СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ДОЛГОВЕГЕТИРУЮЩИХ ВИДОВ РОДА EUPHRASIA L. ФЛОРЫ ПЕРМСКОГО КРАЯ 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Пермь 2012

Авторефераты по всем темам >> Авторефераты по медицине

На правах рукописи

Кроткова Ольга Александровна

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ДОЛГОВЕГЕТИРУЮЩИХ ВИДОВ РОДА EUPHRASIA L.

ФЛОРЫ ПЕРМСКОГО КРАЯ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Пермь 2012

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный руководитель:	кандидат фармацевтических наук, доцент Бомбела Татьяна Владимировна
Официальные оппоненты:	доктор фармацевтических наук, профессор Фурса Николай Сергеевич ГБОУ ВПО Ярославская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России
	кандидат фармацевтических наук, доцент Калина Милитина Александровна ГБОУ ВПО Пермская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России
Ведущая организация:	ГБОУ ВПО Самарский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России

Защита состоится л18 сентября 2012 г. в 13.00 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.068.01 при ГБОУ ВПО Пермская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России по адресу: 614990, г.аПермь, ул.аПолевая, д. 2. Тел./факс (342)233-55-01

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГБОУ ВПО Пермская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России по адресу: 614990, г. Пермь, ул.аКрупской, д. 46.

Автореферат разослан л___ августа 2012 г.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте Министерства образования и науки РФ л___аавгустаа2012 г. и на сайте ГБОУ ВПО ПГФА Минздравсоцразвития России л___ августа 2012 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук,

доцент И.А. Липатникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из приоритетных задач здравоохранения является расширение ассортимента отечественных лекарственных средств за счет внедрения в лечебную практику новых лекарственных растений. Как известно, фитопрепараты по эффективности не уступают синтетическим аналогам, они благоприятно действуют на организм при длительном применении, используются в реабилитационный период у всех возрастных групп.

Перспективными объектами для изучения являются растения рода Очанка, источники высокоактивных природных соединений, издавна используемые в народной медицине для лечения заболеваний глаз, верхних дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта. Некоторые виды рода Очанка являются официнальными в Европейских странах. Трава очанкиаРостковиуса включена в фармакопею Германии, а очанкиалекарственной в Британскую травяную фармакопею. В Польше являются официнальными виды очанкааРостковиуса и очанкаапрямая. Они отпускаются аптеками под торговым названием Herba Euphrasiaе и используются в традиционной медицине этих стран как противовоспалительное, вяжущее и антисклеротическое средство.

В результате ранее проведенных в Пермской государственной фармацевтической академии исследований было установлено, что виды рода Очанка (о.акоротковолосистая, о.аРейтера, о.амелкоцветная) имеют близкий химический состав продуктов вторичного обмена, обладают гипотензивной, противовоспалительной, антимикробной, противолейкемической активностью, сочетающейся с низкой токсичностью. По итогам исследований разработан проект фармакопейной статьи Очанки трава.

Однако исследования химического состава продуктов первичного обмена у представителей рода Очанка носят фрагментарный характер, так как проводились в отношении только некоторых групп биологически активных веществ (БАВ).

Для современного производства фитопрепаратов необходима гарантированная сырьевая база, которую можно обеспечить за счет использования морфологически близких видов рода Очанка, произрастающих совместно. Во флоре Пермского края встречаются 11 представителей, особое внимание заслуживают долговегетирующие (позднецветущие) виды, как широко распространенные, образующие значительные заросли, имеющие максимальный габитус, а соответственно и сырьевую массу.

В связи с этим представляется актуальным комплексное фармакогностическое исследование долговегетирующих видов рода Очанка, произрастающих в Пермском крае, и обоснование возможности их использования в качестве дополнительных производящих растений, а также изучение распределения и накопления продуктов первичного метаболизма и пигментов в растениях рода Очанка.

Цель работы. Целью работы является сравнительное изучение морфолого-анатомического строения и химико-фармакологических свойств долговегетирующих видов рода Очанка (Euphrasia L.), встречающихся во флоре Пермского края, и обоснование возможности их использования в медицинской практике.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач:

изучить морфолого-анатомическое строение перспективных видов рода Очанка (о.алекарственной, о.ататарской, о.апрямой, о.аМурбека), провести сравнительный анализ с ранее изученными видами (о.аРейтера, о.акоротковолосистой и о.амелкоцветной) и выявить диагностические признаки лекарственного растительного сырья (ЛРС);
провести сравнительный фитохимический анализ продуктов вторичного метаболизма четырех ранее не изученных видов рода Очанка, установить константные компоненты, которые могут быть использованы в качестве химических маркеров рода, а так же в аналитических целях;
установить нормы числовых показателей ЛРС и обосновать возможность использования в качестве дополнительных производящих растений перспективных видов, разработать изменение к ФС Очанки трава;
исследовать качественный состав, количественное содержание и закономерности накопления в растениях рода Очанка продуктов первичного метаболизма (аминокислот, углеводов, липофильных веществ) и пигментов;
разработать методику количественного определения углеводов, позволяющую проводить сравнительную оценку их содержания в растениях рода Очанка;
изучить фармакологические свойства и острую токсичность долговегетирующих видов рода Очанка.

Научная новизна. На основании макро- и микроскопического анализа растений рода Очанка установлен комплекс диагностических признаков морфолого-анатомического строения, позволяющий проводить дифференциальную диагностику морфологически близких видов. Получены объективные иллюстрации анатомо-диагностических признаков в виде оригинальных микрофотографий.

Проведено сравнительное фитохимическое исследование продуктов вторичного метаболизма очанкиалекарственной, о.ататарской, о.аМурбека и о.апрямой. Выявлены особенности внутри- и межвидовой изменчивости компонентного состава и количественного содержания основных групп БАВ в растениях рода Очанка. Показана необходимость выделения и использования константных, аналитически значимых компонентов при разработке нормативной документации.

Изучен компонентный состав и количественное содержание продуктов первичного обмена и пигментов очанкиалекарственной, о.ататарской, о.апрямой, о.аРейтера, о.аМурбека, о.акоротковолосистой и о.амелкоцветной. Показано, что данные виды могут быть использованы в качестве источников углеводов, аминокислот, каротиноидов, хлорофиллов, жирных кислот и других веществ.

Проведен фармакологический скрининг перспективных видов рода Очанка, установлено антикоагулянтное и антирадикальное действие, сочетающееся с низкой токсичностью.

Практическая значимость. Доказана целесообразность использования очанкиалекарственной, о.ататарской, о.аМурбека и о. прямой в качестве дополнительных производящих растений. Перспективные виды включены в проект изменения к ФСаОчанки трава.

Материалы диссертационного исследования по теме Морфолого-анатомическое строение растений рода Очанка, произрастающих в Пермском крае использованы при разработке иллюстрированного методического пособия, которое рекомендовано студентам, интернам, аспирантам для учебного процесса, а так же биологам, провизорам и врачам для практической деятельности.

Научно обоснована целесообразность использования растений рода Очанка для получения препаратов, оказывающих антикоагулянтное и антирадикальное действие.

Разработана методика количественного определения углеводов в сырье очанки, позволяющая проводить поэтапное определение содержания низкомолекулярных сахаров и полисахаридов, а также их суммы из одной навески.

Положения, выносимые на защиту: результаты морфолого-анатомического изучения растений рода Очанка и разработка характеристик подлинности ЛРС; фитохимического изучения продуктов вторичного метаболизма перспективных видов о.алекарственной, о.ататарской, о.аМурбека и о. прямой, их распределение и накопление в зависимости от условий произрастания; данные сравнительного изучения продуктов первичного метаболизма и пигментного состава долговегетирующих видов рода Очанка флоры Пермского края; результаты разработки методики количественного определения углеводов в сырье очанки; итоги фармакологических исследований перспективных видов рода Очанка.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на: ежегодных научных конференциях студентов и молодых ученых Пермской государственной фармацевтической академии (Пермь, 2006, 2007, 2008, 2009, 2010, 2011, 2012); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием Актуальные проблемы современной науки и образования (Уфа, 2010); Российской научно-практической конференции Создание лекарственных средств на основе продуктов природного происхождения (Пермь, 2010); Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием Молодежная наука и современность (Курск, 2011); Конкурсе Молодежная инновационная медицина XXI века, проходившем в рамках конгресса Здравоохранение Российской Федерации, стран СНГ и Европы (Москва, 2011); Научно-практической конференции с международным участием Актуальные проблемы науки фармацевтических и медицинских вузов: от разработки до коммерциализации (Пермь, 2011).

Публикации материалов исследования. По результатам исследований опубликовано 30 работ, которые отражают основное содержание диссертации, из них 5 в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Пермской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01.9.10018875).

Конкретное участие автора в получении научных результатов. После обобщения современных данных литературы, автором осуществлено сравнительное морфолого-анатомическое исследование растений рода Очанка; проведено изучение качественного состава и количественного содержания веществ вторичного (флавоноидов, иридоидов, фенолкарбоновых кислот), первичного (аминокислот, углеводов, липофильных веществ) метаболизма и пигментов; разработана методика количественного определения углеводов в сырье очанки, позволяющая проводить поэтапное определение содержания низкомолекулярных сахаров и полисахаридов, а также их суммы из одной навески; установлены отдельные фармакологические свойства растений рода Очанка.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 208 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), материалов и методов (2 глава), экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы и приложения; иллюстрирована 43арисунками и 41 таблицами. Список литературы включает 297 источников, из них 31 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

Объектами исследования служила надземная часть с корнями дикорастущих, однолетних, травянистых растений семи видов рода Euphrasia: E. officinalis L. - о. лекарственная; E. tatarica Fisch. ex. Spreng. - о.ататарская; E.аstricta D. Wolff ex. J.F. Lehm. - о. прямая; E. х reuteri Wettst. - о.аРейтера; E.ахаmurbeckii Wettst. - о. Мурбека; E. brevipila Burn. et Gremli - о.акоротковолосистая; E. parviflora Schag. - о. мелкоцветная. Образцы заготовлены в фазу цветения - начало плодоношения в период с 2003 по 2009агг. преимущественно в Уральском регионе.

Морфолого-анатомическое строение изучали на свежем и гербарном материале (35 - 50 образцов) по общепринятым методикам (ГФ XI).

Качественный состав и количественное содержание БАВ исследовали с помощью современных методов и приемов фитохимического анализа: избирательная жидкостная экстракция, хроматография на бумаге (БХ) и в тонком слое (ТСХ), хромато - масс - спектрометрия (ГХ/МС), фотоэлектроколориметрия, спектрофотометрия.

Исследование липофильных веществ проводили в лаборатории Пермского краевого бюро судебно-медицинской экспертизы, с помощью ГЖХ на приборе Hewlett - Packard 5890/II (США) с квадрупольным масс-спектрометром (МS) (НР MSD 5971), вещества идентифицировали путем сравнения времени удерживания и полных масс-спектров с соответствующими данными библиотеки Wiley275 и NIST98.

Для оценки антирадикальной активности использовали реакцию со свободным стабильным радикалом дифенилпикрилгидразилом (ДФПГ). Антикоагулянтную активность исследовали in vitro с помощью коагулометра Minilab-701. Оценку острой токсичности сухих спиртовых экстрактов определяли на нелинейных белых мышах массой 17аЦа25аг при внутрижелудочном введении. Для обработки полученных данных использовали статистический анализ.

Морфолого-анатомические особенности растений рода Euphrasia

Сравнительный анализ морфолого-анатомических признаков долговегетирующих видов рода Очанка показал, что, несмотря на принадлежность к различным подсекциям, изучаемые виды имеют общие признаки строения. Ни один признак не обладает абсолютной таксономической и диагностической ценностью. Для надежного определения вида и диагностики лекарственного растительного сырья необходимо использовать комплекс низковариабильных признаков, имеющих достоверные отличия. Результаты включены в изменение к проекту ФС Очанки трава.

Диагностическими признаками морфологической структуры являются:

для стебля - длина и ветвистость, длина максимального бокового побега, отношение длины стебля к длине максимального бокового побега; для листа - форма и количество зубцов на листовой пластинке, остистость зубцов стеблевых и прицветных листьев; для цветка - длина венчика, длина нижней губы венчика, отношение длины венчика к длине нижней губы, степень рассечения лопастей верхней губы; длина соцветия; для плода - форма, глубина выемки.

Диагностическими признаками анатомической структуры являются:

для листа - сочетание типов трихом, толщина столбчатого и губчатого мезофилла; для стебля - диаметр, отношение толщины первичной коры к радиусу, отношение толщины флоэмы, перицикла, камбия к радиусу, отношение толщины ксилемы к радиусу, число рядов клеток ксилемы, отношение диаметра сосудов к радиусу стебля; для корня - диаметр, отношение толщины перидермы к радиусу корня, отношение толщины флоэмы к радиусу, отношение толщины ксилемы к радиусу.

Химический состав и распределение продуктов вторичного метаболизма у представителей рода Euphrasia

На основании результатов хроматографического анализа установлен состав и характер распределения основных групп БАВ по органам растений: флавоноидов, фенолкарбоновых кислот и иридоидов в четырех, ранее не исследованных видах рода Euphrasia: E.аofficinalis, E. tatarica, E.ааmurbeckii и E. stricta (табл. 1). С помощью аутентичных образцов доказано наличие цинарозида, хлорогеновой кислоты и аукубина.

Таблица 1

Хроматографическая характеристика БАВ растений рода Euphrasia L.

№ вещества

Значение Rf

E. officinalis

E. tatarica

E. murbeckii

E. stricta

БУВ,

4:1: 2

СН3СООН*

трава

корни

стебли

истья

цветки

плоды

трава

корни

стебли

истья

цветки

плоды

трава

корни

стебли

истья

цветки

плоды

трава

корни

стебли

истья

цветки

плоды

Флавоноиды

0,21

0,31

0,22

0,74

0,24

0,38

0,32

0,16

0,32

0,47

0,42

0,30

0,43

0,18

0,53

0,32

0,56

0,25

0,69

0,74

0,77

0,32

0,52

0,11

0,45

0,07

0,08

Фенолкарбоновые кислоты

0,45

0,74

0,48

0,64

0,55

0,69

0,66

0,69

0,78

0,83

0,23

0,86

0,58

0,40

0,79

0,67

0,78

0,32

Иридоиды

0,13

---

0,22

---

0,26

---

0,37

---

0,41

---

0,56

---

0,78

---

Примечание: * 15% СН3СООН используется для анализа флавоноидов, 2% СН3СООН - фенолокислот. Значения Rf РСО цинарозида в системе: БУВ, 4:1:2 - 0,32; СН3СООН, 15% - 0,17; значение Rf РСО хлорогеновой кислоты в системе БУВ, 4:1:2 - 0,65; CH3COOH, 2% - 0,68; значение Rf РСО аукубина в системе БУВ, 4:1:2 - 0,41.

Сравнительный фитохимический анализ изученных видов показал, что флавоноидный состав является близким и представлен 14 веществами. Типичными для данного рода являются девять веществ, в том числе цинарозид. Наиболее разнообразный состав флавоноидов (13авеществ) отмечен у E.аtatarica, несколько беднее у E.а murbeckii и E.аstricta (11 веществ), минимальное количество найдено в траве E.аofficinalis (9авеществ).

У изученных видов обнаружено 9 фенолкарбоновых кислот. Сравнительный хроматографический анализ показал, что компонентный состав исследуемых видов варьирует от четырех до шести веществ. Близкий химический состав установлен для E.аofficinalis и E.аtatarica, а так же для E.ааmurbeckii и E. stricta. Данные пары видов характеризуются наличием четырех совпадающих веществ. Постоянным компонентом рода Euphrasia является хлорогеновая кислота.

Компонентный состав иридоидов четырех видов очанок представлена7авеществами. По качественным реакциям на хроматограммах эти соединения разделены по окраске пятен на две группы. Вещества группы А (1 - 4) проявляются только реактивом Бэкона - Эдельмана, что указывает на их принадлежность к иридоидным соединениям подгруппы каталпола. Вещества группы Б (5 - 7) проявляются как реактивом Бэкона - Эдельмана, так и другими реактивами, что подтверждает их принадлежность к подгруппе аукубина. Сравнительный фитохимический анализ четырех видов Очанок показал, что их иридоидный состав имеет близкое значение. Постоянными компонентами данного рода являются четыре вещества, в том числе аукубин. Наиболее разнообразный состав (6 веществ) обнаружен у E.аofficinalis и E.аstricta. Компонентный состав E.аtatarica и E.ааmurbeckii представлен шестью иридоидными веществами.

Исследовано количественное содержание флавоноидов, окисляемых веществ и иридоидов (рис. 1). Установлено, что наибольшее количество накапливается в траве и органах E.murbeckii, а наименьшее в E.аofficinalis и E.аstricta. Среднее содержание БАВ (флавоноиды - 6,11%; иридоиды - 0,33%; окисляемые вещества - 7,81%), установленное для рода, характерно для E.аtatarica.

Сравнительный анализ компонентного состава БАВ показал, что исследованные виды характеризуются незначительной вариабельностью флавоноидного и иридоидного пула внутри рода Euphrasia. Константными компонентами являются девять флавоноидных и пять иридоидных веществ, в том числе цинарозид и аукубин. Накопление фенолкарбоновых кислот сильно варьирует внутри рода, типичным компонентом является хлорогеновая кислота. Идентифицированные вещества являются химическими маркерами рода Euphrasia, значение коэффициентов их распределения можно использовать в аналитических целях.

Сравнительный анализ внутривидовой изменчивости четырех видов рода Euphrasia проведен на образцах, собранных в Уральском регионе. Установлено, что на компонентный состав флавоноидов, фенолкарбоновых кислот и иридоидов не оказывает влияние местообитание растения. Сходство, вероятнее всего, обусловлено онтогенетическими факторами, а незначительные различия в количественном содержании влиянием экологических условий произрастания.

E. officinalis E. tatarica

E. murbeckii E. stricta

флавоноиды; окисляемые вещества; иридоиды

Рис. 1. Содержание БАВ в траве и органах растений рода Euphrasia L.

Характер накопления БАВ в органах исследуемых видов имеет общие тенденции. Содержание флавоноидов и окисляемых веществ максимально в листьях и генеративных органах (цветках, плодах). Минимальное количество содержится в корнях и стеблях. Наибольшее количественное содержание иридоидов установлено для плодов, стеблей и корней.

В ходе стандартизации образцов сырья E. officinalis, E. tatarica, E.ааmurbeckii и E.аstricta установлены числовые показатели, которые регламентируют доброкачественность цельного и измельченного ЛРС. Рекомендуемые нормы включены в проект изменения к ФС Очанки трава: флавоноидов в пересчете на цинарозид не менее 2%; экстрактивных веществ, извлекаемых 40% спиртом, не менее 20%; влажность не более 10%; золы общей не более 10%; золы, не растворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной, не более 10%; органической примеси не более 3%; минеральной примеси не более 1%.

Химический состав и распределение

продуктов первичного метаболизма и пигментов долговегетирующих видов рода Euphrasia

Компонентный состав свободных аминокислот исследованных видов представлен двенадцатью веществами, из них идентифицированы: орнитин, пролин, глутаминовая кислота, аланин, аспарагин, серин и три незаменимые аминокислоты - валин, изолейцин, аргинин. Наиболее разнообразный состав аминокислот (двенадцать веществ) отмечен у E.аbrevipila и E.аofficinalis, а наименьший (восемь веществ) в траве E.аxаreuteri (табл. 2).

Таблица 2

Хроматографическая характеристика свободных аминокислот

растений рода Euphrasia L.

№ вещества	Значение Rf		Вид							Стандартные образцы
№ вещества	изопропиловый спирт - ацетон - 25%-ный раствор аммиака - вода (26,0:22,0:4,2:8,5)	хлороформ - этанол - уксусная кислота - вода (24,5:13,5:4,0:2,2)	E. brevipila	E.аparviflora	E. x reuteri	E. tatarica	E.аofficinalis	E. x murbeckii	E. stricta	орнитин	аргинин	пролин	глутаминовая кислота	аланин	аспарагин	серин	валин	изолейцин
1	0,08	0,04	+	+	+	+	+	+	+	+	-	-	-	-	-	-	-	-
2	0,05	0,07	+	+	+	+	+	+	+	-	+	-	-	-	-	-	-	-
3	0,14	0,26	+	+	-	+	+	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
4	0,17	0,24	+	-	-	-	+	+	+	-	-	-	-	-	-	-	-	-
5	0,20	0,22	+	+	+	+	+	+	+	-	-	+	-	-	-	-	-	-
6	0,21	0,16	+	+	+	+	+	+	+	-	-	-	+	-	-	-	-	-
7	0,24	0,20	+	+	+	+	+	+	+	-	-	-	-	+	-	-	-	-
8	0,37	0,13	+	+	-	+	+	-	+	-	-	-	-	-	+	-	-	-
9	0,48	0,16	+	+	+	+	+	+	+	-	-	-	-	-	-	+	-	-
10	0,50	0,39	+	+	+	+	+	+	+	-	-	-	-	-	-	-	+	-
11	0,55	0,46	+	+	+	+	+	+	+	-	-	-	-	-	-	-	-	+
12	0,63	0,20	+	+	-	+	+	+	+	-	-	-	-	-	-	-	-	-

Количественное содержание свободных аминокислот в траве семи исследованных видов находится в пределах 0,82 - 1,64% (рис. 2). По органам аминокислоты распределены неравномерно, их максимальное количество установлено в генеративных органах (цветках, плодах) и листьях, а минимальное - в корнях и стеблях.

Рис. 2. Содержание свободных аминокислот в растениях рода EuphrasiaаL.

Компонентный состав углеводов долговегетирующих представителей рода Euphrasia представлен шестью веществами, при этом глюкоза, галактоза, ксилоза, арабиноза и рамноза присутствуют как в свободном, так и в связанном состоянии.

Из травы E.аbrevipila выделены фракции водорастворимых полисахаридов (ВРПС), выход составил 4,1%; пектиновых веществ (ПВ) - 2,7%; гемицеллюлозы А (ГЦ А) - 1,4%; гемицеллюлозы Б (ГЦ Б) - 2,3% и установлен их компонентный состав (табл. 3).

Таблица 3

Содержание и состав полисахаридных фракций травы E. brevipila

Фракция	Характеристика	Мономерный состав
Фракция	Характеристика	Glc	Gal	Xyl	Ara
ВРПС	темно-коричневый аморфный порошок, без запаха и вкуса	+	-	+	-
ПВ	светло-серый аморфный порошок, без запаха и вкуса	+	-	-	-
ГЦ А	бежевый аморфный порошок, без запаха и вкуса	-	+	+	-
ГЦ Б	темно-серый аморфный порошок, без запаха и вкуса	-	+	+	+

Мономерами водорастворимых полисахаридов являются глюкоза и ксилоза. В комплексе пектиновых веществ обнаружена только глюкоза. Обязательные компоненты пектиновых веществ - уроновые кислоты не найдены, что вероятно связано с ферментативным или химическим восстановлением карбоксильных групп в процессе экстракции и гидролиза. Гемицеллюлоза А - это природный галактоксилан, а гемицеллюлоза Б - галактоксилоарабан.

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ УГЛЕВОДОВ В РАСТЕНИЯХ РОДА EUPHRASIA

Разработана методика количественного определения углеводов, спектрофотометрическим методом, с использованием антронсерного реактива, в пересчете на глюкозу, как постоянного и доминирующего компонента в растениях рода Очанка.

В ходе последовательного анализа (три этапа) возможно параллельное определение полисахаридов и низкомолекулярных сахаров, а также их суммы из одной навески. С антронсерным реактивом будут взаимодействовать свободные и связанные, полимерные углеводы, а также и углеводные компоненты гетерозидов (рис. 3).

Метрологическая характеристика разработанной методики показала, что относительная ошибка определения суммы полисахаридов и низкомолекулярных сахаров составляет 4,7%, а полисахаридов 6,5%, при доверительной вероятности 95%.

С целью сравнительной оценки количественного содержания углеводов в долговегетирующих видах была использована разработанная методика. Установлено, что содержание углеводов находится в пределах от 3,91% до 8,65% (рис. 4). Максимальное количество от общей суммы приходится на низкомолекулярные сахара, тогда как полисахариды от общей суммы составляют 10%. Наибольшее количество углеводов накапливается в траве E.аofficinalis, наименьшее - в траве E.ааreuteri. По органам углеводы распределены неравномерно, их максимальное количество установлено в цветках, плодах и листьях, а минимальное - в корнях и стеблях.

Рис. 3. Схема количественного определения углеводов в растениях рода Euphrasia L.

Рис.4. Содержание суммы углеводов в траве растений рода EuphrasiaаL.

Качественный состав пигментов семи видов рода Euphrasia незначительно отличается и представлен основными фотосинтетическими пигментами высших растений. Обнаружено 11 веществ, в сравнении с аутентичными образцами идентифицированы (по значению Rf и УФ-спектрам элюатов с хроматограмм) -каротин и хлорофилл а. В стандартных условиях в сравнении с литературными данными (по УФ-спектрам элюатов с хроматограмм) - хлорофилл b. Девять веществ по окраске отнесены к производным каротина и ксантофилла (табл. 4, рис. 5).

Таблица 4

Качественный состав пигментов растений рода Euphrasia L.

№ вещества

max

Значение Rf

ПЭ : ДЭ (1:10) *

Окраска

Виды

в видимом свете

в УФ свете

после детектирования **

E. brevipila

E. reuteri

E. murbeckii

E. parviflora

E. officinalis

E. tatarica

E. stricta

0,05

синяя

0,09

синяя

0,18

синяя

0,22

синяя

0,26

бледно-

желтая

зеленая

0,32

желтая

зеленая

459, 645

0,43

зеленая

красная

0,46

синяя

432, 666

0,53

темно-

зеленая

красная

0,63

синяя

424, 452, 480

0,70

синяя

Стандартные образцы

-каротин

430, 453, 480

0,69

ярко-

желтая

зеленая

синяя

хлорофилл а

430, 666

0,52

темно-

зеленая

красная

хлорофилл b

453, 642***

Примечание: * - петролейный эфир - диэтиловый эфир (1:10); ** - 10% спиртовым раствором фосфорно-молибденовой кислоты; *** - литературные данные.

Рис. 5. Спектральные характеристики веществ 7, 9 и 11, элюированных с хроматограмм и стандартных веществ: -каротина и хлорофилла а.

Суммарное содержание зеленых пигментов и продуктов их разрушения в исследованных видах рода Euphrasiа в среднем составляет 5,01 мг/г (табл. 5). Содержание феофетинов преобладает над содержанием хлорофиллов. Доминирующими являются феофетин а (его содержание у исследованных видов колеблется от 2,20 до 3,20 мг/г) и хлорофилл а (от 1,20 до 1,70 мг/г). Максимальное количество хлорофиллов и феофетинов обнаружено в E.аstricta.

Содержание каротиноидов в растениях рода Euphrasia варьирует от 0,26 до 0,40 мг/г (табл. 6). Наибольшее их количество обнаружено в E.аparviflora, а наименьшее - в траве E. reuteri и E. tatarica. Установлено, что на накопление пигментов влияют функциональные особенности органов растений. Максимальное количество обнаружено в листьях, активно участвующих в фотосинтезе, а минимальное в корнях, у которых отсутствует светособирающая функция.

Фотосинтетический аппарат растений рода Euphrasia, характеризующихся полупаразитическим типом питания, является сформированным и прошел успешную адаптацию к природным условиям, о чем свидетельствуют стабильные показатели отношений хлорофилла а (Cаa) к хлорофиллу b (Cаb) - 2,5; суммы хлорофиллов к каротиноидам (Cаa+b/ Сar)аЦ6,2 и их совпадение со значениями данных отношений, установленными для автотрофных растений (табл. 6).

Таблица 5

Содержание хлорофиллов и феофетинов в растениях рода Euphrasia L.

№ п/п	Вид	Содержание, мг/г
		хлорофиллы			феофетины
		а	b	а+b	а	b	а+b
1	E. brevipila	1,370,21	0,470,11	1,850,09	2,480,24	0,420,02	2,920,21
2	E. reuteri	1,220,13	0,610,06	1,830,21	2,200,09	0,660,02	2,860,13
3	E. murbeckii	1,200,22	0,530,03	1,460,16	2,220,08	0,500,03	2,290,17
4	E. parviflora	1,540,16	0,520,03	2,150,22	3,050,09	0,320,07	3,140,09
5	E. officinalis	1,540,05	0,650,07	2,190,24	2,810,12	0,570,04	3,380,22
6	E. tatarica	1,220,08	0,510,10	1,730,03	2,200,05	0,410,03	2,610,08
7	E. stricta	1,700,11	0,610,04	2,580,13	3,200,21	0,410,06	4,110,15
Среднее значение:		1,40	0,56	1,97	2,59	0,47	3,04

Таблица 6

Содержания пигментов и их отношение в растениях рода Euphrasia L.

№ п/п	Вид	Содержание, мг/г				Отношение
№ п/п	Вид	Cаa	Cаb	Сar	Сумма пигментов	Cаa/Cаb	Cаa+b/ Сar
1	E. brevipila	1,37	0,47	0,28	2,12	2,9	6,6
1.1	корни	0,14	0,1	0,05	0,29	1,4	4,8
1.2	стебли	0,99	0,55	0,21	1,75	1,8	7,3
1.3	истья	7,21	2,87	1,71	11,79	2,5	5,9
1.4	цветки	2,55	1,17	0,61	4,33	2,2	6,1
1.5	плоды	1,87	1,08	0,49	3,44	1,7	6,0
2	E. reuteri	1,22	0,61	0,26	2,09	2,0	7,0
3	E. murbeckii	1,20	0,53	0,30	2,03	2,3	5,8
4	E. parviflora	1,54	0,52	0,40	2,46	2,9	5,2
5	E. officinalis	1,54	0,65	0,35	2,54	2,4	6,3
6	E. tatarica	1,22	0,51	0,27	2,0	2,4	6,4
7	E. stricta	1,70	0,61	0,39	2,7	2,8	5,9

В гексановых извлечениях, полученных из травы исследуемых видов рода Euphrasia, обнаружено 16 ипофильных компонентов, доминирующими являются: высшие алканы (октадекан, нонадекан, гексакозан, октакозан, нонакозан, эйкозан), а так же фитостерин ( - ситостерол) и его предшественник (сквален). Содержание жирных кислот и их альдегидов незначительно (табл. 7).

Таблица 7

Состав гексановых извлечений из растений рода Euphrasia L.

Соединение	Количественное содержание, %*							Степень совпадения с библиотечным масс-спектром, %
Соединение	E. officinalis	E. tatarica	E. stricta	E. reuteri	E. murbeckii	E. brevipila	E. parviflora	Степень совпадения с библиотечным масс-спектром, %
Неофитадиен	---**	---	---	---	---	0,60	---	99
Октадекан	---	---	---	9,45	---	1,11	---	95
Нонадекан	9,82	---	4,01	---	7,78	6,89	7,34	90
Эйкозан	---	6,62	---	---	---	6,71	3,10	98
Гексакозан	6,68	---	20,90	---	38,49	---	27,69	91
Гептакозан	---	---	---	9,79	---	7,08	---	99
Октакозан	33,62	---	6,28	---	7,19	2,85	7,50	83
Нонакозан	---	14,24	---	21,47	---	35,38	---	97
2-Нонакозанон	---	---	0,56	---	---	---	---	94
Сквален	1,96	1,48	---	2,97	---	---	---	92
- Ситостерол	1,56	---	28,16	2,67	10,87	21,32	15,03	93
Додекановый (лауриновый) альдегид	2,05	---	---	---	0,59	---	---	91
Тетрадекановый (миристиновый) альдегид	1,86	---	---	---	0,42	---	---	95
Гексадекановая (пальмитиновая) кислота	2,81	---	7,75	1,59	5,32	---	10,05	93
Октадекановая (стеариновая) кислота	---	---	1,91	---	---	---	---	91
9,12-октадекадиеновая (линолевая) кислота	---	---	---	---	---	---	1,91	99
9,12,15-Октадекатриеновая (линоленовая) кислота	---	---	15,92	---	6,04	---	6,93	93
9-Октадеценовая (олеиновая) кислота	---	---	---	---	---	---	2,91	86
Тиомочевина	4,22	---	---	---	---	---	---	80
6,10,14-триметил-2-пентадеканон (гексагидрофарнезил-ацетон)	---	---	0,27	---	---	0,48	---	97
1,2-Бензолдикарбоновая (фталевая) кислота	---	---	---	---	---	0,66	---	97
Фитол	---	---	---	---	---	1,24	---	91

Примечание: * - содержание компонентов в нормировочных процентах от суммы площадей всех зарегистрированных пиков; ** - содержание соединения относительно суммы всех пиков менее 0,005% или его отсутствие.

Сравнительный анализ долговегетирующих видов показал, что компонентный состав липофильных веществ варьирует от трех (E.аtatarica) до одиннадцати (E.аbrevipila) веществ, у E.аofficinalis, E. stricta и E.аparviflora представлен девятью веществами.

Суммарное содержание идентифицированных липофильных компонентов в растениях рода Euphrasia убывает в ряду E.аstricta > E.аbrevipila > E.ааmurbeckii > E.аparviflora > E.аofficinalis > E.ааreuteri > E.аtatarica.

Фармакологические свойства растений рода Euphrasia

Проведена сравнительная оценка антикоагулянтной активности сухих водных и спиртовых экстрактов из долговегетирующих растений рода Euphrasia флоры Пермского края.

Наиболее высокая антикоагулянтная активность отмечена у спиртовых экстрактов из травы E.ааreuteri (22,5%) и E. stricta (21,3%), водного из E.ааmurbeckii (23,5%), а так же водного и спиртового из E.аparviflora (22,5 и 22,0% соответственно). Остальные экстракты проявляют активность в пределах от 15,3 до 19,1% (табл. 8).

Таблица 8

Антикоагулянтная активность сухих экстрактов

из растений рода Euphrasia L.

№ п/п	Вид	Экстрагент	Время свертывания, с		Изменение свертываемости, %	Р
№ п/п	Вид	Экстрагент	контроль	опыт	Изменение свертываемости, %	Р
1	E. brevipila	вода	30,50,63	34,50,79	Ц 16,6	< 0,002
1	E. brevipila	спирт	29,90,53	34,41,20	Ц 15,3	< 0,01
2	E. reuteri	вода	29,71,26	35,11,75	Ц 18,3	< 0,02
2	E. reuteri	спирт	28,21,16	34,51,44	Ц 22,5	< 0,002
3	E. parvifora	вода	26,61,24	32,61,73	Ц 22,5	< 0,02
3	E. parvifora	спирт	26,41,13	32,21,35	Ц 22,0	< 0,02
4	E. officinalis	вода	28,20,58	33,41,27	Ц 18,5	< 0,002
4	E. officinalis	спирт	20,91,07	24,90,93	Ц 19,1	< 0,01
5	E. tatarica	вода	20,50,89	24,11,43	Ц 17,7	< 0,05
5	E. tatarica	спирт	35,31,49	41,21,84	Ц 16,7	< 0,05
6	E. murbeckii	вода	22,61,21	27,90,94	Ц 23,5	< 0,01
6	E. murbeckii	спирт	22,71,17	26,80,15	Ц 18,1	< 0,02
7	E. stricta	вода	14,60,62	17,40,72	Ц 18,8	< 0,02
7	E. stricta	спирт	18,60,64	22,60,42	Ц 21,3	< 0,001
8	Гепарин	---	29,90,48	36,61,82	Ц 22,4	< 0,01

Установлена антирадикальная активность (АРА) у исследуемых видов рода Euphrasia. Время полураспада стабильного радикала ДФПГ изменяется в пределах 0,5 - 27 мин. Наиболее высокую активность показали извлечения из E.murbeckii, E.аbrevipila, E.аtatarica, E.аstricta (0,5аЦа6амин). Низкая антирадикальная активность обнаружена у извлечений из E.ааreuteri, E.аofficinalis и E.аparviflora (18аЦа27амин). Степень выраженности антирадикальной активности изученных видов зависит от содержания в них фенольных соединений и иридоидов (рис. 6). Коэффициент корреляции составляет - 0,841 и - 0,681, соответственно.

окисляемые вещества; флавоноиды; иридоиды; АРА, мин.

Рис. 6. Зависимость между АРА ( 1/2) и количественным содержанием БАВ в растениях рода Euphrasia L.

Наибольшей антирадикальной активностью обладают извлечения из генеративных органов - цветков и плодов (не более 0,5амин). Низкую активность показали извлечения из корней и стеблей (45амин). Антирадикальная активность травы составила 2 минуты, что объясняется большим удельным весом в массе растения листьев, цветков и плодов.

Сухие спиртовые экстракты всех исследуемых видов рода Euphrasia малотоксичны, ЛД50 при введении в желудок - более 5000 мг/кг.

Анализ результатов биологических испытаний подтверждает целесообразность использования растений рода Euphrasia в научной медицине и позволяет рекомендовать их для разработки фитопрепаратов с антикоагулянтной и антирадикальной активностью.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

Изучено морфолого-анатомическое строение четырех перспективных видов рода Euphrasia, произрастающих в Пермском крае: E.аofficinalis, E.аtatarica, E. murbeckii и E. stricta. Методом сравнительного анализа с морфологически близкими ранее изученными видами (E.аreuteri, E.аbrevipila, E.аparviflora), определен комплекс низковариабельных признаков для диагностики цельного и измельченного сырья, включенный в проект изменения к ФС Очанки трава.
Установлено, что исследованные виды рода Euphrasia имеют близкий химический состав продуктов вторичного метаболизма, представленный флавоноидами, иридоидами и фенолкарбоновыми кислотами. С помощью аутентичных образцов доказано наличие цинарозида, хлорогеновой кислоты и аукубина. Данные вещества являются константными для рода Euphrasia и могут использоваться в фармацевтическом и хемосистематическом анализе.

Изучено количественное содержание основных групп БАВ, наибольшее количество накапливается в траве и органах E.murbeckii, а наименьшее в E.аofficinalis и E. stricta. Среднее содержание БАВ, установленное для рода составляет: флавоноидов - 6,11%; иридоидов - 0,33%; окисляемые вещества - 7,81% и сопоставимо с результатами, полученными ранее.

Разработаны и включены в проект изменения к ФС Очанки трава числовые показатели, регламентирующие доброкачественность цельного и измельченного сырья (флавоноидов в пересчете на цинарозид не менее 2%; экстрактивных веществ, извлекаемых 40% спиртом, не менее 20%; и др.), с учетом дополнительных производящих растений: E.аofficinalis, E.аtatarica, E.ааmurbeckii, E. stricta.
Изучен качественный состав и количественное содержание продуктов первичного метаболизма и пигментов в траве и органах семи видов рода Euphrasia: E.аofficinalis, E.аtatarica, E.ааmurbeckii, E. stricta, E.аreuteri, E.аbrevipila и E.аparviflora.

Установлено наличие 12 аминокислот, в том числе 3-х незаменимых. Из них идентифицированы: орнитин, аргинин, пролин, глутаминовая кислота, аланин, аспарагин, серин, валин, изолейцин. Количественное содержание свободных аминокислот в траве находится в пределах 0,82 - 1,64%.

Компонентный состав углеводов представлен шестью веществами, при этом глюкоза, галактоза, ксилоза, арабиноза и рамноза присутствуют как в свободном, так и в связанном состоянии. Содержание углеводов в траве находится в пределах от 3,91% до 8,65%, максимальное количество от общей суммы приходится на низкомолекулярные сахара.

Пигменты исследуемого рода представлены 11 веществами, три из которых идентифицированы как -каротин, хлорофилл а и b, девять веществ отнесены к производным каротина и ксантофилла. Суммарное содержание зеленых пигментов и продуктов их разрушения в траве в среднем составляет 5,01 мг/г. Содержание каротиноидов варьирует от 0,26 до 0,40 мг/г.

По органам исследуемые вещества распределены неравномерно, их максимальное количество установлено в генеративных органах (аминокислоты и углеводы) и листьях (пигменты), а минимальное - в корнях и стеблях.

В гексановых извлечениях обнаружено 16 липофильных компонентов, доминирующими являются: высшие алканы (октадекан, нонадекан, гексакозан, октакозан, нонакозан, эйкозан), а так же фитостерин ( - ситостерол) и его предшественник (сквален). Содержание жирных кислот и их альдегидов незначительно.

Разработана методика количественного определения углеводов в сырье очанки, позволяющая проводить поэтапное определение содержания низкомолекулярных сахаров и полисахаридов, а также их суммы из одной навески. Относительная ошибка метода определения суммы полисахаридов и низкомолекулярных сахаров составляет 4,7%, а полисахаридов - 6,5%.
Установлено, что растения рода Euphrasia перспективны для разработки фитопрепаратов с антикоагулянтной и антирадикальной активностью. В результате определения острой токсичности сухие спиртовые экстракты из исследуемых растений отнесены по общепринятой классификации к группе малоопасных.

Список опубликованных работ

Абдуллина, Е. С. Сравнительный морфологический анализ Euphrasiaаhirtella и Euphrasia tatarica (Scrophulariaceae) // Е. С. Абдуллина, О.аА. Кроткова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. - 2006. - №1. - С. 92.
Кроткова, О. А. Сравнительный анализ анатомического строения Euphrasia tatarica Fisch. и Euphrasia fennica Kihlm. (Scrophulariaceae) / О.аА.аКроткова, Е.аС.аАбдуллина // Там же. - С. 244 - 246.
Кроткова, О. А. Сравнительное исследование флавоноидов Euphrasia tatarica (Scrophulariaceae), произрастающей в Уральском регионе/ О.аА.аКроткова, Т. В. Сухинина // Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа: Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием, 28 сентября - 3 октября 2009 г., Пермь, ГОУ ВПО ПГФА Росздрава, 2009. - С. 153 - 156.
Петриченко, В. М. Биологические и химические свойства растений семейства норичниковые / В. М. Петриченко, Е О. А. Кроткова и др. // Региональный конкурс РФФИ - Урал. Результаты научных исследований, полученные за 2007-2009 гг. Сб. статей. Ч. 2. Пермь: ПНЦ УрО РАН, 2010. - С.а113 - 117.
Кроткова, О. А. Фенольные соединения Euphrasia officinalis / О.аА.аКроткова, Т. В. Сухинина, В. М. Петриченко // Актуальные проблемы современной науки и образования. Биологические науки: Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. Т.аII. - Уфа: РИЦ БашГУ, 2010. - С. 418 - 422.
Кроткова, О. А. Компонентный состав иридоидов некоторых видов рода очанка флоры Пермского края / О. А. Кроткова, Е. А. Булгакова, Е.аА.аМальцева, Е. П. Смирнова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. - 2010. - №6. - С. 211 - 213.
Кроткова, О. А. Влияние места произрастания на содержание биологически активных веществ в очанке лекарственной / О. А. Кроткова, М.аВ.аМельник, Е.аС.аСолодникова, В. А. Захарова // Там же. - С. 213 - 216.
Бомбела, Т. В. Подлинность и количественное определение действующих компонентов настойки очанки коротковолосистой / Т.аВ.аБомбела, Е О.аА.аКроткова и др. // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. - 2010. - №7. - С. 28 - 31.
Бомбела, Т. В. Иридоиды Euphrasia tatarica (Scrophulariaceae)/ Т.аВ.аБомбела, О. А. Кроткова, В. М. Петриченко // Там же. - С. 23 - 26.
Бомбела, Т. В. Состав полисахаридов травы Euphrasia brevipila (Scrophulariaceae) / Т. В. Бомбела, О. А. Кроткова, В. М. Петриченко// Там же. - С.а26 - 28.
Кроткова, О. А. Исследование компонентного состава фенольных соединений Euphrasia murbeckii / О. А. Кроткова, Е. В. Смирнова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. - 2011. - №8. - С.а169а- 171.
Кроткова, О. А. Морфологические признаки стеблевого и прицветного листа Euphrasia murbeckii Wettst. и Euphrasia stricta D. Wolf et J.F. Lehm // О.аА.аКроткова, О. П. Копылова, Л. Ф. Нигамаева // Там же. - С. 167 - 169.
Кроткова, О. А. Содержание биологически активных веществ в экстракционных препаратах растений рода Euphrasia L. / О. А. Кроткова, А.аА.аБажин // Там же. - С. 165 - 167.
Бомбела, Т. В. Микроскопическое исследование травы очанки лекарственной / Т. В. Бомбела, О. А. Кроткова, В. М. Петриченко // Фармация, 2011. - №4. - С. 21 - 23.
Бомбела, Т. В. Оценка антимикробной активности растений рода EuphrasiaаL. / Т. В. Бомбела, О. А. Кроткова, В. М. Петриченко, Т. Ф. Одегова // Актуальные вопросы фармацевтической науки и образования: мат-лы науч. конф. с междун. участием, посв. 70-летию фарм. фак. СГМУ, Томск, 7-8 сентября 2011 г. - Томск, 2011. - С. 27 - 30.
Кроткова, О. А. Полисахариды Euphrasia brevipila (Scrophulariaceae) / О.аА.аКроткова, Т. В. Бомбела, В. М. Петриченко // Вестник уральской медицинской академической науки, 2011. - № 3/1. - С. 64 - 65.
Бомбела, Т. В. Выделение и идентификация пигментов травы очанки коротковолосистой / Т. В. Бомбела, О. А. Кроткова, М. А. Секерина, В.аМ.аПетриченко // Актуальные проблемы науки фармацевтических и медицинских вузов: от разработки до коммерциализации / Материалы научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75-летию Пермской государственной фармацевтической академии (7 - 9 декабря 2011 года, г. Пермь). - Пермь, ПГФА, 2011. - С. 191 - 193.
Кроткова, О. А. Компонентный состав биологически активных веществ Euphrasia stricta (Scrophulariaceae) / О. А. Кроткова, Т. В. Бомбела, Е.аП.аСмирнова, В. М. Петриченко // Там же. - С. 224 - 227.
Бомбела, Т. В. Влияние экологических и онтогенетических факторов на содержание окисляемых веществ E. tatarica, E. murbeckii и E.аstricta // Т.аВ.аБомбела, О. А. Кроткова, В. М. Петриченко // Там же. - С. 188 - 190.
Кроткова, О. А. Особенности микроструктуры прицветного листа двух видов рода Euphrasia L. / О. А. Кроткова, Т. В. Бомбела, В. М. Петриченко // Тамаже. - С. 228 - 231.
Бомбела, Т. В. Фенольные соединения некоторых видов рода очанка (Euphrasia L.) флоры Пермского края / Т. В. Бомбела, В.аМ.аПетриченко, О.аА.аКроткова // Химия растительного сырья, 2011. - №4. - С. 177-180.
Бомбела, Т. В. Изменчивость морфолого-анатомических признаков стеблевого и прицветного листа двух видов рода Euphrasia L. / Т. В. Бомбела, О.аА.аКроткова, В. М. Петриченко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под. ред. М. В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2011. - Вып. 66. - С. 23 - 27.
Кроткова, О. А. Влияние условий произрастания на содержание флавоноидов в траве и органах Euphrasia murbeckii / О. А. Кроткова, Т.аВ.аБомбела, Е. П. Смирнова // Материалы 76-й всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых: Молодежная наука и современность. 19-20 апреля 2011 года. В 3-х частях. Часть II - Курск: ГОУ ВПО КГМУ, 2011. - С. 247.
Бомбела, Т. В. Изменчивость химических параметров травы очанки коротковолосистой в условиях интродукции / Т. В. Бомбела, О. А. Кроткова // Материали за 7-а международна научна практична конференция, Achievement of high school, - 2011. Т. 25. Биологии. Екология. География и геология. София: Бял ГРАД-БГ ООД, 2011. - С. 3 - 7.
Бомбела, Т. В. Проявляемость анатомо-диагностических признаков травы очанки лекарственной при измельчении / Т.аВ.аБомбела, О.аА.аКроткова, В.аМ.аПетриченко // Фармация, 2012. - №1. - С. 12 - 16.
Бомбела, Т. В. Инновационный подход к созданию лекарственных препаратов для лечения социально значимых заболеваний / Т. В. Бомбела, Е О.аА.аКроткова и др. // Менеджмент качества в сфере здравоохранения и социального развития, 2012. - №1 (11). - С. 97 - 100.
Бомбела, Т. В. Фармакогностическое изучение Euphrasia tatarica Fisch. ex Spreng. (Scrophulariaceae) / Т. В. Бомбела, О. А. Кроткова, В.аМ.аПетриченко, В.аД.аБелоногова // Медицинский альманах, 2012. - №2 (21). - С. 230 - 233.
Даминова, Э. Ф. Лекарственные растения, применяемые для лечения болезней глаз / Э. Ф. Даминова, О. А. Кроткова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии, 2012. - № 9. - С. 161 - 163.
Кроткова, О. А. Исследование состава фенолкарбоновых кислот в траве и органах очанки татарской, произрастающей в Уральском регионе / О.аА.аКроткова, Е. П. Смирнова // Там же. - С. 187 - 190.
Тимофеева, К. А. Перспективы использования растений рода Очанка в медицине / К. А. Тимофеева, О. А. Кроткова // Там же. - С. 217 - 219.

Благодарность. Автор выражает благодарность заведующему кафедрой физиологии ГБОУ ВПО Пермская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России, д.м.н., профессору Сыропятову Б.Я. за помощь в изучении антикоагулянтной активности, лаборанту кафедры физиологии Ковалёвой М. Ю. за установление острой токсичности, Пермскому краевому бюро судебно - медицинской экспертизы в лице Гаранина В. П. за помощь в исследовании липофильных веществ.

Кроткова Ольга Александровна (Россия)

Сравнительное фармакогностическое исследование долговегетирующих видов рода Euphrasia L. флоры Пермского края

На основании проведенного комплексного фармакогностического исследования обоснована возможность использования долговегетирующих видов рода Очанка флоры Пермского края в качестве лекарственного растительного сырья, разработан проект изменения к ФС Очанки трава. Установлен комплекс диагностических признаков морфолого-анатомического строения, позволяющий проводить дифференциальную диагностику близкородственных видов. С использованием хроматографии (БХ, ТСХ, ГХ-МС), спектрофотометрии и других методов осуществлен анализ фенольных соединений, иридоидов, углеводов, аминокислот, пигментов и липофильных веществ у растений рода Очанка и отмечена возможность применения результатов исследования в аналитических целях и для хемосистематики. Установлено, что экстракционные формы растений рода Очанка малотоксичны и перспективны для разработки фитопрепаратов с антикоагулянтной и антирадикальной активностью.

Krotkova Olga (Russia)

Comparative pharmacognostic research of late-flowering species of the genus Euphrasia L. flora of Perm Krai

On the basis of a comprehensive pharmacognostic study, the availability of late-flowering species of the genus Euphrasia L. flora of Perm Krai, as a medicinal plant raw material, has been proved. The Pharmacopoeia article Euphrasiae Нerba draft change has been developed. Complex of diagnostic morphological and anatomical characteristics for differential diagnostics of closely-related species has been established. Analysis of phenolic compounds, iridoids, carbohydrates, amino acids, pigments and lipophilic compounds of plants of the genus Euphrasia has been carried out by chromatography (PC, TLC, GC-MS), spectrophotometry and other methods. The possibility of application of research results for analytical and chemosystematic purposes has been noted. It was found that the extraction forms of plants of the genus Euphrasia have low toxicity and they are perspective for the development of plant-based medicinal preparations with anticoagulant and antiradical activity.

Авторефераты по всем темам >> Авторефераты по медицине

Blog