Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по медицине  

На правах рукописи

БРЕУСЕНКО
Дмитрий Витальевич

СТРОЕНИЕ ТИМУСА КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭТАНОЛА И ИММУНОКОРРЕКЦИИ

(экспериментально-морфологическое исследование)

14.03.01 Ц анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург

2012

Работа выполнена на кафедре анатомии человека Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,  профессор  Карелина Наталья Рафаиловна

Официальные оппоненты:

Гайворонский Иван Васильевич доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное  военное казенное образовательное учреждение высшего профессионального образования Военно-медицинская Академия имени С. М. Кирова Министерства обороны Российской Федерации, кафедра нормальной анатомии, заведующий

Молдавская Анна Аркадьевна доктор медицинских наук, профессор, Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Астраханская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, кафедра анатомии человека, профессор

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится л___________________2012 г. в ______ часов

на заседании совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 208.087.01 при ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России по адресу: 194100, Санкт-Петербург, Литовская ул., 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГБОУ ВПО
СПбГПМА Минздравсоцразвития России по адресу: 194100, Санкт-Петербург, Кантемировская ул., 16

Автореферат разослан л____ ___________2012 г.

Ученый секретарь
диссертационного совета

Д.м.н., профессор  Карелина
Наталья Рафаиловна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Вопросы возрастной морфологии человека и экспериментальных животных, в частности органов лимфоидной [иммунной] системы, в норме и при воздействии различных неблагоприятных факторов, постоянно привлекают внимание исследователей (Долгова М.А. и соавт., 1982; Петрова Т.Б., 1982; Савицкая Т.Н., 1985;
Пугач П.В., 1990; Бородин Ю.И. и соавт., 1992; Сапин М.Р., 1994, 1996;Забродин В.А., 2004 и др.).

Тимус как первичный орган иммунной системы во многом определяет не только состояние периферических органов иммуногенеза, но и выраженность защитных реакций всего организма (Бернет Ф., 1964; Кемилева З., 1984; Сапин М.Р. и Этинген Л.Е., 1996; Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000;AndersonG. еtal., 1999; LioC.W. andHsiehC.S., 2011 и мн. др.).

Иммунодефицитные состояния у детей раннего возраста достаточно часто встречаются в клинической практике. Среди причин, приводящих к иммунодефицитам, главенствующими являются неблагоприятные экзогенные влияния различной этиологии в пренатальном периоде онтогенеза, а также наличие патологии материнского организма. Употребление женщинами этанолсодержащих напитков, особенно в период беременности, является тем фактором, который самым неблагоприятным образом интегрирует причины, которые могут приводить к иммунодефицитным состояниям у новорождённых детей. Исследования показывают, что иммунодефицит можно отнести к постоянным проявлениям фетального алкогольного синдрома, часто возникающего у детей вследствие пренатального воздействия этанола (Таболин В.А. и соавт., 1988; Оготоева С.Н. и соавт., 2009; JohnsonS. etal., 1981; CalvaniM. etal., 1985; EwaldD.J. andFrostW.W., 1987; McGillJ. et. al., 2009).

В конце ХХ и начале ХХIвека появились работы, посвящённые изучению иммунной системы, в которых показаны изменения, происходящие в тимусе и лимфатических узлах вследствие пренатального воздействия этанола (Надыров Э.А., 1991; Торбек В.Э., 1995, 1999, 2010; Карелина Н.Р. и соавт., 2009; Свирин С.В., 2010; Пугач П.В., 2011;Круглов С.В. и соавт., 2012).Важной задачей является поиск средств для коррекции возникающих нарушений.

В последние десятилетия проводятся многочисленные исследования, посвящённые применению иммуномодуляторов в комплексной терапии различных заболеваний, одним из патогенетических механизмов которых являются иммунодефицитные состояния (Морозов В.Г. и соавт., 2000; Абдулаев Х.Р., 2003; Парахонский А.П., 2007; Долина А.Б., 2010; Панкратов О.В., 2011 и мн. др.).

Одним из известных препаратов является пептидный препарат тималин, полученный из тимуса телят в 1974 году В.Г. Морозовым и В.Х Хавинсоном (Морозов В.Г. и соавт., 1977). В практической медицине тималин применяется в комплексном лечении многих заболеваний, начиная с конца 1970-х годов.

В экспериментальных исследованиях было показано, что введение тималина оказывает положительное влияние, как на ретикулярный эпителий, так и на лимфоидный компоненты тимуса. Описано усиление пролиферации, дифференцировки лимфоидных клеток при введении тималина лабораторным животным (Кузник Б.И. и соавт., 1984; Хмелевская И.Г. и Ковальчук Л.В., 2000). Однако данных о влиянии тималина на тимус развивающегося организма при воздействии этанола в доступной литературе не обнаружено.

Таким образом, представляется актуальным провести экспериментальное исследование для определения особенностей строения тимуса в раннем постнатальном периоде онтогенеза при воздействии этанола и на фоне иммунокоррекциитималином.

Цель исследования Ц изучить особенности строения тимуса крыс, развивавшихся в условиях воздействия этанола в пренатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза, а также при иммунокоррекциитималином.

Задачи исследования:

1. Определить морфометрические параметры и клеточный состав тимуса в раннем постнатальном периоде онтогенеза у интактных крыс.
2. Выявить изменения морфометрических показателей и клеточного состава тимуса крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период) воздействия этанола.
3. Изучить влияние тималина на морфометрические показатели и клеточный состав тимуса крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период) воздействия этанола.
4. Определить на основе полученных данных корреляционные связи между морфометрическими показателями и клеточным составом тимуса в тимусе крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (подсосный период).

Научная новизна исследования

Впервые установлено, что у крыс в подсосном периоде онтогенеза общей тенденцией динамики морфометрических показателей тимуса является то, что наибольшие значения темпов их прироста приходятся на первую неделю постнатальной жизни, а наименьшие - на вторую. Исключение составляют ТП линейных размеров правой доли, которые постепенно снижаются на протяжении всего периода наблюдений. Рост в длину левой доли тимуса происходит преимущественно в краниальном направлении на первой неделе жизни, а правой доли - в каудальном - на второй неделе жизни

Впервые показана динамика изменений морфометрических параметров тимуса, а также темпов их прироста у крыс после пренатальной этаноловой интоксикации и в условиях перорального поступления этанола в подсосном периоде. В первые две недели темпы прироста линейных размеров тимуса крыс при воздействии этанола существенно превышают контрольные значения, а в течение третьей недели резко понижаются.

