Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии
На правах рукописи
Буханцев Олег Васильевич
Технология получения биологически активных веществ из отходов переработки креветки и применение их в животноводстве
03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Щелково - 2012
Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (ВНИТИБП) Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН)
Научный руководитель: | Албулов Алексей Иванович - доктор биологических наук, профессор, Заслуженный ветеринарный врач РФ, ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности, заведующий отделом получения биологически активных веществ |
Официальные оппоненты: | Скотникова Татьяна Анатольевна - доктор биологических наук, ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности, заведующая лабораторией обеспечения качества вакцин |
Балышев Владимир Михайлович - доктор ветеринарных наук, профессор, ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологи и микробиологии, заведующий лабораторией музейных штаммов | |
Ведущая организация: | ГНУ Всероссийский научно - исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко |
Защита диссертации состоится 26 октября 2012 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности РАСХН по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, пос. Биокомбината д.17, ВНИТИБП; тел./факс: 8 (496) 56-732-63; e-mail: vnitibp@mail.ru
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Россельхозакадемии
Автореферат разослан 25 сентября 2012 г.
1. Общая характеристика работы
Актуальность темы. Разработка комплексных малоотходных технологий переработки водных биологических ресурсов, в частности промысловых ракообразных, является перспективным направлением современного развития рыбохозяйственного комплекса Российской Федерации. В состав панцирьсодержащих отходов (ПСО) ракообразных входят такие ценные вещества, как хитин и белок, которые могут быть направлены на получение хитозана, глюкозамина и белковых гидролизатов. К сожалению, в настоящее время ПСО чаще всего не используются, при этом теряются их ценные компоненты. В нашей стране до сих пор остается актуальным вопрос дефицита кормового протеина. Белковые гидролизаты, полученные из гидробионтов, обладают высокой питательной ценностью и содержат в своем составе все незаменимые аминокислоты (В.П. Сафронова, 1998; М.В. Новикова, 2004).
Основным сырьем для получения хитина и хитозана является хитинсодержащее сырье (ХСС), в основном панцирь ракообразных (крабы, креветки, криль). Для выделения хитина и хитозана наиболее широко используется метод кислотно-щелочного удаления сопутствующих белков, липидов и минералов. Существенным недостатком данной технологии является необходимость утилизации сточных вод, а также ограниченное применение белков, выделяемых из панциря. Имеются данные о получении хитина и хитозана с применением ферментных препаратов (С.В. Рогожин, 1988; В. П. Быков, 1992; С.В. Леваньков, 1998). Применение ферментов для выделения белковой составляющей панциря позволяет получать гидролизаты с высокой биологической ценностью, однако недостатком данного способа обработки ХСС является высокая стоимость коммерческих ферментных препаратов. В связи с этим использование гомогената поджелудочной железы, содержащей в своем составе комплекс протеолитических ферментов, для переработки ХСС представляется перспективным направлением.
Уникальная структура хитозана обуславливает его широкое применение в биотехнологии, медицине, ветеринарии, сельском хозяйстве и пищевой промышленности (В.П. Быков, 1992; А.И. Гамзазаде, 1999; Л.А. Hудьга, 2002; Г.А. Вихорева, 2002; В.П. Варламов, 2004; А.И. Албулов, 2005; С.В. Немцев, 2006; R.A.A. Muzzarelli, 1997; M.G. Peter, 1997). Хитозан обладает широким спектром антимикробной активности, в том числе по отношению к патогенной микрофлоре (В.М. Бондаренко, 2006; С.Н. Куликов, 2010). Имеются данные о способности хитозана стимулировать рост бифидобактерий и лактобактерий (В.М. Червинец, 2001; L. Huean-Woo, 2002; W.H. Lee, 2002), что позволяет применять его в комплексе с пробиотическими препаратами. Пребиотические свойства хитозана изучены недостаточно, поэтому оценка симбиотического действия хитозана с различными пробиотическими штаммами микроорганизмов представляет научный и практический интерес.
В связи с вышеизложенным, исследования в области разработки технологии комплексной переработки отходов креветки являются актуальными, имеют научную и практическую значимость.
Цель и задачи исследований. Основной целью исследований является разработка технологии получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата из отходов переработки креветки и применение их в животноводстве.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
- разработать технологию комплексной переработки отходов креветки с применением в качестве ферментсодержащего препарата гомогената поджелудочной железы свиньи;
- оптимизировать технологические параметры процесса получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата, изучить их физико-химические свойства;
- провести доклинические исследования полученных препаратов белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида;
- изучить влияние сукцината хитозана в комплексе с пробиотическим препаратом Проваген на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови, а также на микробиоценоз кишечника молодняка крупного рогатого скота;
- изучить влияние полученного по разработанной технологии белкового гидролизата в составе пробиотического препарата Муцинол на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови молодняка свиней в период отъема.
Научная новизна исследований. Научно обоснована и разработана технология комплексной переработки отходов креветки с использованием ферментсодержащего гомогената поджелудочной железы свиньи. По разработанной технологии получены биологически активные вещества: хитин, хитозан, а также глюкозамина гидрохлорид и белковый гидролизат, не обладающие токсичностью, раздражающим и аллергизирующим действием.
Показано, что включение в основной рацион молодняка крупного рогатого скота сукцината хитозана в составе пробиотического препарата Проваген способствует оптимизации гомеостаза, повышению среднесуточного прироста живой массы, оказывает положительное влияние на микробиоценоз кишечника.
Применение белкового гидролизата в составе пробиотического препарата Муцинол способствует повышению живой массы молодняка свиней в период отъема и оптимизации гомеостаза организма.
Практическая значимость работы. Разработана промышленная технология комплексной переработки отходов креветки с применением в качестве ферментсодержащего препарата гомогената поджелудочной железы свиньи, позволяющая получать хитин, хитозан, глюкозамина гидрохлорид и белковый гидролизат.
Результаты исследований апробированы в установленном порядке в производственных условиях ЗАО Биопрогресс Щелковского района МО, пос. Биокомбината.
