Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству  

На правах рукописи

РОЖДЕСТВЕНСКАЯ  ТАТЬЯНА  НИКОЛАЕВНА

СОЗДАНИЕ  КОМПЛЕКСНОЙ СИСТЕМЫ ПРОФИЛАКТИКИ

БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ПТИ - В ХОЗЯЙСТВАХ

ПРОМЫШЛЕННОГО ТИПА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология.

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

       

Санкт-Петербург Ц 2011

Работа выполнена в Государственном научном учреждении  Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства (ГНУ ВНИВИП).

Научный  консультант:  доктор ветеринарных наук, профессор,

Борисенкова Адель Наумовна,

  Заслуженный деятель науки РФ

Официальные оппоненты:  доктор ветеринарных наук

Тугаринов Олег Алексеевич

доктор ветеринарных наук, профессор

Субботин Владимир Викторович

доктор  ветеринарных наук, профессор

Тимченко Людмила Дмитриевна

Ведущая организация: Московская государственная академия

ветеринарной медицины  и биотехнологии имени К.И.Скрябина (МГАВМиБ)

Защита диссертации состоится  л 31 марта 2011 г.  в 1300 часов на заседании диссертационного совета  Д220.011.01 в Федеральном Государственном учреждении Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ)  по адресу: Россия, 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе д. 5

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ ВГНКИ

Автореферат разослан л____________2011 года

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук, доцент

Заслуженный ветеринарный врач РФ Козырев Ю.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА  РАБОТЫ

1.1.

Актуальность темы

Характерной особенностью современных птицеводческих хозяйств промышленного типа является узкая специализация производства, использование высокопродуктивных линейных и гибридных кроссов птицы, высокая концентрация поголовья на ограниченных территориях. В таких условиях даже  при незначительных нарушениях  оптимальных зоотехнических и  ветеринарно-санитарных условий содержания  и кормления птицы происходит интенсивное накопление патогенной и  условно патогенной микрофлоры  в воздухе и на объектах птичника, что приводит к снижению уровня нормофлоры и  отрицательно влияет на естественную резистентность  организма птиц. Следствием этого является быстрое распространение инфекционных болезней, в первую очередь бактериальной природы, уровень которых по данным  Росптицесоюза превышает 60% (Венгеренко Л. А.,2009).

В этой связи актуальным является организация и  проведение мониторинговых исследований бактериальной микрофлоры, циркулирующей в птицеводческих хозяйствах различного технологического направления, что позволяет контролировать и прогнозировать эпизоотическую ситуацию на весь период выращивания  птицы (Борисенкова А.Н., 2000; Гусев В.В. и др., 2003; Андреева Н.Л. и др., 2004; Сидорова А.,2008; Лыско С., Макарова О., 2009).

Одной из особенностей эпизоотологии бактериальных болезней птиц в промышленных птицеводческих хозяйствах является их ассоциированное течение  с проявлением респираторного синдрома. При бактериологических исследованиях,  как правило, выделяют культуры эшерихий, стафилококков, синегнойной палочки, микоплазм,  пастерелл ослабленной вирулентности,  орнитобактерий, зачастую в ассоциациях с  пневмовирусом, что значительно затрудняет  своевременную  и объективную постановку диагноза и разработку мер борьбы (Борисенкова А. Н., 2007; Лазуткина Е.А., Бессарабов Б. Ф., 2007; Сavanagh D.,1999).

  В последние годы в птицехозяйствах возросла циркуляция условно патогенной микрофлоры, являющейся причиной  проявления токсикоинфекций человека, что ставит проблему на уровень не только ветеринарный, но и медико-экологический. Достаточно упомянуть о выделении в ряде хозяйств культур  кишечной палочки (О:157 H:7), которые вызывают  у людей геморрагический колит (Бондаренко В.М., Шаманова М.А.,2004; Степаншин Ю.Г. и др., 2005; Thamm B., 2000), S. enteritidis - одного из основных патогенов при сальмонеллёзной инфекции (Кафтырева Л.А. и др.,2008 ) и C. jejuni  - возбудителя кампилобактериоза, являющегося причиной кишечных заболеваний у детей ( Черкасский Б.Л., Минаев В.И.,1993). 

Традиционно для профилактики бактериальных болезней птиц  широко применяют антимикробные препараты. Наиболее эффективными являются макролиды, тетрациклины, фторхинолоны и созданные на их основе комплексные препараты -  тилозина и левомицетина, тилозина и апрамицина (Татарчук О.П.,2007), доксициклина  и  линкомицина ( Лагунин С. В. и  др., 2005),  спектиномицина  и клиндамицина (Ионов С.Н. и др., 2007). Однако,  избавиться этими средствами от ряда вирулентных микроорганизмов  удается далеко не всегда. При этом, использование антимикробных препаратов с профилактической  целью влечет за собой целый ряд негативных последствий - иммуносупрессию, дисбактериоз, аллергические реакции, появление у патогенных и условно патогенных  бактерий резистентности к антибиотикам, ограничение на  использование в пищу людям продуктов убоя птицы, обработанной такими препаратами.  Кроме того, в комплексе  противобактериальных профилактических мероприятий используют  целый ряд эффективных антисептиков (Виденин В. Н. 1994),  пробиотиков (Тараканов Б.В. и др.,2007; Панин А.Н.,2008). 

До последнего времени в стране, за исключением пастереллёза (Борисенкова А.Н., 1992), не были  разработаны эффективные вакцины против колибактериоза, сальмонеллёза и микоплазмоза птиц.  Широко апробированные в 70-90-х гг. прошлого века моно - и бивалентные инактивированные вакцины против колибактериоза, изготовленные из целой бактерии (Рахманина И.А., Грошева Г.А., 1980; Артемьева С.А. и др., 1987; Радчук Н.А., 1990), оказывали защитное действие только при заражении гомологичными полевыми штаммами E.coli.  В  комплексе мероприятий по предупреждению и ликвидации бактериальных болезней птиц в РФ отсутствовали также наиболее востребованные практикой  ассоциированные бактериальные вакцины.

Установлено, что наиболее эффективные  противобактериальные вакцины могут быть созданы  на основе штаммов, подобранных с учетом факторов патогенности - вирулентных, адгезивных,  токсигенных свойств (Григорьева Г.И., Игнатов П.И., 1987; Литвин В.Ю., 1994; Бондаренко В.М., 1999) и с использованием  масляно-эмульсионных адъювантов нового поколения, обеспечивающих  более продолжительный и  напряжённый иммунитет (Glisson J.R. et al., 1984; Feberwee A. еt al., 2006; Kleven S., 2008).

Исходя из вышеизложенного,  работа по совершенствованию системы профилактики бактериальных болезней птиц и созданию эффективных средств их специфической защиты является  актуальной.

1.2. Цель работы и задачи исследований

Создать  комплексную  систему профилактики бактериальных болезней птиц  в хозяйствах промышленного типа с учетом биологических свойств возбудителей.

  Для достижения  цели были поставлены следующие задачи:

- провести микробиологический  и серологический мониторинг, изучить спектр возбудителей бактериальных болезней, циркулирующих в хозяйствах разного технологического направления;

- изучить биологические свойства наиболее значимых возбудителей бактериальных болезней птиц;

- провести исследования некоторых антимикробных средств, пробиотиков и антисептиков с целью профилактики бактериальных болезней птиц;

- изучить факторы патогенности  возбудителей бактериальных болезней птиц и предложить критерии подбора вакцинных штаммов для создания  средств  специфической профилактики;

- получить лабораторные образцы инактивированных вакцин против бактериальных болезней птиц;

- испытать и предложить адъюванты для промышленного производства бактериальных вакцин;

- разработать технологию производства инактивированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллёза и микоплазмоза птиц;

  - разработать систему контроля бактериальных болезней для оценки и прогноза эпизоотической ситуации на период выращивания птицы;

  - внедрить в практику промышленного птицеводства средства и методы профилактики болезней бактериальной этиологии.

1.3. Научная новизна и теоретическая значимость работы

Определен спектр и количественный состав микрофлоры возбудителей бактериальных болезней птиц, циркулирующих в хозяйствах различного технологического направления. 

  Изучены биологические свойства культур, выделенных из  различных птицеводческих объектов (здоровая и павшая птица, смывы с тушек, вода из ванн охлаждения, групповые пробы помета, воздух инкубатория). Установлено, что видовой состав микрофлоры зависит от вида, возраста птицы, эпизоотической ситуации и, в меньшей степени, от технологического направления птицехозяйств.

  Показано, что штаммы E. сoli,  не типируемые  с помощью набора коммерческих О-коли  сывороток, эпизоотически опасные и высоковирулентные для РКЭ и цыплят первого возраста.

Изучены биологические свойства  E. coli и  установлено,  что  термостабильный и термолабильный энтеротоксины  вызывают  у птиц диареегенные и геморрагические поражения на слизистых оболочках,  соответственно, а  цитотоксин  - пневмонию и гибель цыплят.

  Установлена корреляции между токсигенными, адгезивными и вирулентными свойствами эшерихий. Показано, что наибольшей степенью вирулентности обладают культуры, способные вырабатывать термостабильный энтеротоксин,  цитотоксин и специфические адгезивные антигены. 

Впервые  изучено течение респираторного синдрома  у птиц,  предложена  модель определения этиологического фактора заболевания у птиц при заражении цыплят смесью  культур Pasteurella multocida,  Escherichia coli и Staphylococcus aureus .

  Установлено, что экзотоксин А Ps.aеruginosa свободно проникает через гематоэнцефалический барьер и вызывает патологические изменения в паренхиматозных органах, блокируя обменные процессы в организме.

  Изучена степень чувствительности культур патогенных  и условно патогенных микроорганизмов, выделенных от птиц,  к антибиотикам - Тиланик, Тилокол и Польодоксин, изучены антагонистические свойства пробиотиков - Ц-люкс и Лактикол и даны рекомендации для внедрения  их в практику птицеводства.

  Предложены критерии подбора вакцинных штаммов E.coli и  S.enteritidis  с учетом вирулентных, адгезивных и токсигенных свойств.

Разработаны инактивированные  сорбированные вакцины против колибактериоза, сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц и ассоциированная вакцина против  колибактериоза и  пастереллеза птиц.

Подобран эффективный масляный адьювант для промышленного производства бактериальных инактивированных вакцин.

Внедрена промышленная технология производства инактивированных моно- и ассоциированных вакцин на основе масляных адъювантов против сальмонеллеза, колибактериоза, пастереллеза  и  респираторного микоплазмоза птиц.

  Разработана  комплексная  система профилактики бактериальных болезней птиц  с использованием специфических и неспецифических средств защиты с учетом биологических свойств возбудителей.

1.4. Практическая значимость 

Разработаны и утверждены  нормативные документы на следующие биопрепараты:

- Вакцина против сальмонеллёза, колибактериоза и пастереллёза птиц инактивированная  АВИВАК-Сальмо-Коли-Пастовак, СТО 46262188-0002-2007; 

- Инструкция по применению вакцины против сальмонеллёза, колибактериоза и пастереллёза птиц инактивированной АВИВАК - Сальмо- Коли - Пастовак, утверждена  06.12.07 г.;

  - Вакцина инактивированная эмульсионная против респираторного микоплазмоза птиц АВИВАК-РМ, ТУ 9384-002-46262188-04.

  - Инструкция по применению вакцины инактивированной эмульсионной против респираторного микоплазмоза птиц АВИВАК-РМ, утверждена  20.12.2005 г.;

Разработаны и утверждены Рекомендации по диагностике и профилактике псевдомоноза птиц (Санкт-Петербург-Ломоносов, 1990), Рекомендации по проведению микробиологического мониторинга вывода и выращивания цыплят (Утверждены Ученым советом ВНИВИП, 21.11.1994), Рекомендации по диагностике и профилактике  пастереллеза птиц (Санкт-Петербург-Ломоносов, 1995 ), Рекомендации по профилактике пневмонии индеек (Санкт-Петербург-Ломоносов, 1995, утверждены ВПНО Союзптицепром, 28.12.1990), Рекомендации по контролю  сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц (Утверждены Ученым советом ВНИВИП,  31.10.2005).