Впервые показано, что у животных при воздействии этанола регистрируется выраженная сосудистая реакция в тимусе, проявляющаяся расширением и полнокровием внутриорганных сосудов, кровоизлияниями как в корковое, так и мозговое вещество, а также появлением фокусов некроза.

Впервые описано иммуномодулирующее влияние тималина на тимус крыс, развивавшихся в условиях воздействия этанола в пренатальном и постнатальном (подсосный период) периодах онтогенеза. Показано, что после иммунокоррекции, в течение первой недели постнатальной жизни начинается стимуляция компенсаторных реакций, в большей степени в коре тимуса; в течение второй недели проявляется тенденция к нормализации линейных размеров тимуса; в течение третей недели начинает восстанавливаться клеточный состав мозгового вещества. Введение тималина постепенно уменьшает выраженность сосудистой реакции.

Впервые в динамике изучено распределение CD3+ клеток у крыс подсосного периода в норме, после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации и при иммунокоррекциитималином.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Полученные данные существенно расширяют и дополняют имеющиеся представления о строении тимуса крыс, развивавшихся в условиях нормы и после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации, а также при иммунокоррекциитималином.

Сведения о влиянии этанола на тимус развивающегося организма, полученные в работе имеют важное теоретическое значение при исследовании становления других иммунных органов в онтогенезе.

Экспериментальные данные об особенностях строения тимуса организма, развивавшегося в норме, а также после пренатальной и постнатальной этаноловой интоксикации и при иммунокоррекцитималином, представляют интерес для иммуноморфологов, педиатров и акушеров.

Внедрение результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ. Основные результаты диссертационного исследования включены в учебную программу кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО СПбГПМАМинздравсоцразвития России; кафедры анатомии человека и кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова Минздравсоцразвития России.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. В течение первых трёх недель постнатальной жизни крыс происходят значительные изменения в строении тимуса, затрагивающие как его морфометрические параметры, так и клеточный состав. С возрастом появляется и усиливается взаимосвязь, между морфометрическими параметрами тимуса и его клеточным составом,отсутствующая у новорождённых животных.
2. Этанол вызывает существенные изменения динамики морфометрических параметров тимуса в подсосном периоде у крыс, подавляет его лимфопоэтическую функцию, пролиферацию и дифференцировку, усиливает разрушение клеток и изменяет темпы их миграции в органе.
3. Тималин оказывает иммуномодулирующее действие на тимус крыс, развивавшихся в условиях пренатального и постнатального (в подсосный период) воздействия этанола. Степень выраженности этого эффекта и точки приложения зависят от длительности применения тималина.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Санкт-Петербург, 2009 г.); VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009 г.); 5 Всероссийском конгрессе Человек и проблемы зависимостей: междисциплинарные аспекты (Санкт-Петербург, 2011 г.).

ичный вклад соискателя в разработку проблемы. Работа выполнена в рамках комплексной темы НИР кафедры анатомии человека СПбГПМА

(№ гос. регистрации 01200506433). Личный вклад соискателя в разработку проблемы оценивается в 80%. Автором лично произведены: эксперимент, анализ результатов морфометрического, гистологического и иммуногистохимического и статистического исследования, составление таблиц и построение диаграмм.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста и состоит из введения, глав Обзор литературы, Материал и методы исследования, Результаты исследования, Обсуждение результатов исследования, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Список литературы содержит 174 источников, в том числе 116 отечественных и 57 иностранных. Работа иллюстрирована 20 микрофотографиями, 44 диаграммами и снабжена 21 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Исследование выполнено на 140 крысах в возрасте от периода новорождённости до 21 суток постнатальной жизни (табл. 1). Животные были разделены на четыре группы. I группу составили животные, родившиеся от самок, ежедневный рацион которых на всём протяжении эксперимента составляли сухой комбикорм и питьевая вода. Во II, III и IV группы вошло потомство самок, получавших во время беременности и после её окончания сухой комбикорм и 15% раствор этанола в качестве единственного источника жидкости. Потомству самок III группы вводили тималин по следующей схеме: в первые пять суток постнатальной жизни ежедневно, а также на 7 и 14 сутки подкожно в дозе 40 мкг/м2 поверхности тела (Vidal, 2006). Потомству крыс IV группы в эти же сроки вводили дистиллированную воду в адекватном объёме. Животные содержались в виварии СПбГПМА в пластмассовых клетках размером 50 см×30 см×30 см, в сухом, отапливаемом помещении с достаточным естественным и искусственным освещением, при температуре +20 - +22С.

Таблица 1

Распределение материала по количеству и группам

Возраст животных	Группа животных
	I	II	III	IV
Новорож-дённые	10	10	-	-
7 суток	10	10	10	10
14 суток	10	10	10	10
21 сутки	10	10	10	10
Итого	40	40	30	30
ВСЕГО	140

Для получения достоверных результатов всех животных выводили из опыта в весенний период с марта по июнь. Исследования проводились с соблюдением приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 года и приказа Министерства высшего и среднего специального образования СССР от 13.11.1984 года УО правилах проведения работ с использованием экспериментальных животныхФ. Животных забивали под наркозом (пары хлороформа) путём декапитации.

Масса тела крыс определялась взвешиванием на электронных весах УAcculabФ (США). Под бинокулярной лупой МБС-2 выделяли и очищали тимус от окружающих тканей, затем определяли его абсолютную массу на этих же весах. Относительная масса тимуса рассчитывалась как отношение его абсолютной массы к массе тела.

Для оценки развития тимуса рассчитывали показатели возрастной морфологии: абсолютный прирост (АП), энергию роста (ЭР) и темп прироста (ТП) (Агеева В.А., 2007).

АП определяли как разность между абсолютными значениями показателя в данный и предыдущий периоды:

АП = N2 Ц N1 ,

где N2 - абсолютное значение показателя в данный период; N1 - абсолютное значение показателя предыдущего периода.