Показана эффективность включения в состав рациона молодняка крупного рогатого скота сукцината хитозана в комплексе с пробиотическим препаратом Проваген и белкового гидролизата в комплексе с пробиотическим препаратом Муцинол в состав рациона молодняка свиней.
Основные положения работы, выносимые на защиту.
1. Промышленная технология комплексной переработки отходов креветки.
2. Оптимизация технологических параметров процесса получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата.
3. Доклинические исследования белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида из отходов креветки.
4. Влияние сукцината хитозана в составе пробиотического препарата Проваген на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови и микробиоценоз кишечника молодняка крупного рогатого скота.
5. Влияние белкового гидролизата из отходов креветки в составе пробиотического препарата Муцинол на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови молодняка свиней.
ичный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы работы проводились совместно с доктором биологических наук, профессором Е.В. Крапивиной (Брянская ГСХА); доктором ветеринарных наук, профессором В.Е. Абрамовым (ВИГИС); кандидатом биологических наук М.А. Фроловой (ВНИТИБП); кандидатом химических наук С.А. Лопатиным (Центр Биоинженерия РАН); кандидатом биологических наук А.В. Балышевым (МНИ - ОЗОС); кандидатом биологических наук Е.А. Нестеровым (ООО ШансБио).
Апробация результатов работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИТИБП (2010-2012), на Международной конференции Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана (Нижний Новгород, 2010), Международной конференции Актуальные проблемы биологии в животноводстве (Боровск, 2010), Конференции Инновационные технологии управления здоровьем и долголетием человека (Санкт Петербург, 2010), Международной конференции молодых ученых Пищевые технологии и биотехнологии (Казань, 2010), Международной научной конференции молодежная наука - пищевой промышленности (Ставрополь, 2011), Научно-практической конференции Пищевая и морская биотехнология - для здорового питания и решения медико-социальных проблем (Светлогорск, 2011), Международной научно-практической конференции Морские прибрежные экосистемы. Водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки (Южно-Сахалинск,2011), Международной научно-практической конференции Актуальные аспекты разработки, приготовления, контроля качества и использования ветеринарных иммунобиологических препаратов на основе современных биотехнологий (Алушта, АР Крым, 2011), the 10th International Conference of the European Chitin Society (St.-Petetersburg, 2011), Конференции молодых ученых Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине - (Покров, 2012), Международной конференции Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана (Мурманск, 2012), заседании секции Ветеринарная биотехнология Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (Щелково, 2012), на совещаниях сотрудников отдела биологически активных веществ ГНУ ВНИТИБП (2010-2012).
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликованы 23 научные работы, в том числе 5 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для публикации материалов диссертационных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, материалы и методы, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения. Диссертация иллюстрирована 31 таблицей и 8 рисунками. Список литературы включает 243 источника, из которых 120 отечественных и 123 иностранных. В приложениях представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.
2 Собственные исследования
Работа выполнена в 2010-2012 гг. в отделе получения биологически активных веществ ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Россельхозакадемии в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ, задание 08.06.02 Научно обосновать, разработать и освоить производство новых видов лекарственных средств на основе сырья природного происхождения и микробиологического синтеза, повышающих иммунитет, продуктивность животных, качество и экологическую безопасность продукции животноводства.
Материалы и методы
Исходным сырьем для получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата были выбраны отходы креветки (ТУ 15-04-545-87). В качестве ферментсодержащего препарата использовали гомогенизированную на коллоидной мельнице поджелудочную железу свиньи (ГОСТ 11285-93). Протеолитическую активность гомогената поджелудочной железы свиньи определяли методом Ансона (А.П. Рухлядева, Г.В. Полыгалина, 1981).
Разработку и оптимизацию основных режимов технологии получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата осуществляли в экспериментально-производственных условиях. Гидролиз исходного сырья проводили в реакторе емкостью 250 л, высушивание гидролизата осуществляли на распылительной сушке NIRO - ATOMIZER.
При разработке технологии получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата изучали оптимальные условия проведения ферментативного гидролиза (концентрация ферментного препарата, время, температура, соотношение субстрат:вода), процесса депротеинирования ХСС (концентрация щелочи, соотношение субстрат:вода, время, температура), деминерализации ХСС (концентрация кислоты, время, температура, соотношение субстрат:вода), кислотного гидролиза хитина (температура, время, соотношение хитин:кислота).
Степень деацетилирования (СД) хитозана определяли методом кондуктометрического титрования (L. Raymond, et al., 1993). Средневесовую молекулярную массу, среднечисловую массу и значение полидисперсности образцов хитозана определяли методом гель-проникающей высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на приборе Sykam (Германия). Глубину гидролиза оценивали по накоплению свободных аминогрупп (аминный азот) в жидком гидролизате. Количество белка в препаратах хитина определяли по биуретовой реакции (A.G. Gornall, et al., 1949), содержание золы и воды в хитозане, концентрацию аминогрупп в белковом гидролизате - по ГОСТ 7636-85.
Доклинические исследования белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида проводили в соответствии с Методическими рекомендациями Фармакологического Государственного комитета Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Москва, 2005) на базе аккредитованной испытательной лаборатории и вивария МНИ - ОЗОС при ГНУ ВИГИС им. К.И. Скрябина.
Эффективность применения пробиотического препарата Проваген производства ООО Пробиотик центр (ТУ 9291-001-81668197-200) и его комплекса с сукцинатом хитозана (ТУ 9284-027-11734126-08) оценивали на телятах швицкой породы 2-3 - недельного возраста в СПК "Ильинск" Смоленской области. Препарат Проваген применяли согласно рекомендациям предприятия-изготовителя.