  1.5. Апробация

Основные положения диссертации опубликованы, доложены и одобрены на: заседаниях Учёного совета Всероссийского  научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства (ВНИВИП) за 1986-2006 гг.; Всесоюзной научно-производственной конференции (Санкт-Петербург, 1986); Конференциях по птицеводству Национального отделения  ВНАП России (Санкт-Петербург, 1993; Сергиев Посад, 1995; Зеленоград, 2003); III Украинской конференции по птицеводству с международным участием Птицеводство (Харьков, 2001);  Международной юбилейной научно-практической конференции, посвящённой 40-летию ГНУ ВНИВИП Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве (Санкт-Петербург - Ломоносов, 2004);  Конференции  НПП АВИВАК Современные научные разработки  и  перспективные технологии для промышленного птицеводства (Санкт-Петербург, 2005), л20 лет на благо промышленного птицеводства  (Санкт-Петербур, 2010);  I-VI Международных конгрессах  по птицеводству (Москва, 2005-2010); Научно-практической конференции Новые мировые тенденции в производстве продуктов из мяса птицы и яиц (Ржавки, Московская обл.,  2006), Научно-практической конференции, посвящённой памяти академика РАСХН Р.Н. Коровина Болезни птиц в промышленном птицеводстве. Современное состояние и стратегия борьбы (Санкт-Петербург, 2007).

1.6. Публикации результатов исследований

  По материалам  диссертации опубликовано 37 научных работ, в том числе 12- в изданиях, рекомендованных перечнем ВАК РФ

1.7. Структура и объём работы

  Диссертация изложена на Е.. страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов  собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы  и приложений. 

Работа иллюстрирована 41 таблицей,  23 рисунками и 3 схемами. Список использованной литературы включает 341 источник, в т.ч. 140 иностранных авторов.

1. 8.  Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

-  спектр микрофлоры, выделяемой от птиц при промышленном выращивании;

- биологические свойства возбудителей основных бактериальных болезней птиц (пастереллёз, колибактериоз, псевдомоноз, сальмонеллёз) в птицехозяйствах разного технологического направления;

- результаты исследований эффективности антибактериальных препаратов;

- критерии подбора вакцинных штаммов для получения высоко иммуногенных препаратов;

- разработка инактивированных сорбированных и эмульсионных вакцин на основе поверхностных антигенов возбудителей бактериальных болезней, условия их инактивации, режимов сорбции, оптимального состава антигенов в  лабораторных и опытно-промышленных партиях вакцин;

- испытание инактивированных сорбированных и эмульсионных моно- и ассоциированных вакцин против сальмонеллёза, колибактериоза и пастереллёза (АВИВАК-Сальмо-Коли-Пастовак) и респираторного микоплазмоза (АВИВАК-РМ) с целью обеспечения эпизоотического благополучия  при промышленном выращивании птицы;

- комплексная система профилактики бактериальных болезней птиц  в хозяйствах промышленного типа;

- теоретическое обоснование и разработка концепции борьбы с бактериальными болезнями птиц с учётом биологических свойств возбудителей и факторов патогенности.

2.Собственные исследования

2.1. Материалы и методы

Диссертационная работа  выполнена  в 1986-2007 гг. в соответствии с Российской (общесоюзной)  и отраслевой научно-техническими программами НИР в отделе  микробиологии  ГНУ ВНИВИП Россельхозакадемии. Работа по получению биопрепаратов проведена совместно с НПП АВИВАК, НИИЭМ им. Пастера (Санкт-Петербург), НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи (Москва), НИИВС (Санкт-Петербург), НИИ микробиологии МО РФ (Киров) и ФГУП Ставропольская Государственная биофабрика. 

  2.1.1. Материалы

  В работе использовано 2350 развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ) и 1363 СПФ РКЭ 7-8 сут. возраста производства ФГУП Щелковский биокомбинат; 1500 цыплят и кур разного возраста, 30 петухов; 120 белых мышат-сосунков и взрослых белых мышей линии С57ВL/6 живой массой 6-7  и 14-18 г соответственно,  и 37 кроликов породы Шиншилла. В опытах использовали культуры E.coli, Ps.aеruginosa, P.multocida, S.enteritidis,  S.gallinarum-pullorum и  M. gallisepticum и полевые культуры.

  2.1.2. Эпизоотологический, микробиологический и  серологический  мониторинг

Исследования проведены на  52 птицефабриках яичного и мясного направления кур,  индейководческих и  утководческих хозяйствах 32 регионов РФ, в которых под наблюдением находилось свыше 30 млн. птиц.

В каждом хозяйстве анализировали эпизоотическую ситуацию, оценивали условия содержания и кормления, при необходимости устанавливали и причины повышенного отхода птицы. С этой целью проводили  мониторинговые  микробиологические исследования по выделению в хозяйствах культур микроорганизмов  от клинически здоровой (мазки из трахеи, помет), павшей птицы (внутренние органы) и объектов птицеводства (воздух инкубатория, смывы с тушек, вода из ванн охлаждения).

  Микробиологический мониторинг воздуха выводных шкафов инкубатория проводили в  птицехозяйствах разного технологического направления. Для этого чашки со средами - кровяной агар (КА), среда Эндо и желточно-солевой агар (ЖСА) устанавливали на 3-х уровнях выводного шкафа при достижение вывода 15, 40, 60 и 80%, время экспозиции 1мин. Затем чашки выдерживали  в термостате и через 24 часа проводили подсчет колоний.

Культурально-морфологические и биохимические свойства микроорганизмов и их идентификацию проводили в соответствии с Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями (1984 г.) и Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных (2000г.). Для идентификации выделенных культур энтеробактерий  использовали пластины биохимические дифференцирующие для энтеробактерий, серотипирование - с помощью типоспецифических О-агглютинирующих коли-сывороток  согласно Наставлению по применению агглютинирующих О-колисывороток, утверждённому ГУВ Госагропрома СССР 16 июня 1990 года №115-6а. Серотипирование сальмонелл проводили согласно схеме Кауфмана-Уайта, с использованием О-комплексных, О-монорецепторных  и Н- сывороток, а синегнойной палочки - агглютинирующими поливалентными сыворотками. Каждую из культур E. сoli, Ps.aeruginosa и  S. enteritidis, агглютинирующих с любой поливалентной сывороткой на стекле, исследовали с моновалентными сыворотками, входящими в  состав наборов. Все реакции, оцененные более чем на два креста, переставляли в пробирочном варианте.

  2.1.3. Изучение биологических свойств возбудителей

Вирулентные свойства E.coli, Ps.aеruginosa, P.multocida, S.enteritidis,  S.gallinarum-pullorum  и  других  культур микроорганизмов, выделенных  от птиц при различной эпизоотической ситуации и из  объектов птицеводства, изучали  на модели РКЭ 7-8 сут. возраста, 1-3 сут. цыплятах и курах различного возраста.  Эмбрионы заражали в аллантоисную полость  оттитрованными дозами суточных бульонных культур тестируемых микроорганизмов  в объеме  0,2 см3,  цыплятам аналогичные культуры вводили интраокулярно в  объеме 0,1 см3. Летальную дозу (LD50) рассчитывали по методу Риду и Минча. Кур  разного возраста заражали внутримышечно или внутривенно.  При гибели биологических моделей  в течение 3 сут. в количестве 80% и выше культуры характеризовали как высоковирулентные и вирулентные.

Макроскопические поражения внутренних органов цыплят оценивали по предложенной нами  4-х балльной системе: 0 - изменений нет, 1 балл - слабое поражение одного из органов, 2 - поражение органов дыхания,  умеренный перикардит, перигепатит, 3- пневмония,  перикардит, перигепатит, энтерит, и 4 балла Ц  пневмония, сильный фибринозный перикардит, перигепатит и энтерит.

Адгезивные свойства кишечной палочки определяли  в реакции иммуноадгезивной гемагглютинации (РИАГА) диагностическими наборами производства ВНИИ прикладной микробиологии (г. Оболенск), в соответствии с Временным  наставлением по применению агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенам эшерихий К 88, К 99, 987Р, F41, А20,  (1989 г.).

  Для изучения токсигенных свойств культур Е.coli  использовали различные методы : для термолабильного энтеротоксина (LT) тест отёка лапки  (Вартанян Ю.П. и др. 1978), термостабильного энтеротоксина (ST) -  по развитию диареи у мышей-сосунков или 1-3-суточных цыплятах (Смирнова Н.А. и др. 1978). Способность культур Е.coli  вырабатывать цитотоксин (CT) выявляли при интратрахеальном заражении цыплят, используя лёгочную модель (Полоцкий  Ю.К., 1968).

Для оценки культур, вызывающих клиническую картину воспаления подглазничных синусов, сережек, межчелюстного пространства, как этиологического фактора ассоциированного респираторного синдрома у  птиц изучали биологические свойства культур, выделенных из мест поражения и параллельно проводили исследования сывороток крови птиц на выявление антител к  P.multocida методом ИФА с обязательным подтверждением выделения и идентификации возбудителя бактериологическими методами.

Клиническую картину ассоциированного респираторного синдрома воспроизводили  в лабораторных условиях при  заражении цыплят 55-сут. возраста смесью культур P.multocida, E.coli и St. аureus в соотношении 1:1:1  по 1 млрд./см3 каждой.

Способность  культур Ps. aeruginosa продуцировать экзотоксин A определяли в реакции диффузионной преципитации (РДП) в агаровом геле по методу Эликса  с моновалентной антитоксической сывороткой кролика. Биологические свойства экзотоксина А исследовали на моделях РКЭ и цыплятах разного возраста, которым  вводили токсиносодержащий супернатант или взвесь бактериальных клеток.  Для гистологических исследований  кусочки внутренних органов (сердце, печень, почки, селезенка, тимус и бурса) эмбрионов и цыплят фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и обрабатывали по общепринятой методике. Гистосрезы окрашивали гемотоксилином и эозином. Исследования выполнены совместно с доктором ветеринарных наук Бакулиным В.А.

2.1.4. Определение антибактериальных свойств  препаратов

Эффективность антибиотиков в отношении различных культур микроорганизмов определяли по  величине минимальной ингибирующей концентрации (МИК) общепринятым диско-диффузионным методом  по Керби-Бауэр и  методом двойных серийных разведений в жидкой питательной среде.

Антимикробную активность  Катапола  в отношении E.coli, St. аureus, Ps. aeruginosa определяли методом серийных разведений в МПБ  при микробной нагрузке  106 мик. тел/мл, токсические свойства препарата на модели РКЭ.  Безвредность и эффективность аэрозолей Катапола на цыплятах разного возраста,  распыление препарата проводили с помощью аппарата САГ-1,  время экспозиции - 30 мин.

Антагонистические свойства пробиотиков Ц-люкс и Лактикол исследовали методом перпендикулярного подсева тест-микроба к микробу антагонисту (Биргер М.О.,1989) и в опытах на цыплятах в лабораторных и производственных условиях.

2.1.5. Методы получения и контроля опытных и опытно-промышленных серий вакцин

  Наработку экспериментальных микросерий вакцин проводили в условиях  ГНУ ВНИВИП, опытные серии вакцины готовили на двух биопредприятиях - Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток (НИИВС, Санкт-Петербург) и ФГУП Ставропольская биофабрика. Вакцины получали на основе поверхностных антигенов  высоковирулентных штаммов л№ 115 P. multocida, л12 СМ и л4П  E.coli,  С-5-АT  S. enteritidis и S6 M. gallisepticum. Для получения антигенов использовали метод тепловой дезинтеграции (Борисенкова А.Н., 1975).

Контроль накопления адгезивных антигенов  в процессе культивирования вакцинных штаммов проводили в реакции агглютинации с латекс-диагностикумом. Для изготовления диагностикума использовали гамма-глобулиновые фракции гипериммунных антиадгезивных сывороток цыплят. Полученную фракцию разводили глициновым буфером до концентрации 1,2-1,4  мг%. Частицы монодисперсных полистироловых латексов диаметром 0,31 мкм (производство ВНИИ синтетического каучука им. Лебедева) разводили в соотношении 1:3 глициновым буфером ( рН 8,2 ). Раствор латекса смешивали с гамма-глобулиновой фракцией гипериммунной сыворотки крови кур. Учет реакции  проводили визуально в течение 1 часа по 4-х бальной системе.