ЭР рассчитывали как отношение АП к истекшему промежутку времени:

ЭР = АП / t2 Ц t1 ,

где ЭР - энергия роста; АП - абсолютный прирост; t2 и t1 - время (сут) истекшее между данным и предыдущим уровнем сравниваемых величин
(7 суток).

ТП вычисляли как отношение между АП данного периода и абсолютным уровнем показателя предыдущего периода:

ТП = АП2 / N1x 100%,

где ТП - темп прироста; АП2 - абсолютный прирост в данный период; N1 - абсолютный показатель предшествующего периода.

Тимус фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина на фосфатном буфере в течение 24 часов. После этого обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в парафин. На микротоме Accu-Cut изготавливали серийные гистологические срезы толщиной 2-3 мкм.

Обзорная окраска парафиновых срезов гематоксилином и эозином использовалась для определения количества долей в тимусе и его морфометрии; для подсчёта клеточных элементов применялась окраска азуром-II и эозином; маркеры зрелых тимоцитов выявлялись иммуногистохимическим окрашиванием срезов мышиными анти-крысиными антителами к CD3 с последущейдоокраской гематоксилином.

На серийных срезах органа при помощи светового микроскопа МИКРОМЕД-3 (КНР) со съёмной камерой с использованием программы ScopePhoto определяли строение тимуса, измеряли максимальные линейные размеры (длина и ширина) органа и его долей. Для определения площади органа и его структурно-функциональных зон использовали программу ImageJ.

Корково-мозговой индекс вычисляли как отношение площади коркового вещества к площади мозгового. Размеры структур органа определяли в 10 полях зрения у 10 животных. Каждый параметр измерялся 50 раз. Клеточный состав тимуса определялся при окуляре 10 и объективе 100 на единице площади 15000 мкм2. Необходимость подсчёта клеток на заведомо определённой площади обусловлена изменением насыщенности полей зрения клетками при одинаковой толщине срезов. Подсчёт же заранее определённого числа клеток, привёл бы к ошибкам при анализе содержания различных популяций клеток в тимусе.

Полученные цифровые показатели обрабатывались с использованием статистического пакета MicrosoftExcel.

Значение t оценивали по таблице Стьюдента. Различия двух сравниваемых величин считали достоверными при Р<0,05. Полученные результаты представлены в таблицах и диаграммах.

Факторный анализ полученных данных произведён при использовании прикладной программы SPSS16,0 forWindows. Математико-статистическое описание объектов исследования осуществлялось с помощью традиционных и давно утвердившихся в медицинских исследованиях методов (Лакин Г.Ф., 1990; Воронов И.А., 2008).

У шести крыс I группы, что составило 15% мы обнаружили тимус, состоящий из 3 долей. В связи с тем, что двудолевой тимус встречался значительно чаще, мы в последующем исследовании учитывали только этот вариант его строения.

После проведения исследования выяснилось, что достоверных отличий между всеми морфометрическими показателями тимуса и его клеточным составом у животных II и IV групп не было, вследствие чего, эти 2 группы были объединены.

Заключение этического комитета: диссертационное исследование прошло экспертизу этического комитета ГОУ ВПО СПбГПМА (протокол №1 от 24 сентября 2007 г.).

Результаты исследования и их обсуждение.

Вопросы возрастной морфологии человека и экспериментальных животных, в частности органов иммунной системы, постоянно привлекают внимание исследователей (Долгова М.А. и соавт., 1982; Петрова Т.Б., 1982; Савицкая Т.Н., 1985; Пугач П.В., 1990; Сапин М.Р., 1994, 1996; Забродин В.А., 2004; Тухтаев К.Р. и соавт., 2012, и др.). Как известно, лимфоидная [иммунная] система является ведущей в обеспечении защиты организма от постоянного экзо- и эндоантигенного воздействия. Тимусу, в свою очередь, принадлежит главная роль в становлении других иммунных органов и формировании иммунитета (Бернет Ф., 1964; Сапин, М.Р. и Этинген Л.Е., 1996; Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000; LioC.W. andHsiehC.S., 2011).

В результате проведённого исследования установлено, что в течение первых трёх недель постнатальной жизни крыс происходят значительные изменения в строении тимуса, затрагивающие как его морфометрические параметры, так и клеточный состав. При этом по результатам факторного анализа, выявлено, что с возрастом появляется и усиливается взаимосвязь, отсутствующая у новорождённых животных, между морфометрическими параметрами тимуса и его клеточным составом, за исключением дегенерирующих клеток.

В течение первых трёх недель постнатальной жизни увеличиваются показатели абсолютной и относительной масс тимуса, причём наиболее интенсивно в первые семь дней, когда их ТП достигают 266% и 42% соответственно. В течение второй недели они снижаются, а в последующем вновь увеличиваются, оставаясь, тем не менее, на более низком уровне по сравнению с первой неделей (табл. 2, 3). При этом Э.А. Надыров (1991) и А.А. Пасюк (2006), рассматривая вопросы возрастной морфологии тимуса крыс, приводят сходные данные относительно динамики абсолютной и относительной масс тимуса.

Динамика изменений линейных размеров тимуса и его долей, также характеризуется их неравномерным ростом в разные возрастные периоды. Наибольшие темпы прироста длины тимуса отмечаются в первую неделю жизни крыс (28%), а в последующем снижаются, и сохраняются примерно на одном уровне (19-20%). Ширина тимуса, по показателю ТП, наиболее значительно увеличивается в течение первой и третьей недель постнатальной жизни. Такая же закономерность характерна для изменений линейных размеров левой доли. Показатели ТП длины и ширины правой доли тимуса, начиная со второй недели жизни уменьшаются (табл. 2,3). К особенностям становления дефинитивной топографии долей тимуса следует отнести и их асинхронный и разнонаправленный рост. Так, длина левой доли в первые7 суток жизни увеличивается преимущественно за счёт роста её краниального полюса. Рост в длину правой доли происходит преимущественно за счёт роста в каудальном направлении. Что наиболее выражено на 14 сутки жизни. Вероятно, это связано с особенностями развития топографически близких к тимусу органов.

Таким образом, общая тенденция динамики морфометрических показателей заключается в том, что наибольшие значения их темпов прироста приходятся на первую неделю постнатальной жизни, а наименьшие - на вторую. Исключение составляют ТП линейных размеров правой доли, которые постепенно снижаются на протяжении всего периода наблюдений.

Количество долек в долях тимуса в течение первых трёх недель жизни прогрессивно возрастает: с 15,82,4 до 21,01,3 в левой доле и с 11,71,9 до 19,51,1 в правой доле. При этом наиболее активно происходит разделение на вторичные дольки в период с 7 по 21 сутки постнатальной жизни. В эти же

Таблица 2

Динамика темпов прироста морфометрических показателейтимуса крыс (%%)

Морфометрические параметры тимуса	Группа животных	Возраст животных
		7 суток	14 суток	21 сутки
Абсолютная масса	К	266	10	119
	Э	223	77	89
	Э+Т	222	93	85
Относительная масса	К	42	3	17
	Э	67	20	22
	Э+Т	128	17	0
Длина тимуса	К	28	19	20
	Э	42	41	6
	Э+Т	43	38	18
Ширина тимуса	К	36	19	29
	Э	68	52	0
	Э+Т	72	38	3
Длина левой доли	К	52	27	32
	Э	137	36	9
	Э+Т	136	31	19
Ширина левой доли	К	35	18	23
	Э	61	25	30
	Э+Т	54	32	24
Длина правой доли	К	65	33	27
	Э	252	28	11
	Э+Т	244	34	3
Ширина правой доли	К	73	13	0,5
	Э	94	69	5
	Э+Т	107	45	0,8

К - контрольные животные; Э - крысы после воздействия этанола;

Э+Т - крысы послеиммунокоррекции

сроки постепенно нивелируется и разница их количества в правой и левой долях. Следует отметить и постепенное увеличение площади долек, а также относительно равные их размеры по этому показателю на 21 сутки. Разделение тимуса на вторичные дольки в постнатальном онтогенезе крысы описывали Т.Б. Петрова (1984) и Э.А. Надыров (1991).

Таблица 3

Динамика морфометрических параметров тимуса

Морфометричес-кие показатели тимуса	Группа животных	Возраст животных
		Новорождённые	7 суток	14 суток	21 сутки
Абсолютная масса, г	К	0,01250,0007	0,04570,0013(*)	0,07630,0021(*)	0,16710,0096(*)
	Э	0,01120,0011(*)	0,03620,0001(*),(**)	0,06400,0030(*),(**)	0,12090,0019(*),(**)
	Э+Т	-	0,03610,0013(*)	0,06970,0009(*),(**),(***)	0,12890,0018(*),(**),(***)
Относительная масса	К	0,00240,0001	0,00340,0002**	0,00350,0001**	0,00410,0001**
	Э	0,00180,0002(*)	0,00300,0001(*),(**)	0,00360,0001(**)	0,00530,0001(*),(**)
	Э+Т	-	0,00410,0001(*)	0,00480,0002(*),(**),(***)	0,00480,0002(*),(***)
Длина, мм	К	4,250,07	5,420,16(**)	7,120,26(**)	8,530,14(**)
	Э	3,740,29(*)	5,320,20(**)	7,480,31(*),(**)	7,890,19(*),(**)
	Э+Т	-	5,340,36	7,380,29(**)	8,680,29(**)
Ширина, мм	К	2,830,03	3,860,12(**)	4,610,13(**)	5,940,50(**)
	Э	2,020,21(*)	3,370,11(*),(**)	5,120,23(*),(**)	5,110,01(*)
	Э+Т	-	3,460,09(*),(**)	4,730,18(**),(***)	4,870,11(*),(***)
Длина левой доли, мм	К	3,240,04	4,930,11(**)	6,380,09(**)	8,310,07(**)
	Э	2,240,14(*)	5,310,19(*),(**)	7,240,22(*)	7,680,22(*)
	Э+Т	-	5,280,08(*)	6,930,07(*),(**),(***)	8,260,30(**),(***)
Ширина левой доли, мм	К	1,670,03	2,260,04(**)	2,660,11(**)	3,280,09(**)
	Э	1,270,09(*)	2,050,06(*),(**)	2,560,10(**)	3,320,09(**)
	Э+Т	-	1,950,10(*)	2,580,02(**),(***)	3,200,17(**),(***)
Длина правой доли, мм	К	2,710,03	4,480,23(**)	5,970,22(**)	7,560,16(**)
	Э	1,270,08(*)	4,470,21(**)	5,710,31(**)	6,330,34
	Э+Т	-	4,370,18	5,840,24(**)	6,020,24(*)
Ширина правой доли, мм	К	1,120,01	1,940,03(**)	2,200,01(**)	2,210,12
	Э	0,840,09(*)	1,630,06(*),(**)	2,760,13(*),(**)	2,890,01(*),
	Э+Т	-	1,740,07(*)	2,530,04(*),(**),(***)	2,550,18(*),(***)

К - контрольные животные; Э - крысы после воздействия этанола; Э+Т - крысы после иммунокоррекции

* - различия с контролем статистически достоверны (0,0005<p<0,05); ** - различия с предыдущей возрастной группой животных статистически достоверны (0,0005<p<0,05); *** - различия между экспериментальными группами животных статистически достоверны (0,0005<p<0,05)

Корково-мозговой индекс в течение первой недели жизни увеличивается с 3,770,14 до 4,170,23, а в последующем ширина коркового вещества уменьшается и уже у трёхнедельных крысят КМИ составляет 2,950,17. Такая динамика, возможно, связан а с волнообразным характером заселения тимуса претимоцитами и их эмиграцией во вторичные лимфоидные органы(Fontaine-PerusJ.C. etal., 1981). В литературе нет единого мнения об изменении КМИ долек тимуса после рождения. Так, Т.Б. Петрова (1984) и Е.В. Морозова (1990) отмечают снижение этого показателя, а Э.А. Надыров (1991) - увеличение.

Спектр изменений в клеточном составе коркового и мозгового вещества тимуса так же отличается разнообразием. В КВ существенно увеличивается абсолютное и относительное содержание малых лимфоцитов, причём особенно интенсивно в течение первой недели внеутробной жизни (в 1,8 и 1,4 раза соответственно). Количество средних и больших лимфоцитов, напротив, снижается, но более равномерно (с 25,891,07 до 19,701,04 и с 10,960,36 до 8,030,61 соответственно). Уменьшение числа ретикулярных эпителиоцитов наиболее выражено в течение второй и третьей недель постнатальной жизни. Содержание митотически делящихся клеток на протяжении первой недели увеличивается в 1,4 раза, а затем снижается и к 21 суткам жизни становится меньше, чем у новорождённых животных.

В мозговом веществе количество малых лимфоцитов наиболее резко (в 1,8 раза) увеличивается на первой неделе постнатального развития; в течение второй недели достоверно не изменяется, а на третьей вновь возрастаетв 1,3 раза. Статистически значимое снижение содержания средних лимфоцитов регистрируется только к концу третьей недели жизни. В изменении количества больших лимфоцитов и ретикулярных эпителиоцитов отмечается сходная динамика. В первые7 суток их количество достоверно не изменяется, а в течение последующихдвух недель снижается. Митотическая активность на протяжении первых 7 суток жизни несколько увеличивается, а затем снижается. Сходная тенденция в динамике изменения клеточного состава в КВ и МВ тимуса в раннем постнатальном онтогенезе крыс описана ранее (Петрова Т.Б., 1984; Морозова Е.В., 1990; Надыров Э.А., 1991; Чурилова Н.И., 1999).

В распределении CD 3+ клеток в структурно-функциональных зонах тимуса выявлены следующие особенности. Для новорождённых животных характерно их равномерное распределение, к концу первой недели они концентрируются в наружных отделах коры и мозговом веществе, а к 21 суткам их наибольшее количество отмечается только в МВ. Таким образом распределение этих клеток соответствует таковому взрослых особей (Федорова О.В., 2005)к концу третьей недели жизни.

В структуре проявлений алкогольного синдрома плода человека и экспериментальных животных, одно из ведущих мест занимает снижение массы тела (Надыров Э.А., 1991; Пугач П.В., 2012; JonesK.L. andSmithD.W., 1973). Дефицит массы тела по данным некоторых исследователей может достигать 25% и сохраняться до 5 месяцев постнатальной жизни (AbelE.L., 1984; PullenG.L.etal., 1988).

Пренатальное воздействие этанола приводит к существенным структурным, а следовательно, и функциональным перестройкам тимуса и лимфатических узлов (Надыров Э.А., 1991; Торбек В.Э., 1995, 1999, 2010; Карелина Н.Р. и соавт., 2009; Свирин С.В., 2010; Пугач П.В., 2011; Круглов С.В. и соавт., 2012).

Известно, что этанол легко проникает в материнское молоко, в котором его концентрация такая же, как в крови (Зупанец И.А. и соавт., 2003). В литературе существует мнение, что периодическое употребление 11% алкоголя в количестве около 280 г не вызывает значимых изменений в организме ребёнка, находящегося на грудном вскармливании. В то же время установлено, что приём спиртосодержащих напитков во время лактации приводит к снижению у ребёнка сосательного рефлекса, угнетению центральной нервной системы, задержке моторного развития, нарушению динамики прибавления массы тела, а также утяжеляет течение заболеваний (LittleR.E. etal., 2002; HaleT., 2006).

По нашим данным, тимус крыс, подвергшихся пренатальному и постнатальному пероральному (с молоком матери) воздействию этанола характеризуются следующими особенностями. Как показал факторный анализ, сильные корреляционные связи между морфометрическими показателями и клеточным составом тимуса наблюдается во всех изученных возрастных группах. В то же время, наблюдается их некоторое ослабление, а иногда и исчезновение в отношении дегенерирующих и митотически делящихся клеток.

Абсолютная масса тимуса во всех изученных возрастных периодах снижена по сравнению с контрольными животными. Это является результатом пренатальной этаноловой интоксикации, вследствие снижения общей клеточной массы зародыша (Надыров Э.А., 1991; Пугач П.В., 2012; SreenathanR.N. etal., 1983). Наиболее высокий темп прироста абсолютной массы тимуса отмечается в первые семь сутоквнеутробной жизни, когда он составляет 223%, что ниже по сравнению с контрольными животными. В дальнейшем, на второй неделе жизни, ТП снижается до 77%, однако этот показатель значительно выше контрольных значений. В течение третьей недели ТП несколько увеличивается (до 89%), но снижен, относительно контроля (табл. 2, 3).

Сниженный показатель относительной массы тимуса наблюдается у алкоголизированных животных только в течение первой недели жизни. На 14 сутки этот показатель достоверно не отличается от контрольных значений, а на 21 сутки даже превышает его (в 1,3 раза). Это обусловлено тем, что темп прироста относительной массы тимуса более высокий, чем у контрольных крыс (табл. 2, 3). В тоже время у пренатальноалкоголизированных крыс, не получавших этанол перорально (Надыров Э.А., 1991), относительная масса тимуса остаётся сниженной.

Длина и ширина тимуса у животных при воздействии этанола изменяются однонаправленно. У новорождённых крыс и на 21 сутки эти параметры снижены, на 14 сутки жизни они превышают контрольные значения. На 7 сутки ширина тимуса меньше, а длина достоверно не отличается от контрольных показателей (табл. 2, 3).

Изменения длины правой и левой долей тимуса алкоголизированных крыс носят принципиально сходный характер. У новорождённых животных длина обеих долей уменьшена по сравнению с контролем. На протяжении первой и второй недель жизни наблюдается их активный рост, наиболее интенсивный в правой доле. Подобная динамика характерна и для показателей ширины долей. У новорождённых крыс этот параметр снижен. Интенсивный рост начинается после 7 суток, особенно выраженный в правой доле, где значения ширины выше, чем в контроле (прил. 12; 13).

Таким образом, в первые две недели жизни темпы прироста линейных размеров тимуса существенно превышают контрольные значения, а в течение третьей недели резко снижаются. Описанная динамика морфометрических параметров тимуса обусловлена уменьшением концентрации этанола и его метаболитов в организме. Известно, что этанол может накапливаться в тканях эмбриона и плода, так как система алкогольдегидрогеназы не функционирует в полном объёме. В результате уровень этанола в тканях зародыша может даже превышать его уровень в крови матери (Blakley P.M. andScottW.J.Jr., 1984; Brien J.F. etal., 1985). В началевнеутробной жизни усиливается выделение этанола и его метаболитов в связи с изменением и усилением активного функционирования пищеварительной дыхательной и мочевой систем. Помимо этого, важную роль играет уменьшение концентрации этанола, начинающего поступать только с материнским молоком.

Количество долек в долях тимуса при воздействии этанола уменьшено на протяжении всего периода наблюдений. Их число увеличивается только в течение первой недели внеутробной жизни (с 10,7 0,24 до 14,70,7 в левой доле и с 10,00,35 до 13,70,5 - в правой). В последующие две недели количество долек в тимусе достоверно не изменяется. Количество тимусных телец прогрессивно увеличивается и к концу третьей недели, их число становится больше, чем у животных контрольной группы.

Корково-мозговой индекс у новорождённых животных при воздействии этанола составляет 9,580,61 и в течение первых семи суток постнатального развития он резко снижается до 3,360,46 (2,85 в 2,85 раза). В течение 2 недели он продолжает снижаться (до 1,730,08), а к концу 21 суток увеличивается и составляет 2,650,07. Значительное увеличение по сравнению с контролем КМИ у новорождённых животных (в 2,5 раза) обусловлено накоплением во внутренней кортикальной зоне тимоцитов. В последующих изученных возрастных периодах этот показатель ниже, чем у животных контрольной группы, что в свою очередь также является отражением нарушений функционирования этой структурно-функциональной зоны. Одной из функций этой зоны является антигеннезависимая дифференцировка и приобретение Т-лимфоцитами аутотолерантности. Эти процессы происходят в результате сложного взаимодействия тимоцитов с РЭ и при участии тимических гормонов (Гриневич Ю.А. и Чеботарев В.Ф., 1989; Ивановская Т.Е. и соавт., 1996; JanossyG. etal., 1986). Кроме этого, именно из этой зоны, через внутридольковые периваскулярные пространства, расположенные на границе КВ и МВ, происходит эмиграция части созревших тимоцитов из тимуса (Ивановская Т.Е. и соавт., 1996; AryaS. etal., 1982; JanossyG. etal., 1986).

Как известно, отражением их функционального состояния органов иммунной системы является их клеточный состав (Сапин М.Р. и
Этинген Л.Е., 1996).

Клеточный состав коркового и мозгового вещества тимуса алкоголизированных животных характеризуется изменениями количества и динамики содержания различных видов клеток на разных этапах онтогенеза.

В КВ отмечается стабильное уменьшение количества клеток лимфоидного ряда, по сравнению с контрольными животными. Однако, при воздействии этанола, достоверное увеличение числа малых лимфоцитов в тимусе крыс (в 1,5 раза) отмечается только со второй недели внеутробной жизни (в норме - на первой). Число средних лимфоцитов снижается в первые 2 недели, а затем не изменяется. Содержание больших лимфоцитов наиболее резко (в 1,8 раза) падает в течение первых 7 суток жизни и продолжает снижаться на протяжении 2 недели, после чего их количество несколько возрастает. По сравнению с тимусом контрольных животных при воздействии этанола число ретикулярных эпителиоцитов в органе увеличено у новорождённых крыс, а также на 7 и 21 сутки, а в 14 суток достоверных отличий этого показателя нет. Количество дегенерирующих клеток увеличено, причём особенно значительно - в 4,3 раза - на первой неделе жизни. Такая реакция со стороны тимуса не является специфичной и может наблюдаться при токсических воздействиях на материнский организм в период беременности, при врождённых пороках сердца, хроническом стрессе (Азизова Ф.Х. и соавт., 2012; Логинова Н.П. и Четвертных В.А., 2012; Улла М. и соавт., 2012). Снижается митотическая активность в тимусе новорождённых животных по сравнению с контролем. В течение следующей недели жизни наблюдается увеличение числа митотически делящихся клеток, а в последующем - вновь уменьшение.

В мозговом веществе тимуса крыс при воздействии этанола количество клеток лимфоидного пула уменьшено во всех возрастных периодах, а ретикулярных эпителиоцитов и дегенерирующих клеток - увеличено.

Таким образом, общими закономерностями изменения клеточного состава тимуса при воздействии этанола по сравнению с контрольными животными, является снижение общего числа клеток, абсолютного и относительного количества лимфоцитов, митотически делящихся клеток во всех возрастных группах крыс. При этом число ретикулярных эпителиоцитов и дегенерирующих клеток повышено. Указанная тенденция изменения клеточного состава тимуса крыс при воздействии этанола, более выражена в мозговом веществе.

CD3 иммуннореактивные клетки у новорождённых крыс и на 7 сутки жизни при воздействии этанола, регистрируются во всех структурно-функциональных зонах тимуса, но главным образом, в коре. У животных следующих возрастных групп преимущественная локализация этих клеток наблюдается в мозговом веществе. Однако их плотность во всех возрастных группа меньше, чем у контрольных животных. При этом необходимо отметить, что у интактных крыс преимущественная локализация CD3+ клеток в мозговом веществе отмечается только на 21 сутки. Это подтверждает нарушения процессов созревания и эмиграции тимоцитов.

Как было показано в работе Э.А. Надырова (1991) по изучению тимуса только пренатальноалкоголизированных крыс, у таких животных в постнатальном онтогенезе происходит стимуляция компенсаторно-приспособительных процессов в органе. Это проявляется сохранением до 14 суток жизни субкапсулярной зоны и увеличением количества ТТ. В нашем исследовании субкапсулярная зона у крыс на 7 сутки практически полностью исчезает, при том, что число тимусных телец также увеличивается. Объяснением этому факту, вероятно, является наличие перорального поступления этанола в организм экспериментальных животных. В субкапсулярной зоне тимуса происходит пролиферация и начальные этапы созревания претимоцитов, мигрировавших сюда из костного мозга. Это происходит в условиях специфического микроокружения, которое создается посредством тимических гормонов, интерлейкинов, особых факторов роста, выделяемых самими лимфоцитами, и прямых мембранных контактов, осуществляемых в клетках-няньках (Janossy G. еtаl., 1986; Villa-Verde D.M. etal., 1995; Anderson G. andJenkinson E.J., 2001; Hendrix T.M. etal., 2010). По этой же причине, видимо, нами не было обнаружено описанного Э.А. Надыровым (1991) увеличения количества больших и средних лимфоцитов в КВ.

Таким образом, пероральное поступление этанола подавляет лимфопоэтическую функцию тимуса на протяжении первых трёх недель постнатального развития и снижает его компенсаторные возможности в отношении нарушений, вызванных этанолом и его метаболитов в пренатальном периоде. С этим же связано более значительное уменьшение числа малых лимфоцитов при одновременном усилении интенсивности процессов распада клеток и угнетении митотической активности. Кроме этого, сравнивая результаты нашего исследования и данные Э.А. Надырова (1991), мы пришли к заключению, что пероральное поступление этанола, в большей степени влияет на мозговое вещество тимуса.

Выявленные нами особенности соотношения клеток в различных зонах тимуса при воздействии этанола являются проявлением нарушения процессов пролиферации и миграции тимоцитов, а также гормональной активности тимуса (Ярилин А.А. и соавт., 1991; Ивановская Т.Е. и соавт, 1996;
KendallM.D., 1981; JanossyG. etal., 1986). Сходные тенденции изменения клеточного состава структурно-функциональных зон тимуса крыс в постнатальном периоде онтогенеза описаны как при пренатальной алкогольной интоксикации (Надыров Э.А., 1991; Пугач П.В., 2012), так и после внутриутробного воздействия лекарственных препаратов (Петрова Т.Б., 1984; Морозова Е.В., 1990).

В оценке изменений со стороны клеточного состава тимуса необходимо учитывать и стрессовый компонент, приводящий к описанным нарушениям. Впервые H. Selye (1936) обнаружил связь между воздействием стрессорных факторов и структурными изменениями в тимусе. Позднее эти связи были неоднократно подтверждены многочисленными исследованиями не только в отношении тимуса, но и других иммунных органов
(Кульбах О.С., 2006, Сапин М.Р. и Никитюк Д.Б., 2000; Морозова З.Ч. и соавт., 2012; Смирнова О.Ю. и Денисова Г.Н., 2012; Улла М. и соавт., 2012).

У животных при воздействии этанола также регистрируется выраженная сосудистая реакция в тимусе, проявляющаяся расширением и полнокровием внутриорганных сосудов, а также кровоизлияниями, как в корковое, так и мозговое вещество.

Положительные эффекты от введения тималина алкоголизированным животным сводятся к следующему.

На 7 сутки жизни относительная масса органа выше (в 1,4 раза) даже по сравнению с контрольными значениями (в 1,2 раза). Темп прироста относительной массы тимуса увеличен в 1,9 раза по сравнению с крысами, не получавшими тималин (табл. 2, 3).Число долек в долях тимуса крыс после введения тималина соответствует контрольным показателям. Однако корково-мозговой индекс и количествотимусных телец увеличиваются. Увеличивается количество малых лимфоцитов, причём наиболее значительно в корковом веществе; уменьшается содержание ретикулярных эпителиоцитов в коре в 2,1 раза, в мозговом веществе - в 1,4 раза. Снижается число дегенерирующих клеток, особенно в коре (в 1,8 раза);также в коре усиливается митотическая активность. Распределение CD3 иммунореактивных клеток в тимусе у животных на фоне иммунокоррекциипрактически такое же, как и у контрольных крыс.

Таким образом, на фоне иммунокоррекции на 7 сутки жизни в тимусе крыс наблюдается тенденция к нормализации клеточного состава, особенно значительная - в корковом веществе. Усиление пролиферации, дифференцировки лимфоидных клеток при введении тималина лабораторным животным описано ранее (Кузник Б.И. и соавт., 1984; Хмелевская И.Г. и Ковальчук Л.В., 2000).

Помимо активации компенсаторных реакций в тимусе, необходимо отметить уменьшение выраженности сосудистой реакции в тимусе, что является одним из значимых эффектов воздействия тималина (Абдулаев Х.Р., 2003).

У крыс на 14 сутки жизни при воздействии этанола и на фоне иммунокоррекции абсолютная масса тимуса увеличивается, не достигая, однако, контрольных значений. Темп прироста этого показателя выше, чем у животных контрольной группы и крыс, которым тималин не вводился. Относительная масса и темп её прироста превышает контрольные показатели. Линейные размеры тимуса крыс, получавших этанол и тималин, не имеют статистически значимых различий по сравнению с животными развивавшимися в условиях нормы, однако темпы прироста этих параметров в 2 раз выше (табл. 2, 3). Введение тималина приводит к увеличению количества долек в тимусе, а также корково-мозгового индекса. Изменения в клеточном составе тимуса таких животных заключаются в увеличении количества клеток лимфоидного пула и клеток с фигурами митоза, за исключением больших лимфоцитов, содержание которых снижено в мозговом веществе в 1,3 раза. Воздействие тималина приводит к уменьшению количества ретикулярных эпителиоцитов; число дегенерирующих клеток в корковом веществе уменьшается, в мозговом - повышается.

У животных при воздействии этанола и тималина на 21 сутки абсолютная масса тимуса увеличивается, по сравнению с крысами, не получавшими иммуномодулятор. Относительная масса органа больше, чем в контроле, но уменьшена по сравнению с животными, которым тималин не вводился. При этом темп прироста показателя абсолютной массы наименьший (85%), а относительной - равен нулю. После проведённой иммунокоррекции, по сравнению с контрольными животными, у крыс на 21 сутки жизни в тимусе статистически достоверных различий в отношении его длины нами не выявлено. Показатель ширины меньше контрольных значений в 1,2 раза, а его темп прироста - в 10 раз. Снижены темпы прироста всех линейных размеров долей тимуса, при этом в правой доле достоверно уменьшаются как длина, так и ширина. В отличие от крыс, не получавших тималин, при иммунокоррекции длина тимуса больше, а ширина - наоборот меньше. При этом характерно снижение всех показателей возрастной морфологии линейных размеров, как тимуса, так и его долей. Длина левой доли тимуса при этом больше, а ширина правой доли меньше (табл. 2, 3).

У животных после воздействия этанола и тималина на 21 сутки увеличено количество долек в тимусе и корково-мозговой индекс в отличие от крыс, не получавших иммуномодулятор.

На фоне иммунокоррекциина 21 сутки жизни характерны более выраженные положительные изменения со стороны мозгового вещества. Они, в свою очередь, заключаются в увеличении числа малых лимфоцитов, снижении количества больших лимфоцитов, ретикулярных эпителиоцитов, дегенерирующих и делящихся клеток. В корковом же веществе уменьшается число малых лимфоцитов и возрастает количество ретикулярных эпителиоцитов.

Помимо мозгового вещества CD3+ клетки концентрируются и в корковом веществе тимуса крыс на 21 сутки, получавших иммунокоррекцию.

ВЫВОДЫ

1. В течение первых трёх недель постнатальной жизни крыс происходит увеличение абсолютной и относительной масс тимуса, линейных размеров органа и его долей, изменяется клеточный состав. Появляются и усиливаются корреляционные связи между морфометрическими параметрами тимуса и его клеточным составом.
2. Наибольшие значения темпов прироста морфометрических показателей наблюдаются на первой неделе постнатальной жизни, а наименьшие - на второй. Рост в длину левой доли тимуса происходит преимущественно в краниальном направлении на первой неделе жизни, а правой доли - в каудальном - на второй. В клеточном составе происходит увеличение числа малых лимфоцитов и снижение числа остальных клеточных элементов.
3. При воздействии этанола темпы прироста линейных размеров тимуса крыс в течение первых двух недель жизни существенно превышают контрольные значения, а в течение третьей недели резко понижаются. Наиболее интенсивно растут в длину доли тимуса на первой неделе жизни; темпы прироста левой доли увеличиваются в 2,6 раза, а правой - в 3,9 раза по сравнению с контролем.
4. Для клеточного состава тимуса крыс при воздействии этанола характерно снижение общего числа клеток, абсолютного и относительного количества лимфоцитов, в том числе и CD3+ клеток, а также митотически делящихся клеток. Происходит увеличение содержания ретикулярных эпителиоцитов и дегенерирующих клеток во всех возрастных группах, более выраженное в мозговом веществе.
5. Этанол вызывает сосудистые нарушения в виде расширения и полнокровия сосудов, а также кровоизлияний, выраженность которых нарастает в зависимости от длительности этаноловой интоксикации.
6. Введение иммуномодулятора крысам в подсосном периоде в течение двух недель приводит к нормализации линейных размеров тимуса, однако не отражается на динамике изменений темпов прироста его морфометрических показателей.
7. Под влиянием иммуномодулятора (тималина) у крыс, подвергшихся этаноловой интоксикации, в тимусе компенсаторные процессы заключаются в увеличении числа малых лимфоцитов и снижении количества дегенерирующих клеток, стимуляции лимфопоэтической функции в корковом веществе на первой неделе постнатальной жизни, в мозговом веществе - на третьей. Тималин уменьшает выраженность сосудистых реакций, которые на 3 неделе иммунокоррекции исчезают.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные о строении тимуса крыс в подсосном периоде в норме и при воздействии этанола необходимо использовать для изучения лимфоидных органов и других систем организма.
2. Данные об особенностях распределения CD 3+ клеток в тимусе крыс в подсосном периоде необходимо учитывать при проведении исследований с использованием иммуногистохимических методов на этих экспериментальных животных в возрастном аспекте.
3. Экспериментальные данные об особенностях влияния тималина на тимус алкоголизированных крыс необходимо учитывать в клинической практике.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изменения структурной организации центральных и периферических органов иммуногенеза как результат пренатального воздействия этанола /Пугач П.В., Свирин С.В., Бреусенко Д.В., Смирнова О.Ю., Торопкова Е.В., Карелина Н.Р. //Аллергология и иммунология. 2009. Т. 10. № 2. С. 296.
2. Особенности строения иммунных органов новорожденных крыс после пренатального воздействия алкоголя / Пугач П.В., Карелина Н.Р., Круглов С.В., Свирин С.В., Бреусенко Д.В. //Ретиноиды. 2009. Вып. 29. С. 147-150.
3. Особенности строения центральных и периферических органов иммунной системы новорождённых крыс после пренатального воздействия алкоголя / Пугач П.В., Карелина Н.Р., Круглов С.В., Свирин С.В., Бреусенко Д.В. //Однораловские морфологические чтения. Воронеж, 2009. Вып. 8. С. 239-242.
4. Строение иммунных органов новорождённых крыс после пренатального воздействия алкоголя. / Пугач П.В., Карелина К.И., Круглов С.В., Свирин С.В., Бреусенко Д.В. //Современные проблемы науки и образования. 2009. №6 (приложение "Медицинские науки"). C. 16.
5. Иммуноморфологические аспекты выживаемости крыс в течение первой недели постнатальной жизни после пренатальной алкоголизации /Пугач П.В., Круглов С.В., Свирин С.В., Бреусенко Д.В., Карелина К.И. //Современные проблемы науки и образования. 2009. №6 (приложение "Медицинские науки"). C. 17.
6. Особенности строения брыжеечных лимфатических узлов и лимфоидной ткани, ассоциированной с носоглоткой у крыс, развивавшихся в условиях пренатального воздействия этанола / Пугач П.В., Карелина Н.Р., Круглов С.В., Свирин С.В., Бреусенко Д.В. // Наследие Н.И. Пирогова: прошлое и настоящее. СПб., 2010. С.129-131.
7. Структурные изменения брыжеечных лимфатических узлов и лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистыми оболочками, как результат пренатального воздействия этанола / Пугач П.В., Бреусенко Д.В., Свирин С.В., Надъярная Т.Н. // Морфология. 2010. Т.137. № 4. С. 159.

Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по медицине