С учетом живой массы и интенсивности роста методом парных аналогов были сформированы 3 группы телят по 10 голов в каждой: I-ая группа-контрольная, II-ая и III-я - опытные. Животные всех групп получали основной рацион, принятый в хозяйстве. Телятам II-ой группы ежедневно в течение 7 суток давали пробиотик Проваген (14 г/голову) содержащий в своем составе пробиотические штаммы Bacillus licheniformis ВКМ В-2414 и Bacillus subtilis ВКМ В-2287 , животным III-ей группы - комплекс этого пробиотика (14 г/голову) с сукцинатом хитозана (1,6 г/голову). Дневную дозу препаратов выпаивали вместе с молоком во время утреннего и вечернего кормления. За животными вели наблюдение в течение 10 недель с начала опыта. Через 5 суток после окончания опыта у животных брали содержимое кишечника для микробиологического анализа. Пробы крови для биохимического и клинического анализа получали утром до кормления из яремной вены перед началом опыта и через 10 суток после его окончания.
Влияние белкового гидролизата в составе пробиотического препарата Муцинол производства ООО КРОС Фарм (ТУ 9291-001-90166827-2011) на прирост живой массы, клинические и биохимические показатели крови молодняка свиней изучали в условиях свинокомплекса ОАО Аграрная группа РОСТ Московской области.
С учетом живой массы и интенсивности роста методом парных аналогов были сформированы 3 опытные группы поросят крупной белой породы 4-недельного возраста по 10 голов в каждой. Животные I-ой контрольной группы получали общий рацион, принятый в хозяйстве. Поросята II-ой группы в дополнение к основному рациону в течение 10 дней получали препарат Муцинол, содержащий в своем составе споры Bacillus subtilis ВКМ В-2716D и Bacillus licheniformis ВКМ В-2717D в концентрации не менее 1109 КОЕ/г и хитозан с молекулярной массой 500 кДа в дозе 5 г/голову. Животным III-ей группы в течение 10 дней скармливали препарат Муцинол (5 г/ голову) и гидролизат из отходов креветки в дозе 1г/кг живой массы. За животными вели наблюдение в течение 6 недель с начала опыта. Пробиотический препарат Муцинол применяли согласно рекомендациям предприятия-изготовителя.
Биохимический спектр сыворотки крови определяли с помощью автоматического биохимического анализатора Olympus AU 400. Гематологические показатели определяли с помощью автоматического гематологического анализатора PCE 90-vet. Исследования фекалий и типизацию микроорганизмов проводили согласно Методическим рекомендациям Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника (1990).
При анализе и статистической обработке результатов использовали программу Microsoft Excel, входящую в пакет программ Microsoft Office, 2007. Для выявления статистически значимых различий использовали критерий Стьюдента-Фишера (Н.А. Плохинский, 1961).
Результаты собственных исследований
Разработка технологии комплексной переработки отходов креветки. В настоящее время предложены различные методы ферментативной обработки ХСС, которые предполагают использование кислых и щелочных протеиназ, панкреатина, трипсина, коллагеназы, собственных ферментных комплексов членистоногих. Полученные таким способом хитин и белок отличаются более высоким качеством, так как при этом используются щадящие условия, что позволяет максимально сохранить нативные свойства полимеров. Однако использование в промышленных условиях очищенных ферментов повышает себестоимость полученных продуктов. В связи с этим, весьма перспективной и экономически обоснованной является разработка технологии комплексной переработки отходов креветки с применением в качестве ферментсодержащего препарата гомогената поджелудочной железы свиньи, что позволяет снизить стоимость целевых продуктов.
Получение белкового гидролизата. С целью повышения доступности для ферментов предварительно размороженные отходы креветки гомогенизировали на коллоидной мельнице до получения однородной массы. Химический состав полученного гомогената представлен в таблице 1.
Таблица 1
Химический состав отходов креветки
Массовая доля, % | ||||
влага | белки | ипиды | хитин | минеральные вещества |
65,0-75,0 | 12,2-14,5 | 3,1-6,4 | 4,5-5,1 | 5,2-6,0 |
В качестве источника фермента использовали предварительно гомогенизированную на коллоидной мельнице поджелудочную железу свиньи с протеолитической активностью 0,09-0,1 ПЕ/мг. При отработке процесса гидролиза было изучено влияние следующих экспериментальных факторов: соотношение субстрат-вода, концентрация фермента и продолжительность процесса.
В результате проведенных исследований установлены оптимальные параметры ферментативного гидролиза: ферментолиз суспендированных в воде отходов креветки в соотношении 2:1 гомогенатом поджелудочной железы в количестве 10% от объема сырья при температуре 470С, рН 7,9-8,1 в течение 6 часов; инактивация фермента нагреванием реакционной смеси до 90-100 0С с последующим охлаждением до 40 0С; отстаивание в течение 20 часов; фильтрация гидролизата через бельтинг ткань на нутч фильтре.
Полученный жидкий гидролизат содержал не менее 1095 мг% свободных аминогрупп. Выход сухого продукта составил 9,4-10,8% от массы исходного сырья. Органолептические и физико-химические свойства полученного белкового гидролизата представлены в таблице 2.
Таблица 2
Органолептические и физико-химические свойства гидролизата из отходов креветки
Наименование показателей | Характеристика и значение показателей |
Внешний вид, цвет | Порошок розовый с серым оттенком |
Запах, вкус | Специфический |
рН 1% раствора | 7,8-8,0 |
Общий азот, %, не менее | 9,8 |
Аминный азот, %, не менее | 6,4 |
Степень гидролиза (Nам/Nоб),%, не менее | 62,2 |
Влажность (распылительная сушка), %, не более | 5,8 |
Результаты изучения аминокислотного состава сухого препарата показали, что полученный белковый гидролизат содержит все незаменимые аминокислоты, в том числе триптофан (таблица 3).
Таблица 3
Количественная характеристика аминокислот в белковом гидролизате
Заменимые аминокислоты | Содержание аминокислот, г/100 г | Незаменимые аминокислоты | Содержание аминокислот, г/100 г |
Аргинин | 6,82 | Валин | 4,92 |
Аспарагиновая кислота | 6,35 | Метионин | 2,84 |
Тирозин | 3,67 | ейцин | 6,22 |
Серин | 2,76 | Изолейцин | 4,58 |
Глутаминовая кислота | 7,81 | Треонин | 3,28 |
Пролин | 3,37 | Фенилаланин | 3,91 |
Глицин | 3,64 | изин | 5,83 |
Аланин | 5,27 | Гистидин | 2,65 |
Цистин | 1,15 | Триптофан | 0,21 |
Сумма: 75,28 г/100 г | |||
Количество незаменимых аминокислот в гидролизате составило 34,44 г/100г белка. Как видно из таблицы 3, в гидролизате из отходов креветки превалирует содержание аргинина, аспаргиновой и глутаминовой кислоты, валина, лейцина и лизина.
Таким образом, в результате отработки технологических параметров гидролиза отходов креветки с использованием в качестве ферментсодержащего препарата гомогената поджелудочной железы свиньи получен препарат белкового гидролизата, содержащий в своем составе не менее 6,4% аминного азота и все незаменимые аминокислоты.
Получение хитина. Для получения качественного препарата хитина необходимо снизить в нем содержание белка до 1-2%. После проведения ферментативного гидролиза уровень содержания белка в хитине составил 6-10%. Удаление остаточного белка достигалось мягким гидролизом щелочами в низких концентрациях при невысокой температуре, что позволяет максимально сохранить молекулярную массу хитина.
Исходным материалом для изготовления хитина служил креветочный жом, полученный после ферментативного гидролиза отходов креветки. С целью определения оптимальных условий депротеинирования были изучены концентрационные, температурные и временные параметры процесса, что позволило максимально снизить остаточное содержание белка в препарате хитина. Отработку процесса депротеинирования хитинсодержащего материала проводили при концентрации NaOH 0,25-3%, продолжительности процесса 0,5-4ч, температуре 600C и соотношении сырье:раствор щелочи 1:5. В результате проведенных исследований установлено, что обработка хитинсодержащего материала 1%-ным раствором NaOH в соотношении 1:5 при 600C в течение 3 часов позволило снизить содержание белка в хитине до 0,9-1,2%. Следует отметить, что депротеинирование необходимо проводить сразу после ферментолиза, когда хитин находится в набухшем состоянии и молекулы щелочи более эффективно проникают в его структуру.
При оптимизации условий деминерализации хитина установлено, что наиболее эффективной является обработка 2%-ным раствором соляной кислоты при соотношении твердой и жидкой фазы 1:4, температуре 60 0С в течение 2 часов. При данных условиях был получен хитин с содержанием минеральных веществ менее 1% (таблица 4). Использование более высоких концентраций соляной кислоты нежелательно, так как это приводит к снижению молекулярной массы полимера.
Таблица 4
Качественные показатели хитина из отходов креветки
Наименование показателя | Требования ТУ 64-14-170-89 (хитин) | Хитин из отходов креветки |
Внешний вид | порошок или хлопья | хлопья |
Цвет | от белого до серовато-розового | светло-кремовый |
Массовая доля влаги, % | 10,0 | 9,1-9,2 |
Минеральные вещества, % | 1,0 | 0,85-0,95 |
Белковые вещества, % | 1,5 | 0,9-1,2 |
Таким образом, в результате проведенных исследований был получен препарат хитина, соответствующий требованиям ТУ 64-14-170-89.
Получение хитозана. В качестве исходного материала для изготовления хитозана использовали хитин, полученный нами ранее. Деацетилированием хитина 50% раствором NaOH в соотношении 1:6 при 1200С в течение 2 ч получен препарат хитозана. После промывки водой до рН 7,5-8,0 и конвекционной сушки были изучены органолептические и физико-химические свойства препарата (таблица 5).
Таблица 5
Органолептические и физико-химические показатели хитозана
Наименование показателей | Характеристика и значение показателей |
Внешний вид | Чешуйки 1-3 мм |
Цвет | Белый с желтым оттенком |
Запах, вкус | Специфический |
рН 1% раствора хитозана в 1% растворе уксусной кислоты | 4,7 - 4,9 |
Влажность, % | 9,1 - 9,2 |
Молекулярная масса, кДа | 250-290 |
Степень деацетилирования, % | 79-85 |
Содержание белка, % | 0,7-0,9 |
Зольность, % | 0,85-0,97 |
Получение глюкозамина гидрохлорида. Глюкозамина гидрохлорид был получен гидролизом хитина концентрированной соляной кислотой в соотношении 1:3 при 950С в течение 3 часов. С целью увеличения выхода конечного продукта на 5-7% нами введена дополнительная стадия, которая включает в себя добавление к гидролизату 10% (от объема гидролизата) этилового спирта, охлаждение до 50С, выдерживание реакционной смеси при этой температуре в течение 16 ч для кристаллизации соли.
Важным этапом в получении глюкозамина является его очистка от побочных продуктов гидролиза хитина. Установлено, что трехкратная обработка препарата этиловым спиртом в соотношении 2:1 при 800С в течение 10-15 минут с последующим освобождением от спирта фильтрованием позволило получить глюкозамина гидрохлорид со степенью чистоты 89%. Нами введена дополнительная стадия очистки активированным углем при соотношении глюкозамин:уголь 10:1, перемешивании и температуре 70-800С в течение 10 минут. После этого полученный бесцветный или бледно-желтый раствор подвергалсяя высушиванию на распылительной либо на лиофильной сушилке.
Степень чистоты полученного препарата была определена с использованием высокоэффективной обращенно-фазовой хроматографии. Как показали результаты хроматографических исследований (рисунок 1), введение этапа дополнительной очистки позволило получить препарат глюкозамина гидрохлорида со степенью чистоты 99,07 %.
COLUMN: Shodex Asahipac NH2P-50 4E Size: 4.6x 250 mm Number: 709032 Part.size: 5.0 m ELUENT: CH3CN : H2O = 70 :30 Flow: 0.80 мл/мин Temperature: 25.0 C Pressure: 86.0 бар No Retention Area Area Name мин mV*сек % 1 2.8 67.49 0.93 2 7.233 7201,51 99.07 _____________________________ 2 13.35 7269.11 100.00 |
Рисунок 1 Хроматограмма глюкозамина гидрохлорида
Схема комплексной переработки ХСО креветки. В результате проведенных исследований предложена схема технологии комплексной переработки отходов креветки для получения хитина, хитозана глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата (рисунок 2). Разработанная технология апробирована и используется в промышленных условиях на предприятии ЗАО Биопрогресс.
| Отходы креветки | ||
Гомогенизация | ||
Вода, фермент (461С) | Ферментолиз (6ч) | |
(нагрев до 955С) | Инактивация фермента | |
Отстаивание | ||
Фильтрование | ||
Раствор гидролизата | Креветочный жом | |
Сушка | 1% р-р NaOH (601С) | Депротеинирование (3 часа) |
Порошок гидролизата | Вода | Промывка водой до рН 7,5 |
Упаковка | ||
2% р-р HCl (601С) | Деминерализация (2 часа) | |
Промывка водой до рН 7,5 | ||
Хитин | ||
Сушка | 50% р-р NaOH (1201С) | Деацетилирование (2 часа) |
Конц. НCl (951С) | Гидролиз (3 часа) | Промывка водой до рН 7,5 |
Охлаждение до (51С) | Хитозан | |
Кристаллизация (16-18 ч.) | Сушка | |
Отделение осадка | Расфасовка | |
Этиловый спирт | Промывка | НCl |
Вода дистиллированная | Растворение осадка | Фильтрат |
Активированный уголь | Очистка раствора | |
Фильтрация | ||
Сушка | ||
Глюкозамина гидрохлорид | ||
Упаковка |
Рисунок 2 Технологическая схема комплексной переработки
отходов креветки
Доклинические исследования белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида.
Исследование белкового гидролизата. Острая токсичность белкового гидролизата была определена внутрижелудочным введением белым мышам в дозах от 1000 до 6000 мг/кг. Установлено, что введение гидролизата во всех тестируемых дозах ни в одном случае не привело к гибели животных. У всех мышей отсутствовали признаки интоксикации. В связи с тем, что верхняя доза была максимально возможной для внутрижелудочного введения, значение LD50 исследуемого препарата превышало 6000 мг/кг. Согласно общепринятой классификации и общим требованиям безопасности ГОСТ 12.1.007, белковый гидролизат был отнесен к малоопасным веществам (IV-ый класс опасности по ГОСТ 12.1.007).
При изучении субхронической токсичности на белых крысах было выявлено, что при внутрижелудочном введении в дозах 1000, 2000 и 4000 мг/кг в течение 14 дней гидролизат не оказывал отрицательного влияния на функцию жизненно важных органов и систем лабораторных животных.
Нанесение белкового гидролизата на слизистую конъюнктивы глаз кроликов показало, что препарат оказывал слабое раздражающее действие (не более 1 балла).
При изучении аллергизирующего (сенсибилизирующего) действия гидролизата из отходов креветки методом реакции непрямой дегрануляции тучных клеток установлено, что при однократном подкожном введении морским свинкам в дозе 0,2 мл/кг препарат сенсибилизацию организма не вызывал. При накожном ежедневном нанесении гидролизата в течение 7 суток раздражающего действия также не установлено.
Исследование глюкозамина гидрохлорида. Путем внутрижелудочного введения препарата белым крысам в нарастающих дозах от 2000 до 12000 мг/кг изучена острая токсичность глюкозамина гидрохлорида. Установлено, что LD50 глюкозамина гидрохлорида превышало 12000 мг/кг при отсутствии у животных признаков интоксикации. Таким образом, глюкозамина гидрохлорид был отнесен к малоопасным веществам (IV-ый класс опасности по ГОСТ 12.1.007). Дальнейшие исследования препарата свидетельствовали об отсутствии отрицательного влияния на функцию жизненно важных органов и систем белых крыс при многократном внутрижелудочном введении, слабом раздражающем действии на слизистую конъюнктивы глаза кроликов и отсутствии сенсибилизирующего действия на организм морских свинок.
Эффективность применения сукцината хитозана в комплексе с пробиотическим препаратом Проваген. Задача заключалась в оценке влияния сукцината хитозана в сочетании с пробиотическим препаратом Проваген на интенсивность роста и развития телят, динамику морфологических и биохимических показателей крови подопытных животных, на микрофлору содержимого желудочно-кишечного тракта.
В ходе эксперимента установлено, что введение в рацион испытуемого пробиотика и его комплекса с сукцинатом хитозана способствовало увеличению живой массы опытных животных, по сравнению с контролем, на 4,2% и 6,3%, соответственно (таблица 6).
Таблица 6
Показатели живой массы телят в течение десяти недель опыта
Показатель | I-ая группа, n=10 | II-ая группа, n=10 | III-я группа, n=10 |
Живая масса в начале опыта, кг | 50,7+2,45 | 50,4+2,10 | 50,42,23 |
Живая масса через 10 недель опыта, кг | 91,6+4,20 | 95,5+3,90 | 97,4+3,75 |
Валовой прирост живой массы за 10 недель опыта, кг | 40,91,96 | 45,11,89 | 472,11* |
Среднесуточный прирост в течение 10 недель опыта, г | 584+23,02 | 646+29,99* | 671+35,94* |
Примечание: * P0,05 к контрольной группе
Также установлено, что за весь период опыта среднесуточный прирост телят II-ой и III-ей опытных групп был выше в сравнении с аналогами из контроля на 10,0 % и 14,9 %, соответственно. При этом животные III-ей группы опережали аналогов II-ой группы по данному показателю на 3,8%. Молодняк опытных групп по абсолютному приросту живой массы превосходил телят контрольной группы. Более высокие приросты наблюдались у животных, получавших пробиотический препарат Проваген и сукцинат хитозана, которые за весь период опыта превосходили аналогов I-ой и II-ой групп на 14,9% и 4,2%, соответственно.
При изучении клинических и биохимических показателей крови установлены достоверные межгрупповые различия (таблица 7). У животных II-ой и III-ей групп количество эритроцитов и гемоглобина в крови было выше, по сравнению с телятами контрольной группы, на 4,9 и 6,2% и на 8,5% и 6,0%, соответственно. Содержание общего белка в крови животных II и III групп было выше по сравнению с контрольной группой на 10,5 и 14,5%, глобулинов - на 30,2 и 21,7%, соответственно. Отмечено снижение содержания холестерина и триглицеридов в сыворотке крови телят III-ей группы по сравнению с I-ой и II-ой группой на 59,0 и 40,7%, соответственно.
Таблица 7
Клинические и биохимические показатели крови телят
Показатели | Норма | I-ая группа, n=5 | II-ая группа, n=5 | III-я группа, n=5 |
Гематокрит, % | 24-46 | 42,41,21 | 41,70,97 | 41,70,92 |
Гемоглобин, г/л | 80-150 | 119,95,4 | 122,15,1 | 121,15,2 |
Эритроциты, 1012/л | 5,0-10,0 | 7,220,39 | 7,150,28 | 7,140,37 |
Общий белок, г/л | 61-82 | 63,52,2 | 76,42,3* | 77,72,6* |
Глобулины, г/л | 30-50 | 27,11,9 | 35,32,2 | 33,01,7 |
Холестерин, ммоль/л | 1,3-5,0 | 3,710,30 | 3,480,28 | 1,520,24* |
Триглицериды, ммоль/л | 0,20-0,60 | 0,540,12 | 0,580,10 | 0,320,06* |
P, ммоль/л | 1,45-1,9 | 1,620,17 | 1,760,10 | 1,780,04 |
Ca, ммоль/л | 2,5-3,3 | 2,680,17 | 2,570,19 | 2,370,08* |
АСТ, Ед/л | 46-130 | 56,59,8 | 85,411,8* | 97,19,7* |
АЛТ, Ед/л | 5-40 | 15,23,2 | 25,13,0* | 28,52,6* |
Щелочная фосфатаза, Ед/л | 20-155 | 218,322,5 | 261,224,8* | 248,018,4 |
Примечание: * P0,05 к контрольной группе
Изучено влияние пробиотического препарата Проваген и комплекса Проваген с сукцинатом хитозана на состав микрофлоры содержимого желудочно-кишечного тракта телят (таблица 8).
Таблица 8
Результаты исследований микрофлоры кишечника телят
Группа животных | КМАФАнМ1 | Группы микроорганизмов | ||||
Молочно-кислые1 | БГКП1 | Энтерококки1 | Стафилококки2 | Дрожжи и плесени3 | ||
I | 6023,7176,2 | 367,231,4 | 321,520,9 | 1,570,21 | 19,61,76 | 458,527,7 |
II | 7587,3211,5 | 529,127,9 | 197,318,8 | 1,080,09 | 11,530,84 | 234,413,2 |
III | 8267,7238,9 | 553,823,6 | 181,627,7 | 0,790,13 | 13,31,28 | 198,617,9 |
Примечание: 1 - млн.КОЕ/г; 2 - тыс.КОЕ/г; 3 - КОЕ/г
Данные, представленные в таблице 8, свидетельствуют об увеличении количества мезофильно-аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), а также молочнокислых бактерий в содержимом желудочно-кишечного тракта животных II-ой и III-ей групп, в сравнении с контрольной группой животных, на 20,6 и 30,5% и на 37,2 и 33,7 %, соответственно, что является сдерживающим фактором размножения условно-патогенной микрофлоры. Так, в пробах кала телят II и III групп количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), энтерококков, стафилококков, грибов и плесеней было меньше по сравнению с контролем, на 61,4 и 56,5%; 68,8 и 50,3%; 58,7 и 67,9% и 51,2 и 43,3%, соответственно. При этом наименьшее содержание условно-патогенной микрофлоры установлено в пробах кала телят, получавших препарат Проваген в комплексе с сукцинатом хитозана. Соотношение БГКП к молочнокислым бактериям в содержимом желудочно-кишечного тракта животных данной группы составило 1:3,05 против 1:1,14 у телят контрольной группы, что является показателем сбалансированного микробиоценоза.
Таким образом, включение в рацион телят сукцината хитозана в комплексе с пробиотическим препаратом Проваген способствует повышению среднесуточного привеса молодняка, оптимизации гомеостаза и оказывает позитивное влияние на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта животных.
Эффективность применения белкового гидролизата из отходов креветки в составе пробиотического препарата Муцинол. При изучении эффективности применения белкового гидролизата из отходов креветки в комплексе с пробиотическим препаратом Муцинол оценивали его влияние на прирост живой массы, биохимические и клинические показатели крови молодняка свиней.
Показатели живой массы поросят контрольной и опытных групп представлены в таблице 9.
Таблица 9
Изменение показателей живой массы поросят за десять недель опыта
Показатели | I-ая группа, n=10 | II-ая группа, n=10 | III-я группа, n=10 |
Живая масса в начале опыта, кг | 7,450,32 | 7,620,27 | 7,340,46 |
Живая масса через 6 недель опыта, кг | 22,430,57 | 24,010,44 | 24,690,66 |
Валовой прирост живой массы за 6 недель опыта, кг | 14,980,88 | 16,390,79 | 17,350,90* |
Среднесуточный прирост живой массы в течение 6 недель опыта, г | 35619,7 | 39018,2 | 41322,9 |
Примечание: * P0,05 к контрольной группе
В результате проведенных исследований установлено, что введение в рацион молодняка свиней пробиотического препарата Муцинол и его комплекса с гидролизатом из отходов креветки способствовало увеличению живой массы опытных животных, по сравнению с контролем, на 7,0 % и 10,1 %, соответственно. Животные II-ой и III-ей групп за период опыта превосходили аналогов из контроля по среднесуточному приросту живой массы на 9,5% и 16,0 %, по абсолютному приросту - на 9,4% и 15,8%, соответственно.
При изучении клинических и биохимических показателей крови установлены достоверные межгрупповые различия (таблица 10). У животных II-ой и III-ей групп отмечена тенденция к увеличению содержания эритроцитов, содержание гемоглобина было выше, по сравнению с контролем, на 10,2 и 17%, соответственно.
Таблица 10
Клинические и биохимические показатели крови поросят
Показатели | Норма | Группы | |||||
I-ая группа, n=5 | II-ая группа, n=5 | III-я группа, n=5 | |||||
до опыта | после опыта | до опыта | после опыта | до опыта | после опыта | ||
Гематокрит, % | 39-43 | 39,80,4 | 39,71,0 | 39,51,3 | 41,20,3* | 41,01,4 | 40,30,7 |
Гемоглобин, г/л | 90-110 | 91,73,1 | 93,21,6 | 90,76,0 | 102,70,3* | 89,83,6 | 109,10,3* |
Эритроциты, 1012/л | 6-7,5 | 6,370,33 | 6,820,17 | 6,270,36 | 6,910,14 | 6,480,25 | 6,940,11 |
Общий белок, г/л | 60-85 | 60,52,1 | 65,51,7 | 60,21,5 | 78,51,2* | 60,71,5 | 83,81,3* |
Кальций, ммоль/л | 2,5-3,5 | 2,460,18 | 2,570,2 | 2,520,39 | 2,690,17 | 2,550,20 | 2,770,09 |
Фосфор, ммоль/л | 1,3-1,9 | 1,480,17 | 1,670,18 | 1,680,15 | 1,80,17 | 1,650,10 | 1,860,11 |
Общий холестерин, ммоль/л | 0,2-3,9 | 1,890,17 | 2,020,12 | 1,870,46 | 1,020,28* | 1,920,39 | 1,430,11* |
Щелочная фосфатаза, Ед/л | 140-200 | 280,724,6 | 199,728,3 | 273,027,1 | 23516,5 | 278,715,2 | 211,317,2 |
Примечание: * P0,05 к контрольной группе
Как видно из данных, представленных в таблице 10, биохимические показатели крови поросят II-ой и III-ей групп в конце опыта превосходили показатели контрольной группы по содержанию белка на 19,8 и 27,9%, по активности щелочной фосфатазы - на 17,6 и 5,6%, соответственно. Содержание общего холестерина в крови поросят II-ой и III-ей групп было ниже на 49,5% и 29,2%.
Таким образом, применение пробиотического препарата Муцинол и его комплекса с гидролизатом из отходов креветки при кормлении молодняка свиней в период отъема позволяет повысить среднесуточный прирост живой массы животных и оказывает положительное влияние на биохимические и клинические показатели крови.
3. Выводы
- Разработана и предложена для промышленного применения технология комплексной переработки отходов креветки для получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата.
- Оптимизированы технологические параметры получения белкового гидролизата из отходов креветки, включающие обработку сырья 10% гомогенатом поджелудочной железы с протеолитической активностью 0,09-0,1 ПЕ/мг при температуре 470С, рН 7,9-8,1 в течение 6 часов, при которых выход сухого гидролизата составляет 9,4-10,8% от массы исходного сырья.
- Определены технологические параметры получения глюкозамина гидрохлорида со степенью чистоты не менее 99% из креветочного хитина, включающие гидролиз соляной кислотой при 95С в течение 3 часов, кристаллизацию 10% этиловым спиртом при 5С с последующей очисткой препарата этиловым спиртом и активированным углем.
- Доклинические исследования полученных по разработанной технологии препаратов белкового гидролизата и глюкозамина гидрохлорида показали, что испытуемые препараты относятся к IV-му классу опасности, не влияют на функцию жизненно важных органов и систем лабораторных животных при многократном внутрижелудочном введении и оказывают слабое раздражающее действие на слизистую конъюнктивы глаза кроликов.
- Включение в рацион молодняка крупного рогатого скота комплекса сукцината хитозана в дозе 1,6г/голову с пробиотическим препаратом Проваген в дозе 14г/голову способствует повышению среднесуточного привеса телят на 14,9 %, положительно влияет на клинические и биохимические показатели крови, а также приводит к снижению уровня патогенной и условно-патогенной микрофлоры и повышению содержания нормальной микрофлоры в желудочно-кишечном тракте животных.
- Показано, что применение белкового гидролизата из отходов креветки в дозе 1г/кг живой массы в комплексе с пробиотическим препаратом Муцинол в дозе 5г/голову при откорме молодняка свиней в послеотъемный период способствует повышению среднесуточных привесов на 16,0 % и оказывает положительное влияние на клинические и биохимические показатели крови.
4. Практические предложения
На основании проведенных исследований предлагаются для практики:
- Промышленная технология комплексной переработки отходов креветки для получения хитина, хитозана, глюкозамина гидрохлорида и белкового гидролизата;
- Лабораторный технологический регламент изготовления глюкозамина, утвержден директором ВНИТИБП 26 сентября 2011г.
- Методические положения по применению белкового гидролизата из отходов промысла креветки в свиноводстве, утверждены академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины, академиком РАСХН А.М. Смирновым 15 августа 2012 г.
5. Список работ, опубликованных по теме диссертации
- Биологические свойства различных форм и модификаций хитозана при использовании их в ветеринарии, животноводстве и агробиологии / А.И. Албулов, М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко, С.М. Шинкарев, О.В. Буханцев, В.П. Варламов, Е.В. Крапивина, Ю.Д. Фролов // Актуальные проблемы биологии в животноводстве: материалы пятой международной конференции. - Боровск, 2010. - С. 124-125.
- Влияние способа высушивания на качество продукта при производстве хитозана и хитозансодержащей продукции / А.И. Албулов, М.А. Фролова, Б. А. Комаров, С.М. Шинкарев, О.В. Буханцев, В.И. Еремец // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы десятой Международной конференции. - Нижний Новгород, 2010. - С. 74-77.
- Отечественные хитозансодержащие биологически активные добавки / А.И. Албулов, В.П. Варламов, М.А. Фролова, Б.А. Комаров, О.В. Буханцев // Инновационные технологии управления здоровьем и долголетием человека: материалы конференции. - Санкт Петербург, 2010. - С. 10-14.
- Разработка промышленных технологий изготовления ферментных препаратов протеолитического действия для использования в различных областях народного хозяйства / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, В.П. Варламов, Р.В. Рогов, О.В. Буханцев // Перспективные биокатализаторы для перерабатывающих отраслей АПК: сборник научных трудов. - Москва, 2010. - С. 123-128.
- Разработка технологии получения глюкозамина гидрохлорида из хитина камчатского краба / М.А. Фролова, О.В. Буханцев, А.И Албулов, А.В. Бакулин, А.И. Левов, С.А. Лопатин, В.П. Варламов // Пищевые технологии и биотехнологии: матер. XI Международной конференции молодых ученых. - Казань, 2010. - С. 34-36.
- Современное состояние и перспективы производства хитозан-содержащей продукции в России / А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, М.А. Фролова, А.В. Гринь, О.В. Буханцев, В.П. Варламов // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы десятой Международной конференции. - Нижний Новгород, 2010. - С. 7-9.
- Хитозансодержащие биологически активные добавки к пище в рационализации питания населения / А.И. Албулов, М.А. Фролова, О.В. Буханцев, В.М.Быкова, С.В. Немцев, Б.А. Комаров // Рыбпром. - 2010. - №2. - С. 25-28.
- Эффективность применения препаратов хитозана при заболеваниях кожи и химических и термических ожогах / М.А. Фролова, Е.И. Лебедько,С.М. Шинкарев, А.И. Албулов, О.В. Буханцев, Ю.Д. Фролов // Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства: материалы Международной научно-практической конференции. - Самара, 2010. - С. 334-337.
- Буханцев, О.В. Применение хитозана в производстве продуктов питания / О.В. Буханцев // Молодежная наука - пищевой промышленности: материалы II международной научной конференции. - Ставрополь, 2011. - С. 67-69.
- Буханцев, О.В. Опыт скармливания хитозана в качестве биодобавки к пробиотическому препарату Проваген / О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, П.Н. Абрамов // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: сборник научных трудов молодых ученых, выпуск 7. - Москва, 2011. - С.53-56.
- Application experience of chitosan in veterinary practice / M.A. Frolova, A.I. Albulov, A.J. Samujlenko, S.M. Shinkarev, O.V. Buhantsev // Adv. Chitin Sci.: the 10th International Conference of the European Chitin Society. - St.-Petetersburg, 2011. - Vol. 11. - P. 8-9.
- Изучение влияния хитозана в составе рациона кормления на продуктивность цыплят-бройлеров / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, О.В. Буханцев, П.А. Красочко // Ветеринарна медицина: мiжвiдомчий тематичний науковий збiрник. - 2011. - Випуск 95. - С. 414-415.
- ечебная эффективность хитозановых препаратов / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, С.Д. Антонов, С.М. Шинкарев, А.В. Гринь, О.В. Буханцев, Ю.Д. Фролов // Ветеринарна медицина: мiжвiдомчий тематичний науковий збiрник. - 2011. - Випуск 95. - С. 232-233.
- Перспективы получения биологически активных добавок к пище на основе морепродуктов / А.И. Албулов, М.А. Фролова, А.Я. Самуйленко, В.П. Варламов, В.М. Быкова, О.В. Буханцев // Морские прибрежные экосистемы. Водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки: тезисы докладов четвертой международной научно-практической конференции. - Южно-Сахалинск, 2011. - С. 192-193.
- Хитозансодержащие биологически активные добавки - источники активных компонентов пищи / А.И. Албулов, М.А. Фролова, В.П. Варламов, А.В. Гринь, О.В. Буханцев, В.М. Быкова // Пищевая и морская биотехнология - для здорового питания и решения медико - социальных проблем: материалы IV Научно-практической конференции. - Светлогорск, 2011. - С. 6-7.
- Хитозан в составе пробиотической кормовой добавки Проваген / Е.В. Крапивина, Д.В. Иванов, А.И. Феськов, А.И. Албулов, М.А. Фролова, О.В. Буханцев // Ветеринария и кормление. - 2012. - №1. ЦС. 30-31.
- Крапивина, Е.В. Влияние выпаивания телятам разных доз пробиотика Проваген и комплекса этого пробиотика с хитозаном на микробиоцидную активность нейтрофилов крови / Е.В. Крапивина, Д.В. Иванов, А.И. Феськов, М.А. Фролова, А.И. Албулов, О.В. Буханцев // Научный журнал КубГАУ [Электронный ресурс].- Краснодар: КубГАУ, 2012. - № 02(76). - 12 с. - Режим доступа:
- Перспективы применения хитозана и его производных в составе ветфарм-препаратов / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, В.П. Варламов, А.В. Гринь, О.В. Буханцев // Фармацевтические и медицинские биотехнологии: материалы международной научно-практической конференции. - М., 2012. - С. 295-296.
- Влияние комплекса хитозан-пробиотик на морфо-биохимические показатели гомеостаза молодняка свиней / О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, М.А. Фролова, А.И. Албулов // Ветеринария и кормление. - 2012. - №2. ЦС. 32-33.
- Применение хитозана и белковых гидролизатов в комплексе с пробиотиком Муцинол при откорме поросят / О.В. Буханцев, Р.В. Рогов, М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.В. Гринь, Р.С. Краснокутский, П.Н Абрамов // Свиноводство. - 2012. - №3. ЦС. 69-71.
- Рогов, Р.В. Применение белкового гидролизата при лечении гипотрофии поросят / Р.В. Рогов, О.В. Буханцев, П.Н. Абрамов // Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине: материалы II-ой конференции молодых ученых.- Покров, 2012. - С. 35-39.
- Буханцев, О.В. Технология комплексной переработки отходов промысла креветки / О.В. Буханцев, Р.В. Рогов // Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине: материалы II-ой конференции молодых ученых.- Покров, 2012. - С. 162-164.
- Эффективность применения хитозана в качестве пребиотика при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных / А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, М.А. Фролова, О.В. Буханцев, В.И. Еремец, А.А. Раевский, Ю.Д. Фролов // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: материалы одиннадцатой Международной конференции. - Мурманск, 2012. - С. 245-249.
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии