Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии
На правах рукописи
СТАВСКИЙ Евгений Александрович
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СИСТЕМЫ ОБЕСПЕЧЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ РАБОТ С ВИРУСАМИ I-II ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ
03.00.06 - вирусология 14.00.30 - эпидемиология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Кольцово - 2008
Работа выполнена в Федеральном Государственном Учреждении Науки Государственном Научном Центре Вирусологии и Биотехнологии УВекторФ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный консультант:
доктор медицинских наук, профессор ДРОЗДОВ Илья Геннадиевич
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор ПОКРОВСКИЙ Андрей Георгиевич доктор биологических наук, профессор ЛОКТЕВ Валерий Борисович доктор медицинских наук ТОПОРКОВ Владимир Петрович
Ведущая организация: Федеральное государственное учреждение л48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации
Защита состоится 6 февраля 2009 г. в.00 час на заседании диссертационного совета Д 208.020.01 при Федеральном Государственном Учреждении Науки Государственном Научном Центре Вирусологии и Биотехнологии УВекторФ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации (ГН - ВБ УВекторФ, п. Кольцово Новосибирской области, 630559, тел. 383-336-74-28).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГН - ВБ УВекторФ.
Автореферат разослан октября 2008 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук Л. И. Карпенко
Актуальность проблемы. Проблема биологической безопасности вызывает все большую тревогу у населения, политиков и ученых в связи с реальным ростом биологических угроз. Биологическая безопасность включает широкий круг вопросов, решение которых в современных условиях становится частью национальной безопасности как необходимого условия устойчивого развития страны.
При этом согласно национальным нормативно-методическим документам под биологической безопасностью понимают систему медико-биологических, организационных и инженерно-технических мероприятий и средств, направленных на защиту работающего персонала, населения и окружающей среды от воздействия патогенных биологических агентов /СП 1.2.731-99/.
Среди биологических факторов дестабилизации биологической безопасности Российской Федерации и других стран мира определяющее значение имеет инфекционная патология / Кондрик Е. К. и др., 2003; Онищенко Г. Г. и др., 2006. К началу XXI века около 70% всех регистрируемых болезней человека относились к инфекционным болезням и более 50 млн. человек на планете ежегодно погибали от инфекций /Воробьев А.А. 2002/. Среди инфекционной патологии особую значимость приобрели особо опасные инфекции, новые и вновь возникающие инфекции /Воробьев А.А. 2002; Львов Д. К., 2002; Раевский К.К., 2002; Ефременко В. И. и др., 2002; Кондрик Е. К. и др., 2003; Toungoussova O.
S., et. al., 2006/. В последние десятилетия XX века впервые были выявлены такие заболевания, как легионеллез, геморрагические лихорадки Эбола, Марбург, Ласса, геморрагической лихорадки с почечным синдромом, СПИД, прионовые заболевания и др. /Лебединский В. А., Гарин Н.С., 1988; Пшеничнов В.А., и др., 1992; Воробьев А.А. 2002; Раевский К. К., 2002; Ефременко В. И. и др., 2002;
Rajendra A, Wong J. B., et. al., 2007/. Произошла активизация туляремии /Ефременко В. И. и др. 2002; Мельниченко П.П. 2002; Раевский К.К, 2002; В. В. Никифоров, Г. Н. Кареткина, 2007; ЗНиСО, 2008, № 1/. С 1999 г. наблюдается устойчивый рост заболеваемости лихорадки Западного Нила /Ефременко В.И. и др. 2002; Мельниченко П.П. 2002; Раевский К.К, 2002; Галимзянов Х.М., Малеев В.В., Горелов А.В. и др., 2006/. Отмечены эпидемии атипичной пневмонии и эпизоотии гриппа птиц типа А подтипа H5N1 в Юго- восточной Азии. С 20г. в ряде регионов России регистрировалась массовая гибель птиц от вируса гриппа птиц типа А подтипа H5N1, занесенного перелетной птицей из Китая /Ефременко В. И. и др. 2002; Львов Д. К. 2002; Мельниченко П. П., 2002; Раевский К. К, 2002; Онищенко Г.Г., 2002; Онищенко Г. Г. и др., 2005/. В июле 20г. в городе Верхняя Пышма Свердловской области возникла эпидемическая вспышка легионеллеза со смертельными исходами среди заболевших людей.
В настоящее время в мире сложилась крайне не благоприятная ситуация с заболеваемостью так называемыми социально-значимыми инфекциями (гепатиты В, С, ВИЧ/ СПИД, туберкулез). По некоторым оценкам в мире уже инфицировано вирусным гепатитом В около 2,0 миллиардов человек /Онищенко Г.
Г., Дементьева Л. А., 2003; Kidd-Ljunggren K, et. al., 2004; Баяндин Р. Б. и др., 2004; Бондаренко А. Л., 2005; Rajendra A, Wong J. B., et. al., 2007/. В Российской Федерации число больных хроническим гепатитом В составляет 7 - 8 млн.
человек / Баяндин Р. Б. и др., 2004; Бондаренко А. Л., 2005; Кочнева Г. В. и др., 2005; Баяндин Р. Б. и др., 2007; ЗНиСО, № 6, 2007/. К апрелю 1993 г. 1/3 населения планеты уже была инфицирована туберкулезом /Волкова К. И. и др., 2001; Петрухина М. И. и др., 2003; Кондратенко Т. А. и др., 2007/ при этом глобальное ухудшение эпидемической ситуации по туберкулезу сопровождается широким распространением лекарственно-устойчивых микобактерий туберкулеза / Волкова К. И. и др., 2001; Surikova O. V. et. al., 2005; Surikova O. V. et. al., 2005; Drobniewski F., et. al., 2005; Mokrousov I., et. al., 2005;Сивков, А. Ю и др., 2006; Toungoussova O. S., et. al., 2006; Воронкова, О. В. и др, 2007/. По экспертным оценкам Объединенной Программы ООН по ВИЧ/СПИД и ВОЗ в мире в настоящее время насчитывается более 40 миллионов ВИЧ - инфицированных, из них только за последние 2 года заразилось ВИЧ 11,5 млн. человек, что составляет почти 30% от всех случаев, зарегистрированных с начала эпидемии.
Более 22 млн. человек уже умерли от ВИЧ/ СПИДа. Россия с 2002 года находится в стадии генерализованной эпидемии ВИЧЦинфекции /Волкова К. И. и др., 2001; ЗНиСО, № 7, 2007/.
В условиях возросших миграционных и туристических потоков в мире, существуют реальные угрозы трансграничного переноса между странами различных вышеуказанных видов возбудителей инфекций, а также ранее не известных, лекарственно-устойчивых или с измененными патогенными свойствами. Молекулярно-биологические работы по выделению и изучению РНК и ДНК патогенных возбудителей, получению ГММ и их применению также требуют решения вопросов обеспечения биологической безопасности /Кондрик Е. К. и др., 2003/. При этом актуальной проблемой является оценка биологических рисков интродукции ГММ для закрытых и открытых систем /Сорокулова И. Б.
и др., 1997; Белявская В. А. и др., 2000; 2001/, в том числе, по оценке отдаленных последствий интродукции ГММ в открытые системы /Ставский Е. А. и др., 2004; 2006; Stavskiy E. A. et al., 2006/.
Кроме этого человечество относительно недавно столкнулось с новой угрозой - биотеррористическими атаками / J. B. Tucker, 1999; Свальновы В. и В.
2001; Ефременко В.И. и др., 2002; Онищенко Г Г., 2002; Онищенко Г.Г. и др., 2003; Кондрик Е. К. и др., 2003/. Биотерроризм может вызвать значительные людские, политические, а также огромные экономические потери /Kaufmann A.
F., et. al., 1997; Воробьев А. А. и др., 1997; Henderson D. A. et. al., 1999; Онищенко Г. Г. и др., 2003; Кондрик Е. К. и др., 2003; Miller Ju., 2004/. В связи с этим рядом исследователей были предприняты шаги по оценке вероятности использования некоторых возбудителей инфекционных болезней в качестве бактериологического оружия /Воробьев А. А. и др., 1997; Atlas R. M., 1998; Воробьев А. А., 2001; Покровский В. И., 2002; Онищенко Г. Г., 2002; Онищенко Г.
Г. и др., 2003/. Известны также попытки моделирования различных сценариев актов биотерроризма для прогнозирования и оценки масштабов их последствий в интересах разработки адекватных мер предупреждения или ликвидации их последствий / Г. Н. Хлябич, 1979; O'Toole T., 1999; OТToole T. et al., 2002/. В интересах противодействия почтовому биотерроризму рядом исследователей оценивалась возможность использования пучка ускоренных электронов для обеззараживания образцов, зараженных бактериями, /Ауслендер В. Л. и др., 2002/. В отношении образцов, зараженных вирусами, в известной литературе нет сведений.
Вышеизложенные факты обусловили признание проблемы обеспечения биологической безопасности, в целом, в качестве важнейшего направления укрепления национальной безопасности Российской Федерации. Проведение активных действий по изучению возбудителей инфекционных заболеваний в интересах развития медико-биологических, организационных, инженерно-технических мероприятий и средств, направленных на защиту работающего персонала, населения и окружающей среды от воздействия патогенных биологических агентов / Wedum A.G., 1975; Вотяков В.И. и др., 1984; Whitehead J. E. M., 1985;
Дроздов С. Г. и др., 1987; Richmond J.Y. et al., 1994/, требует разработки и постоянного совершенствования нормативных документов, рабочей инструктивно-методической документации, а также системы обучения персонала. К 90-м годам XX века, действующие в Российской Федерации инструктивно-методические документы, к сожалению, устарели /Бургасов П. Н., 1972; 1973; 1974;
1975; 1976; Вотяков В. И. и др., 1984; 1987/, а для персонала вирусологических лабораторий до настоящего времени не разработаны соответствующие учебные программы.
В учреждениях, работающих с патогенными микроорганизмами, для высокоэффективной очистки воздуха в вентиляционных и технологических системах, являющихся одними из основных инженерно-технических систем биобезопасности, применяют различные типы фильтров тонкой очистки воздуха /Уайт П., Смит С., 1967; Dorman R. G., 1967; 1968; Петрянов И. В. и др., 1968;
Гапонов К. П., 1981/. Контроль задерживающей способности этих фильтров осуществляют с помощью различных методов и тест аэрозолей в стационарных и мобильных установках /Уайт П., Смит С., 1967; Dorman R. G., 1967; 1968;
Bоуnе L. et al., 1971; Дроздов С. Г. и др., 1987/. Однако в известной нам литературе отсутствуют данные об адекватности получаемых результатов аттестации фильтров тонкой очистки воздуха с помощью российских методов и тест аэрозолей показателям, получаемым с помощью международных методов и тест аэрозолей.
Имеющиеся в доступной литературе данные об устройстве, инженернотехнических системах биобезопасности, о методах организации и проведения работ с патогенами, средствах индивидуальной защиты персонала в микробиологических лабораториях устарели / Вотяков В. И. и др., 1984; 1987; Дроздов С. Г. и др., 1987; Richmond J.Y. et al., 1994/. Материалы о современном состоянии указанных вопросов в новейших зарубежных лабораториях с высшим уровнем биологической безопасности, а также данные о тенденциях в области обеспечения биологической безопасности в этих лабораториях мало доступны, носят разрозненный характер и мало информативны. Однако они необходимы для организации и проведения работ с патогенами в российских лабораториях согласно современным требованиям. В доступной литературе отсутствуют сведе ния о защитной эффективности нетканых материалов /Азейштейн Э.М., 2005/ и самой защитной спецодежды медицинского назначения разового использования, изготовленной на их основе.
Таким образом, высокий общественный и индивидуальный уровень опасности вирусов I-II групп патогенности и вызываемых ими инфекций, способных к эпидемическому и пандемическому распространению, риск высвобождения из лабораторий искорененных, искореняемых или редких особо опасных инфекций (вирусы оспы, полиомиелита, Марбург, Эбола, бактерии чумы и т.п.), интенсификация и рост объемов трансграничных людских и материальных потоков, недостаточный уровень разработки или отсутствие нормативной и инструктивно-методической документации, регламентирующей работы с вирусами I-II групп патогенности, необходимость гармонизации и унификации национальных руководств по биобезопасности с международными, необходимость совершенствования средств защиты персонала и технического устройства российских медико-биологических лабораторий до современного уровня зарубежных, несовершенство программ обучения персонала, работающего с особо опасными вирусами, угрозы биотерроризма с применением указанных вирусов явились актуальным основанием для проведения данной исследовательской работы.
Целью настоящей работы явилось оценка современного состояния биологической безопасности в микробиологических лабораториях и совершенствование национальной системы обеспечения безопасности работ с вирусами I-II групп патогенности.
В связи с этим задачами исследований являлись:
1. Сравнительный анализ современных тенденций в развитии теории и практики совершенствования систем обеспечения биологической безопасности при работах с вирусами I-II групп патогенности на примере микробиологических лабораторий с высшим уровнем биобезопасности Швеции, США, Франции, Швейцарии и России.
2. Разработка нормативно-методических документов федерального уровня, регламентирующих требования биологической безопасности при работах с вирусами I-II групп патогенности.
3. Разработка инструктивно-методической документации внутри объектового уровня, детально регламентирующей обеспечение требований биобезопасности при работах с вирусами I-II групп патогенности.
4. Разработка методов безопасного проведения работ с вирусами I-II групп патогенности, средств защиты и контроля систем обеспечения биобезопасности этих работ.
6. Разработка мер предупреждения и защиты персонала крупного национального вирусологического и биотехнологического опасного биологического объекта (ФГУН ГН - ВБ УВекторФ), населения прилегающей к нему территории (р. п.
Кольцово, г. Новосибирска) от природных, техногенных угроз биологического характера и актов биотерроризма:
- организация и проведение комплекса экстренных карантинных и обсервационных мероприятий в ГН - ВБ УВекторФ при случае подозрительном на завозную легочную чуму;
- анализ аварий и аварийных ситуаций при работах вирусами I-II групп патогенности;
- разработка комплекса противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий по предупреждению и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций и аварий при выполнении работ с возбудителями I-II групп патогенности, санитарной охране территории, прилегающей к ГН - ВБ УВекторФ от завоза, возникновения и распространения карантинных инфекций, а также последствий актов биотерроризма;
- экспериментальная оценка обеззараживания ускоренными электронами образцов и предметов внешней среды, контаминированных или потенциально контаминированных вирусами.
7. Оценка перспектив применения математического моделирования некоторых сценариев возможных биологических терактов в интересах прогнозирования, разработки мер противодействия и ликвидации их последствий.
8. Разработка программ обучения персонала, привлекаемого к работам с вирусами I-II групп патогенности.
Научная новизна, полученные результаты.
1. Проведено сравнительное изучение Российских Санитарных Правил с Руководствами по биобезопасности США и ВОЗ, регламентирующими работу с патогенами в медико-биологических лабораториях. Проведен анализ практики применения основных положений указанных руководств в современных и новейших лабораториях с высшим уровнем биобезопасности США, Швеции, Франции, Швейцарии и России. Создана информационная база сравнения национальных и международных руководств по биобезопасности, а также устройства, оснащения, организации и проведения работ с патогенами в отечественных и зарубежных лабораториях. На ее основе выявлено более 20 возможных направлений гармонизации и унификации национальных и международных правил по биобезопасности, а также определены тенденции совершенствования устройства лабораторий и биологической безопасности в них.
2. Получены экспериментальные данные, позволившие сформулировать правила, регламентирующие работу с вирусами I-II групп патогенности:
- впервые показана адекватность применения аэрозолей ДОФ и турбинного масла для оценки эффективности фильтров тонкой очистки воздуха с помощью разработанной мобильной установки;
- установлено негативное воздействие на деятельность сердечно-сосудистой системы, органов дыхания и температурный статус у персонала, работающего в ИСИЗ, что привело к необходимости нормирования продолжительности работы в них, а также совершенствованию системы подбора кадров и оценки их пригодности к работам в ИСИЗ;
- продемонстрирована обеззараживающая активность дезинфицирующих и лизирующих растворов, использующихся для получения препаратов особо опасных вирусов с целью их выноса из УзаразнойФ зоны.
- определена динамика инактивации вируса натуральной оспы растворами перекиси водорода и едкого натра;
- определен уровень обсеменённости крови, слюны и экскретов экспериментально инфицированных филовирусами животных. Установлено, что наибольший титр вируса Марбург наблюдался в крови (7,0-9,5 lg ЛД50). В слюне, моче и кале концентрация вируса была существенно ниже - на уровне 2,3 - 3,5 lg ЛД50, при этом титр вируса в моче и кале был одинаков и достоверно превышал содержание вируса в слюне. Показано, что наибольшую угрозу заражения для персонала, работающего с филовирусами, представляет кровь инфицированных ими животных.
3. Разработан комплект инструктивно-методических документов, регламентирующих безопасное проведение работ с вирусами I-II групп патогенности в крупном национальном вирусологическом и биотехнологическом опасном биологическом объекте (ГН - ВБ УВекторФ), а также усовершенствованы внутри объектовые системы контроля обеспечения биобезопасности указанных работ:
- система контроля над организацией и проведением работ с вирусами I-II групп патогенности;
- система контроля качества текущих и заключительных дезинфекционных мероприятий в УзаразнойФ зоне;
- система контроля соблюдения требований биобезопасности при получении различных препаратов вирусов ООИ и оценки остаточной их инфекционности при выносе из УзаразнойФ зоны;
- усовершенствована система контроля и оценки эффективности функционирования инженерно-технических систем биобезопасности;
- система организации и контроля эксплуатации ИСИЗ персонала, работающего с высоко патогенными вирусами;
- система предупреждения и ликвидации последствий аварий и аварийных ситуаций.
4. Экспериментально в статических и динамических условиях, впервые оценена проницаемость нетканых материалов Спанбонда, СМС, Сонтары, типа УTyvekФ с использованием физических и биологических тест аэрозолей. Показано, что повышение плотности и ламинирование материалов повышает их защитные барьерные свойства. Установлено, что наиболее высокими защитными свойствами обладают нетканые материалы СМС, Тайвек, Сонтара и ламинированные ткани Спанбонд. Указанные ткани по своим барьерным защитным свойствам превосходят ткани, используемые для изготовления защитной медицинской одежды многоразового применения и перспективны для конструирования и изготовления одноразовых средств индивидуальной защиты (спецодежды) и средств индивидуальной защиты органов дыхания (масок).
5. Показано, что наиболее подвержены риску внутри лабораторного заражения сотрудники, работающие с нативным материалом особо опасных вирусов или инфицированными ими животными в виварных помещениях. Реальность существования угроз для персонала от выявленных рисков подтверждена двумя случаями внутри лабораторного заражения возбудителями геморрагических лихорадок Марбург и Эбола сотрудников ГН - ВБ УВекторФ.
6. На основе данных экспериментального моделирования акта почтового биотерроризма предложена математическая модель распространения биологического аэрозоля в закрытом помещении, оснащенном приточно-вытяжной вентиляцией.
7. Показана впервые в эксперименте возможность использования пучка ускоренных электронов для обеззараживания образцов, зараженных вирусами, в интересах противодействия почтовому биотерроризму. Определены дозы и динамика их инактивации, определен диапазон рабочих доз облучения, не приводящих к нарушению функциональных или потребительских свойств облучаемых предметов и образцов.
8. Проведено математическое моделирование возможных сценариев актов биотерроризма на территории опасного биологического объекта и крупного регионального центра на примере научной площадки крупного национального вирусологического и биотехнологического научного учреждения (ФГУН ГН - ВБ УВекторФ) и города Новосибирска при террористическом применении вируса натуральной оспы. Определены количественные характеристики зон поражения и динамика эпидемического распространения натуральной оспы за пределы очага заражения.
Практическая значимость работы.
1. С использованием полученных в ходе настоящего исследования теоретических и практических результатов разработаны нормативно-методические документы федерального уровня, соавтором которых соискатель является:
1. 1. Онищенко Г. Г., Федоров Ю. М., Безсмертный В. Е. и др. Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности). СП 1.3.128503. - М.: Минздрав России, 2003. - 152 с.
1.2. Онищенко Г. Г., Федоров Ю. М., Ставский Е. А. и др. Организация и проведение противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий при натуральной оспе: Методические указания. МУ 3.1.3.5-07. - М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2007.- 63 с.
1.3. Маренникова С. С., Рябчикова Е. И., Зайцев Б. Н. и др. Лабораторная диагностика натуральной оспы. Методические указания (проект) - М.: ФГУ здравоохранения Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 201.4. Онищенко Г.Г., Федоров Ю.М., Шевырева М.П. и др. Организация и проведение работ по исследованию методом ПЦР материала, инфицированного вирусами I - II групп патогенности. Методические указания (проект) - М.: ФГУ здравоохранения Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2008 Ч 36 с.
1.5. Шипулин Г. А., Подколзин А. Т., Яцышина С. Б. и др. Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоко-вирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА), у людей: Методические указания. МУК. 4.2.2136-06. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2006. - 23 c.
1.6. Биологическая безопасность. Термины и определения. // Под ред. Г.Г. Онищенко, В. В. Кутырева. - Саратов: Приволжское книжное издательство, 2006. 112 с.
2. Разработан для крупного национального вирусологического и биотехнологического опасного биологического объекта - ГН - ВБ УВекторФ комплект инструктивно-методических документов (более 70 документов), регламентирующих различные аспекты биобезопасности при работах с вирусами I-II групп патогенности.
3. Разработан комплекс противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий предупреждения вирусных заболеваний персонала и населения при работах с возбудителями особо опасных вирусных инфекций (натуральная оспа, Эбола, Марбург и др.). Разработаны внутри объектовые системы контроля обеспечения биобезопасности работ с вирусами I - II групп патогенности:
- система контроля над организацией и проведением указанных работ;
- контроля и оценки эффективности функционирования инженерно-технических систем биобезопасности;
- контроля соблюдения требований биобезопасности при получении различных вирусных препаратов возбудителей ООИ и оценки остаточной их инфекционности при выносе из УзаразнойФ зоны;
- контроля качества проведения дезинфекционных мероприятий в УзаразнойФ зоне;
- система организации и контроля эксплуатации СИЗ, ИСИЗ персонала, работающего с высоко патогенными вирусами.
4. Изучены физиологические показатели деятельности сердечно-сосудистой системы, органов дыхания и температурный статус у персонала, работающего в ИСИЗ, в рамках нормирования продолжительности работы в них, а также совершенствования системы подбора кадров и оценки их пригодности к работам в ИСИЗ.
5. Отработан и внедрен в практику применения режим стерилизующего облучения пучком ускоренных электронов на установке ИЛУ-6 одноразовой медицинской одежды производства ЗАО УЗдравмедтех - НовосибирскФ (средняя поглощенная доза составила 18 3,0 кГр при 95% вероятности).
6. Разработан костюм УВекторФ для защиты от патогенных биологических агентов на основе нетканых материалов и получен патент № 54519 РФ на полезную модель. Составлены, производятся ЗАО УЗдравмедтехФ и внедрены в практику применения различные комплекты защитной медицинской одежды и медицинских масок на основе нетканых материалов.
7. Разработан одноразовый стерильный комплект врача-инфекциониста на основе нетканых материалов производства ЗАО УЗдравмедтехФ, который приказом Департамента здравоохранения города Москвы от 05.11.04 г. № 488 УОб усилении мероприятий по санитарной охране территории г. Москвы от заноса и распространения инфекционных заболеваний, представляющих опасность для населения города МосквыФ включен в состав комплектов экстренного реагирования лечебно-профилактических учреждений.
8. Полученные теоретические и экспериментальные данные реализованы в разработанных учебных программах, утвержденных руководителем Роспотребнадзора, и сертифицированном обучении персонала с различным уровнем образования на базе функционирующего в ГН - ВБ УВекторФ специализированного отдела научно-методической подготовки персонала по работе с возбудителями ООИ в соответствии с Федеральной лицензией № 166191 от 30.03.06 г.
Положения, выносимые на защиту:
1. С помощью созданной информационной базы сравнения национальных и международных руководств по биобезопасности, а также устройства, оснащения, организации и проведения работ с патогенами в отечественных и зарубежных лабораториях установлено более 20 возможных направлений гармонизации и унификации национальных и международных правил по биобезопасности, а также основные тенденции совершенствования устройства лабораторий и биологической безопасности в них.
2. Разработанные с учетом полученных теоретических и экспериментальных данных нормативно-методические документы федерального уровня адаптированы к современным требованиям биобезопасности при работах с ПБА I-II групп патогенности, а разработанная инструктивно-методическая документация внутри объектового уровня, детально регламентирует безопасное проведение работ с вирусами I-II групп патогенности и обеспечение необходимых требований биобезопасности.
3. Усовершенствованная система обеспечения безопасности работ с вирусами III групп патогенности в крупном национальном вирусологическом и биотехнологическом опасном биологическом объекте:
3.1. Обеспечивает защиту исследователя и окружающей среды от заражения инфекционным материалом или позволяет максимально уменьшить, с учетом возможного негативного действия человеческого фактора, риски возникновения аварийных ситуаций и аварий;
3.2. Обеспечивает санитарную охрану территории опасного биологического объекта (ФГУН ГН - ВБ УВекторФ), населения и прилегающих к объекту территорий (наукограда Кольцово, города Новосибирска) от последствий чрезвычайных ситуаций при выполнении работ с возбудителями ООИ, завоза карантинных инфекций, а также актов биотерроризма.
4. УЧеловеческийФ фактор даже в условиях бесперебойного и эффективного функционирования полного комплекса инженерно-технических систем биобезопасности, использования кондиционных СИЗ, ИСИЗ, имеет определяющее значение для внутри лабораторного заражения персонала при работах с особо опасными вирусами. Наибольшему риску внутри лабораторного заражения подвержены сотрудники, работающие с нативным материалом особо опасных вирусов и инфицированными ими животными в виварных помещениях.
5. Предложенные методы математического моделирования возможных сценариев развития почтового биотерроризма с применением спор сибирской язвы в замкнутом помещении, актов биотерроризма на территории крупного национального вирусологического и биотехнологического опасного биологического объекта (ГН - ВБ УВекторФ), территории муниципального образования (п. Кольцово) и крупнейшего регионального центра (г. Новосибирска) с применением вируса натуральной оспы обеспечивают решение задач прогнозирования и оценки масштабов распространения биологических аэрозолей, заражения объектов, территорий и населения, находящегося на них, планирования и принятия адекватных управленческих решений по ликвидации медико-санитарных последствий биотеракта на местном и региональном уровнях.
6. Нетканые материалы Спанбонд, СМС, Сонтара и типа УТайвекФ обладают высокими барьерными защитными свойствами и перспективны для разработки и производства разовой защитной медицинской спецодежды и средств защиты органов дыхания от патогенных биологических агентов.
Апробация работы.
Основные положения работы доложены на:
- Международной научной конференции УПроблемы биологической и экологической безопасности Ф, Оболенск, 22 - 24 мая 2000 г., - Международной научной конференции УЗащита от микробных агентов. Инаугурация Шведской лаборатории максимальной биозащиты У, Стокгольм, 8 - октября 2000 г., - IХ Международной конференции и дискуссионном клубе ФНовые информационные технологии в медицине и экологииФ, Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 01 - 10 июня 2001 г., - 44 Цой Конференции по биобезопасности. 17-ой ежегодной конференции Американской ассоциации биобезопасности, Новый Орлеан, 21-24 октября 2001 г., - 45-ой Конференции по биобезопасности. 18-ой ежегодной конференции Американской ассоциации биобезопасности, Сан-Франциско, 20-23 октября 2002 г., - Научной конференции УПроблема инфекции в клинической медицинеФ и VIII съезде Итало - Российского общества по инфекционным болезням 5-6 декабря 2002 г., - Межведомственной Комиссии по контролю над генно-инженерной деятельностью (МВКГИД) в Министерстве науки и технологий РФ, Москва, 19 декабря 2003 г., - Ежегодной Конференции-семинаре УБиобезопасность, физзащитаФ Агентства по Снижению Угрозы Министерства Обороны США (DTRA), Будапешт, Венгрия, 24 марта - 3 апреля 2004 г., - Научно-практической конференции УДальнейшее совершенствование природной, техногенной и пожарной безопасности населения и территорий - устойчивое развитие Сибирского регионаФ, 15 сентября 2004 г., Новосибирск, - Межрегиональном совещании ФУ УМедбиоэкстремФ по вопросам профилактики особо опасных инфекций и дезинфектологии, 11-15 октября 2004 г., - Конференции, посвященной 70 - летию Противочумного центра УПротивочумные учреждения России и их роль в обеспечении эпидемиологического благополучия населения страныФ, Москва, 2004, - VI-ом Международном симпозиуме по методам обнаружения и противодействия химической и биологической угрозе (CBMTS), Шпиц, Швейцария, 30 апреля - 5 мая 2006, - II-ом Международном Семинаре-Совещании специалистов санитарно-эпидемиологических служб стран СНГ по актуальным вопросам мониторинга за гриппом, в том числе гриппом птиц, Новосибирск, 28-29 мая 2007, - Российском медицинском форуме-2007. Молекулярная медицина и биобезопасность. Семинаре - тренинге УАктуальные вопросы защиты населения от биологических угрозФ, 17-19.10.07, - Научно-практической конференции СПАССИБ СИББЕЗОПАСНОСТЬ - 2008, 16-18 сентября 2008 г., Новосибирск.
Результаты диссертационной работы опубликованы в 27 научных работах (включая три монографии), девять из которых входят в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации на соискание ученой степени доктора наук.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 535 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов, списка используемой литературы (том 1 из 495 стр.), приложения из 40 стр. (том 2). Иллюстрирована 78 таблицами и 49 рисунками. Библиография представлена 388 источниками отечественных и зарубежных авторов.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Глава 1. Материалы и методы исследования.
В работе использованы следующие вирусы: вирус натуральной оспы штаммы Индия -3а, Батлер, Нгами, вирус Эбола субтип Заир штамм Mayinga, вирус Марбург, штамм Popp, вирус гриппа А серотипа Н5N1 штамма A/Turkey/ Suzdalka/Nov-1/2005, депонированные в музейной коллекции ГН - ВБ УВекторФ. Вирус осповакцины штамм Л ЦИВП коммерческой оспенной живой сухой вакцины производства ФГУП УВирионФ. Кроме вирусов использовали также ряд бактерий: Serracia marcescens и Bacillus subtilis var. niger, депонированные в музейной коллекции ГН - ВБ УВекторФ. Bacillus thuringiensis (var. dendrolimus), который является действующим началом коммерческих порошковых средств защиты растений - дендробациллина, битоксибациллина лепидоцида - сухих каолин содержащих бактериальных инсектицидных препаратов, выпускаемых российской промышленностью.
Для размножения вирусов использовали перевиваемые культуры клеток почки зеленой мартышки Vero, культуры клеток Л-68 (диплоидные клетки легкого эм бриона человека) и др., раствор Хэнкса, среду Игла МЕМ, сыворотку крови крупного рогатого скота, эмбриональную сыворотку плодов коровы (все производства ГН - ВБ "Вектор"). Для микробиологических исследований применяли сухие коммерческие бактериальные питательные среды.
При проведении экспериментов использовали следующих животных:
1-2-дневные нелинейные белые мыши; нелинейные белые мыши массой 17-г; нелинейные морские свинки массой 180-200 и 250-300 г, кролики породы "Шиншилла" массой (2,5-3,0) кг. Животных получали из вивария ГН - ВБ "Вектор" и содержали на стандартном рационе. Все болезненные процедуры проводили с применением обезболивающих препаратов. В опытах также использовали 9 - 12 - ти дневные РКЭ для вирусологических исследований, 6 - 7-недельных цыплят породы Род-Айланд, кросс Изобраун, полученных из ГППЗ Новосибирский.
Полученные в экспериментах данные обрабатывали с применением различных методов статистической обработки и математических моделей.
Глава 2. Современное состояние и тенденции совершенствования биологической безопасности при работах с микроорганизмами I-IV групп патогенности.
Провели сравнительный анализ основных Российских Санитарных Правил и руководств США и ВОЗ по биобезопасности:
1. СП 1.2.1318-03. Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами.
2. СП 1.3.1285-03. Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности).
3. СП 1.2.731-99. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами.
4. СП 1.2.036-95. Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности.
5. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 4rd Edition, CDC - NIH. - Washington, 1999.
6. Laboratory Biosafety Manual, 3rd Edition, World Health Organization, Geneva, 2004.
При этом был выявлен ряд различий между ними по некоторым параметрам (табл. 1), а также проведена по основным критериям устройства сравнительная дифференциация (табл. 2) лабораторий разного уровня биологической безопасности. Установленные в результате анализа различия (табл. 1) представляют собой основные направления унификации и гармонизации национальных и международных правил по биобезопасности.
Анализ устройства современных зарубежных и отечественных лабораторий с высшим уровнем биозащиты (BSL-3-BSL-4), в частности, лабораторий Таблица Основные различия, выявленные между международными и национальными руководствами по биобезопасности №№/ Критерии сравнения Руководства CDC-NIH, ВОЗ Российские Санитарные п.п. Правила 1. Техническое оформление документов Единые комплексные Руко- Вопросы биобезопасности водства изложены в 4-х отдельных Санитарных Правилах 2. Статус документов Рекомендации, компактные Нормативные правовые аки удобные практические ты обязательные для гражсправочники дан, индивидуальных предпринимателей и юридических лиц, за нарушение которых наступает дисциплинарная, административная и уголовная ответственность.
3. Тематическое содержание, состав и объем докумен- Выявлена тенденция к увеличению числа освещаемых в тов документах аспектов биобезопасности. Существуют различия по перечню изложенных в документах аспектов биобезопасности, детализации изложения и объёму освещения.
4. Разрешительная система на работы с микроорга- Отсутствует информация о Подробно изложена систенизмами I-IV групп патогенности разрешительной системе ма получения заинтересованными учреждениями санитарно-эпидемиологических заключений на право работы с ПБА I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами, а также соответствующие требования и комплект документации, необходимые для получения заключения 5. Классификация патогенных микроорганизмов Дифференциация и нумерация групп микроорганизмов в принятой в России классификации, отличаются от классификаций ВОЗ и США обратным порядком. Существуют также различия между российской и американской класссификациями по составам групп, включению микроорганизмов одних видов в различные группы.
6. Зонирование лабораторных помещений и уровни Уровни биобезопасности УЗаразнаяФ и УчистаяФ зоны безопасности лабораторий при работе с патоген- BSL-1-BSL-ными микроорганизмами 7. Работа с дикими животными и эктопаразитами В Руководствах ВОЗ и США Изложены принципы безоэтих материалов нет пасного отлова, содержания, доставки в исследовательское учреждение диких животных и эктопаразитов и правила работы с ними 8. Уровни биобезопасности для работы с лаборатор- Уровни биобезопасности Нет дифференциации ными животными ABSL-1-ABSL- 9. Условия допуска к работе с биологическим мате- Не содержат требований по Изложена жесткая система риалом и контроль допуска персонала возрастному, образователь- допуска персонала к работе ному цензам с биологическим материалом и контроль допуска персонала. Введены требования по возрастному, образовательному и квалификационному цензу к лицам, принимаемым и допускаемым к работам с ПБА 10. Медицинское наблюдение, допуск к работе, меди- Более мягкие требования к Соответствие строгим трецинское обеспечение состоянию здоровья. Нет бованиям медицинского осжесткого требования по видетельствования. Устаежедневному медицинскому новлены требования по осмотру при работе с микро- ежедневному медицинскоорганизмами BSL-3-BSL-4. му осмотру при работе с Нет требований по обсер- ПБА I-II, обсервации, наливации. Нет требований по чию в учреждении специналичию в учреждении спе- ального инфекционного циального инфекционного изолятора изолятора.
11. Ответственность персонала при проведении работ с Прописана система распре- В отличие от руководств биологическим материалом деления ответственности США и ВОЗ ничего не говорится о мере ответственности персонала ниже уровня заведующего лабораторией 12. Транспортировка и передача биологических агентов Транспортировка и передача Четко изложены вопросы биологических агентов рег- упаковки ПБА, их трансламентируется другими портировки и передачи стандартами биобезопасности. Представлены только требования к упаковке материалов.
13. Рекомбинантные молекулы ДНК и генетические ма- Имеются небольшие разде- Разделов по этим видам ранипуляции лы по этим видам работ. бот нет.
14. Культуры клеток животных и ткани В российских СП и руководстве ВОЗ нет информации по этому вопросу. В Руководстве США существует небольшой раздел.
15. Биологические токсины В СП представлены в отдельном подразделе дополнительные требования к работам с ботулиническим токсином, биологическими ядами. В руководстве ВОЗ требования к работам с биологическими ядами отсутствуют. В руководстве США в двух приложениях представлены принципы организации и проведения работ с биологическими токсинами.
16. Действия и мероприятия в чрезвычайных ситуациях В отличие от Руководства США, Российские СП и Руководство ВОЗ содержат более подробные изложения Действий и практических рекомендаций при ликвидации аварий во время работы с биологическим материалом. В руководстве ВОЗ подробно рассмотрены аварии при перевозке, изложен алгоритм действий при различных авариях. В Руководстве США отдельного раздела, посвященного мероприятиям при ликвидации аварий нет. Для каждого уровня безопасности заложены принципы устранения последствий аварий.
17. Первичные и вторичные защитные барьеры Изложены понятия первич- Нет подобной информации ных и вторичных защитных барьеров, их описание и назначение 18. Защитное оборудование для снижения или исклю- Приводится более полный Имеются общие указания чения рисков, боксы безопасности список защитного оборудо- на применяемое защитное вания, предназначенного для оборудование, без подробуменьшения опасности, ного описания и процедур описаны принципы его Дей- испытаний.
ствия. Подробно рассмотрены боксы биологической безопасности разных класссов с иллюстрациями, правилами пользования и тестирования.
19. Риски, оценка риска Изложены понятия биорис- Нет подобной информации ков, приведены основные виды рисков, дана система оценки рисков 20. Организация и проведение учебы Представлены программы Нет подобной информации обучения, занятий 21. Комиссия по контролю за соблюдением требований Рекомендательный орган Является исполнительно - биологической безопасности (Российские СП) и консультативным органом Комитет (совет) по биобезопасности (Руководства и обладает более широким США и ВОЗ) кругом решаемых ею воп росов и ответственности 22. Физическая безопасность Оснащение лабораторий Нет требований системами контроля допус- ка персонала и наблюдения за проводимыми работами 23. Химическая, противопожарная, электрическая безо- Изложены в специальных Нет подобной информации пасность разделах принципы организации химической, противопожарной и электрической безопасности 24. Средства и методы дезинфекции, используемые при В российских СП и зарубежных руководствах указанные работе с ПБА. Режимы обеззараживания различных вопросы изложены в виде разделов или специальных приобъектов, зараженных ПБА. ложений. При этом в российских СП материал изложен более полно и подробно, однако в СП нет информации по обеззараживанию прионов, необычных агентов.
Таблица Сравнительный анализ устройства лабораторий различного уровня биобезопасности Устройство и Уровень биологической безопасности согласно УЗаразнаяФ зона согласно СП Стационарная оснащенность CDC-NIH, ВОЗ для работы с максимально лаборатории BSL-1 BSL-2 BSL-3 BSL-4 ПБА III-IV ПБА II груп- изолировангрупп пы ная лаборатория для работы с ПБА I группы Изоляция (рас- Нет Нет Да Да В отдельно В отдельно В отдельно положение) ла- стоящем зда- стоящем зда- стоящем зда боратории нии или изо- нии или изо- нии лированной лированной части здания части здания Допуск в лабора- Не огра- Не огра- Ограничен- Ограничен- Ограничен- Ограничен- Ограниченторию ничен ничен ный ный ный ный ный Герметичность Нет Нет Да Да. Стены ла- Нет. Окна и Да Да. Стены лаОСК лаборато- боратории не двери Узараз- боратории не рии примыкают к нойФ зоны примыкают к наружным должны быть наружным ОСК здания герметичны- ОСК здания (Уядро в яд- ми. (Уядро в ядреФ) реФ) Приточно- Нет Жела- Да Да Да Да Да вытяжные вен- тельно тсистемы HEPA-фильтры Нет Нет Один каскад Один каскад Вытяжная Один каскад Один каскад или их аналоги на входе- на входе, два система с од- на входе-вы- на входе, два на приточно-вы- выходе воз- на выходе воз- ним каскадом ходе воздуха. на выходе тяжных вентси- духа. духа. ФТО. Или без, воздуха.
стемах но при исользовании БББ II класса.
Предбоксник Нет Нет Да Да Да Да Да (вход с двумя дверями) Санпропускники Нет Нет Да Да Да. Для вновь Да Да с тамбур-шлюза- строящихся.
ми на входе-вы ходе Дездуш на вы- Нет Нет Нет Да Нет Нет Да ходе Тамбур с душем Нет Нет Да/Нет1 Нет Да. Для вновь Нет Нет строящихся.
Санитарно- Нет Нет Да/Нет1 Да Да. Для вновь Да Да гигиенический строящихся.
душ, помывка Сбор и обработка Нет Нет Да/Нет1 Да Химическое Да Да сточных вод обеззараживание жидких отходов Сбор и обработка Нет Нет Нет Да Нет Да Да душевых вод Автоклав на мес- Нет Жела- Да Да Да Да Нет те работы тельно Автоклав в лабо- Нет Нет Желательно Да Да Да Нет ратории Двухдверный Нет Нет Желательно Да Нет Да Да проходной автоклав с электроблокировкой дверей Камера фумига- Нет Нет Да Да Нет Да Да ции (пароформалиновая камера) Передаточные Нет Нет Да Да Нет Да Да шлюзы (химич еские, камера проныривания) Боксы биологи- Нет. Ра- Жела- Да. (БББ Да. БББ III Желательно. Да Да. БББ III ческой безопас- бота на тельно. и/или иная класса (боксо- (Работа на от- класса (боксоности откры- (Работа первичная вая лаборато- крытых сто- вая лаборатотых на от- изоляция для рия). лах и в БББ рия).
столах. крытых всех видов БББ II класса для защиты от БББ II класса столах и работ). (костюмная потенциаль- (костюмная в БББ лаборатория). ных аэрозо- лаборатория).
для за- лей).
щиты от потенциальных аэрозолей).
Система воздухо- Нет Нет Нет Да. В случае Нет Нет Да. В случае снабжения пнев- костюмной костюмной мокостюмов лаборатории лаборатории Система приго- Нет Нет Желательно Да Нет Да Да товления и раздачи дезрастворов Дублирование Нет Нет Да Да Нет Да Да (резервирование) энергоснабжения Дизель-генератор Нет Нет Да Да Нет Да Да Резервирование, Нет Нет Да Да Нет Да Да дублирование систем, агрегатов/ оборудования Система водо- Обыч- Обыч- Оснащена Оснащена Обычная Оснащена Оснащена снабжения ная ная технически- техническими техническими техническими ми средст- средствами от средствами от средствами от вами от под- подсоса или подсоса или подсоса или соса или об- обратного то- обратного то- обратного торатно-го то- ка ка ка ка Вакуумные ли- Обыч- Обыч- Оснащены Оснащены Обычные Оснащены Оснащены нии, линии сжа- ные ные технически- техническими техническими техническими того воздуха и ми средст- средствами средствами средствами газов вами очист- очистки и очистки и очистки и ки и HEPA- HEPA- ФТО ФТО фильтрами фильтрами Тревожно-ава- Нет Нет Да Да Нет Да Да рийная сигнализация Пожарная сигна- Да Да Да Да Да Да Да лизация, средства пожаротушения Система внешне- Нет Нет Желательно Да2 Да3 Да3 Нет2,го контроля Примечание: 1 - В зависимости от используемого в лаборатории патогенного агента; 2 - Например, окна, системы телевизионного наблюдения, двусторонняя связь; 3 - окна.
Швеции (лаборатория BSL-3-BSL-4 Шведского медицинского института по контролю инфекционных заболеваний (SMI), США (лаборатория BSL-4 Центров по контролю и профилактике инфекционных заболеваний (CDC); лаборатории BSL-3 - BSL-4 Научно-исследовательского медицинского института инфекционных заболеваний Армии США (USAMRIID), Франции (лаборатория BSL-4 Европейского Исследовательского Центра Вирусологии и Иммунологии, Лион), Швейцарии (микробиологическая лаборатория BSL-3 Шпица (Spiez Laboratory), а также России на примере крупного опасного биологического объекта (лаборатория BSL-4 для проведения работ с вирусом натуральной оспы и лаборатория BSL-3 для работы с вирусами геморрагических лихорадок, комплекса клещевых энцефалитов, ВИЧ и других вирусных инфекций ФГУН ГН - ВБ УВектор У Роспотребнадзора) позволил выявить такие тенденции в создании лабораторий с максимальным уровнем защиты, как:
- минимизация лабораторных УзаразныхФ площадей;
- создание лабораторий по модульному, блочному типу;
- оснащение лабораторных модулей, блоков автономными инженерно-техническими системами биобезопасности;
- максимальное размещение оборудования инженерно-технических систем биобезопасности и коммуникаций герметичного исполнения в УчистыхФ зонах на технических этажах;
- оснащение лабораторий санпропускниками смешанного использования (мужским и женским персоналом);
- наделение одного устройства несколькими функциями (дездуш, воздушный шлюз, камера фумигации);
- широкое применение микропроцессорной и компьютерной техники в системах контроля, регистрации, управления инженерно-техническими системами биобезопасности и физической защиты;
- оснащение лабораторий современными системами автоматического обнаружения очагов возгорания и пожаротушения;
- оснащение лабораторий системами круглосуточного видеонаблюдения;
- оснащение лабораторий аварийными системами сигнализации, оповещения, а также телефонной, телексной и радиосвязью;
- применение на системах приточно-вытяжной вентиляции вентагрегатов с изменяемой производительностью;
- повышение сейсмостойкости и прочности корпусов лабораторий;
- повышение устойчивости лабораторий к террористическим проявлениям (применение бронированных или повышенной прочности стекол, развитые системы физической защиты с персонифицированным допуском в лаборатории и т.п.);
- использование оригинальных архитектурных, проектных решений и новых строительных материалов;
- применение современных инструментальных методов аттестации и контроля как инженерно-технических систем, так и отдельных их составных элементов;
- внедрение инструментальных методов аттестации и контроля средств индивидуальной защиты (СИЗ), изолирующих СИЗ (ИСИЗ).
Глава 3. Биологическая безопасность при работах с вирусами I-II групп патогенности.
Сравнительный анализ методов определения защитной эффективности фильтров тонкой очистки воздуха с использованием аэрозолей диоктилфталата и турбинного масла.
Значительный практический интерес представлял вопрос выяснения равнозначности применения российского тест аэрозоля и корректности получаемых с его использованием показателей задерживающей способности фильтров тонкой очистки воздуха (ФТО) в сравнении с тест аэрозолем, применяемым за рубежом. Для этого изучили методы оценки задерживающей способности различных типов отечественных ФТО впервые в условиях их реальной эксплуатации в ГН - ВБ УВекторФ (без демонтажа из работающих на момент испытаний вентиляционных систем) с использованием тест аэрозоля ДОФ (диоктилфталата), применяемого в США, и аэрозоля турбинного масла Т22 или Т30, используемого в Российской Федерации.
Таблица Типы и основные характеристики фильтров для высокоэффективной очистки воздуха используемые в Российской Федерации Типы фильтров для фильт- Материал Характеристика рую-щего элемента ФТО - 750 (фильтрующий ФПП - 15 - 1,5; ФПП- Перхлорвиниловое элемент тонкой очистки, 15 - 4,5 (фильтр Петря- волокно на марлевой производтельность нова перхлорвинило- основе, термостой750 м3ч-1), В-О,4 вый, диаметр волокна кость 70-70С, гидро1,5 и 4,5 мкм) фобен ФТО - 60, ФТО - 500, ФПАН - 10 - 3,0 Полиакрилнитриловое ФТО Ц1000, (фильтрующий (фильтр Петрянова ак- волокно на марлевой элемент тонкой очистки, рилнитрилвый, диаметр основе, термостойпроизводительность 60, 500 волокна кость 180С и 1000 м3ч-1) 3,0 мкм) ФТО - С - 500 К (фильтр Базальтовая бумага и Супертонкое базальтонкой очистки стерилизуе- картон товое волокно с домый) бавлением целлюлозы ЕО - 16 (противогазовая ко- Активированный уголь Ч робка) Таблица Задерживающая способность двухкаскадных венткамер систем вытяжной вентиляции с использованием аэрозолей турбинного масла и ДОФ Количество Производи- Коэффици- Коэффици- Коэффицифильтров в тельность ент прони- ент прони- ент коррелядвухкаскад- системы, цаемости цаемости ции ной вентка- м3ч-1 по туману по туману мере, турбинного ДОФ, шт. масла, (XJ95)10-3,% (XJ95)10-3,% 8 (2 x 4) 3000 0,2120,021 0,2050,0 24 (2 x12) 8300 0,1200,011 0,1250,01, 16 (2 x 8) 3000 0,1300,021 0,1330,0 16 (2 x 8) 5000 0,5730,110 0,5380,1Примечание: количество измерений, выполненных на каждой венткамере, равно пяти.
В результате выполненных исследований установили, что ММАД50 для аэрозольных частиц ДОФ составляли 0,19 - 0,36 мкм, а для турбинного масла - 0,17 - 0,34 мкм при д = 1,5 - 2,0 (геометрическое квадратичное отклонение, характеризующее полидисперсность аэрозоля). При этом в аэрозолях, образующихся при диспергировании ДОФ и турбинного масла, количество частиц вышеуказанных размеров составило (97,72,3)% и (98,61,6)%, соответственно.
Полученные данные продемонстрировали отсутствие существенных различий (с вероятностью Р<0,05) ФДС аэрозолей ДОФ и турбинного масла, полученных с помощью генератора ГАК-УМ. В дальнейшем оценили задерживающую способность различных типов отечественных фильтров, применяемых для очистки воздуха. При этом была доказана корректность и правомерность использования турбинного масла в качестве тест аэрозоля и получении при этом равнозначных с ДОФ показателей (Кп). Полученные данные послужили основанием для широкого практического применения в ГН - ВБ УВекторФ метода оценки задерживающей способности фильтров очистки воздуха с использованием в качестве тест аэрозоля турбинного масла в научных корпусах Центра, в том числе, в корпусах с высшим уровнем биозащиты.
Биологическая безопасность при проведении научно-исследовательских работ с вирусом натуральной оспы, с возбудителями геморрагических лихорадок, комплекса клещевых энцефалитов, ВИЧ и других вирусных инфекций.
Комплекс мероприятий обеспечения биологической безопасности при организации и проведении научно-исследовательских работ в ГН - ВБ УВекторФ с вирусами I - II групп патогенности, разрабатывался и совершенствовался на протяжении многих лет. В частности, для вируса натуральной оспы на базе Сотрудничающего Центра ВОЗ по диагностике ортопоксвирусных инфекций и музее штаммов и ДНК вируса оспы в корпусе 6 с уровнем биобезопасности BSL-4, и с вирусами Эбола, Марбург в корпусе 1 с уровнем биобезопасности BSL-3. В результате были отработаны вопросы по требованиям, предъявляемым к персоналу и системе его допуска к работам с ООИ; медицинскому обслуживанию, наблюдению и обсервации; вопросы безопасной организации и проведения работы, которые нашли свое отражение более чем в 70 рабочих инструкциях, регламентирующих все виды работ в Центре с микроорганизмами I IV групп патогенности. В единый реестр вошли инструкции по соблюдению требований биобезопасности при организации и проведении работ с вирусами натуральной оспы и оспы обезьян в корпусе 6, инструкции по соблюдению требований биобезопасности при организации и проведении работ с вирусами I-IV групп патогенности в корпусе 1, планы противоэпидемических мероприятий, планы ликвидации аварий на случай возникновения аварий и аварийных ситуаций и др. Отработаны методы работы с РКЭ, различными видами животных, использование автоматических пипеток, организация и проведение работ в биохимических комнатах, организация и проведение работ в виварии, содержание инфицированных животных, вскрытие лабораторных животных, взятие крови у животных, измельчения тканей, центрифугирования вирусного материала. Отработаны режимы лиофилизации вирусного материала на сушильной камерной установке ALPHA-1,5 и коллекторной установке оригинального изготовления КСУ-22. Отработаны режимы обеззараживания пневмокостюмов, предусматривающие двух кратное последовательное обеззараживание дезинфицирующими растворами. Разработаны алгоритмы действий, планы мероприятий и схемы оповещения при различных видах аварий и аварийных ситуаций, оказание медицинской помощи в УзаразнойФ зоне.
Показана роль и функции службы биобезопасности в ГН - ВБ УВекторФ, разработаны система контроля службы биобезопасности и взаимодействующих с ней смежных служб при работах с ПБА в Центре. Показан перечень и объем выполняемых отделом биобезопасности и отделом контроля инженерно-технических систем мероприятий (санитарно-эпидемиологические обследования подразделений, лабораторных и технологических помещений, контроль специфической контаминации поверхностей и окружающей территории, контроль качества проведенных текущих дезинфекционных обработок лабораторных и технологических помещений УзаразнойФ зоны научных корпусов и др., контроль качества заключительных дезнфекционных обработок УзаразнойФ зоны корпусов, дератизационные и дезинсекционные мероприятия, контроль качества приготовленных дезинфицирующих растворов в корпусах).
Определены виды, периодичность и методы контроля инженерно - технических систем обеспечения биобезопасности (системы ограждающих строительных конструкций; систем приточно-вытяжной вентиляции; специальной канализации, сбора и обработки стоков; передаточных устройств; системы воздухообеспечения шланговых средств индивидуальной защиты; системы подачи дезинфицирующих растворов; санитарных пропускников; системы очистки технологического воздуха). Кроме этого боксов биологической безопасности типа 4БП1, биокабинетов II класса безопасности фирмы УBakerФ, УLabconcoФ.
Установлено, что перед началом работ с инфекционным материалом и после окончания планово-предупредительного (летнего) ремонта (ППР) необходимо проведение обязательной ежегодной проверки (комплексной аттестации и опробования) работоспособности инженерных систем обеспечения биобезопасности с составлением Актов комплексного испытания и проверки на каждую систему. В процессе работы осуществления дополнительного контроля эффектив ности их работы со стороны отделов биобезопасности и контроля инженерных систем биобезопасности в соответствии с утвержденными Графиками проверок.
С учетом общемировых тенденций по усилению системы физической защиты и ужесточению контроля доступа в лаборатории, работающие с ООИ, лабораторный корпус 6 был оснащен контрольной круглосуточной системой телевизионного наблюдения. Указанная система дала возможность осуществлять контроль за персоналом, работающим в УзаразнойФ зоне (помещения с уровнями защиты BSL2 - BSL4) с целью контроля доступа персонала в зонированные помещения и соблюдения им требований биобезопасности. Система состоит из 62 видеокамер установленных в основных лабораторных и технологических помещениях корпуса. Видео камеры помещены в герметичные корпуса, выдерживающие обработку дезинфицирующими средствами. В составе системы видеоконтроля имеются два локальных (корпусных) пульта видеооператора и один центральный видеопульт, расположенный в строго охраняемом специальном помещении в корпусе 1. Связь между корпусами осуществляется по оптоволоконному кабелю.
С целью изучения обеззараживающего действия на вирус натуральной оспы растворов перекиси водорода и едкого натра, а также определения динамики инактивации этими растворами вируса натуральной оспы провели специальную серию экспериментов на штамме Индия - 3А (гомогенат ХАО РКЭ) с концентрацией 1,2108 ООЕсм-3. Полное обеззараживание проб и гибель в них указанных вирусов достигалось при использовании 6% раствора перекиси водорода и времени экспозиции 1,0 час. Также полная стерилизация проб происходила после воздействия на вирусы натуральной оспы и осповакцины в течение 1,0 часа 4% раствора щелочи.
Необходимость разработки методики выделения ДНК вируса натуральной оспы и вируса оспы обезьян была обусловлена практикой проведения молекулярно-биологических исследований музейной коллекции штаммов указанных вирусов в корпусе 6. За ее основу была взята аналогичная методика, применяемая в Сотрудничающем центре ВОЗ по оспе в CDC, Атланта, США. При этом были решены вопросы выделения ДНК из вирусной культуры, наработанной на перевиваемой культуре клеток, гомогената ХАО РКЭ, из корочек больных натуральной оспой, имеющихся в музейной коллекции, а также комплекс вопросов обеспечения требований биобезопасности при выделении рекомбинантных плазмид, содержащих фрагменты ДНК вируса вируса натуральной оспы, и определения их специфической контаминации. Кроме этого были отработаны вопросы контроля соблюдения требований биобезопасности при выделении белков вируса натуральной оспы и их остаточной инфекционности. Плазмидная ДНК выделяется из клеток E.coli, зараженных фагом М13, контактировавшим с вирусом натуральной оспы, и необходима для работ, связанных с получением комбинаторных антител против вируса натуральной оспы. В настоящее время метод электронной микроскопии широко используется при исследованиях вируса натуральной оспы в американском и российских Сотрудничаю щих Центрах ВОЗ по натуральной оспе. Метод является одним из основных методов диагностики натуральной оспы у человека. Поэтому были отработаны вопросы контроля соблюдения требований биобезопасности при получении образцов для электронной микроскопии и их остаточной инфекционности. Также в интересах проведения молекулярно-биологических и диагностических работ были разработаны способы контроля соблюдения требований биобезопасности и остаточной инфекционности при выделении лизатов очищенных препаратов вирусов Эбола и Марбург, препаратов РНК вирусов Эбола и Марбург, образцов органов животных, инфицированных вирусами Эбола и Марбург, предназначенных для электронной микроскопии.
Было показано, что при выполнении работ с ВНО может происходить контаминация поверхностей оборудования и лабораторных помещений указанным вирусом, особенно при выполнении манипуляций на открытых столах.
Однако это не является нарушением требований биобезопасности, т.к. в лабораториях костюмного типа с высшим уровнем биозащиты персонал защищен ИСИЗ, а в пространстве лаборатории предполагается нахождение патогенных агентов. В связи с этим были разработаны методы контроля специфической контаминации вирусом натуральной оспы как внутри лабораторной среды, так и поверхностей различных объектов и воздуха за пределами лаборатории при возникновении возможных чрезвычайных ситуаций.
Методы специфической детекции филовирусов в пробах воздуха, с поверхностей лабораторных помещений, при работах с экспериментально зараженными животными, а также в различных биологических пробах отрабатывали на примере вирусов Эбола, Марбурга. Исследования проводили с вирусами Эбола, штамм Mayinga и Марбург, штамм Voege, полученными из Белорусского института Эпидемиологии и Микробиологии. В частности, при работе с зараженными животными было показано, что эпидемиологическую опасность больные животные представляют не только в терминальный период, когда из-за нарушения в системе свертывания крови развиваются кровотечения на фоне высокой вирусемии, но и весь период болезни из-за наличия нативного вируса в слюне, моче и фекалиях. Относительно высокое содержание вируса Марбург в исследуемых пробах больных животных в сочетании с его способностью длительно сохраняться на поверхностях требует от исследователей и персонала тщательного соблюдения мер предосторожности при работе с зараженными животными, в том числе из-за опасности образования вторичного аэрозоля от контаминированной экскретами подстилки.
Для подтверждения специфичности положительных проб воздуха и смывов, биопроб от животных, а также обеспечения экстренного эпидемиологического контроля острых лихорадочных состояний с анамнезом, подозрительным на филовирусные лихорадки, и принятия своевременных мер по лечению и профилактике заболевания в ГН - ВБ УВекторФ были разработаны современные диагностические средства к вирусам Эбола, Марбург (диагностические системы непрямого иммунофлюоресцентного анализа (НМФА), твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА). Было также показано, что для проведения спе цифической детекции филовирусов и, в частности, вируса Эбола в пробах воздуха, с поверхностей лабораторных помещений, а также в различных биологических материалах и образцах целесообразно применение постановки биологической пробы на чувствительных лабораторных животных, применение иммунофлюоресцентного и иммуноферментного методов идентификации антигенов и антител вируса Эбола, Марбург. Кроме указанных методов в ГН - ВБ УВекторФ также были разработаны лабораторные РНК ПЦР наборы для выявления в плазме крови РНК вируса Эбола. Дополнительно к этим средствам индикации и идентификации филовирусов в практике работы Центра (особенно при необходимости проведения диагностических работ в стационаре особо опасных инфекций ФГУЗ МСЧ-163 ФМБА России) использовали официально утвержденные к применению МЗиСР РФ диагностические тест-системы иммуноферментные для выявления антигенов вируса Эбола, Марбург производства Вирусологического Центра НИИМ МО РФ. В целом, в настоящее время согласно действующим СП 1.3.1285-03 при работах с микроорганизмами I-II групп патогенности на специфическую контаминацию контролируют только стоки. К счастью до настоящего времени нам не удалось даже выявить вирусные маркеры в стоках, т.к. в процессе накопления стоков происходит их многократное разбавление, а также разрушение вирусного материала последующим жестким тепловым обеззараживанием стоков (1452С в течение 7-10 мин).
Как известно, летом 2005 года в Новосибирской области, а позднее в ряде других регионов России была зарегистрирована массовая гибель птиц. В результате проведенных исследований в ГН - ВБ УВекторФ из органов погибших в Новосибирской области диких и домашних птиц были изолированы и идентифицированы несколько штаммов вируса гриппа А подтипа Н5N1. Учитывая их возможную высокую эпидемическую опасность, провели цикл предварительных, оценочных экспериментов по определению контаминации воздуха и зообоксов при содержании в них птиц, зараженных вирусом гриппа А подтипа Н5N1, по оценке риска заражения здоровых цыплят от больных цыплят фекально-оральным и аэрогенным путями в условиях искусственного их содержания в виварии, а также риска контаминации СИЗ персонала, ухаживающего за инфицированными птицами. При этом считали возможным выделение вирусного аэрозоля при дыхании инфицированных цыплят (первичный аэрозоль) или образование вторичного аэрозоля из инфицированной подстилки. В экспериментах использовали культуру вируса гриппа А серотипа Н5N1 штамма A/ Turkey/Suzdalka/Nov-1/2005, выделенного из селезенки павшей 20.07.05 г. индюшки из с. Суздалка Доволенского района НСО. Штамм депонирован в коллекции культур микроорганизмов ГН - ВБ УВекторФ. В результате была показана возможность формирования вирусного аэрозоля при содержании инфицированных цыплят и высокая степень защиты зообоксов для их содержания, препятствующая выходу инфекционного материала за пределы зообокса и контаминации СИЗ обслуживающего персонала.
Важнейшее значение при работах с микроорганизмами I-IV групп патогенности, а тем более с возбудителями ООИ, имеют вопросы проведения теку щей и заключительной дезинфекции в УзаразнойФ зоне. На протяжении многих лет практической работы с ПБА в ГН - ВБ УВекторФ была разработана система их проведения, а также контроля и оценки её эффективности микробиологическими методами, что было подтверждено большим количеством практических результатов.
Учитывая высокую степень опасности для персонала работ с возбудителями ООИ, особое значение приобретают вопросы подготовки, организации эксплуатации и объективного контроля СИЗ, ИСИЗ (пневмокостюмов). В результате на протяжении ряда лет нами была создана эффективная система организации и контроля эксплуатации СИЗ, ИСИЗ персонала, работающего с высоко патогенными вирусами. Основными ее отличиями от зарубежных систем являются: использование костюма разово в пределах одной рабочей смены; индивидуальная (личная) ответственность сотрудника за правильную эксплуатацию полученного пневмокостюма и комплектного фильтра с момента их получения на централизованном участке контроля и выдачи, на протяжении рабочей смены и до момента его поступления обратно на участок; обязательная проверка пневмокостюма и комплектного к нему фильтра перед выдачей сотруднику и после их использования; осуществление контроля целостности пневмокостюма визульным и газоиндикаторным методами; проверка задерживающей способности комплектного к пневмокостюму фильтра инструментальным методом с использованием тумана турбинного масла и др.
Исходя из того, что роль самого важного звена в общей системе биобезопасности принадлежит человеку, выполняющему работу в ИСИЗ в зоне вероятного присутствия возбудителей ООИ, изучили некоторые физиологические показатели деятельности сердечно-сосудистой системы, органов дыхания и температурного статуса у сотрудников в процессе эксплуатации ими пневмокостюмов. Знания о влиянии ИСИЗ на организм работающих являются, безусловно, необходимыми для рациональной организации их труда, совершенствования ИСИЗ, профилактики и снижения заболеваемости персонала лабораторий. Полученные результаты позволили оптимизировать режим и условия труда вирусологов с целью обеспечения его безопасности, совершенствования системы подбора кадров, усовершенствовать систему их медицинского отбора, ежегодных медицинских осмотров, а так же допуска персонала к работам с ООИ.
На основе полученных теоретических и экспериментальных данных по совершенствованию системы биологической безопасности при работах с вирусами I-II групп патогенности были разработаны учебные программы и организовано сертифицированное обучение персонала на базе функционирующего в ГН - ВБ УВекторФ специализированного отдела научно-методической подготовки персонала по работе с возбудителями ООИ в соответствии с Федеральной лицензией № 166191 от 30.03.06 г. При этом обучение осуществляется по следующим Программам:
- Программа курсов первичной специализации врачей и биологов по особо опасным вирусным инфекциям, утвержденной руководителем Роспотребнадзора;
- Программа обучающего семинара для специалистов территориальных органов Роспотребнадзора по эпизоотологии, эпидемиологии и лабораторной диагностике высокопатогенного гриппа птиц, утвержденной руководителем Роспотребнадзора;
- Программа теоретических и практических занятий курсов усовершенствования специалистов вирусологических лабораторий с высшим медико-биологическим образованием ФГУН ГН - ВБ Вектор, утвержденной генеральным директором Центра;
- Программа теоретических и практических занятий курсов специализаций и усовершенствования лаборантов вирусологических лабораторий ФГУН ГН - ВБ Вектор, утвержденной генеральным директором Центра;
- Перечни контрольных вопросов комиссионной проверки знаний требований биобезопасности у научного персонала, инженерно-технических работников, лаборантского и обслуживающего персонала Центра, соответственно, утвержденных генеральным директором Центра.
Формы профессиональной подготовки включают в себя:
- аттестационные и сертификационные циклы (от 144 до 540 академических часов, но не менее 144 часов);
- переподготовка (специализация) по специальности УвирусологияФ (от 500 до 1000 академических часов, но не менее 500 часов);
- тематическое усовершенствование (от 72 до 100 академических часов, но не менее 72 часов).
За 2007-2008 г.г. сертифицированное обучение прошли - 491 сотрудник ГН - ВБ УВекторФ, Роспотребнадзора, Россельхознадзора, системы лабораторий полио Европейского бюро ВОЗ по России, ФМБА России с различным уровнем образования, а также около 10 вирусологов из Казахстана и Монголии.
Глава 4. Экспериментальная оценка перспективности применения нетканых материалов для разработки и производства средств индивидуальной защиты при работе с возбудителями вирусных инфекций, включая ООИ.
В связи с тем, что данные о защитной эффективности нетканых материалов спецодежды медицинского назначения в известной литературе отсутствуют, впервые провели экспериментальную оценку в статических и динамических условиях проницаемости материалов и тканей одноразовой медицинской одежды ЗАО "Здравмедтех" (Россия) с использованием тест аэрозолей, включая бактериальный. Изучали ткани Spanbond, SMS, УTyvekФ, Sontara-F808 различной плотности (15 - 60 гм-2), а также хлопчатобумажную ткань артикул 262 в качестве материала сравнения.
На рис. 2-3 представлены показатели коэффициентов проницаемости указанных тканей полученные в результате их испытаний в динамическом режиме.
Решение вопросов индивидуальной Оценка условий труда и харак- Санитарно-гигиенические Медицинский отбор и периодическое защиты на стадии проектирования теристика проводимых работ условия труда медицинское освидельствование пери строительства микробиологичес- сонала, работающего в СИЗ кой лаборатории Характер труда, тяжесть, Изучение функционального и психоинтенсивность и продоРезультаты лабораторных, профизиологического состояния человежительность работы Зонирование помещений микробиизводственных, санитарно- гика при использовании СИЗ ологической лаборатории гиенических исследований условий труда Аттестация рабочих мест Физиологическая оценка СИЗ Система воздухоснабжения шланИзучение особенности говых СИЗ Определение области примене- Самооценка применения комплекэксплуатации СИЗ ния СИЗ тов СИЗ и функционального состоСистема приготовления и раздачи яния при работе в СИЗ дезинфицирующих растворов Выбор СИЗ, порядок их компле- Средства защиты органов Контроль службой биобезопасноктации и получения дыхания Система дезинфекционной обрасти защитной эффективности и ботки СИЗ правил эксплуатации СИЗ Средства защиты рук Участок централизованного техни- Система обучения работающих ческого обслуживания, контроля правилам пользования СИЗ Оценка состояния и эффективносСредства защиты ног шланговых СИЗ и фильтров ти использования СИЗ службой биобезопасности и Комиссией по Использование СИЗ в соответстконтролю соблюдения требований Система санитарных пропускников Спецодежда вии с инструкциями по эксплуабиобезопасности и шлюзов тации Изолирующие и шланговые СИЗ Спецпрачечная Разработка рекомендаций по оптиКонтроль исправности и защитмизации использования и соверной эффективности СИЗ шенствованию СИЗ Рис. 1. Основные элементы и мероприятия системы использования СИЗ, ИСИЗ.
В результате проведенных испытаний была установлена различная степень их проницаемости. Показано, что с повышением плотности исследуемых материалов происходит снижение их проницаемости для бактериального аэрозоля. Ламинирование тканей Спанбонд способствует резкому снижению бактериопроницаемости этого вида тканей и позволяет повысить их защитные свойства. Установлено, что наиболее высокими защитными свойствами обладают нетканые материалы СМС, Тайвек, Сонтара и ламинированные ткани Спанбонд. Указанные ткани по своим барьерным защитным свойствам превосходят ткани, используемые для изготовления защитной медицинской одежды многоразового применения. Показана перспективность применения нетканых материалов для изготовления трех-пяти слойных медицинских масок. Коэффициенты проскока бактериального аэрозоля испытанных нетканых материалов масок составили менее 1,0 % и были близки к показателям респиратора УЛепестокФ.
Пяти слойные маски на основе материалов СМС-42 обладают более высокими показателями задержки бактериальных аэрозолей. С учетом полученных результатов нами был разработан перспективный по защитным свойствам костюм разового использования на основе нетканых материалов - костюм УВекторФ для защиты от патогенных биологических агентов [Патент РФ на полезную модель № 54519. Дата поступления заявки- 25.08.05. Регистрационный номер - 2005126782]. Запланирован выпуск экспериментальных образцов указанного костюма ЗАО УЗдравмедтехФ и проведение оценки их защитной эффективности.
Глава 5. Разработка мер защиты персонала опасного биологического объекта, населения прилегающей к нему территории от природных, техногенных и террористических угроз биологического характера.
Разработка комплекса противоэпидемических мероприятий по защите опасного биологического объекта и населения, прилегающей к нему территории, от особо опасной антропозоонозной инфекции на примере случая подозрительного на завозную легочную чуму.
Известно, что санитарно-противоэпидемические мероприятия по их перечню, срокам и объему выполнения при завозе карантинных инфекций практически аналогичны проводимым мероприятиям при биотеррористических актах /Корбут В. Б и др., 2002/. Подобным примером может служить опыт ФГУН ГН - ВБ УВекторФ Роспотребнадзора по предупреждению завоза и распространения легочной чумы в связи с осложнением ситуации в Индии в 1994 г.
В октябре 1994 г. в ГН - ВБ УВекторФ были размещены для изоляции и прохождения обсервации 95 пассажиров двух рейсов Аэрофлота. Среди доставленных 11 индийских граждан у пассажирки второго рейса отмечались сильное недомогание, сухой кашель и высокая температура. Местом размещения прибывших авиапассажиров, согласно принятому решению областной ЧПК, был определен ГН - ВБ УВекторФ. До прибытия самолетов Областная ЧПК, ЧПК 110,0,1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Номер материала Номер материала Рис. 2. Коэффициенты проскока нетканых материалов по Рис. 3. Коэффициенты проскока для некоторых материабактериальному аэрозолю в динамическом режиме лов средств защиты органов дыхания по бактериальному 1 - 5 - материал УСпанбондФ плотностью 15; 20; 35; 50; 60 аэрозолю (Кп, %).
г/м2, соотве-ственно; 6, 7 - материал УСпанбондФ ламини- 1 - хлопчатобумажная ткань (61,4%); 2 - трехслойная рованный плотностью 20; 25 г/м2, соответственно; 8 - 10 - мака на основе материала Спанбонд плотностью 25 г/мматериал УСМСФ плотностью 20; 35; 45 г/м2, соответствен- (< 1,0 %); 3 - пятислойная маска на основе материала но; 11 - материал УТайвекФ плотностью 35 г/м2 ; 12 - мате- Спанбонд плотностью 25 г/м2 (0,3%); 4 - трехслойная риал УСонтараФ плотностью 64 г/м2 ; 13 - х/б ткань (конт- маска на основе материала УСМСФ плотностью 42 г/м2 (< роль) плотностью 128 г/м2. 1,0%); 5 - пяти слойная маска на основе материала УСМСФ плотностью 42 г/м2 (< 1,0%); 6 - ватно-марлевая повязка (< 1,0%); 7 - ткань Петрянова - ФПП-15-1,5 респиратора УЛепесток-200Ф (< 0,1%).
Коэффициент проскока, % Коэффициент проскока,% Центра, совместно с органами городской и местной власти, санэпиднадзора уточнили порядок эвакуации пассажиров, выделение автотранспорта, экипировку и оснащение эвакуационных бригад. Одновременно с этим были приведены в полную готовность инфекционный изолятор, обсерватор, шлюз-камера и медперсонал. Кроме индийской авиапассажирки, в специальный изолятор ГН - ВБ УВекторУ были доставлены 04.10.94 г. эвакотранспортом гордезстанции три жителя г. Новосибирска с высокой температурой, прибывшие из Индии в период 26.09-01.10.94 г. В отношении этих четырех человек был также проведен полный комплекс бактериологических, клинико-биохимических и других исследований. Клинические данные и результаты выполненных исследований ни в одном из указанных случаев не подтвердили предварительно выставленный диагноз чумы. Поэтому после завершения у них соответствующих схем лечения они были выписаны из изолятора. Все обсервируемые лица после прохождения ими курса экстренной профилактики тетрациклином и завершения сроков обсервации были также выписаны из отделения ООИ ГН - ВБ УВекторУ.
Проведенный комплекс экстренных противоэпидемических мероприятий продемонстрировал высокую степень готовности всех звеньев Новосибирского РЦМК; персонала, лечебно-профилактической базы и службы биобезопасности ГН - ВБ УВекторУ к случаю подозрительному или реальному на завозную чуму, а также адекватность возможным подобным угрозам мероприятий, предусмотренных разработанным нами УКомплексным планом мероприятий по санитарной охране территории наукограда Кольцово и научной площадки ГН - ВБ УВекторФ от завоза, возникновения и распространения карантинных инфекций и при массовых эпидемических осложненияхФ.
Анализ аварий, аварийных ситуаций на инженерно-технических системах биобезопасности научно-лабораторных корпусов ФГУН ГН - ВБ УВекторФ при работах с вирусами I - II групп патогенности.
Бесперебойное и надежное функционирование инженерно-технических систем обеспечения биологической безопасности имеет большое значение при проведении работ с возбудителями I-II групп патогенности в микробиологических лабораториях. От эффективности их работы во многом зависят как безопасность и здоровье работающего персонала, так и надежная защита от специфической контаминации лабораторных, технологических помещений и объектов внешней среды. В табл. 5-6 представлены доступные данные об авариях, аварийных ситуациях и технических неисправностях на инженерно-технических системах научных корпусов за 12 лет наблюдения, а также о мероприятиях, проведенных в связи с ними.
Как следует из представленных данных за анализируемый период времени аварии, аварийные ситуации и технические неисправности касались только ограждающих строительных конструкций, приточно-вытяжной вентиляции, системы спецканализации, сбора и обработки стоков и системы передаточных устройств. При этом следует указать, что аварии за этот период времени произо- шли только в корпусе № 1. Согласно представленным данным самое большое количество аварий было связано с системами спецканализации, сбора и обработки стоков (70%) и ОСК (17,5%). Аварийные ситуации и технические неис- правности наиболее часто были отмечены со стороны систем приточно-вытяжной вентиляции (43,6% и 44,4 %, соответственно), систем спецканализации, сбора и обработки стоков (25,9% и 47,3%, соответственно). Другие научные корпуса за анализируемый период времени не имели аварий.
Таблица Аварии, аварийные ситуации и технические неисправности на инженерно-технических системах научных корпусов Центра Нарушения и принятые Аварии, Аварийные Технические немеры % ситуации, исправности, % % Ограждающие строитель- 17,5 18,6 ные конструкции Приточно-вытяжная вен- 10 44,4 43,тиляция Система спецканализации, 70 25,9 47,сбора и обработки стоков Система передаточных ус- 2,5 11,1 9,тройств Дезинфекционная обра- 40 - ботка оборудования и помещения Проведение ремонта (уст- 40 27 ранение дефекта, ремонт оборудования) Проведенные расследования аварий на ОСК показали, что они были связаны с образованием трещин в гидроизоляции межэтажных перекрытий и протечками через них жидкостей из УзаразныхФ зон в УчистыеФ и УзаразныеФ помещения нижележащих этажей. В связи с нарушением целостности внутренних стекол окон УзаразныхФ помещений при сохранении их наружного остекления были связаны одна авария и все аварийные ситуации в корпусе № 1. В корпусах №№ 6 и 6а до запуска их в эксплуатацию, с целью исключения разрушения стёкол окон УзаразныхФ помещений при работах с возбудителями I-II групп патогенности, оконные рамы были заварены изнутри металлическими листами с последующей герметизацией швов. На протяжении ряда лет для улучшения герметичности гидроизоляции полов, межэтажных перекрытий, сопряжений полов и стен был проведен необходимый комплекс мероприятий, который позволил минимизировать нарушения со стороны этих элементов ОСК. Кроме этого для исключения нарушений со стороны приточно-вытяжных систем, передаточных систем и других, связанных с нештатной работой КИПиА этих систем, были разработаны проекты проведения модернизации указанных систем. Все работы по ликвидации последствий нарушений, возникших на инженерно-технических системах обеспечения биобезопасности, проводили согласно разработанной нами инструктивно-методической документации.
Таблица Мероприятия, выполненные в отношении попавшего в аварии на инженерно-технических системах персонала Проведенные ме- Ограждающие Приточно- Система Система пероприятия, строительные вытяжная спецканали- редаточных % конструкции вентиляция зации, сбора устройств и обработки стоков Проведение уси- 6,0 6,0 25,3 ленного медицинского наблюдения Введение дополни- 6,0 6,0 41,7 тельного контроля температуры тела Помещение под 1,5 - 4,5 1,усиленное медицинское наблюдение в корпус № Помещение под 1,5 - - усиленное медицинское наблюдение в корпус № Для подавляющего большинства персонала, попавшего в аварии на системах ОСК, приточно-вытяжной вентиляции, спецканализации, сбора и обработки стоков, передаточных устройств решением Комиссии по контролю соблюдения требований биобезопасности Центра совместно с МСЧ-163 было предписано проведение усиленного медицинского наблюдения с самостоятельным дополнительным (вечером, в выходные дни) ежедневным контролем температуры тела, отображаемым в температурном листе. По окончании наблюдения (период обсервации для конкретного вида инфекции) температурный лист сдавался в отдел биобезопасности. Нахождение под усиленным медицинским наблюдением не ограничивало доступ персонала к работам в УзаразнойФ зоне. Аналогичным правом пользовался также персонал, помещенный в корпус № 20 (обсерватор). Сотрудники, помещенные для наблюдения в корпус № 19 (изолятор), такого права не имели. Перечень предписанных к выполнению и осуществленных санитарно-противоэпидемических и медицинских мероприятий в связи с авариями на инженерно-технических системах определялся исходя из анализа возможных уровней рисков для персонала, попавшего в зону аварии. Во всех случаях эти риски были оценены нами как ничтожные, а угрозы заражения персонала лишь как теоретически возможные. Как правило, в момент аварии персонал находился в средствах индивидуальной защиты или успевал до аварии по кинуть помещения, случаи протечек были связаны с протеканием стоков, других жидкостей предварительно инактивированных дезрастворами или нагретых до высоких температур (трубопроводы и другое оборудование системы обработки стоков). Случай нарушения герметичности внутреннего остекления окна в УзаразномФ виварии произошёл после завершения в нем работ, проведения текущей дезинфекции помещения, после ухода из него сотрудников и при поддержании в этом помещении требуемых режима разрежения и направленности потоков воздуха. Отсутствие заражения сотрудников, находившихся в зоне аварий, показало правильность проведенного анализа обстоятельств и последствий аварий, адекватность и достаточность объемов проведенных мероприятий.
Анализ случаев нарушения целостности ИСИЗ и внутри лабораторного заражения сотрудников ГН - ВБ УВекторУ возбудителями вирусных инфекций I - II групп патогенности.
При работе с возбудителями I группы патогенности персонал использует изолирующие средства индивидуальной защиты (ИСИЗ), включающие в себя комплект резиновых перчаток и пневмокостюм УАнтибелок - 5Ф. При выполнении в ИСИЗ необходимых манипуляций в лабораторных, технологических или виварных помещениях существуют риски нарушения целостности перчаток и оболочки пневмокостюма (проколы, разрезы, порывы). При этих нарушениях возможны также и повреждения кожных покровов работающего в ИСИЗ персонала. В табл. 7 представлены доступные нам данные о нарушениях целостности ИСИЗ персонала, работавшего с возбудителями I группы патогенности.
Таблица Нарушения целостности ИСИЗ в корпусах Центра при работах с возбудителями I группы патогенности Место поврежде- Локализация и количество повреждений пневмокостюмов ния Шлем Рукава Штанины Область Воздухо- Фильтр туловища воды Виварные поме- 3 196 50 25 8 - щения научных корпусов Вирусологические - 13 17 18 1 и другие помеще- ния УзаразнойФ зоны Корпус № 19 - - - 1 - - Из представленных данных следует, что в виварных помещениях научных корпусов произошло 84,9%, в других помещениях УзаразнойФ зоны корпусов 15,1% нарушений целостности ИСИЗ. При этом были повреждены рукава в 59%, штанины пневмокостюмов в 15,1% и область туловища в 7,5% случаев от их общего количества. В корпусе № 19 был отмечен за анализируемый период времени только один случай повреждения пневмокостюма, который был получен при выполнении подготовительных мероприятий к работам с инфекционным материалом. Ретроспективный анализ случаев повреждений ИСИЗ пока зал, что 84,9% случаев нарушения целостности пневмокостюмов произошли при кормлении и уходе за инфицированными вирусами Эбола и Марбург лабораторными животными в вивариях. Мероприятия в отношении персонала (табл.
8), получившего повреждения ИСИЗ при работах с возбудителями I группы патогенности, осуществляли согласно разработанным нами инструктивно-методическим документам.
Таблица Мероприятия, выполненные в отношении персонала, пневмокостюмы которого получили повреждения при работах с возбудителями I группы патогенности Проведенные ме- Корпус Корпус Корпус Корпус роприятия, % № 1 № 6 № 6а № Проведение уси- 34,8 0,7 17,8 ленного медицинского наблюдения Введение дополни- 26,7 0,7 16,3 0,тельного контроля температуры тела Помещение под - - - усиленное медицинское наблюдение в корпус № Помещение под 1,1 - 1,1 усиленное медицинское наблюдение в корпус № Обработка раны, - - 0,4 изоляция в корпусе № 19, специфическая профилактика гетерологичным гамма-глобулином Из представленных в табл. 8 данных следует, что только в 2,2% случаев повреждений ИСИЗ сотрудники были изолированы в специальном инфекционном стационаре под усиленное медицинское наблюдение без проведения специфической профилактики и лечения. Однако 0,4% повреждений ИСИЗ потребовали проведения обработки раны, изоляции пострадавших в корпусе № 19, специфической профилактики гетерологичным гамма-глобулином. Тем не менее, все имевшие место случаи нарушения целостности пневмокостюмов не привели к заражению вирусами Эбола и Марбург работавшего в них персонала. Это стало возможным из-за работы персонала на центральном воздухоснабжении пневмокостюмов, обеспечивающего поддержание постоянного избыточного давления в подкостюмных пространствах, в том числе, и в момент их повреждения; эффективным обеззараживанием поверхностей пневмокостюмов при выходе из вивариев; своевременностью и достаточностью выполненных медицинских мероприятий при нарушениях ИСИЗ с повреждением подлежащих кожных поверхностей пострадавшего персонала. Кроме того, осуществляемый непрерывный медицинский контроль как за работающими в УзаразнойФ зоне, так и за персоналом, получившим повреждение ИСИЗ при этих работах, но не изолированных в стационаре, давал возможность своевременного выявления и немедленной изоляции в корпусе № 19 сотрудников с повышенной температурой тела или другими отклонениями в состоянии их здоровья.
К сожалению, в практике работ с возбудителями I-II группы патогенности в ФГУН ГН - ВБ УВекторФ Роспотребнадзора нам не удалось исключить аварии с нарушениями целостности кожных покровов у персонала, работавшего в УзаразныхФ зонах научных корпусов, в том числе, повлекших внутри лабораторные заражения сотрудников, и, что печальнее всего, с трагическим исходом. На рис.
4 представлена структура травм кожных покровов на руках у сотрудников Центра. Из этих данных следует, что повреждения были нанесены посредством укола в 37% случаев (иглой, проволокой, приколышем), порезом стеклом - 30%, укусом животного - 7%, нанесением плоской раны-ссадины - 22%, повреждение собственным ногтем - 4% случаев. Анализ состава сотрудников, совершивших аварии или ее участников (рис. 5) показал, что на категорию научных и к ним приравненных сотрудников пришлось 44%; лаборантов и к ним приравненных - 22%; старшие лаборанты и к ним приравненные составили 19%; остальные 15% пришлись на прочие категории персонала (врачи, стажеры-исследователи, аппаратчики и слесари КИПиА).
4% 22% 37% Укол Порез стеклом Укус животного с с Рана - ссадина 7% Повреждение ногтем 30% Рис. 4. Структура травм кожных покровов на руках у сотрудников Центра.
15% 44% Ученые Старшие лаборанты с с Лаборанты 22% Прочие 19% Рис. 5. Состав сотрудников, пострадавших в аварии.
21% Виварий Биобокс III класса с с 10% 52% Вирусологический блок Прочие 17% Рис. 6. Распределение мест совершения аварий.
При этом 52% аварий произошли в виварии; 17% - в полости изолирующих боксов 4БП1; 10% - в помещениях вирусологических блоков УзаразнойФ зоны;
остальные 21% были совершены в прочих помещениях УзаразнойФ зоны корпусов (автоклавные, центрифужные, помещения участка сбора и обработки стоков, технологические помещения, боксы для больных и др., рис. 6). Полученные данные однозначно свидетельствовали о том, что 85% аварий были совершены или в них участвовали категории сотрудников непосредственно работавшие с активным вирусным материалом, ассистировавшие им, обслуживавшие инфицированных животных, транспортировавшие животных или отходы.
Персонал, попавший в аварию, был изолирован в корпусе № 19 в 89,6% случаев. В 10,4% случаев получения травм кожи рук персонал работал в технологических помещениях УзаразнойФ зоны, в которых на момент травмирования не было инфекционных материалов. В этих случаях согласно совместному решению Комиссии по контролю соблюдения требований биобезопасности Центра и специалистов МСЧ-163 пострадавшим обработали раны, установили усиленное медицинское наблюдение и предоставили возможность работы в УчистойФ зоне. Из сотрудников, изолированных в инфекционном стационаре, превентивному специфическому лечению были подвергнуты 80,8%. В результате грубых нарушений требований биобезопасности в виварии получил укол иглой, инфицированной вирусом геморрагической лихорадки Эбола, заболел и, не- смотря на предпринятые специфическое, симптоматическое лечения и реанимационные мероприятия умер один сотрудник. В связи с поздним выявлением больного, заразившегося вирусом Марбург, из-за сокрытия им факта нарушения требований биобезопасности предположительно при центрифугировании было назначено этому больному только симптоматическое лечение. Тем не менее, этот больной выздоровел.
Проведенный анализ внутри лабораторных заражений показал, что соблюдение требований биобезопасности еще не стали для персонала осознанной жизненной необходимостью, доминирующей нормой поведения в УзаразнойФ зоне при работах с подобными особо опасными возбудителями. К сожалению, эти вопросы имеют отношение к проблеме и роли так называемого УчеловеческогоФ фактора и по настоящее время являются актуальными как для практики работ с ООИ в Российской Федерации, так и для других стран, проводящих подобные исследования.
Моделирование акта почтового биотерроризма, актов биотерроризма на территории особо опасного биологического объекта и крупного города, а также результатов их последствий Следует отметить, что на протяжении более 30 лет работы с ООИ в ГН - ВБ УВекторФ не было ни одного случая аварии, повлекшей выход инфекционного материала из УзаразныхФ зон научно-лабораторных корпусов во внешнюю среду на территории научной площадки, а тем более за ее пределы. Это свидетельствует о высокой степени надежности существующей системы биобезопасности в Центре. В связи с этим наиболее вероятными причинами вспышек инфекционных заболеваний, включая ООИ, в п. Кольцово, городе Новосибирске, Сибирском регионе, могут быть случаи их заноса или завоза из эндемичных районов, а также возможные акты биотерроризма. В пользу таких возможностей свидетельствовали ранее рассмотренный нами случай подозрительный на завоз легочной чумы в наш регион, а также занос в 2005 г. в Новосибирскую область и другие территории Российской Федерации из сопредельных с ней государств перелетными птицами вируса гриппа птиц. Поэтому в дальнейшем нами были рассмотрены сценарии и моделирование возможных случаев биотерроризма и ликвидация их последствий.
При моделировании акта почтового биотерроризма определяли возможность аэрозолирования при вскрытии конверта с бактериальным споровым порошком, изменение концентрации частиц указанного порошка в воздухе, а также определяли количество бактерий, остающихся на руках человека, вскрывавшего конверт. В качестве бактериального спорового тест-микроорганизма в составе сухих образцов применяли Bacillus thuringiensis (var. dendrolimus), который является действующим началом коммерческих порошковых средств защиты растений - лепидоцида, дендробациллина, битоксибациллина - сухих каолин содержащих бактериальных инсектицидных препаратов, выпускаемых российской промышленностью.
Таблица Возможность аэрозолирования при вскрытии конверта с порошком и изменение концентрации частиц в воздухе на примере лепидоцида Время, прошедшее после вскрытия кон- Концентрация бактерий в воздухе в месверта, мин те вскрытия конверта и радиусе 1,0 м, КОЕдм-3, для Р 0 69600 225 160 15 183 1 При вскрытии конвертов, содержащих 0,5 г порошка лепидоцида, установлено, что в воздухе в радиусе 1,0 м происходит образование бактериального аэрозоля с концентрацией около 7,0 104 клетокдм-3 (табл. 13), более 90% которого представлены крупными аэрозольными частицами. При этом средний медианно-массовый аэродинамический диаметр частиц аэрозоля лепидоцида составил 17 мкм при массовом геометрическом квадратичном отклонении g3,l. Через 5,0 мин концентрация аэрозоля падала на 2 - 3 порядка и сохранялась на этом уровне в течение всего времени наблюдения (15 минут). При этом на руках человека, вскрывавшего конверт (в смывах с рук), обнаруживали содержание B. thuringiensis в количестве около 1,5 10 8 бактериальных клеток.
Математическое моделирование распределения биологического аэрозоля по пространству помещения, в котором происходило вскрытие конверта, показало, что по истечении незначительного времени в объеме помещения не оставалось свободных от биоаэрозоля зон. При этом концентрация биоаэрозоля была достаточно высокой, чтобы вызвать заражение всего находящегося в помещении персонала. Реальность существования угрозы почтового биотерроризма была подтверждена в октябре-декабре 2001 года регистрацией в Российской Федерации более 600 случаев почтовых отправлений, подозрительных на наличие биологических агентов (в одном случае были выявлены споры возбудителя сибирской язвы), а также выявлением в Новосибирске в 2001-2003 годах УподозрительныхФ проб.
Моделирование и анализ оценки сценария возникновения эпидемии на примере оспы в результате биотеракта в наукограде Кольцово, городе Новосибирске, в условиях современной подвижности населения, запаздывания развертывания мер противодействия и недостаточной их эффективностью в связи с ресурсными ограничениями, показали, что экономика Сибирского региона при эпидемии, может оказаться парализованной в течение нескольких месяцев с колоссальными затратами на ликвидацию ее последствий (более 10 млрд.
рублей). В результате проведенных исследований была показана перспективность и необходимость моделирования возможных актов биотерроризма для прогнозирования и оценки масштабов их последствий в интересах разработки адекватных и достаточных мер предупреждения или ликвидации их последствий на местном и региональном уровнях.
Экспериментальная оценка обеззараживания ускоренными электронами образцов и предметов внешней среды, контаминированных или потенциально контаминированных бактериальными и вирусными микроорганизмами.
В качестве возможного не разрушаемого метода обеззараживания почтовой корреспонденции и других образцов внешней среды, контаминированных или потенциально контаминированных бактериальными и вирусными микроорганизмами, включая возбудителей ООИ (в том числе в результате биотеракта), рассмотрели возможность использования пучка ускоренных электронов. Одновременно с изучением инактивирующего воздействия пучка ускоренных электронов на бактериальный и вирусный образцы оценили возможные морфологи ческие изменения, происходящие при облучении в бактериальных спорах и вирусных частицах, методами атомно-силовой микроскопии и негативного контраста при электронной микроскопии.
В работе использовали жидкие и сухие бактериальные и вирусные препараты, содержащие модельные тест микроорганизмы возбудителей сибирской язвы (Bacillus thuringiensis) и натуральной оспы (вирус осповакцины штамм Л - ИВП - штамм Листер, депонированный в Институте вирусных препаратов). В качестве бактериальных сухих и жидких споровых образцов применяли коммерческое порошковое средство защиты растений - лепидоцид. В качестве вирусного тест-микроорганизма использовали вирус осповакцины штамм Л ЦИВП коммерческой оспенной живой сухой вакцины производства ГП НПО УВирионФ. Подготовленные сухие и жидкие бактериальные и вирусные пробы облучали с помощью импульсного линейного ускорителя электронов ИЛУ-6 при рабочем режиме: энергия электронов в пучке 2,4 МэВ, мощность 4,5 кВт, пиковый ток электронного пучка 0,3 А. Испытывали следующие поглощенные дозы (кГр): 1,0; 2,5; 3,0; 5,0; 6,0; 9,0; 10; 12; 15; 20; 25; 30; 35; 40; 50; 60; 70; 80; 90;
100; 200; 300; 400; 500. После облучения в образцах определяли количество выживших бактерий и вирусов (рис. 7-8).
В результате проведенных исследований были определены динамика и дозы инактивации бактериальных (15-20 кГр) и вирусных образцов (не менее 40 кГр). Определен диапазон рабочих доз облучения, не приводящих к нарушению функциональных или потребительских свойств облучаемых предметов (оптические и магнитные носители информации, денежные бумажные российские и американские знаки, писчая бумага и цветная полиграфическая продукция - научные журналы) - не более 200 кГр. Показана стерилизующая эффективность отработанного и внедренного в практику применения режима облучения пучком ускоренных электронов на установке ИЛУ-6 одноразовой медицинской одежды производства ЗАО УЗдравмедтех - НовосибирскФ (18,5 кГр).
Разработка комплекса защитных мероприятий от чрезвычайных ситуаций при работах с возбудителями I-II групп патогенности, санитарной охране территории опасного биологического объекта от завоза, возникновения и распространения карантинных инфекций и при массовых эпидемических осложнениях, включая акты биотерроризма.
На протяжении более чем 30-летнего периода работы с ООИ в ГН - ВБ УВекторФ постоянно совершенствовался с учетом приобретаемого практического опыта комплекс мероприятий по предупреждению и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций и аварий при выполнении работ с возбудителями III групп патогенности, санитарной охране территории р.п. Кольцово, научной площадки Центра от завоза, возникновения и распространения карантинных инфекций и при массовых эпидемических осложнениях, включая акты биотерроризма. В результате только за период 1996 - 2007 г.г. были разработаны, утверждены и внедрены в практику следующие основополагающие документы:
1. Планы-инструкции ликвидации аварий и аварийных ситуаций на инженерно-технических системах биобезопасности научно-лабораторных корпусов.
2. Виды возможных аварийных ситуаций или аварий на инженерно-технических системах биобезопасности в научно-лабораторных корпусах и мероприятия по ликвидации их последствий.
3. Комплексный план организационных и противоэпидемических мероприятий по организации безопасных работ с вирусом натуральной оспы, предупреждению заболеваний и ликвидации очагов натуральной оспы.
4. Комплексный план мероприятий по санитарной охране территории р.п.
Кольцово и научной площадки ГН - ВБ УВекторФ от завоза, возникновения и распространения карантинных инфекций и при массовых эпидемических осложненияхФ.
5. Комплексный план мероприятий по ГН - ВБ УВекторФ по биологической безопасности.
6. План мероприятий по усилению биобезопасности и противодействию биологическому терроризму в ГН - ВБ УВекторУ.
7. Перечень необходимых работ по реконструкции инженерных систем и мероприятий для обеспечения безопасного проведения исследований с особо опасными патогенами в ГН - ВБ УВекторФ (предложения в доклад ФМБА РФ на заседании Совета безопасности РФ).
8. Перечень необходимых работ и мероприятий для повышения биобезопасности проведения исследований с особо опасными патогенами и противодействия терроризму в ГН - ВБ УВекторФ (предложения в Региональную антитеррористическую комиссию).
Кроме этого были подготовлены предложения, вошедшие позднее в УРекомендации о порядке проведения профилактической работы и тушения пожаров в помещениях с особым санитарным режимомФ, а также 24 рекомендации и дополнения для УПлана бактериологической защиты населения Новосибирской области при возможных биологических террористических актах (Карантин)Ф, утвержденного в 2002 году.
10,12 8,6,4,2,0,0 2,5 5 10 20 30 40 50 60 70 80 90 1Доза облучения (кГр) 0 2,5 5 10 20 30 60 90 120 1Вирус осповакцины(сухой-ампула) Вирус осповакцины(жидкий) Доза облучения (кГр) B. thuringiensis (сухой) B. thuringiensis (жидкий) B. subtilis niger (жидкий) Рис. 7. Инактивация спор B. thuringiensis жидких и сухих Рис. 8. Инактивация вируса осповакцины в жидких и сухих образобразцов под действием пучка ускоренных электронов. цах под действием пучка ускоренных электронов.
- концентрация (КОЕ10n); доза облучения (kGy) - B. thuringiensis (сухой); - B. thuringiensis (жидкий);
- B. subtilis niger (жидкий) Концентрация (lg Концентрация (lg) ВЫВОДЫ 1.Выявлено более 20 основных различий между российскими, американскими и руководствами ВОЗ по биологической безопасности и определены приоритетные направления гармонизации и унификации национальных и международных правил биобезопасности. Установлены основные тенденции совершенствования устройства лабораторий с высшим уровнем биобезопасности, а также организации и проведения в них работ с патогенными для человека микроорганизмами.
2. Усовершенствованы с использованием полученных теоретических и экспериментальных данных и существенным образом адаптированы к современным требованиям биобезопасности нормативно-методические документы федерального уровня по работе с ПБА I-II групп патогенности.
3. Разработан комплект инструктивно-методической документации, детально регламентирующей безопасное проведение работ с вирусами I-II групп патогенности и обеспечение необходимых требований биобезопасности на конкретном вирусологическом и биотехнологическом опасном биологическом объекте.
4. Оптимизирован комплекс элементов системы обеспечения безопасности работ с вирусами I-II групп патогенности:
- порядок организации и осуществления контроля соблюдения требований биобезопасности при работах с нативными вирусами и зараженными ими биологическими моделями (культуры клеток, РКЭ, лабораторные животные);
- порядок проведения контроля и оценки эффективности функционирования инженерно-технических систем биобезопасности;
- организация контроля соблюдения требований биобезопасности при получении различных вирусных препаратов возбудителей ООИ и оценки остаточной их инфекционности при выносе из УзаразнойФ зоны;
- оценка эффективности дезинфекционных мероприятий, проводимых в УзаразнойФ зоне;
- порядок организации и контроля эксплуатации СИЗ, ИСИЗ персонала.
5. Разработан комплекс организационных, противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий, направленных на предупреждение и ликвидацию последствий чрезвычайных ситуаций и аварий при выполнении работ с возбудителями I-II групп патогенности, предупреждение вирусных заболеваний населения территорий, расположенных вблизи опасного биологического объекта, завоза карантинных инфекций, а также возможных актов биотерроризма.
5. Усовершенствован метод определения защитной эффективности фильтров тонкой очистки воздуха с использованием в качестве тест аэрозоля тумана турбинного масла с помощью разработанной ГН - ВБ УВекторФ мобильной установки. Впервые в реальных условиях без демонтажа из технологических систем проведен сравнительный анализ методов определения защитной эффективности фильтров тонкой очистки воздуха с применением аэрозолей турбинного масла и диоктилфталата (ДОФ). Фракционно-дисперсные характеристики указанных аэрозолей идентичны (ММАД аэрозольных частиц ДОФ составил 0,19 - 0, мкм, а турбинного масла - 0,17 - 0,34 мкм; количество частиц данных размеров составило 97,7 2,3% и 98,61,6%, соответственно), что позволяет получать равные показатели коэффициентов проницаемости фильтров тонкой очистки воздуха для указанных тест аэрозолей. Данные экспериментов продемонстрировали равнозначность применения тест аэрозолей ДОФ и турбинного масла для оценки защитной эффективности фильтров тонкой очистки воздуха.
6. Впервые экспериментально в статических и динамических условиях определена проницаемость нетканых материалов (Спанбонда, СМС, Сонтары, Тайвек с плотностью 15 - 64 гм-2) с использованием физических и биологических тест аэрозолей. Установлена различная степень их проницаемости. Увеличение плотности исследуемых материалов, их ламинирование повышают защитные барьерные свойства тканей по сравнению с обычными тканями защитной медицинской одежды многоразового применения. Материалы СМС, Тайвек, Сонтара в динамическом режиме продемонстрировали более высокие барьерные свойства (Кп 1,0 %), чем хлопчатобумажная ткань (Кп - 61,4%), или вискозно-полиэфирная ткань (Кп - 10 - 12%). Показана перспективность применения нетканых материалов для изготовления трех-пяти-слойных защитных медицинских масок (Кп биологического аэрозоля для всех испытанных нетканых материалов масок составили менее 1,0 % и приближались к аналогичным показателям материала ФПП-15-1,5 респиратора УЛепесток-200Ф).
7. Разработан на основе нетканых материалов костюм УВекторФ для защиты от патогенных биологических агентов (Патент РФ RU на полезную модель 54519, Россия, 2005).
8. Установлено, что в процессе трудовой нагрузки у сотрудников, использующих от 2-х до 5-ти лет ИСИЗ, изменялось функциональное состояние сердечнососудистой системы по гипертензивному или гипотензивному типу (33,2% и 2,4%, соответственно). Систематическое перегревание при работе в ИСИЗ приводило к усилению у них легочной вентиляции и снижению на 18% величины коэффициента утилизации кислорода в легких. Повышение средневзвешенной температуры кожи и температуры УядраФ тела у сотрудников свидетельствовало об изменении в сторону перегрева терморегуляторного статуса их организма.
9. Показано, что основное количество аварий, аварийных ситуаций и технических неисправностей на инженерно-технических системах биобезопасности корпусов с высшим уровнем биобезопасности было связано с повреждением ограждающих строительных конструкций, приточно-вытяжной вентиляции, системы спецканализации, сбора и обработки стоков и системы передаточных устройств. Наиболее травмоопасной зоной работы персонала, связанной с повреждением целостности пневмокостюмов и кожных покровов сотрудников является виварий (84,9% и 85%, соответственно).
10. Экспериментально установлено, что при вскрытии конверта, содержащего 0,5 г порошка спор, в радиусе одного метра образуется аэрозоль с концентрацией 7,0104 клетокдм-3, а на руках человека, вскрывавшего конверт, остается 1,5108 бактериальных клеток. На основе полученных данных разработана ма тематическая модель распространения аэрозоля в закрытом помещении. На примере возможных сценариев актов биотерроризма с применением вируса натуральной оспы на территории опасного объекта и крупного города методами математического моделирования определены количественные характеристики зон поражения, динамика эпидемического распространения натуральной оспы за пределы очага заражения.
11. Экспериментально впервые показана возможность использования пучка ускоренных электронов для обеззараживания образцов, зараженных вирусами, а также бактериями, в интересах противодействия почтовому биотерроризму.
Полная стерилизация жидких и сухих бактериальных образцов достигалась при поглощенных дозах 15 - 20 кГр, сухих и жидких вирусных образцов - при дозе не менее 40 кГр. Определен диапазон рабочих доз облучения, не приводящих к нарушению функциональных или потребительских свойств облучаемых предметов и образцов (50 - не более 200 кГр). Показана стерилизующая эффективность отработанного и внедренного в практику режима облучения одноразовой медицинской одежды пучком ускоренных электронов на установке ИЛУ-(средняя поглощенная доза составила 18 3,0 кГр).
12. Разработаны на основе полученных теоретических и экспериментальных данных учебные программы, используемые в сертифицированном обучении персонала вирусологических лабораторий, осуществляющих работы с вирусами I-IV групп патогенности.
Практические предложения Полученные в результате выполнения настоящей работы теоретические и практические результаты учтены при разработке нормативно-методических документов федерального уровня:
- Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности). Санитарные правила: СП 1.3.1285-03.
- Организация и проведение противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий при натуральной оспе: Методические указания. МУ 3.1.3.5-07.
- Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоко-вирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА), у людей: Методические указания. МУК. 4.2.2136-06.
- Организация и проведение работ по исследованию методом ПЦР материала, инфицированного вирусами I - II групп патогенности. Методические указания (проект).
- Лабораторная диагностика натуральной оспы. Методические указания (проект).
- Рекомендации о порядке проведения профилактической работы и тушения пожаров в помещениях с особым санитарным режимом. Москва: 1 Управление ГУ ГПС МВД РФ, 1996. - С. 32.
Полученные данные использованы при разработке более 70 инструктивно-методических документов, детально регламентирующих различные аспекты биобезопасности в крупном опасном биологическом объекте (ФГУН ГН - ВБ УВекторФ) при работах с вирусами I-IV групп патогенности.
На основании полученных теоретических и экспериментальных данных разработаны учебные программы:
- Программа курсов первичной специализации врачей и биологов по особо опасным вирусным инфекциям, утвержденной руководителем Роспотребнадзора;
- Программа обучающего семинара для специалистов территориальных органов Роспотребнадзора по эпизоотологии, эпидемиологии и лабораторной диагностике высокопатогенного гриппа птиц, утвержденной руководителем Роспотребнадзора;
- Программа теоретических и практических занятий курсов усовершенствования специалистов вирусологических лабораторий с высшим медико-биологическим образованием ФГУН ГН - ВБ УВекторФ Роспотребнадзора, утвержденной генеральным директором Центра;
- Программа теоретических и практических занятий курсов специализаций и усовершенствования лаборантов вирусологических лабораторий ФГУН ГН - ВБ УВекторФ Роспотребнадзора, утвержденной генеральным директором Центра.
Согласно указанным программам проведено сертифицированное обучение на базе функционирующего в ГН - ВБ УВекторФ специализированного отдела научно-методической подготовки персонала по работе с возбудителями особо опасных инфекций 491 сотрудника ГН - ВБ УВекторФ, Роспотребнадзора, Россельхознадзора, российской системы лабораторий полио ВОЗ, ФМБА России с различным уровнем образования.
Список публикаций по итогам работы:
1. Л. А. Криницин, Е. А. Ставский, С. В. Нетесов, А. С. Едапин, В. А. Даняев, О.
В. Пьянков, Л. Е. Булычев. Сравнительный анализ методов определения эффективности фильтров для очистки воздуха с использованием аэрозолей диоктилфталата и турбинного масла.// Биотехнология. 1999, N 4, с.57-62.
2. L. A. Krinitsyn, E. A. Stavsky, S. V. Netesov, A. S. Edapin, V. A. Danyaev, O. V.
Pyankov, and L. E. Bulychev. Comparative Analysis of the Methods for Determining the Efficiencyof Air-Purification Filters Using Dioctyl Phthalate and Turbine Oil Aerosols // Applied Biosafety, v. 6, n. 1, 2001, p. 6-12.
3. N.B. Cherny, E.A. Stavskiy, S.V. Netesov. Providing biosafety in research work with>
4. E.A. Stavskiy, N.B. Cherny, L.A Krinitsin, A.S. Edapin, V.A. Danyayev. Isolating>
5. T.S. Chepurnova, N.B. Cherny, E.A. Stavskiy. Monitoring of specific contamination of laboratory during work with Filoviruses // Applied Biosafety, v. 7, n. 1, 2002, p. 19.
6. E.A. Stavskiy, N.B. Cherny, A.A. Chepurnov, S.V. Netesov. Anthology of Some Biosafety Aspects in Russia (up to 1960).- Anthology of Biosafety V. BSL-4 Laboratories. Jonathan Y. Richmond, Editor. 2002, pp. 29 - 92.
7. Evgeniy A. Stavskiy, Robert J. Hawley, Jonathan T. Crane. A Comparison of Containment Facilities and Guidelines in Russia and the United States. - Anthology of Biosafety V. BSL-4 Laboratories. Jonathan Y. Richmond, Editor. 2002, pp. 179 - 208.
8. A. Chepurnov, N. Cherny, T. Chepurnova, E. Stavsky. Monitoring of Specific Contamination of Virology Laboratories During Work with Filoviruses.- Anthology of Biosafety V. BSL-4 Laboratories. Jonathan Y. Richmond, Editor. 2002, pp. 301 - 310.
9. E. A. Stavskiy, V. N. Bondarenko, N.B. Cherny, S.V. Netesov. Organizing and carrying out works with animals under stationary laboratory and field conditions- Anthology of Biosafety VI. Arthropod Borne Diseases. Jonathan Y. Richmond, Editor.
2003, 178 p., pp. 113 - 150.
10. Evgeniy A. Stavskiy, Barbara Johnson, Robert J. Hawley, Jonathan T. Crane, Nikolay B. Cherny, Irina V. Renau, Sergey V. Netesov. Comparative Analysis of Biosafety Guidelines of the USA, WHO, and Russia (Organizational and Controlling, Medical and sanitary-Antiepidemiological Aspects)// Applied Biosafety, v. 8, n. 3, 2003, p. 118-127.
11. Ставский Е. А., Гришаева О. Н., Леляк А. И., Ларина Н. М., Тимукина Л. А., Митько Л. В., Коваль Р. С., Серебров В. В., Ренау И. В., Культенко О. В. Экспериментальная оценка возможности передачи искусственного гена лейкоцитарного интерферона - -2 человека в другие виды микроорганизмов. // Вестник РАМН. 2004, N 11, с. 29 - 32.
12. Ставский Е. А., Гришаева О. Н., Леляк А. И., Серебров В. В., Нетесов С. В.
Экспериментальная оценка выживания рекомбинантного штамма B. subtilis ВКПМ В-7092 в желудочно-кишечном тракте крупного рогатого скота, его влияния на микробиоценоз кишечника, а также возможности переноса плазмидных генов представителям кишечной микрофлоры.// Ветеринария. 2006, № 12, с. 18-22.
13. Ставский Е. А., Киселев С. А., Ренау И. В., Марченко Ю. В., Культенко О.
В., Бакшеева Г. П., Криницын Л. А., Чернов В. И., Ручкин А. В., Поляков Н. В., Клевасов А. И., Корнишин С. Н., Сандахчиев Л. С. Экспериментальная оценка защитных свойств нетканых материалов одноразовой медицинской специальной одежды. // Гигиена и санитария. № 6, 2006, с. 34 - 39.
14. Биологическая безопасность. Термины и определения. // Под ред. Г.Г. Онищенко, В. В. Кутырева. (М. Н. Ляпин, Е. М. Головко, Т. А. Малюкова, И. Н.
Ежов, Т. А. Костюкова, В. В. Кутырев, С. Д. Кривуля, Ю. М. Федоров, И. Г.
Дроздов, С. В. Нетесов, А. Н. Сергеев, Е. А. Ставский).- Саратов: Приволжское книжное издательство. 2006, 112 с.
15. Stavskiy E.A., Lelyak A.I., Larina N. M., Grishaeva O.N., Serebrov V.V., Gorbunov Yu. A., DubenТ L. G., Timukhina L. A., MitТko L. V., Koval R. S., Khodyrev V.P. Experimental evaluation of biological risks of introduction of the geneengineering-modified microorganism (GMM) B. subtilis VKPM В-7092 into the environment. // The ASA Newsletter, ASA 06-3, Issue No. 114, June 28, 2006- p. 16 - 21.
16. Ставский Е. А., Киселев С. А., Ренау И. В., Культенко О. В., Бакшеева Г. П., Криницын Л. А., Марченко В. Ю., Яшин В. А., Сандахчиев Л. С., Чернов В. И., Ручкин А. В., Поляков Н. В., Клевасов А. И., Корнишин С. Н. Экспериментальная оценка защитных свойств и перспективности применения некоторых нетканых материалов для изготовления средств защиты органов дыхания.// Гигиена и санитария. № 1, 2007, с. 31-34.
17. Ставский Е. А., Леляк А. И., Ларина Н. М., Гришаева О. Н., Серебров В. В., Горбунов Ю. А., Дубень Л. Г., Тимукина Л. А., Митько Л. В., Коваль Р. С., Ходырев В. П. Экспериментальная оценка биологических рисков интродукции генетически модифицированного микроорганизма B. subtilis ВКПМ В -7092 в окружающую среду.// Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2007, № 1.- с. 35-40.
18. Е. А. Ставский, А. И. Леляк, А. Е. Нестеров, И. В. Ренау, Л. Е. Булычев, Ю. В. Немцов, О. В. Культенко, Г. П. Бакшеева. Изучение динамики накопления интерферона - Ц2 человека in vivo, продуцируемого генетически модифицированным микроорганизмом B. subtilis.// Молекулярная медицина. 2007, № 2, с.25-28.
19. Бородулин А. И., Ставский Е. А., Михеев В. Н., Десятков Б. М., Иванова Л.
К., Криницын Л. А., Сергеев А. Н., Шабанов А. Н., Шульгина Н. И. Оценка риска заболевания гриппом в группах типового детского комбината // Проблемы охраны здоровья населения и обеспечения гигиенической и эпидемиологической безопасности окружающей среды.- Новосибирск.- 2007.- С.390-394.
20. Бородулин А. И., Десятков Б. М., Ставский Е. А. и др. Модель для оценки последствий распыла опасных примесей на станции метрополитена. // Безопасность жизнедеятельности.- 2007.- № 11.- С. 28-32.
21. Ставский Е. А., Зубовичене Н. М., Азаев М. Ш., Сергеев А. Н. Использование защитного оборудования и средств индивидуальной защиты при различных уровнях биологической безопасности. - РИА Индустрия Безопасности:
Magazine UNIFORM Russia - 2008. - С.46-47.
Патенты и авторские свидетельства:
1. Л. С. Сандахчиев, Е. А. Ставский, В. В. Зиновьев, Н. А. Маркович, Е. И. Рябчикова, Э. Г. Малыгин, Ю. Н. Мистюрин, Е. Д. Даниленко, Т. В. Воевода, Л. К.
Федосова, В. И. Масычева. Средство для лечения гнойно-некротических ран и ожогов "Коллагель". Патент РФ N 2139044. Приоритет от 16.12.97 г. выдан 10.10.99 г. Бюлл. изобр. № 28.
2. Патент РФ на полезную модель № 54519. Костюм УВекторФ для защиты от патогенных биологических агентов. Патент РФ 54519. 545 МПК А62В 17/00.
Авторы: Е. А. Ставский, К. Е. Ставский, Ю. Н. Мистюрин, А. И. Клевасов, С. Н.
Корнишин, А. В. Ручкин. Регистрационный номер заявки: 2005126782/22.
Опубликовано: 2006.07.10. Бюлл. изобр. № 19.
Нормативно-методические документы:
1. Онищенко Г. Г., Федоров Ю. М., Безсмертный В. Е. и др. Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности). СП 1.3.1285-03.
- М.: Министерство здравоохранения Российской Федерации, 2003.- 152 с.
2. Онищенко Г. Г., Федоров Ю. М., Ставский Е. А. и др. Организация и проведение противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий при натуральной оспе: Методические указания. МУ 3.1.3.5-07. - М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2007.
- 63 с.
3. Шипулин Г. А., Подколзин А. Т., Яцышина С.Б. и др. Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоко-вирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА), у людей: Методические указания. МУК. 4.2.2136-06. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2006. - 23 c.
4. Маренникова С. С., Рябчикова Е. И., Зайцев Б. Н. и др. Методические указания по лабораторной диагностике натуральной оспы Методические указания (проект).
Доклады и тезисы конференций:
1. Antonov N. A., Stavsky E. A., Masycheva V. I., Kiselev S. A., Fedosova L. K., Danilenko E. D., KolokolТtsev A. A. Experimental verification of aerosol use of reaferon. // Program and Abstracts. 2-nd International Conference УAIDS, Cancer and Human RetrovirusesФ, St.-Petersburg, Russia, November 29-December 3, 1993, (p.), p. 34.
2. L. S. Sandakhchiev, S. S. Marennicova, E. A. Stavskiy. Adherence to WHO Containment and Security Recommendations. // WHO Ad Hoc Meeting, 14 - 15 January 1999, Geneva, Switzerland, p.1-18.
3. Е. А. Ставский, Л. А. Криницын, С. В. Нетесов, Н. Б. Черный, С. Н. Бондарев, П. Ф. Иванов, В. Н. Никитин, Г. М. Голошевский. Микропроцессорные контроллеры в системах управления и контроля инженерно - техническими системами биобезопасности корпуса № 1 ГН - ВБ УВекторУ. // Проблемы биологической и экологической безопасности. Сборник материалов международной научной конференции, Оболенск, 22 - 24 мая 2000, с. 115-116.
4. Е. А. Ставский, Н. Б. Черный, Л. А. Криницын, А. С. Едапин, С. В. Нетесов.
Унифицированный бокс 3 класса биобезопасности для микробиологических и вирусологических исследований. // Проблемы биологической и экологической безопасности. Сборник материалов международной научной конференции, Оболенск, 22 - 24 мая 2000, с. 116-117.
5. Н. Б. Черный, Е. А. Ставский, Л. А. Криницын, И. В. Ренау, С. В. Нетесов.
Обеспечение биологической безопасности работ с возбудителями особо опасных вирусных инфекций в ГН - ВБ УВекторУ. // Проблемы биологической и экологической безопасности. Сборник материалов международной научной конференции, Оболенск, 22 - 24 мая 2000, с. 119-120.
6. Е. А. Ставский, Л. А. Криницын, С. В. Нетесов, А. С. Едапин, В. А. Даняев, О. В. Пьянков, Л. Е. Булычев. Оценка возможности равнозначного применения аэрозолей диоктилфталата и турбинного масла для определения защитной эффективности фильтров тонкой очистки воздуха. // Проблемы биологической и экологической безопасности. Сборник материалов международной научной конференции, Оболенск, 22 - 24 мая 2000, с. 436-437.
7. Л. С. Сандахчиев, Е. А. Ставский, Н. Б. Черный. Биологическая безопасность при проведении работ с вирусом натуральной оспы в Сотрудничающем центре ВОЗ ГН - ВБ УВекторУ.// Проблемы биологической и экологической безопасности. Сборник материалов международной научной конференции, Оболенск, - 24 мая 2000, с. 113-115.
8. L. A. Krinitsyn, E. A. Stavskiy, S. V. Netesov, A. S. Edapin, V. A. Danyaev, O. V.
Pyankov, L. E. Bulychev. Assessment of the possibility to use aerosolized dioktylphtalate and turbine oil for equvivalent testing of HEPA - filter efficacy. // Protection against microbial threats. Inauguration of the Swedish containment laboratories, Stockholm, 8 - 10 October, 2000, p. 28.
9. Evgeniy A. Stavskiy, Ph.D., Robert J. Hawley, Ph.D., Jonathan T. Crane, AIA. A Comparison of Containment Facilities and Guidelines in Russiu and the United States.// Protection against microbial threats. Inauguration of the Swedish containment laboratories, Stockholm, 8 - 10 October, 2000, p. 26.
10. Е. А. Ставский, В. И. Чернов, В. Г. Орловский. Комплекс экстренных карантинных и обсервационных мероприятий, проведенных в ГН - ВБ УВекторУ при случае, подозрительном на завозную чуму// Труды. Новые информационные технологии в медицине и экологии, IХ Международная конференция и дискуссионный клуб. Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 1 июня - 10 июня 2001 г, с.142144.
11. Е. А. Ставский, Н. Б. Черный. Биологическая безопасность при проведении работ с вирусами геморрагических лихорадок и натуральной оспы в ГН - ВБ УВекторУ// Труды. Новые информационные технологии в медицине и экологии, IХ Международная конференция и дискуссионный клуб. Украина, Крым, ЯлтаГурзуф, 1 июня - 10 июня 2001 г, с.145-147.
12. А. А Чепурнов, Е. А. Ставский. Методы специфической детекции контаминации вирусом Эбола биологических образцов и зонированных помещений ГН - ВБ УВекторУ// Труды. Новые информационные технологии в медицине и экологии, IХ Международная конференция и дискуссионный клуб. Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 1 июня - 10 июня 2001 г, с.148-151.
13. N. B. Cherny, E. A. Stavskiy, S. V. Netesov. Providing biosafety in research work with>
14. E.A. Stavskiy, S.V. Zykov. Evalution of physiological status of virologists working in personal protection clothes // Conference proceedings. The 44th Annual Biological Safety Conference. 17th Anniversary of the American Biological Safety Associaton. Radisson Hotel New Orleans, LA, October 21-24, 2001, p. 35.
15. E.A. Stavskiy, N.B. Cherny, L.A Krinitsin, A.S. Edapin, V.A. Danyayev. Isolating>
16. T.S. Chepurnova, N.B. Cherny, E.A. Stavskiy. Monitoring of specific contamination of laboratory during work with Filoviruses // Conference proceedings. The 44th Annual Biological Safety Conference. 17th Anniversary of the American Biological Safety Associaton. Radisson Hotel New Orleans, LA, October 21-24, 2001, p.37.
17. E.A. Stavskiy, N.B. Cherny, I.V. Renau, S.V. Netesov. Comparative analysis of biosafety guidelines of the USA, WHO and RUSSIA (organizational and controlling, medical and sanitary-antiepidemiological aspects)// Conference proceedings. The 45th Annual Biological Safety Conference Biosafety by the Bay! 18th Anniversary of the American Biological Safety Associaton. Hyatt Hotel San Francisco, CA, October 20-23, 2002, p.48.
18. Tatiana S. Chepurnova, Nikolai B. Cherny, Evgueni A. Stavsky. Decontamination of laboratory facilities post suspension of work on Filoviruses and assessment of its efficacy// Conference proceedings. The 45th Annual Biological Safety Conference Biosafety by the Bay! 18th Anniversary of the American Biological Safety Association. Hyatt Hotel San Francisco, CA, October 20-23, 2002, p.57.
19. Ауслендер В. Л., Горбунов В. А., Зайцев Б. Н., Кругляков Э. П., Культенко О. В., Нетесов С. В., Ренау И.В., Сербин В. И., Ставский Е. А., Ткаченко В. О., Черный Н. Б. Обеззараживание ускоренными электронами предметов, образцов и проб внешней среды, контаминированных или потенциально контаминированных бактериальными и вирусными микроорганизмами. - Проблема инфекции в клинической медицине//Тезисы докладов научной конференции и VIII съезда Итало - Российского общества по инфекционным болезням 5-6 декабря 2002 г., 430 с., с 23.
20. Александров В. С., Беркутов А. В., Бачинский А. Г., Бородулин А. И., Криницын Л. А., Мартынюк Р. А., Нетесов С. В., Попов А.С., Сандахчиев Л. С., Сафатов А. С., Ставский Е. А. Проблемы защиты населения Сибирского региона от природных и техногенных угроз биологического характера. //Материалы научно-практической конференции УДальнейшее совершенствование природной, техногенной и пожарной безопасности населения и территорий - устойчивое развитие Сибирского регионаФ 15 сентября 2004 г., Новосибирск, Агентство УСибпринтФ, С.26-27.
21. Ставский Е. А. Биологическая безопасность при проведении работ с вирусами геморрагических лихорадок и натуральной оспы в ГН - ВБ УВекторФ// Материалы научно-практической конференции УДальнейшее совершенствование природной, техногенной и пожарной безопасности населения и территорий - устойчивое развитие Сибирского регионаФ 15 сентября 2004 г., Новосибирск, Агентство УСибпринтФ, С.126-127.
22. Короткин Л. М., Никифоров В. В., Кузовлев О. П., Локтева Л. И., Акинфеева Л. А., Василевич И. В.. Кузубов В. И., Чепурнов А. А., Ставский Е. А., Нетесов С. В., Щербаков Г. Я., Евстигнеев В. И. Иммунобиологические препараты в профилактике и лечении геморрагической лихорадки Эбола. // Противочумные учреждения России и их роль в обеспечении эпидемиологического благополучия населения страны: Материалы конференции, посвященной 70 - летию Противочумного центра - Москва РОО ЛО Сокольники, 2004. Цс. 205 - 212.
23. Stavskiy E. A., Gorbunov V. A., Zaitsev B. N., Kultenko O. V., Renau I.V., Serbin V. I., Tkachenko V. O., PТyankov O. V., Netesov S. V., Auslender V. L., Kruglyakov E. P. Decontamination of environmental samples and specimens contaminated or potentially contaminated with bacteria and viruses using accelerated electrons // Technical program. The Sixth International chemical and Biological Medical Treatment Symposium. 30 april - 5 may 2006. Spiez, Switzerland, p.31.
24. Бородулин А. И., Ставский Е. А., Шлычков В. А., Бакшеева Г. А., Десятков Б. М., Золин В. В., Культенко О. В., Пьянков О. В., Ренау И. В., Михеев В. П., Докучаева С. Ф., Иванова Л. К., Каримова Т. В., Федянин А. П. Образование и распространение аэрозолей при вскрытии в помещении конверта с подозрительным порошком // Тезисы докладов 15 заседания рабочей группы Аэрозоли Сибири. - Томск. - 2007. - С. 28.
25. Дроздов И. Г., Сергеев А. Н., Ставский Е. А. Актуальные вопросы биологической безопасности. Роль и место ГН - ВБ Вектор в системе биологической безопасности. //Материалы научно-практической конференции УПроблемы совершенствования природной, техногенной и пожарной безопасности населения и территорий муниципальных образований субъектов Российской Федерации Сибирского федерального округаФ 17 сентября 2008 г., Новосибирск, 2008. - С.10-15.