В качестве адьювантов использовали  3%-ный  раствор ГОА в разных соотношениях (1:1, 1:2 и 2:1),  масляную  эмульсию на основе Marcol-52, Montanide ISA- 70 VG (1:2).

Стабильность  эмульсионных форм вакцин определяли центрифугированием  при 4000 об/мин в течение 30 мин,  вязкость  - с помощью вискозиметра ВПЖ-2 ( по ГФ, вып. XI, 1990, с.87).

Стерильность  и полноту инактивации полученных препаратов исследовали по ГОСТ 28085-90 Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности, безвредность - по ОСТ 9380-076-00008064-96 Препараты ветеринарные. Методы определения безвредности. Основные положения.

  Антигенную активность вакцин оценивали  по  уровню антител в  сыворотке крови иммунизированных птиц в  РА, РНГА и/или ИФА на 5, 10, 15 и 20 день. Напряженность иммунитета изучали  на цыплятах разного возраста результатам контрольного заражения патогенными штаммами возбудителей. При этом учитывали количество клинических случаев заболевания, павших птиц, характер  патологоанатомических изменений,  процент  выделения культур заражающего штамма из органов убитых в конце опыта птиц, сохранность поголовья, прирост живой массы. Коэффициент иммунологической эффективности (КИЭ), полученных вакцин рассчитывали по формуле:

КИЭ =  А-В  х 100, где

А

КИЭ - коэффициент иммунологической  эффективности, %

А - количество заболевшей птицы в контрольной группе; %

В - количество заболевшей птицы в опытной группе, %

  Полученные данные обработаны статистически с применением компьютерной программы Microsoft Excel,  проведен  расчет средних данных и проверка достоверности различия по критерию Стьюдента,  использованы методы математического моделирования и  компьютерной графики.

  2.2.  Результаты собственных исследований

  2.2.1. Эпизоотологический, микробиологический и  серологический мониторинг бактериальных болезней птиц

Анализ эпизоотической ситуации в РФ за последние 10-15 лет показал, что структура инфекционных болезней птиц претерпела существенные изменения. Падеж от болезней бактериальной этиологии достиг  60% и более от общего числа павших.  При этом от  колибактериоза погибло 48,5%,  от респираторного микоплазмоза - 11,6%,  пуллороза - 1,2%,  сальмонеллезов -0,2% и пастереллеза - 0,03%. При этом наибольший процент занимают  болезни, возбудители которых относятся к группе условно патогенных микроорганизмов. 

Важным звеном в комплексной системе профилактики и борьбы с бактериальными болезнями птиц является микробиологический мониторинг периода вывода и выращивания цыплят. В результате проведенных исследований проб, взятых от клинически здоровых и павших птиц, смывов с тушек,  воды из ванн охлаждения тушек,  воздуха  выводных шкафов инкубатория, замерших эмбрионов в 26 хозяйствах разного технологического направления, было выявлено  18 видов микроорганизмов. При этом доминировали  представители условно патогенной микрофлоры  -  E.coli (39,6 %) , S. aureus (13,9%), Pr. vulgaris (14,2%)  и  Ps. aeruginosa (6,9%).  Зооантропогенные бактерии S. enteritidis и C. jejuni  были  выделены в 1,8 и 3,5% проб соответственно. Оба патогена не были изолированы от индеек и гусей. Процент выделения остальных микроорганизмов составлял  28,7%.

При бактериологическом исследовании птицы  в хозяйствах разного технологического направления было установлено, что от птицы мясного направления культуры S. enteritidis и C. jejuni выделяли в количестве 1,7% и 0,9%, яичного - 2,6% и 8,2%, соответственно.

Исследования проб воздуха выводных шкафов инкубатория в  птицехозяйствах показали, что в процессе вывода идет интенсивное накопление микрофлоры (табл. 1).

Как видно из данных таблицы 1, общее количество колоний микроорганизмов на кровяном  агаре  (КА) при выводе 40% было в 2 раза, а при 60 и 80% - в 7-10 раз больше, чем при исследовании, проведенном при  15% уровне вывода циплят. Аналогичные изменения отмечены и при определении видового состава микроорганизмов. Так, количество колоний колипаратифозных бактерий на среде Эндо к концу вывода увеличивается в 6-9 раз, а стафилококков  на желточно-солевом агаре (ЖСА) - в  2,5-4 раза. Полученные результаты статистически достоверны (Р<0,02-0,001).

Таблица 1.

Динамика накопления микрофлоры в воздухе выводных инкубаторов

(n=15)

№ п/п	Вывод, %	Количество колоний на средах
		КА	Р	Эндо	Р	ЖСА	Р
1.	15	234,1	-	50,7	-	345,0	-
2.	40	457,9	<0,02	101,5	<0,01	324,2	>0,05
3.	60	17027	<0,001	294,0	<0,001	8310	<0,001
4.	80	22835	<0,001	456,2	<0,001	13020	<0,001

 

  Спектр микрофлоры, выделяемой из проб воздуха выводного шкафа инкубатора, составил 18 нозологических видов микрооргинизмов, в т.ч. потенциально опасных для птицы - St.aureus, St.albus, E.coli, S.enteritidis,  Ps. aeruginosa и др.  В процессе работы  в 8 птицеводческих хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией из трупов павших и вынужденно убитых цыплят, кур, индеек, уток, а также со скорлупы яиц, из воздуха птицеводческих помещений и выводных шкафов инкубатория было выделено 142 культуры Ps. aeruginosa, которые обладали типичными для данного вида с культурально-морфологическими и биохимическими свойствами.

  При анализе результатов микробиологического мониторинга вывода и выращивания с целью  выяснении  причин  высокого  уровня падежа цыплят в первые дни жизни  было  установлено, что спектр микрофлоры, выделенной из трупов цыплят, в первую очередь из легких, совпадал с данными бактериологического анализа воздуха выводных шкафов  и  показателями  микрофлоры, выделенной  из  трупов эмбрионов -задохликов. Так, в хозяйстве, неблагополучном по стафилококкозу, возбудитель выделяли  не только из воздуха выводного шкафа и выводного зала, но также из легких и сердца цыплят, павших в первую декаду выращивания.

  В хозяйствах, благополучных по бактериальным болезням, патогенную  микрофлору  в пробах воздуха  выделяли в единичных случаях.

Для оценки и прогноза эпизоотической ситуации по болезням в условиях промышленного выращивания птицы были  разработаны ФРекомендации по проведению микробиологического мониторинга вывода и выращивания цыплят, которые одобрены Ученым советом  (протокол №19 от 21. 11.1994 г.).

  С целью изучения  ассоциированного  респираторного синдрома у птиц было обследовано 7 хозяйств разного технологического направления, включая  одну фабрику по разведению индеек.  При клиническом  осмотре  выявляли до 5% птиц  с признаками воспаления  инфраорбитальных синусов, сережек, межчелюстного пространства и отмечали повышенный отход (8-10%),  в т.ч. вынужденную  выбраковку. При проведении  серологических исследований птицы родительских стад только  на трех бройлерных птицефабриках методом ИФА были обнаружены антитела к P. multocida в 25,4; 40,2 и 33,1% случаев от количества исследованных, соответственно, а от индеек  - 16,7% .

  При бактериологических исследованиях патологического материала от птиц с признаками воспаления тканей в области головы в 4-х птицехозяйствах выделены культуры P.multocida в различных ассоциациях с E.coli, St. aureus, Pr. vulgaris  и  Ps. aeruginosa, а в трех птицехозяйствах Ц  те же ассоциации культур, но без  выделения P. multocida. При этих  исследованиях культуры P. multocida  выделены не были в индейководческом хозяйстве, а  серологически регистрировали наличие антител к этому возбудителю. Полученные данные свидетельствуют о полиэтиологичности ассоциированного респираторного синдрома и  сложности  выделения культур P. multocida при смешанном течении  инфекций.

С целью контроля распространения сальмонеллезной  инфекции, был проведен сравнительный анализ выделения S. enteritidis  и других видов микрофлоры из трупов павшей птицы и групповых проб помета в птицехозяйствах, по производству мяса бройлеров и  производству яиц (№ 1,3). Микрофлора,  выделенная от павшей птицы,  представлена 6 и 7-ю видами. В основном  это  культуры  E. сoli - 53,2 и  43,4%, и  S. enteritidis - 14,9  и 42,2% , соответственно. При исследовании  проб помета кур в хозяйствах  №1  и №3, было выделено 10 видов микроорганизмов, при этом E.coli обнаружили  в 39,1 и 45,0%, а S. enteritidis Ц  в 26,1 и 5,3% случаев.

Для оценки эпизоотической ситуации по респираторному микоплазмозу  (РМ) в разных регионах РФ в 2004 и 2005 гг. были исследованы  соответственно 1032 и 2421 пробы  сывороток крови птиц разного возраста  на наличие антител  к  M. gallisepticum. В эти же сроки в 3-х птицехозяйствах определяли уровень антител к возбудителю инфекционного синовита (ИС).  Специфические антитела к M. gallisepticum были  установлены в 57%, к M. sinoviae  Цв  33% проб сыворотки. Антитела к обоим видам микоплазм одновременно обнаружены в 73% проб сывороток, что свидетельствовало о высокой инфицированности промышленных стад птиц возбудителями микоплазмозов. Наглядным примером инфицированности M. gallisepticum цыплят и кур разного возраста в птицехозяйстве №4 яичного направления, неблагополучным по микоплазмозу,  могут служить следующие данные: у цыплят раннего возраста материнские антитела обнаруживали в 5 и 15-сут. возрасте в количестве 10 и 20%, соответственно, а при исследовании в 45-сут. возрасте они отсутствовали. Максимальный уровень инфицированности - 100%  положительных реакций был установлен у птиц в возрасте 149-226 дней. Средний титр антител составил 1:2927410 и 1:94831300 (Р<0,01), с минимальными и максимальными колебаниями 1:41 - 1:8052 и 1:2739 и 1:18408, соответственно. У кур-несушек в возрасте свыше 450 дней положительных серологических реакций было  выявлено уже значительно меньшеЦ18%. 

Антитела к M. sinoviae  в диагностических значениях в хозяйстве № 5 мясного направления появились к 90- сут. возрасту (1:3000470) и значительно увеличились (1:7300900) к 120-сут. возрасту (Р<0,05). В  птицехозяйстве яичного направления № 4 антитела начали регистрироваться в 120-сут.  возрасте (1:1050170), а  в другом  (№6) они отсутствовали. Тем не менее, уже  к 140-сут. возрасту птица из всех трех хозяйств различного технологического направления имела высокий уровень антител (1:7300-1:8000 и более). Следует отметить, что в хозяйстве мясного направления (№ 5) у кур родительского стада к 90-100-сут. возрасту при клиническом осмотре отмечали опухание суставов, болезненность при пальпации. При патологоанатомическом вскрытии регистрировали аэросакуллиты. У птицы из хозяйств яичного направления №4 и 6 эти признаки появлялись к 120-140 сут., но в значительно меньшем количестве.

Результаты серологического  мониторинга эпизоотической ситуации по M. gallisepticum и M. sinoviae показали, что респираторный микоплазмоз имеет значительно большее распространение, так как наличие антител к  возбудителю M. gallisepticum обнаружено  практически во всех исследуемых хозяйствах.

Таким образом, результаты микробиологического и  серологического мониторинга распространения  патогенной и  условно патогенной микрофлоры позволяет дать оценку эпизоотической ситуации и прогнозировать ее  на период выращивания птицы, что позволит  своевременно проводить меры неспецифической и специфической профилактики болезней птиц в птицехозяйствах неблагополучных по данной инфекции.

2.2.2. Исследование биологических свойств возбудителей бактериальных  инфекций птиц

Биологические свойства изучали более чем у  400-х культур E.coli, S. enteritidis, выделенных от эмбрионов-задохликов,  клинически здоровых и павших птиц разных видов и при различной эпизоотической ситуации. При серотипировании выделенных культур Е.coli, почти половину (47%) не удалось типировать по О-антигену  со стандартными О-коли-сыворотками. Не типируемые культуры выделяли, как правило,  в хозяйствах неблагополучных по колибактериозу  Из типируемых 45% отнесли к серовару О:78, 41% к серовару О:2 и 14% к сероварам О:1, О:4, О:8, О:9, О:11, О:15, О:55, О:115, О:126, О:127 и др.

  Все выделенные культуры E.coli обладали  характерными  для данного вида культурально-морфологическими и биохимическими свойствами, но проявляли разную вирулентность в отношении  РКЭ и суточных цыплят. По вирулентным свойствам выделенные культуры E. coli разделили на 4 группы: высоковирулентные, вирулентные, слабовирулентные и авирулентные. Высокую вирулентность проявили 19 из 24 тестированных культур, выделенных от индеек; 9 из 13 - от бройлеров и 5 из 22 - от кур-несушек. Культуры вводили  в дозе 0,2 мл3  в аллантоисную полость РКЭ и интраорбитально суточным цыплятам гибель  моделей наблюдали в 90-100% случаев уже в течение 24-48 ч. При этом у павших цыплят при патологоанатомическом вскрытии обнаруживали признаки катаральной пневмонии. Остальные культуры были слабовирулентными  или авирулентными  как для РКЭ, так и для суточных цыплят.

При исследовании 118 культур E. coli адгезивные свойства выявили у 63, из которых 20% обладали сильной, 40% - умеренной и 24,5% - слабой адгезивностью. Наибольшее количество штаммов имело адгезивные антигены К99, К88 или F41. Три культуры имели по 2 адгезивных антигена (К99 и F41)  и по одной культуре  - двойные антигены (К88 и F41, А20 и F41, К88 и 987Р).

  Эшерихии, у которых были обнаружены адгезины, относились к патогенным  сероварам О:1, О:2, О:78, О:9, О:111. Большинство их (69%) принадлежали к серовару О:2. У сероваров О:2 и О:78 выявлено по два адгезивных антигена. Установлена прямая корреляция между степенью адгезивной активности и вирулентностью культур кишечной палочки. Так, 87,55% культур, обладающих высокой и средней степенью адгезивности, были высоковирулентны  для эмбрионов и цыплят, а авирулентные культуры не обладали  высокоадгезивными свойствами.

Токсигенные свойства E.coli  изучали у 93 культур. Большинство из них образовывало токсины: 24% - термолабильный (LT), 24% - термостабильный (ST), 9% - оба упомянутых токсина и 24% продуцировали  еще и цитотоксин (CT).

В опытах на мышатах-сосунках и 1-3- сут. цыплятах установили, что SТ- токсин обладает диареегенными свойствами. У мышей процесс развивался в течение 4 часов и  по истечении этого времени у вынужденно-убитых животных на вскрытии отмечали серозно-геморрагический энтерит. У цыплят были аналогичные изменения,  и они погибали в течение 2-3-х сут. 

  LT-токсин, напротив, вызывал геморрагические  поражения. При введении  его в аллантоисную полость РКЭ и 10- сут. цыплятам интраназально наблюдали их 100% гибель в течение 24-48 ч. На вскрытии у эмбрионов отмечали точечные кровоизлияния на оболочках,  у цыплят - отек легких, острую катаральную пневмонию, скопление серозно-геморрагического экссудата.

  С помощью легочной модели установили, что высоковирулентные культуры кишечной палочки (серовар О:78 или нетипируемые) способны вырабатывать цитотоксин. При интраназальном заражении эти культуры интенсивно размножались  в легочной ткани, вызывая острую катаральную  пневмонию и скопление серозно- геморрагического экссудата в грудной полости. Количество микробных тел, высеваемых от зараженных цыплят в динамике, резко возрастало  и на  2-3  сутки  птица погибала. Установить связь между  токсигенными и антигенными свойствами не удалось, так как к одному и тому же серовару (например,  О:78) были отнесены культуры, образующие токсины,  и не обладающие функцией токсинообразования.

При серологическом типировании культур Ps. aeruginosa с помощью набора поливалентных агглютинирующих О-сывороток была установлена их принадлежность к О:1, О:2, О:3, О:4, О:6, О:9 и О:10 серогруппам, при этом  у кур и индеек  преобладал серотип О:6, а у уток Ц  серотип О:3.

Вирулентные свойства культур Ps.aeruginosa изучали  на 7-8-сут. РКЭ и цыплятах суточного возраста. Показано, что все культуры вызывали гибель спустя 24-48 ч  в 90-100% случаев. У павших цыплят при патологоанатомическом вскрытии отмечали кровоизлияния на сердечной сорочке, пневмонию, инфильтраты в месте инъекции. При бактериологическом исследовании культуры заражающих штаммов выделяли из всех внутренних органов, что свидетельствует о развитии септического процесса.

В опытах на цыплятах старшего возраста и курах было показано, что культуры Ps. aeruginosa были вирулентные для РКЭ и цыплят до 30-дневного возраста и слабовирулентные для цыплят старше 40-суточного возраста при в/в  введении.  При внутривенном заражении птица погибала на 2-3-и сут. в 40-60% случаев.  При вскрытии павших цыплят основными патологоанатомическими признаками были кровоизлияния на сердечной сорочке, серозный перикардит, пневмония, некроз тканей в месте введения культуры, а также зеленый цвет печени. Внутримышечное и внутрисинусальное заражение 30-60-сут. цыплят  культурами Ps. aeuruginosa  приводило  лишь к единичным случаям гибели.

При изучении способности синегнойной палочки продуцировать  экзотоксин A, было отобрано 6 высоковирулентных культур, обладающих типичными для Ps. aeruginosa культурально-морфологическими свойствами. Иммунохимическим методом в агаризованной среде  Мартена  было установлено, что все 6 культур, выделенные из трупов птицы, образовывали линии преципитации с моновалентной антитоксической сывороткой кролика, т.е. обладали функцией токсинообразования.

Исследованиями биологических свойств  выделенного  экзотоксина А на модели РКЭ  было показано, что он  вызывал их гибель в 66-73% случаев в течение 24 ч, а при введении бактериальной взвеси Ps. aeruginosa за этот период погибало  лишь  27-30% эмбрионов. Аналогичные результаты были получены в опытах на цыплятах 10-сут. возраста. При внутримышечном введении токсиносодержащей жидкости гибель наступала в течение 48 ч у 68-72% птиц, а при инъекции бактериальной взвеси за этот же период пало лишь 23-29% птицы. При патологоанатомическом вскрытии трупов вынужденно убитых цыплят на месте введения наблюдали некроз тканей.

Культуры Ps. aeruginosa были высоковирулентны для эмбрионов и цыплят первых дней жизни, при этом возбудитель свободно проникает через гематоэнцефалический барьер и вызывает специфические изменения характерные для действия токсина, блокируя деятельность основных иммунокомпетентных органов. Проведенными гистологическими исследованиями выявлены деструктивные изменения не только в месте введения  культур Ps. aeruginosa, но и во внутренних органах, что указывает на развитие генерализованного патологического процесса. 

  2.2.3.  Ассоциированный респираторный синдром бактериальной этиологии у птиц

Для определения роли патогенных и условно патогенных микроорганизмов в развитии респираторного синдрома у птиц был  проведен анализ спектра микрофлоры, выделяемой  из мест поражения, и показано, что доминируют  культуры кишечной палочки (36,5%) и кокковой микрофлоры (35,85%). Выделение M. gallisepticum, P. multocida и S. enteritidis  регистрировали в 4,6; 2,9 и 2,9% случаях, соответственно. При проведении  бактериологических исследований патологического материала,  взятого от  птиц с признаками воспаления тканей в области головы, были выделены  культуры P. multocida  с типичными культурально-морфологическими и биохимическими свойствами, но не обладающие  гемолитическими свойствами. У 4-х  культур в сравнении с высоковирулентным  штаммом л№115 P.multocida были изучены вирулентные свойства на 1-3- и 90-сут цыплятах при внутримышечном, внутрисинусальном и внутривенном заражении.

  При внутримышечном  способе заражения цыплят дозой оттитрованной дозой суточной бульонной культуры P.multocida в объеме 0,5 см 3 заболело и пало лишь 40-50% птицы в течение  6-7 сут. При этом высоковирулентный штамм P.multocida в объеме 0,5 см3 суточной бульонной культуры  разведенной до  10-8 , вызывал гибель цыплят в течение 36-48 часов. У павших цыплят обнаруживали серозный перикардит и некротические узелки в печени, и  разлитой некроз на  месте инъекции культуры.

Внутрисинусальное введение цыплятам испытуемых культур P.multocida в 70% случаев приводило к развитию респираторного синдрома, характерного для хронического течения пастереллеза. Полученные данные доказывают, что культуры пастерелл, выделенные при респираторном синдроме, обладают слабовирулентными свойствами. Пастереллез птиц в современных условиях протекает в основном ассоциированно в подостро-хронической форме и клинически характеризуется развитием респираторного синдрома.

  Для создания у цыплят мясных пород 55-сут. возраста модели ассоциированного респираторного синдрома в экспериментальных условиях были отобраны культуры пастерелл, кишечной палочки и стафилококка, вирулентные для РКЭ  8-сут. возраста. Цыплят заражали как  монокультурами, так и их смесью (1:1:1) внутрисинусальным способом в объеме 0,21 см3.

Наиболее выраженная клиническая картина с двусторонним воспалением тканей подглазничных синусов, сережек и межчелюстного пространства была при введении смеси культур,  в то время как при заражении монокультурами P.multocida и Е.сoli  отмечали лишь незначительное воспаление на месте введения. Заражение культурой St.aureus клинически никак не проявлялось.

4. Исследование  антибактериальных  препаратов

  Традиционное  решение  проблемы бактериальных болезней птиц с помощью антибиотиков явилось предпосылкой для сравнительной оценки  эффективности  препаратов Тилозина, Тилокола и Польодоксина, действующим веществом которого является доксициклин.

  В производственных условиях испытали препараты Тилокол и Тиланик.  Первая группа цыплят (4480 гол.) получала Тилокол в дозе 200 мг/кг на 1-3 и 26-28 сут., 2-я (5200 гол.)  - Тиланик в дозе 0,5 г/л по аналогичной схеме и 3-я  группа (4480 гол.) -  препараты не  получала (контрольная). Продолжительность опыта составила 42 дня. Применение Тилокола и Тиланика улучшило показатели сохранности бройлеров  на 3,5 и 1,4% , среднесуточного прироста живой массы на 2,2 и 0,7 г и средней живой массы перед убоем на 94 и 30 г по сравнению с контрольной группой.

Эффективность  Польодоксина проверяли в опытах in vitro на 44 культурах 10 видов бактерий. Показано, что 72,7% культур были  чувствительны и высокочувствительны.

Польодоксин, назначенный цыплятам 75-сут. возраста  перорально в дозе 0,2 см3 четыре дня подряд, был эффективен при внутримышечном заражении на 2-й день оттитрованной дозой высоковирулентного штамма №115 Р. multocida. Из 10 подопытных цыплят за 14 дней пал только один, в то время как в контрольной группе погибли все цыплята. В третьем аналогичном опыте,  цыплят заражали внутрисинусально смесью суточных  культур -  ослабленной вирулентности P. multocida, E.coli  и St. аureus, взятых в соотношении 1:1:1. Из 7 подопытных  цыплят только у одного отмечено воспаление вокруг подглазничного синуса, в то время как в контрольной группе заболели все цыплята.

Таким образом, применение Тиланика, Тилокола  и Польдоксина может стать эффективной составляющей системы профилактики бактериальных болезней птиц.

  Для снижения микробного давления  воздуха выводных шкафов инкубатора в период вывода цыплят  изучена эффективность применения антисептика из группы поверхностно-активных веществ - Катапол в отношении условно патогенной микрофлоры.

Применение Катапола для обработки цыплят  на выводе в хозяйствах, неблагополучных по болезням респираторного комплекса, дало положительный эффект. Количество птиц,  павших от  патологии органов дыхания, в т.ч. и с  признаками аэросаккулитов, за первые 20 дней выращивания было в 2,3 и 2,7 раза меньше по сравнению с контрольной группой. Сохранность в опытной группе была на 0,5 % выше, чем в контроле.

В последующем эти цыплята были обработаны Катаполом в птичнике  из расчета 1,0 см3/м3 на 6, 7, 13, 14 и 15 Цй дни  выращивания. В опытной группе цыплят, павших с патологией органов дыхания, было на 14,5% меньше, в т.ч. и  с аэросаккулитами (0,45%),  а сохранность была на 1,17% выше по сравнению с группой контрольной птицы.

В дополнение к комплексу мероприятий по профилактике заболеваний, вызываемых условно-патогенной микрофлорой были  проведены исследования по изучению эффективности применения пробиотиков при выращивании птиц. Комплексный препарат Ц-люкс, в который входят три вида нормальной микрофлоры и фермент норизин, оказывал антагонистическое действие по отношению к 7 из 10 исследованных культур  бактерий и в первую очередь на патогенную культуру кишечной палочки. В производственных  условиях препарат был назначен с целью профилактики колибактериоза цыплятам-бройлерам перорально из расчета 25 мг/кг живой массы в течение 5 дней, что позволило за период выращивания повысить показатели сохранности на 0,8-1,6%  и увеличить средний прирост живой массы  на 165 г ( р < 0,05), по сравнению с группой цыплят, не получавшей пробиотик.

Лактикол,  препарат полученный на основе антагонистически активных штаммов лактобактерий, обладал выраженным действием в отношении E. coli  и Ps. aeruginosa. Зона задержки роста составила от 15 до 20 мм, St. аureus - до 15 мм.  В эксперименте была показана безвредность Лактикола для цыплят 5-кратной дозы пробиотика при пероральном введении в течение 10 дней. В производственных условиях опыт провели на 35 тыс. цыплят-бройлеров, которым  Лактикол назначали с питьевой водой в течение 7 дней. Сохранность цыплят-бройлеров в опытной группе составила 95,6%, в контрольной - 91,9%. Количество вынуждено убитой птицы в опытной группе было значительно ниже -  10,3%  по сравнению с контрольной группой - 15,2% .

  В целях повышения естественной резистентности и снижения инфицированности условно патогенной микрофлорой, на птицефабрике яичного направления, в период искусственно вызванной линьки кур,  пробиотик  Лактикол применяли в возрасте 500 дней в дозе 5 млн. микробных клеток с питьевой водой курсом 5 дней. Эффективность препарата  оценивали по выделению микрофлоры из помёта кур до и после его применения .

Анализ полученных данных показал, что если до применения Лактикола из помета кур выделяли культуры C. jejuni, Streptococcus spp., Pr.vulgaris и E.coli  в 56,6; 73,3; 20,0 и 100% проб соответственно, то  после его применения количество  обнаружений,  C jejuni практически не регистрировалось,  других условно патогенных микроорганизмов уменьшалось на 30-50 %.

Таким образом, применение Лактикола с лечебно-профилактической целью позволяет птицехозяйствам повысить  сохранность поголовья, улучшить качество тушек  и контролировать эпизоотическую ситуацию по  бактериальным инфекциям без  включения в схему ветеринарных обработок  антибиотиков.

5. Разработка средств специфической профилактики

  Одним из этапов комплексной системы профилактики бактериальных болезней птиц  является усовершенствование и разработка средств специфической профилактики. На  модели  вакцины против колибактериоза птиц были определены критерии подбора вакцинных штаммов эшерихий с учетом факторов патогенности по следующим показателям: принадлежность к одному из наиболее широко распространенных серовариантов или к  нетипируемым, высокая степень вирулентности,  адгезивности и токсигенности.

На основании предварительных исследований и с учетом перечисленных требований были отобраны 2 штамма кишечной палочки ( л4П и л12СМ) и разработана методика получения поверхностных антигенов, обладающих протективной активностью в отношении наиболее эпизоотически опасных серовариантов. Проведены исследования по подбору адъювантов.

  Технологическая схема производства вакцины против колибактериоза птиц состоит из трех основных этапов:

  1. Подготовка вакцинных штаммов: пассажирование на РКЭ; определение культурально-морфологических, вирулентных, адгезивных и  токсигенных свойств, изготовление производственных расплодок штаммов  Master seed (МS),  Working seed (WS) и Production seed (PS).

  2. Получение коливакцины: приготовление питательной среды; подготовка посевного материала (PS); засев реактора матровой расплодкой; глубинное культивирование; снятие поверхностных антигенов; инактивация бактериальной массы формалином; сорбция антигенов на геле гидроокиси алюминия или эмульгирование с масляным адъювантом.

3.  Биологический контроль полученной вакцины: определение стерильности, полноты инактивации, безвредности для птиц,  антигенных,  протективных и др. свойств.

Для наработки опытной серии инактивированной сорбированной вакцины против колибактериоза птиц в соответствии с первым этапом  штаммы E.coli  л12СМ и л4П трижды пассажировали на РКЭ, заражая их каждый раз суточной бульонной культурой в объеме 0,2 см3. Гибель эмбрионов наступала, как правило, на 1-2 сутки. Все штаммы обладали высокой степенью вирулентности. Штамм л12 СМ (серовар  О:78 ) продуцировал энтеротоксины и имел специфические адгезивные антигены К88, К99 и А20.  Штамм E.coli л4П не типировался по О-антигену, обладал способностью вырабатывать термолабильный  и термостабильный энтеротоксины, цитотоксин, адгезивные антигены К88, К99 и А20.

  Полученные  вакцинные штаммы по культурально-морфологическим, биохимическим и биологическим свойствам соответствовали исходным и служили основой для изготовления MS, WS  и PS .

В связи с тем, что среда Минка, рекомендуемая для  накопления адгезинов, достаточно дорогостоящая и состоит из  большого количества дефицитных компонентов, было проведено сравнительное культивирование штаммов эшерихий на других питательных средах аналогичного назначения. Было показано, что максимальное накопление бактериальной массы происходит при выращивании E.coli в бульоне на основе панкреатического гидролизата кильки. При этом штаммы сохраняли исходные  культурально-морфологические,  биохимические, адгезивные и токсигенные свойства.

С целью повышения иммуногенности вакцины проводили сорбцию антигенных комплексов  из смеси  подобранных штаммов в равных пропорциях на  3%-ном геле гидроокиси алюминия  (ГОА) при рН 5,8-6,3 с таким расчетом, чтобы в 1 см3 готовой вакцины содержалось 1,5-2,0 мг  сорбента в пересчете на Al2O3.

  Полученные опытные  серии  вакцины инактивированной сорбированной  против колибактериоза  АВИВАК-Коливак, были  проверены на соответствие требованиям стандарта отрасли. При  внутримышечном введении вакцины  по 2,0 см3 в каждое крыло  цыплятам они оставались клинически здоровыми  в течение 10 суток наблюдения. Местная  реакция после  введения вакцины  отсутствовала, что свидетельствовало о ее безвредности.

Для определения антигенных и протективных свойств вакцины АВИВАК-Коливак было сформировано 3 группы цыплят, по 10 голов в каждой. Цыплятам первых двух групп вакцину вводили  вн/мышечно в крыло в дозе 0,5 см3 однократно и двукратно с интервалом 8 дней, цыплят третьей группы не вакцинировали. Через 7 и 14 дней у цыплят первой и второй групп была установлена  положительная  РНГА на стекле. В развернутой РА средний титр антител составил 5,70,4 и 6,30,5 log2, (Р>0,05)  соответственно. На  14 день  после  второй вакцинации цыплят заражали вн/венно суточной бульонной культурой вирулентного штамма  E. сoli в дозе - 1 млрд. микробных клеток  в объеме  1,0 см3. При этом в группе цыплят, вакцинированных однократно,  заболело 4, из которых пало 3 головы. При двукратной вакцинации Ц  заболел и пал 1 цыпленок. В группе контроля все 10 зараженных цыплят заболели с признаками диареи и  из них пало -  6 голов.  Коэффициент иммунологической эффективности (КИЭ)  после однократной и двукратной вакцинации составил 60 и 90 %  соответственно. Через две недели все оставшиеся в живых цыплята были убиты и проведено полное бактериологическое исследование. Культура заражающего штамма выделена только от цыплят группы контрольного заражения.

  Производственные испытания вакцины инактивированной сорбированной против колибактериоза провели в птицехозяйстве яичного направления, в котором бактериологически подтверждали циркуляцию  вирулентных штаммов E coli. Было вакцинировано 28 тыс. цыплят 120-сут. возраста. В аналогичной контрольной  группе цыплят профилактику колибактериоза проводили с помощью химиотерапевтических средств.

  В результате у вакцинированной  птицы в сравнении с контрольной  сохранность за  10 месяцев наблюдения была выше на 0,7%, а яйценоскость -  на 6,0%, затраты  на 10 снесенных яиц уменьшились на 0,11 кормовых единиц, расходы на медикаменты были в 1,5 раз ниже. При бактериологическом исследовании эпизоотически опасные культуры E. coli выделяли  только в группе не вакцинированной птицы.

Таким образом, вакцина АВИВАК-Коливак обладала выраженными протективными свойствами в отношении эпизоотически опасных изолятов E. coli, независимо от региона выделений и серологической принадлежности. Применение вакцины способствовало увеличению производственных показателей и  значительно сокращало  расходы на  препараты неспецифической профилактики.

С целью оптимизации схемы специфической профилактики, была разработана и испытана с положительным эффектом ассоциированная вакцина против колибактериоза и пастереллеза птиц. В работе использовали  антигенные комплексы  вакцинных штаммов л4П и л12СМ  E. сoli и  л 115 P. multocida, взятые в равных количествах. Сорбцию  полученного ассоциированного антигенного комплекса проводили на 3%-ном геле  гидроокиси алюминия (ГОА). 

  Вакцину испытали  в условиях вивария на цыплятах яичных пород 15-сут. возраста.  Было сформировано 6 групп: 1-я группа - 20 голов (две подгруппы) и по 10 голов в остальных. Цыплятам 1-й группы вводили ассоциированную вакцину против пастереллеза и колибактериоза  вн/мышечно в дозе 0,5 см3, 2-й - только против колибактериоза,  3-й  -  против пастереллеза, 4- и 5-я - были группами контрольного заражения, 6-я служила интактным контролем. Для изучения  динамики накопления титров антител сыворотки крови опытных и контрольных цыплят  исследовали с антигенами E.coli и  P. multocida  на 5, 10, 15 и 20-й день после вакцинации.

Было установлено, что у цыплят, вакцинированных ассоциированной вакциной титр антител в РА нарастал постепенно и достигал максимума к 15-20-у дню (4,0 и 3,8 log2), а при применении моновакцин он был несколько ниже (3,4 и 3,5 log2).

  На 28 день после вакцинации провели контрольное заражение  цыплят 1-подгруппы, 2- и 4-й группы патогенным штаммом  E.сoli в дозе 0,5 см3  вн/мышечно  и 2-й подгруппы, 3- и 5-й группы  оттитрованной дозой бульонной культуры P. multocida. В группе цыплят, иммунизированных  ассоциированной вакциной, на 3-и сут. пал один , во 2 и 3-й  -  по 2  и  в 4 и 5-й группах заболели все  и из них пало по 9 цыплят. В группе интактного контроля птица была клинически здорова.

По результатам испытания моновакцина КИЭ (70%)  уступала  в эффективности ассоциированной вакцине, у которой КИЭ составил 90%. Можно предположить, что это связано  с  антигенной  активностью препарата, содержащего  два антигенных комплекса.

Для подтверждения результатов испытания вакцины ассоциированной  инактивированной против колибактериоза и пастереллеза птиц был проведен повторный опыт. В опыте находилось четыре группы цыплят яичных пород, по 10 голов в каждой. Птицу 1- и 2-й групп вакцинировали однократно ассоциированной вакциной, где соотношение поверхностных антигенов было 1:1, в дозе  0,5 см3 вн/мышечно. На 20-й день опыта их  заразили соответственно патогенными  штаммами  E.coli  и P. multocida  вн/мышечно. В эти же сроки  аналогично провели контрольное заражение цыплят 3- и 4-й групп.

  После заражения иммунизированных цыплят 1-й  группы E. сoli  пал  1 цыпленок  и  9 выжили. При бактериологическом исследовании еще от одного цыпленка была выделена исходная культура E. coli и при вскрытии отмечали патологоанатомические изменения, характерные для колибактериоза. Во второй группе иммунизированных цыплят, зараженных P.multocida, пало 2 головы. В группах контрольного заражения при заражении  E. сoli, пало 2 и заболело 3 головы, а в группе цыплят,  зараженных P. multocida, пали все цыплята. При бактериологическом исследовании  исходные культуры заражающих  штаммов  были выделены от всех невакцинированных цыплят. КИЭ  для цыплят, иммунизированных ассоциированной вакциной  и зараженных  E. сoli  составил  80%,  а  P. multocida  - 80%, что отвечает требованиям  СТО. 

Учитывая полученные данные по выделению сальмонелл в хозяйствах различного технологического направления из разных объектов, и то, что Salmonella enteritidis относится к эпидемически опасным возбудителям, нами разработана  вакцина против сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц.

  Для создания инактивированной  вакцины против  сальмонелла - энтеритидис инфекции птиц был подобран штамм С-5-АТ, который обладал типичными для сальмонелл культурально-морфологическими, биохимическими свойствами и антигенной структурой (О:9, Н : mg) и был высоковирулентным для РКЭ 8-сут.  возраста и цыплят при  в/венном  введении. В лабораторных условиях была изготовлена опытная  серия вакцины с  сорбентом ГОА в соотношении 1:1.

  Безвредностъ сорбированной вакцины определяли на 10 цыплятах яичных пород 100-сут. возраста.  Ее образцы вводили в каждое крыло вн/мышечно в объеме 2,0 см3.  Все цыплята в течение 10 дней наблюдения были клинически здоровы.

Для определения антигенной активности  сорбированную вакцину вводили  цыплятам 100-сут. возраста вн/мышечно в крыло в объеме 1,0 см3. Динамику формирования  поствакцинальных  антител оценивали  в ККРНГА  на стекле  и развернутой РА с эритроцитарным пуллорным антигеном производства ФГУП Курская биофабрика - БИОК, исследования проводили с интервалом 7 дней, начиная с 7  по 91 день.

  У птиц, иммунизированных сорбированной вакциной, первые положительно реагирующие пробы крови в ККРНГА были выявлены на 14 день (47%), а на 21-й день опыта 100% проб крови от вакцинированной птицы давали реакцию на 4 креста.  В РА максимальный  титр специфических антител  установлен  на 28 день (1: 43344). С 35 по 91-й день он постепенно снизился с 1:32035 до 1:606,3 и практически был на уровне 14-го дня с начала вакцинации(1:495,1) (рис 1).

  В период с 40 по 79-й день после вакцинации  проводили сбор яиц. При исследовании экстрактов яичных желтков в РА было показано, что титр специфических  антител  был  ниже, чем в сыворотках крови,  и максимального уровня (1:10314 и 1:969,7) достигал  позже - на 46-50 день (рис. 1).

Рисунок 1

Динамика изменения титра сывороточных антител к S. enteritidis у птиц,

иммунизированных сорбированным вариантом вакцины

  7 10 14 21 28 35 42 49 56  63  70 77 84 91

дни после вакцинации

Рисунок 2

Динамика изменения титра антител к S. enteritidis в желтке яиц птиц,

иммунизированных сорбированным вариантом вакцины

  40 46 50 56 64  72  79 

дни после вакцинации

Обнаружение в желтках яиц специфических антител в диагностических титрах свидетельствует  о возможности  защиты цыплят  от  S. enteritidis  за счет формирования  материнского иммунитета с первых дней жизни.

Антиинвазивные свойства инактивированной сорбированной вакцины против сальмонелла-энтеритидис инфекции изучали на 38-сут. цыплятах. Одну группу цыплят вакцинировали внутримышечно в дозе 0,5 см3, вторая - была  контрольной. На 22 день после вакцинации обе группы цыплят заразили перорально суточной бульонной культурой S. enteritidis. Групповые пробы помета собирали  за сутки до заражения и  далее с 2-дневным  интервалом до конца срока наблюдения (10 дн.). При бактериологических исследованиях исходную культуру заражающего  штамма  S. enteritidis  изолировали только из проб помета цыплят группы контрольного заражения. Через 10 дней после заражения проводили вынужденный убой  птицы обеих групп и бактериологическое исследование  внутренних органов. Были получены результаты, аналогичные исследованиям групповых проб помета, т.е. исходные культуры выделяли только от невакцинированной зараженной птицы.

Для производственных испытаний была наработана опытно-промышленная серия инактивированной сорбированной вакцины АВИВАК-Сальмовак. Вакцину испытали  в хозяйствах  мясного направления корпорации Саратов-птица, неблагополучных по сальмонелла-энтеритидис инфекции, где, при исследовании крови эритроцитарным пуллорным антигеном в  10%  случаев  выявляли положительно реагирующую птицу, а при  проведении бактериологических исследований из патологического материала выделяли культуры S.enteritidis.

В  опытной группе было  42757 голов, вакцинацию  которых проводили двукратно: первый раз  в 35-сут. возрасте, ревакцинацию в 90-сут. возрасте. Аналогичное количество птицы было в контрольной (не вакцинированной) группе. Эффективность  вакцинации определяли через 1,5 мес. по количеству выделения возбудителя из трупов, эмбрионов-задохликов, мазков из клоаки, а также сохранности цыплят.  При бактериологическом исследовании 149 проб, взятых от вакцинированной птицы, в т.ч. 40  мазков из клоаки, 70  смывов с поверхности яиц и  39 положительно реагирующих в ККРНГА птиц, культуры S.enteritidis не были выделены, тогда как  от птицы не вакцинированной группы из 176 проб, в т.ч.125 эмбрионов - задохликов, 6 трупов  и 45 положительно реагирующих в ККРНГА  птиц  было выделено 17 положительных  проб (10%).

Во втором хозяйстве мясного направления  первая вакцинация ремонтного молодняка  30 сут. возраста (25037 голов) проведена в двух птичниках, и ревакцинация через 2 месяца только в одном. Падеж цыплят в первые 30 дней выращивания составил 2,8%,  а  после вакцинации в течение последующих 30 дней он снизился  до  0,6%. Проведенное бактериологическое исследование 5 голов убитых вакцинированных цыплят дало отрицательный результат,  в то время как из трупов цыплят 4-11-суточного  возраста, полученных от не вакцинированных кур,  была выделена культура S.enteritidis. Установлено также, что  вакцинация вызывала  выраженную сероконверсию. Наибольшее количество реагирующих в ККРНГА проб  выявлялось на 14-21 день после вакцинации (90%), а через 4,5 и 8,5 месяцев уровень антител снижался до 25 и 10 %, соответственно.

При исследовании в  Саратовской  региональной ветеринарной лаборатории по болезням птиц из 20 вакцинированных цыплят, реагирующих в ККРНГА, от  5 были произведены бактериологические высевы из крови сердца, печени, селезенки и  желчного пузыря. Культура S. enteritidis ни в одном случае не выделена.

Оставшиеся 15 цыплят разделили на 3 группы, по 5 голов в каждой. Первую группу  заражали культурой  S.enteritidis с кормом из расчета 1 млрд. микробных тел на 1 г корма; 2-ю - подкожно в область шеи аналогичной культурой в объеме 1,0 см3 и 3-я была контрольной (вакцинированная, но не зараженная). Через 7 дней цыплят исследовали  в ККРНГА. Все вакцинированные цыплята дали положительную реакцию, контрольные - только в 60% случаев. На 12-й день после заражения цыплята всех трех групп были убиты. У 100% цыплят, зараженных подкожно, обнаруживали разлитые некрозы в месте введения культуры, однако из внутренних органов  культура заражающего штамма не была выделена. У вакцинированных, но не зараженных цыплят, изменений, характерных для сальмонеллеза, не установлено. Применение инактивированной сорбированной вакцины позволило обеспечить в хозяйствах  стабильное благополучие по сальмонелла-энтеритидис инфекции.

За последние годы показано, что при производстве инактивированных вакцин  важное значение имеет подбор адъюванта, так как это позволяет достичь у привитых птиц необходимый защитный уровень гуморальных антител на каждый из входящих в композицию антигенов и  обеспечивать их циркуляцию в крови в течение более длительного времени.

  Нами были  изготовлены образцы моновакцин против сальмонелла-энтеритидис инфекции  на основе минерального масла Marcol-52 и масляного адъюванта Montanide ISA-70 VG. Антиген и адъюванты смешивали в соотношении 1:2 при режиме 3000 об/мин в течение 10 мин, а затем эмульгировали на диспергаторе Ultra Turrax. Изготовленные вакцины представляли собой однородную эмульсию белого цвета, стерильную, с вязкостью 56 и 35 мм2/с , соответственно, и стабильностью 3,0 мм.

С целью определения реактогенности эмульсионные вакцины вводили  подкожно в область верхней дорсальной поверхности груди в объеме 2,0 см3. После 15 дней наблюдения на месте инъекции вакцины, изготовленной на основе масла Marcol-52, образовывались уплотнения, безболезненные при пальпации. При инъекции  вакцины  на основе адъюванта Montanide ISA-70 VG аналогичные изменения отсутствовали, что и послужило основанием в дальнейшем проводить испытание антигенной активности вакцины, изготовленной только на масляном адъюванте Montanide ISA-70 VG.

Рисунок 3

Динамика изменения титра сывороточных антител к S. enteritidis у птиц,

привитых эмульсионным вариантом вакцины

 

  -1 30 60 90

дни после вакцинации

  Для исследования антигенной активности вакцину вводили  подкожно в область верхней дорсальной поверхности груди в объеме 0,5 см3. Определение титра антител в сыворотке крови в ИФА проводили за сутки до вакцинации и через 30,60 и 90 дней после.  До введения вакцины титр специфических антител у птицы был ниже диагностического уровня (1:20). Динамика роста уровня сывороточных антител у птицы представлена на рисунке 3.

Также было проведено сравнительное изучение антигенной активности сорбированной и эмульсионной вакцин против сальмонелла-энтеритидис инфекции, изготовленных на идентичном инактивированном антигене S. enteritidis с одинаковой его концентрацией в обоих образцах.

Вакцинами, полученными на основе гидроокиси алюминия и адъюванта Montanide ISA-70 VG, иммунизировали цыплят 60-сут. возраста в мышцу крыла между лучевой и локтевой костями и подкожно в область нижней трети шеи в дозе 0,5 см3, соответственно. Ревакцинацию проводили в 90-сут. возрасте сорбированной вакциной в объеме 1,0 см3, а эмульсионной 0,5 см3 вышеописанными методами. Установлено, что титр антител в развернутой РА с пуллорным эритроцитарным антигеном у цыплят, иммунизированных инактивированной эмульсионной вакциной, на 14 и 28 день составил 1:1470130 и 1:1225117, а сорбированной вакциной только 1:59565 и 1:35045. У птицы чистого контроля титры антител отсутствовали.

  Рисунок 4

Антигенная активность сорбированного и эмульсионного вариантов вакцин, изготовленных на основе инактиврованного антигена S.enteritidis

до дни после I вакцинации  дни после II вакцинации

  вакцинации  14  28  22 119

После ревакцинации эмульсионной вакциной титр антител на 22 день незначительно повысился (1:1592180), а в группе иммунизированной сорбированной вакциной существенно возрос (1:94587). По окончании опыта (119 день после второй вакцинации) титр антител у  птиц привитых эмульсионной вакциной был в 3,5 раза выше - 1:47760, по сравнению с привитыми сорбированной вакциной  - 1:13315 ( Р<0,001).

При сравнении результатов антигенной активности сорбированной и эмульсионной вакцин было показано, что после применения эмульсионной вакцины наблюдали более выраженный и напряженный  иммунитет, чем при иммунизации сорбированной вакциной (рис 4).

  Проблема сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц актуальна не только для птицеводства, но и для охраны здоровья людей. Предлагаемая система профилактики и оздоровления, включающая  применение не только антибактериальных препаратов,  но и  вакцин против сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц, научно обоснована и позволяет стабилизировать эпизоотическую  ситуацию в хозяйствах и предотвратить  заражение людей. 

Респираторный  микоплазмоз (РМ) -  одно из наиболее экономически значимых для промышленного птицеводства заболеваний.  Важным методом контроля РМ является вакцинопрофилактика. С этой целью нами разработаны  и изготовлены образцы инактивированной вакцины АВИВАК-РМ на основе  масляного адъюванта высокой степени очистки, что позволило исключить реактогенные свойства и повысить иммуногенность препарата.

Опытный образец инактивированной эмульсионной вакцины против РМ птиц был изготовлен на основе адьюванта Montanide ISA-70 VG  и  инактивированного антигена, полученного в результате культивирования вакцинного штамма S6 M.gallisepticum на среде Эдварда, с последующей инактивацией возбудителя химическим препаратом Теотропином. Образец вакцины эмульгировали с помощью диспергатора ULTRA-DISPAX.

Для накопления бактерийной массы  использовали триптический гидролизат кильки, который равноценен по биологической ценности  триптическому гидролизату из сердца КРС (Стегний Б.Т. и др., 2007), с добавлением сыворотки крови лошади и дрожжевого экстракта.

Инактивированная эмульсионная вакцина против респираторного микоплазмоза птиц представляла собой однородную эмульсию белого цвета, со следующими характеристиками: стабильность эмульсии по высоте верхней прозрачной фракции 2,5 мм, вязкость 41 мм2/с. Исследование безвредности и антигенной активности вакцины проводили на цыплятах кросса Хайсекс-браун 25-суточного возраста.

Для определения безвредности вакцины была сформировано 3 группы птиц по 10 голов в каждой.  Птице первой группы вакцину вводили  п/к  в нижнюю треть шеи в объеме 2,0 см3. На 13 день, при вскрытии вынужденно убитых  цыплят, на месте введения вакцины отмечали остатки не рассосавшейся вакцины в виде крупинок размером  0,5-1,5 мм. Признаков воспалительного процесса обнаружено не было.

  Для определения антигенной активности цыплят второй группы иммунизировали опытным образцом вакцины, которую вводили п/к в область нижней трети шеи в объёме 0,5 см3/голову. Третья группа была контрольной и вакцинации не подвергалась.

  Результаты определения антигенной активности эмульсионной вакцины против респираторного микоплазмоза птиц в ИФА приведены в табл. 2.

Таблица 2

Антигенная активность инактивированной эмульсионной вакцины против респираторного микоплазмоза птиц

Результат	Опытная группа №2			Контрольная группа №3
	Титр антител к M.gallisepticum
	До вакци-нации	После вакцинации через:		До начала опыта	Через:
		1 мес.	3 мес.		1 мес.	3 мес.
Среднее значение:	507,4	6801580	7050540	415,6	7514	18356
Max результат в группе	135	10684	11000	81	146	352
Min результат в группе	18	3555	3549	20	38	108

Как видно из данных табл. 2, в группах цыплят № 2 и 3 до начала опыта средний титр антител в ИФА был отрицательным (1:50 и 1:41). Спустя 1 мес. после иммунизации в группе № 2 средний титр составил по 10 пробам 1:6801580 (1:3555 - 1:10684), а через 3 мес. он был 1:7050540 (1:3549 - 1:11000), что указывает на высокую антигенную активность испытуемого препарата. Достоверной разницы между показателями титров антител через 1 и 3 месяца после вакцинации не установлено. У цыплят контрольной, не вакцинированной группы титры в диагностически положительных значениях не выявлены.

Для изучения антигенных свойств вакцины инактивированной эмульсионной против РМ, в условиях птицехозяйства яичного направления было образовано две группы цыплят, по 21700 и 20500 голов в каждой. Первой группе цыплят вакцину  вводили  вн/кожно в область нижней трети шеи с дорсальной стороны  в объёме 0,5 см3 первый раз в возрасте 5 недель, с последующей ревакцинацией за 4 недели до начала яйцекладки. Вторая группа цыплят была интактным контролем.

Результаты исследований титров антител в сыворотке крови цыплят  методом  ИФА за сутки до, через 30 и 60 дней после  первой вакцинации,  второй - через 1; 1,5; 2,5; 3,5; 4,5; 5,5; 6,5; 7,5 и 8,5 мес. представлены на рис.5. 

Рисунок 5.

Антигенная активность инактивированной эмульсионной  вакцины  АВИВАК-РМ

 

 

 

до после I в. ч/з после II вакцинации через (мес.)  .

1 м.  2 м. 1  1,5  2,5  3,5 4,5  5,5  6,5 7,5 8,5

До начала  опыта у птиц  обеих групп антитела  не  были обнаружены.

Через 1 и 2 мес. после 1-й иммунизации титр антител составил 1:2026230 и 1:5579670 (Р<0,05), что в 2 и 5,4 раза превышает минимально положительный показатель (1:1029) для диагностических наборов производства НПП АВИВАК и  свидетельствуют об антигенной активности вакцины уже после первого введения.

После второй иммунизации максимальный титр антител устанавливали на 30 и 45 день - 1:195161500 и 1:242542000, хотя разница в титрах была не существенной (Р>0,05). Затем он удерживался с 75 по 135 день на уровне 1:14040-1:10911 и на 195-255 день стабилизировался на значениях 1:5626-1:5867. В контрольной группе титр антител во все указанные сроки составлял 1:38-1:398.

Применение инактивированной эмульсионной  вакцины АВИВАК-РМ  в хозяйстве, неблагополучном по респираторному микоплазмозу, улучшило  продуктивность птицы: яйценоскость и выводимость цыплят увеличилась на 14-17% и 8,7-9,1%, соответственно. В подопытных группах количество птиц, павших с патологоанатомическими признаками поражения органов дыхания, уменьшилось на 15-18% по сравнению с контролем.

С помощью инактивированной вакцины в сочетании с химиопрофилактикой удалось снизить уровень циркуляции возбудителя в стаде, предотвратить вертикальную передачу инфекции, получить потомство свободное от микоплазменной инфекции и  стабилизировать эпизоотическую ситуацию по РМ, что позволило  увеличить продуктивность несушек и бройлеров, обеспечить сохранность поголовья и  улучшить финансово-экономические показатели хозяйств.

Наиболее значимым разделом  является  разработка системы контроля бактериальных болезней птиц в хозяйствах промышленного типа, которая включает основные этапы  производственных процессов начиная с закладки яйца на инкубирование, получения здорового, молодняка, и заканчивая этапом контроля  получения экологически чистой птицеводческой продукции.

Основные этапы системы контроля бактериальных болезней птиц:

1.  Эпизоотологический мониторинг технологического цикла производства

2.  Микробиологический мониторинг вывода и выращивания цыплят

3.  Диагностический мониторинг:

- серологические исследования;

- микробиологические исследования ;

4.  Антибиотикопрофилактика

5.  Пробиотикопрофилактика

6.  Вакцинопрофилактика

7.  Дезинфекция

8.  Дератизация

  В заключение следует отметить, что для создания стабильно благополучной эпизоотической ситуации по бактериальным  болезням в комплексе ветеринарно-санитарных мероприятий необходимо проводить мониторинговые микробиологические и серологические исследования как в период вывода и выращивания птицы, так и при выпуске готовой продукции. Применение антибиотиков и других химиопрепаратов оправдано только  после оценки чувствительности к ним выделенных культур. Целесообразно также шире использовать специфическую профилактику бактериальных болезней инактивированными моно- и  ассоциированными вакцинами. Работники птицехозяйств обязаны регулярно проходить медицинские осмотры работников с целью выявления скрытого  бактерионосительства.

Только комплексный подход к решению проблемы бактериальных болезней птиц  позволит улучшить  экономические  показатели работы птицехозяйств и  обеспечить эпизоотическое и эпидемиологическое благополучие.

3. Выводы

  1. Разработана  комплексная система профилактики бактериальных болезней птиц, включающая эпизоотологический, серологический и микробиологический мониторинг вывода и выращивания птицы,  контроль качества подготовки технологического оборудования, инкубационного  яйца,  использования эффективных антибактериальных препаратов и  средств  специфической профилактики.

  2. Спектр и количественный состав  микрофлоры,  циркулирующей в птицехозяйствах, зависит от вида, возраста птицы и  эпизоотической ситуации. Зоопатогенные виды Salmonella enteritidis и Campylobacter jejuni чаще выделяют из помета и смывов с тушек, обсеменение которых происходит  в процессе потрошения.

3.  Результаты микробиологического мониторинга вывода и выращивания цыплят позволяют прогнозировать развитие эпизоотической ситуации птицехозяйствах и своевременно  разработать эффективные меры предупреждения возникновения инфекционных болезней. 

  4. Причиной возникновения эпизоотически опасного колибактериоза  птиц  являются  штаммы E. сoli, обладающие  высокой  вирулентностью,  способностью вырабатывать термолабильный и термостабильный энтеротоксины, цитотоксин, а также два или три энеротоксина одновременно. Культуры, продуцирующие термолабильный энтеротоксин, вызывают геморрагические поражения,  а цитотоксин  - пневмонию у цыплят. Колибактериоз птиц  протекает по  типу токсико-септико инфекции.

  5. Этиологическим фактором развития респираторного синдрома у птиц является ассоциированное действия пастерелл ослабленной вирулентности и условно патогенной микрофлоры.

6.  Культуры синегнойной палочки, выделенные от птиц, способны продуцировать экзотоксин А, который свободно проникает через гематоэнцефалический барьер, вызывает  патологические изменения в паренхиматозных органах, блокируя деятельность иммунокомпетентных органов.

7. Установлено, что  применение водорастворимого тилозина тартрата и комплексного препарата тилозина тартрата с левомицетином  для профилактики бактериальных и микоплазменных болезней птиц увеличивает сохранность  цыплят- бройлеров на 1,4 и  3,5 %, среднесуточный  прирост живой массы на 0,7 и  2,2 г  и средней живой массы  перед  убоем на  30 и 94  г,  соответственно.

  8.  Антисептик  Катапол эффективен in vitro в отношении большинства штаммов стафилококков, кишечной и синегнойной палочки. Его применение в форме аэрозоля в выводных шкафах при достижении вывода цыплят более 60% снижает контаминацию  воздуха инкубатория различными бактериями  в 2-15 раз, уменьшает количество птиц,  павших от  патологии органов дыхания, в т.ч. и с  признаками аэросаккулитов, за первые 20 дней выращивания было в 2,3 и 2,7 раза меньше по сравнению с контрольной группой и увеличивает сохранность в опытной группе  на 0,5 % , чем в контроле.

  9. Применение препаратов Ц-люкс и  Лактикол для восстановления микробиоценоза кишечника птиц в период выращивания и, особенно, в период технологического стресса, а также после применения антибиотиков,  позволяет  повысить сохранность бройлеров на 0,8-1,6%  и снизить инфицированность кур-несушек и контаминацию тушек при убое и разделке птиц C. jejuni и  другими условно патогенными микроорганизмами.

  10. Предложены критерии  подбора вакцинных штаммов с учетом факторов  патогенности (вирулентных, адгезивных, токсигенных и др.).  Селекционированы  штаммы эшерихий и сальмонелл  для производства инактивированных вакцин нового поколения.

11. Инактивированная вакцина АВИВАК-Сальмо-Коли-Пастовак, созданная  на основе селекционированных штаммов С-5-АТ Salmonella enteritidis, адгезивных антигенов токсигенных штаммов Escherichia coli и л№115 Pasteurella multocida  с адьювантами гидроокиси алюминия или  эмульсионным  Montanide ISA-70 VG  в моно- или двухвалентных вариантах, обладает выраженными иммуногенными свойствами. Применение вакцин в птицехозяйствах позволяет стабилизировать эпизоотическую ситуацию, повысить планово-экономические показатели и снизить затраты на ветобслуживание в 1,5 раза.

12. Разработана и внедрена инактивированная эмульсионная вакцина АВИВАК-РМ против респираторного микоплазмоза птиц. Ее применение  в сочетании с правильно подобранными схемами химиопрофилактики позволяет стабилизировать эпизоотическую ситуацию в  неблагополучных по данному заболеванию птицехозяйствах, повысить яйценоскость на 14 -17%  и увеличить выводимость цыплят  от вакцинированной птицы на  8,7 - 9,1%

4. Предложения для практики

Разработаны и внедрены в ветеринарную практику вакцины  против сальмонеллеза, колибактериоза и пастереллеза птиц  инактивированные сорбированные и эмульсионные АВИВАК-Сальмо-Коли-Пастовак, выпускаемые в моно- или  двухвалентном  вариантах,  и вакцина инактивированная эмульсионная против респираторного микоплазмоза птиц АВИВАК-РМ.  Вакцины производятся серийно на биологическом предприятии  НПП АВИВАК и широко применяются в птицеводческих хозяйствах страны.

Для практического применения  в комплексе ветеринарных мероприятий рекомендованы  водорастворимый препарат тилозина тартрата и его комплекс с левомицетином,  антисептик Катапол, пробиотики  Ц-люкс и Лактикол.

Разработаны: Рекомендации по диагностике и профилактике псевдомоноза птиц (одобр. ВПНО Союзптицепром 10.11.1989 г.); Рекомендации по проведению микробиологического мониторинга вывода и выращивания  цыплят (одобр. Ученым советом ВНИВИП 28.11.1994 г. и утв. директором института);

л Рекомендации по диагностике и профилактике пастереллеза птиц (одобр. Ученым советом ВНИВИП 1995г.); Рекомендации по профилактике пневмоний индеек (утв. ВПНО Союзптицепром 28.12.1990 г.); Рекомендации по контролю сальмонелла-энтеритидис-инфекции птиц (одобр. Ученым советом ВНИВИП 31.10.2005 г. и утв. директором института).

5.  Список работ, опубликованных по теме  диссертации

1. Рождественская  Т.Н. Токсигенные свойства кишечной палочки и их роль в патологии птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н. // Ветеринария.-1994.-№3.- С.27-29.
2. Рождественская  Т.Н.  Определение эффективности Энрофлона при бактериальных болезнях птиц/ Борисенкова А.Н, Рождественская Т.Н., Новикова О.Б., Елисеева Е.Н. // Ветеринария.-2002.-№6.-С.15-17.
3. Рождественская  Т.Н.  Результаты испытания тилозина отечественного производства в отношении микроорганизмов, выделенных от птиц / Борисенкова А.Н, Рождественская Т.Н., Новикова О.Б.,  Головещенко К. А., Елисеева Е. Н.  // Ветеринария.- 2003.- N 8. - С. 12-14.
4. Рождественская Т.Н. Биологические свойства возбудителя псевдомоноза птиц/ Т.Н. Рождественская// Ветеринария.-2005.-№3.-С.29-30.
5. Рождественская Т.Н. Зоопатогенные и эпидемиологически опасные микроорганизмы, выделяемые от птицы в хозяйствах промышленного типа/ Рождественская Т.Н., Борисенкова А.Н., Новикова О.Б., Чавгун В.А. // Российский ветеринарный журнал. С.-х. животные.-2005.-№4.-С. 37-38.
6. Рождественская Т.Н. Микоплазмозы птицы: особенности эпизоотологии, диагностики и профилактики/ Рождественская Т.Н.,  Борисенкова А.Н., Панкратов С.В.  //Российский ветеринарный журнал. С.-х. животные.- 2006.-№3.-  С.38-40.
7. Рождественская  Т.Н.  Биологические свойства пастерелл, выделенных при респираторном синдроме птиц/  Борисенкова А.Н.,  Рождественская Т.Н., Лебедева А.И., Новикова О.Б. // Российский  ветеринарный журнал. C.-х. животные.

т-2007.-№3 .- С.39-40.

8. Рождественская  Т.Н. Респираторный микоплазмоз птиц / Борисенкова, А.Н.  Рождественская Т.Н.// Птицеводство.-2008.-№1.-С.11-13.
9. Рождественская  Т.Н. Польодоксин против возбудителей бактериальных болезней птицы/  Борисенкова А.Н., Новикова О.Б., Рождественская Т.Н., Лебедева А.И., Волкова М.// Птицеводство.-2008.-№4.-С.51-52. 
10. Рождественская  Т.Н.  О проблеме кампилобактериоза в птицеводстве/  Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б. //Российский  ветеринарный  журнал. С.-х. животные..-2008.- №4.- С.30-31.

11. Рождественская Т.Н. Колибактериоз птиц: факторы патогенности возбудителя и профилактика болезни/  Т.Н.Рождественская // Российский ветеринарный  журнал.С.-х. животные.-2008.- №1.- С.40-42.

12. Рождественская Т.Н. Специфическая профилактика инфекции Salmonella enteritidis у птицы// Российский ветеринарный журнал. С.-х. животные.-2009.-№1.- С.46-48.

13. Рождественская  Т.Н. Лабораторная диагностика псевдомоноза птиц / Борисенкова А.Н., Бовкун Г.Ф., Рождественская Т.Н. //Основы профилактики болезней сельскохозяйственных животных: сб. науч. тр. /ВНИВИП.-Л., 1989.-С.27-32.

14. Рождественская  Т.Н.  Сравнительная характеристика антигенных, токсигенных, адгезивных и вирулентных свойств эшерихий, выделенных от птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Смирнова Л.И. //Национальное отделение России ВНАП: тез. докл. конф. по птицеводству.- С-Пб., Ломоносов, 1993.-С.203-204.

15. Рождественская  Т.Н.  Испытание комплексного препарата на основе пробиотика и фермента для профилактики бактериальных болезней у птиц/ Борисенкова А.Н, Рождественская Т.Н. //Cб. науч. тр. Литовского вет. инст.-1993.- C. 99-100.

16. Рождественская  Т.Н. Рекомендации по диагностике и профилактике псевдомоноза птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Бовкун Г.Ф. и др. - С-Пб, 1995.-17с.

17. Рождественская  Т.Н. Эффективность применения катапола в присутствии птицы/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Слизнёва И.В. //Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве: сб. науч. тр. ВНИВИП. ЦС-Пб, 1996.-С.62-65.

18. Рождественская  Т.Н. Ассоциированная вакцина для профилактики колибактериоза и пастереллёза/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Лебедева А.И., Заерко В.И. // Птицеводство.: межв. науч. сб. матер. III Укр. конф. по птиц.  с 3 межд. участием.- Борки, 2001.-вып.31.-С.514-515.

19. Рождественская  Т.Н.  Инактивированная сорбированная вакцина против пастереллёза птиц - эффективное средство специфической профилатики/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Заерко В.И. //Практик.-2002-№5-6.- С.62-64.

20. Рождественская Т.Н. Рекомендации по проведению микробиологического мониторинга вывода и выращивания цыплят/ Рождественская Т.Н., Борисенкова А.Н., Новикова О.Б., Чавгун В.А. и др.//Современные научные разработки и передовые технологии для промышленного птицеводства: мат. Юбил. конф. 15 лет. НПП АВИВАК.-С-Пб, 2005.-С.101-108.

21. Рождественская  Т.Н. Спектр микрофлоры, выделяемой от птиц в хозяйствах различного технологического направления/ Борисенкова А.Н, Коровин Р.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б., Чавгун В.А., Головещенко К.А. //РацВетИнформ.-2003.-№10.-С. 3-6.

22. Рождественская  Т.Н. Препараты Тиланико и Тилоколо в отношении возбудителей бактериальных болезней птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б.,. Головещенко К.А и др.//Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве.: мат. Межд. юбил. научн.-практ. конф., посв. 40-лет. ВНИВИП 14-16 сент. 2004 г.- С-Пб, Ломоносов, 2004.-С. 248-251.

23. Рождественская  Т.Н. Диагностика бактериальных болезней птиц при смешанном течении (пастереллёз, гемофиллёз, колибактериоз)/ Борисенкова А.Н., Новикова О.Б., Рождественская Т.Н. //Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве.: мат. Межд. юбил. научн-практ. конф., посв. 40-лет. ВНИВИП 14-16 сент. 2004 г.- С-Пб, Ломоносов, 2004.-С. 135-137.

24. Рождественская  Т.Н. Метод контроля бактериальной инфицированности птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б., Чавгун В.А. //РацВетИнформ.-2004.-№10.-С.6-7.

25.  Рождественская Т.Н. О выделении Salmonella enteritidis от птиц/ Рождественская Т.Н.,. Борисенкова А.Н, Новикова О.Б., Чавгун В.А. //1-й Международный конгресс по птицеводству. 18-22 апреля 2005 .- М., 2005 -С.170-174.

26. Рождественская  Т.Н.  Программа обеспечения эпизоотического благополучия птицехозяйств в отношении бактериальных болезней птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н. //Современные научные разработки и передовые технологии для промышленного птицеводства: мат. Юбил. конф. 15 лет. НПП АВИВАК. -С-Пб, 2005.-С.60-73.

27. Рождественская  Т.Н. Методические рекомендации по выделению кампилобактерий и другой кишечной микрофлоры из групповых проб помёта птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б., //Современные научные разработки и передовые технологии для промышленного птицеводства: мат. Юбил. конф. 15 лет. НПП АВИВАК. ЦС-Пб, 2005.-С.94-101.

28. Рождественская  Т.Н.  Испытание инактивированной сорбированной вакцины против сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Байбиков Ю.И. и др. //Современные научные разработки и передовые технологии для промышленного птицеводства: мат. Юбил. конф. 15 лет. НПП АВИВАК.-С-Пб, 2005.-С.73-80.

29.  Рождественская Т.Н. Программа профилактики и оздоровления хозяйств от сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц/ Рождественская Т.Н., Борисенкова А.Н., Новикова О.Б. и др.//Био.-2006.-№10.-С.25-29.

30. Рождественская Т.Н. Контроль и возможности снижения контаминации тушек кур зоопатогенной и эпидемиологически опасной микрофлорой/ Рождественская Т.Н., Борисенкова А.Н., Новикова О.Б. //Новые мировые тенденции в производстве продуктов из мяса птицы и яиц: мат. науч.-практ. конф.- Ржавки, 2006.-С.202-205.

31. Рождественская Т.Н. Инактивированные вакцины для профилактики бактериальных болезней птиц/ Рождественская Т.Н., Панкратов С.В., Гаврилов С.Н. // III Международный конгресс по птицеводству 10-13 апреля 2007 г., М., 2007.-С.187-190.

32. Рождественская  Т.Н.  Респираторный синдром бактериальной этиологии у птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н. //III Международный конгресс по птицеводству 10-13 апреля 2007 г., М., 2007-С.176-181.

33. Рождественская  Т.Н. Особенности эпизоотологии пастереллёза птиц в современных условиях/ Борисенкова А.Н., Лебедева А.И., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б. //Болезни птиц в промышленном птицеводстве. Современное состояние и стратегия борьбы: мат. научно-практ. конф., посв. памяти акад. РАСХН Р.Н. Коровина, 5-6 июня 2007 г., С-Пб.-С.202-207.

34. Рождественская  Т.Н.  Чувствительность к антимикробным препаратам сальмонелл, выделенных от животных и птиц и из продуктов животного происхождения в Северо-Западном регионе РФ/ Забровская А.В., Кафтырева Л.А., Селиванова Л.В., Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н. и др. //Болезни птиц в промышленном птицеводстве. Современное состояние и стратегия борьбы: мат. науч.-практ. конф., посв. памяти акад. РАСХН Р.Н. Коровина, 5-6 июня 2007 г., С-Пб.-С.207-209.

35.  Рождественская Т.Н. Профилактика и лечение сальмонеллеза/ Рождественская  Т.Н., Борисенкова А.Н., Панкратов С., Новикова О.Б.// Агрорынок., 2007. -№4.- С.16-18.

36.  Рождественская  Т.Н.  Методы специфической и неспецифической защиты от сальмонеллёза птиц/ Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б. и др.//V Международный ветеринарный конгресс по птицеводству 21-24 апреля 2008 г., М.,2008.-С.140-145.

37. Рождественская Т.Н. Изучение эффективности Лактикола в профилактике сальмонелла-энтеритидис инфекции у кур/ Рождественская Т.Н., Борисенкова А.Н., Новикова О.Б. //VI-й Международной ветеринарный конгресс по птицеводству 26-29 апреля 2010 г., М., 2010.-С. 106-109.

Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству