Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по сельскому хозяйству
На правах рукописи
ТУРДИЕВ ШАМСУЛЛО АБДУЛЛОЕВИЧ
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С БРУЦЕЛЛЕЗОМ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ
В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН
06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора ветеринарных наук
Душанбе - 2012
Работа выполнена в лаборатории по изучению бруцеллеза Ветеринарного института Таджикской академии сельскохозяйственных наук и лаборатории микробиотехнологии Таджикского аграрного университета им. Ш. Шотемура.
Научный консультант: | доктор ветеринарных наук, профессор, академик И. Саттори |
Официальные оппоненты: | доктор биологических наук, профессор, член-корреспондент Россельхозакадемии Девришов Д.А.; доктор ветеринарных наук, член-корреспондент ТАСХН Аноятбеков М.К.; доктор медицинских наук, профессор Камаридинов Х.К. |
Ведущая организация: ФГОУ ВПО Саратовский государственный аграрный
университет им. Н.И. Вавилова
Защита диссертации состоится 30 декабря 2012 г. в 10 ч на заседании диссертационного совета ДМ 050.001.01 при Ветеринарном институте Таджикской академии сельскохозяйственных наук по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Каххорова, 43, тел. (992-372) 27-39-95.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ветеринарного института Таджикской академии сельскохозяйственных наук по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Каххорова, или на официальных сайтах ВИ ТАСХН www.tajnivi.tj и ВАКа России www.vak2.ed.gov.ru
Автореферат разослан 29 сентября 2012 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук, профессор | Ярбаев Н.Я. |
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. Особое место среди инфекционных болезней животных, сдерживающих развитие животноводства, в том числе в Республике Таджикистан (РТ), занимает бруцеллез, наносящий огромный экономический ущерб вследствие широкого распространения, большой пораженности поголовья животных, вариабельности и убиквитарности возбудителя заболевания (способности к обитанию в организме самых разнообразных видов живых существ), латентного (и ассоциированного) течения инфекции, которое осложняет диагностику и специфическую профилактику бруцеллеза.
Одной из актуальных проблем здравоохранения является бруцеллез людей, заражение которых происходит при непосредственном контакте с больными животными, через инфицированные (контаминированные) предметы внешней среды или при употреблении необеззараженных продуктов животного происхождения. Контактный путь передачи возбудителя болезни представляет исключительную угрозу для лиц, оказывающих помощь больным животным (особенно при родовспоможении) или осуществляющих анатомическое вскрытие трупов и разделку туш. Очень большое социальное значение имеет борьба с бруцеллезом мелкого рогатого скота (МРС), заражение от которого нередко приводит к инвалидности (Белобаб В.И., 1998).
Несмотря на значительные успехи в области изучения многих вопросов эпизоотологии и эпидемиологии, клинических проявлений и патогенеза, разработки средств и методов диагностики и специфической профилактики, бруцеллез, особенно МРС, имеет повсеместное распространение в Таджикистане. Однако данные по неблагополучию животноводческих хозяйств по этому заболеванию не отражают эпизоотическую ситуацию, которую осложняют антропогенные факторы: изменение форм хозяйствования (резкое развитие частного, мелкотоварного животноводства), технологии животноводства, увеличение числа хозяйствующих субъектов, совместное содержание разных видов животных, рыночные условия экономики и др.
Напряженность эпизоотической ситуации по бруцеллезу МРС в РТ обусловлена природно-географическими и хозяйственно-экономическими особенностями регионов, что определяет необходимость выявления факторов, влияющих на распространение и течение инфекции, проявление заболевания, разработки наиболее эффективных систем оздоровительных мероприятий с учетом условий и форм хозяйствования (Иванов Н.П., 1984).
Характерной особенностью этой инфекции является преимущественное поражение сельскохозяйственных парнокопытных животных, причем наиболее восприимчивы и чувствительны к ней половозрелые молодые особи (Здрадовский П.Ф. и др., 1953).
Наиболее частыми клиническими признаками бруцеллеза у животных являются аборты и послеродовые осложнения (задержание последа, метриты), которые в неблагополучном стаде, особенно в начале появления инфекции, приобретают массовый характер, затем напряженность течения инфекции снижается, количество абортов сокращается. Так как повторно прерывание беременности происходит редко, аборты и другие признаки бруцеллеза не проявляются.
Больное животное, являющееся основным источником возбудителя инфекции, длительно (до 7 лет - срок наблюдения) выделяет заразное начало во внешнюю среду, особенно в предабортном состоянии, во время аборта с околоплодными водами, последом, абортированным плодом, выделениями из гениталиев и т.д. (Жованик П.Н., 1975). От 60 до 100% больных бруцеллезом животных обильно и длительно выделяют возбудителя болезни с молоком (Вершилова П.А. и др., 1970; Жованик П.Н., 1975). В инфицированной внешней среде (помещения, стойла, корма, предметы ухода и т.д.) бруцеллы могут сохранять жизнеспособность в течение длительного времени (месяцы) (Калачев С., 1996). Поэтому при вводе в неблагополучное стадо новых неиммунных животных, которые заражаются через слизистые оболочки и поврежденный кожный покров, угасающая энзоотия обостряется, сопровождаясь массовым клиническим проявлением заболевания и выявлением положительно реагирующих особей.
Изменчивость биологических свойств и антигенной структуры возбудителя бруцеллеза (Negre et al., 1912; White P.Y. et al., 1951; Косилов И.А., 1974) обусловливает изыскание принципиально новых диагностических средств (Иванов Н.П., 1984) и профилактических препаратов (Белобаб В.И., 1998).
Иммунитет против бруцеллеза может быть создан как неживыми, так и живыми вакцинами. Последние, среди которых наибольшее признание получили вакцины из штаммов Brucella abortus 19 и Brucella melitensis Rev-1, большинство авторов считает наиболее эффективными. Превентивные свойства вакцин из штаммов Br. abortus 19 и Br. melitensis Rev-1 могут быть повышены путем их сочетанного применения с фагом, гиалуронидазой, позитивной сывороткой и т.д. (Воробьев А.Л. и др., 1994; Иванов Н.П. и др., 1996).
Наряду с этим продолжается поиск в области создания неживых вакцин. Установлены (Иванов Н.П. и др., 1992) протективные свойства отдельных клеточных структур бруцелл: наиболее выраженной иммуногенностью обладают клеточные стенки бактерий, цитоплазматические структуры не оказывают отрицательного воздействия на выработку иммунитета. Производственные испытания созданнной неживой противобруцеллезной вакцины (Иванов Н.П. и др., 1998) дали обнадеживающие результаты.
Правильное определение границ эпизоотического очага и неблагополучного пункта, организационно-хозяйственные и ветеринарно-санитарные меры являются важным звеном в системе противобруцеллезных мероприятий. Кроме того, существование возбудителя как вида в определенных нозоареалах определяет необходимость особого внимание к недопущению заноса возбудителя инфекции в оздоровленные хозяйства (фермы, стада, подворья).
Вышеизложенное обусловливает актуальность проведенных нами исследований, целью которых явилось совершенствование мер борьбы с бруцеллезом сельскохозяйственных животных в Республике Таджикистан в новых экономических условиях.
Для достижения поставленной цели решены следующие задачи:
1. Провести эпизоотологический мониторинг распространения:
- бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза в овцеводческих хозяйствах районов республиканского подчинения (РРП);
- бруцеллеза среди мелкого и крупного рогатого скота в индивидуальных и фермерских хозяйствах РРП.
2. Разработать оптимальные схемы:
- специфической профилактики бруцеллеза молодняка овец и взрослых животных вакциной из штамма Рев-1 подкожным и конъюнктивальным методами;
- одновременной вакцинации овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
3. В экспериментальных условиях определить эффективность:
- конъюнктивального метода введения вакцины Рев-1 в малой дозе;
- комплексной иммунизации овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
4. Провести производственные испытания разработанных схем:
- специфической профилактики овец против бруцеллеза вакциной из штамма Рев-1;
- одновременной иммунизации против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
5. Определить эффективность препарата Бровадез-плюс при дезинфекции животноводческих помещений.
6. Разработать системы:
- спецефической профилактики бруцеллеза овец вакциной из штамма Рев-1 модифицированными подкожным и конъюнктивальным методами;
- комплексной иммунизации овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
Научная новизна. При эпизоотологическом мониторинге в 2001 - 2005 гг. в РРП выявлено 2,1% больных овец из числа исследованных. Зараженность частных животных (2,7%) была выше, чем общественных (1,9%). Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что больного бруцеллезом МРС в частных хозяйствах больше (3,04 - 8,7%), чем в общественных (0,5 - 0,8%). В районах республиканского подчинения в 2001 - 2005 гг. возбудители сальмонеллеза и пастереллеза выделены соответственно в 3,8 и 29,2% проб патологического материала от овец. При комплексном исследовании МРС в 17,9% случаев диагностированы смешанные инфекции сальмонеллеза с пастереллезом, 11,0% - бруцеллеза с сальмонеллезом. 18,2% овец, больных сальмонеллезом, 15,3 - пастереллезом, и 20% животных, от которых изолировали ассоциации сальмонелл с пастереллами, положительно реагировали в серологических реакциях на бруцеллез. Впервые в 2005 - 2007 гг. в четырех неблагополучных по бруцеллезу кишлаках Шахринавского района проведено полевое исследование на бруцеллез.
Для повышения эффективности метода дифференциальной диагностики животных, привитых вакциной из штамма 82, от естественно больных бруцеллезом животных предложено к исследуемой сыворотке добавлять антиген, полученный из S-R-формы вакцинного штамма 82, культуры бруцелл которого находятся в S-R-форме, следовательно, в сыворотке крови животных, привитых этой вакциной, вырабатываются S-R-антитела, способные вступать во взаимодействие с родственным R-82 антигеном, в результате чего образуется комплекс R-антитело + S-R-антиген. Разработан экспресс-метод диагностики бруцеллеза коров роз-бенгал пробой с молоком (РБПМ).
Установлено, что при профилактических и оздоровительных мероприятиях от бруцеллёза МРС и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Рев-1 в хозяйствах Республики Таджикистан овец и коз необходимо вакцинировать в полной дозе (2 млрд м.к.) в возрасте 3 - 5 месяцев, не исследуя на бруцеллез, взрослых животных ежегодно реимунизировать через 2 года после иммунизации в малой дозе (2 млн м.к.). Предложен конъюнктивальный метод ежегодной иммунизации МРС независимо от пола и возраста вакциной из штамма Рев-1 в дозе 0,03 мл (50 млн м.к.), обеспечивающий напряженный иммунитет.
Выявлено, что при введении только вакцины из штамма Рев-1 и одновременно этого препарата с ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в организме морских свинок, кроликов и ярок происходит сравнительно быстрое и широкое расселение бруцелл вакцинного штамма. Доказано, что при комплексном применении морским свинкам и кроликам указанные биопрепараты не влияют отрицательно на иммуногенность друг друга. В эксперименте установлено, что одновременная прививка против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза, являясь безвредной и иммуногенной, предохраняет животных от заражения вышеназванными инфекциями; комплексное применение вакцины из штамма Рев-1 и ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза способствует формированию клеточного и гуморального иммунитета у привитых животных, не оказывает отрицательного влияния на факторы естественной резистентности организма овец.
В производственных условиях определено, что одновременная прививка овец против бруцеллеза (вакциной из штамма Рев-1), сальмонеллеза и пастереллеза (ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза) по эффективности (95%) не уступает раздельной иммунизации против бруцеллеза и ассоциированной прививке против сальмонеллеза и пастереллеза.
Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований вошли в нормативную документацию:
1. Инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).
2. Технические условия на ассоциированную гидроокисьалюминиевую формолвакцину против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).
3. Наставление по применению ассоциированной гидроокисьалюминиевой формолвакцины против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).
4. Система профилактических и оздоровительных мероприятий против бруцеллеза мелкого рогатого скота и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Рев-1 в хозяйствах Республики Таджикистан (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).
5. Методические указания по серологической диагностике бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота (утв. ГУВ МСХ РТ, 2003).
6. Инструкция по изготовлению и контролю антигена цветного для роз-бенгал пробы (РБП) при диагностике бруцеллеза у животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
7. Технические условия на антиген цветной для роз-бенгал пробы (РБП) при диагностике бруцеллеза у животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
8. Наставление по применению антигена цветного для роз-бенгал пробы (РБП) при диагностике бруцеллеза у животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
9. Инструкция по изготовлению и контролю единого антигена для РА, РСК, РДСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
10. Технические условия на единый антиген для РА, РСК, РДСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
11. Наставление по применению единого антигена для РА, РСК, РДСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
12. Система профилактических и оздоровительных мероприятий против бруцеллеза мелкого рогатого скота и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Br. melitensis Рев-1 (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
13. Наставление по диагностике бруцеллеза животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2006).
14. Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2006).
15. Рекомендации по применению комплексной иммунизации мелкого рогатого скота против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастерелеза (утв. ГУВ МСХ РТ, 2006).
16. Система профилактических и оздоровительных мероприятий от бруцеллеза мелкого рогатого скота и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Рев-1 в хозяйствах РТ (утв. СГВН МСХ РТ, 2011).
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
1. Результаты эпизоотологического мониторинга распространения бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза в овцеводческих хозяйствах; бруцеллеза среди мелкого и крупного рогатого скота в индивидуальных и фермерских хозяйствах РРП.
2. Схемы специфической профилактики бруцеллеза молодняка овец и взрослых животных вакциной из штамма Рев-1 подкожным и конъюнктивальным методами; одновременной вакцинации овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
3. Результаты экспериментального изучения эффективности конъюнктивального метода введения вакцины Рев-1 в малой дозе, комплексной иммунизации овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
4. Результаты производственных испытаний эффективности разработанных схем специфической профилактики овец против бруцеллеза вакциной из штамма Рев-1 и одновременной иммунизации против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
5. Результаты экспериментального определения и производственной проверки эффективности препарата Бровадез-плюс при дезинфекции животноводческих помещений.
6. Системы спецефической профилактики бруцеллеза овец вакциной из штамма Рев-1 модифицированными подкожным и конъюнктивальным методами и комплексной иммунизации овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ТаджНИВИ (1998 - 2006); республиканских конференциях и семинарах-совещаниях (Душанбе, 1998 - 2006); Международной научно-практической конференции Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях (Воронеж, 2002); Международной научной конференции Состояние и перспективы развития ветеринарной науки и практики, посвященной государственной программе Аул (Алматы, 2003); Международной научно-практической конференции Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях, посвященной 60-летию ТаджНИВИ (Душанбе, 2003); II Международной конференции Актуальные вопросы диагностики болезней животных (Алматы, 2005); III Международной конференции Состояние и перспективы развития производства ветеринарных биопрепаратов (Алматы, 2006), Международной научно-практической конференции Research and Clinical Application of Traditional Medicinein Xinjiangand Neighbouring Countries (Урумчи, 2011), Международной научно-практической конференции Ветеринарные проблемы в Центральной Азии - Продовольственная безопасность: Использование современных методов диагностики и профилактики инфекционных болезней животных (Душанбе, 2011)
Публикации. По результатам исследований опубликованы 39 научных работ, получены 8 патентов РТ.
Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.
Диссертация изложена на 371 странице текста, иллюстрирована 34 таблицами и 17 рисунками. Список литературы включает 438 наименований. В приложение включены материалы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Работа выполнена в 2000 - 2010 гг. в лаборатории по изучению бруцеллеза сельскохозяйственных животных Ветеринарного института Таджикской академии сельскохозяйственных наук (ТАСХН) и лаборатории микробиотехнологии Таджикского аграрного университета им. Ш. Шотемура в соответствии с республиканскими научно-техническими программами Разроботать и внедрить усовершенствованную систему иммунизации и реиммунизации ярок вакциной из штамма Рев-1 против бруцеллеза на 1996 - 2000 гг., Разработать и внедрить научно-обоснованную систему мероприятий по оздоровлению животноводческих хозяйств от бруцеллеза животных с учетом новых методов хозяйствования на 2001 - 2005 гг., зарегистрированной в НПИЦентре РТ (№ госрегистрации 000000966).
Научно-производственные опыты, апробация и производственная проверка полученных результатов проведены в хозяйствах РРП.
В ряде комплексных исследований принимали участие сотрудники лаборатории вирусологии Ветеринарного института ТАСХН К.Б. Махмудов, Н.Р. Сатторов, З.С. Каландаров, Р.М. Юсупов, К.У. Идиев, А.Х. Махмудов, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и сотрудничество.
Исследование распространения бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза овец и коз проводили путем анализа и обобщения данных лабораторий по изучению бруцеллеза сельскохозяйственных животных и вирусологии Ветеринарного института ТАСХН, статистических материалов СГВН МСХ РТ.
Бруцеллез, сальмонеллез и пастереллез диагностировали на основании результатов эпизоотологических, бактериологических и серологических исследований с учетом клинических признаков болезни, руководствуясь при этом общепринятыми методами.
Бактериологические посевы из подчелюстных, шейных, аксиллярных, паховых, парааортального лимфатических узлов, печени, селезенки и костного мозга проводили в две пробирки с мясопептонным печеночно-глюкозно-глицериновым агаром (МППГГА) и соевым агаром и одну пробирку с мясопептонным печеночно-глюкозно-глицериновым бульоном (МППГГБ). Посевы инкубировали при температуре 37оС в течение 30 сут.
Индекс инфицированности (ИИ) определяли по формуле:
где Квк - количество выделенных культур,
Кж - количество животных в опыте,
Ко - количество объектов, из которых проводили высевы.
Иммунологическую реактивность животных и антигенную активность культур бруцелл вакцинного штамма определяли в реакциях агглютинации (РА), связывания комплемента (РСК), а антитела к антигенам возбудителей сальмонеллеза и пастереллеза в сыворотках крови овец - в РА.
Бактериологические и серологические исследования проводили на базе Гиссарской ветеринарной лаборатории и лабораторий по изучению бруцеллеза сельскохозяйственных животных и вирусологии Ветеринарного института ТАСХН.
Эксперименты проводили на 140 морских свинках (массой 350 - 400 г), 24 кроликах породы шиншилла (массой 2,0 - 2,3 кг), 1200 ярках (в возрасте 2 - 6 месяцев, гиссарской породы); производственные испытания - на 13000 овцах (гиссарской породы) разного возраста.
В работе использовали:
1) сухую живую вакцину из штамма Br. melitensis Рев-1 (далее вакцина из штамма Рев-1), производства НПП Антиген (Республика Казахстан);
2) ассоциированную формолвакцину против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных (далее ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и пастереллеза), изготовленную в Ветеринарном институте ТАСХН.
Перед применением вакцины культуры бруцелл вакцинного штамма изучали на диссоциацию и определяли количество живых микробных клеток в препарате. Для этого взвесь культуры засевали в чашки Петри на соевый агар с таким расчетом, чтобы получить большое количество изолированных друг от друга колоний.
Жизнеспособность бруцелл в каждой серии вакцины, которую разводили до концентрации 10 м.к./мл, определяли путем посева на поверхность агара в чашки Петри. После определения количества жизнеспособных бруцелл в растворе каждой ампулы вычисляли средний арифметический показатель данной серии препарата.
Для оценки напряженности иммунитета морских свинок (через 90 сут после вакцинации) и кроликов (через 30 дней после прививки) подкожно в область паха заражали вирулентной культурой Br. melitensis в объеме 1 мл (100 м.к. - 10-кратная заражающая доза); кроликов (через 30 сут после иммунизации) также заражали культурами вирулентных штаммов Salmonella dublin и Рasteurella multocida в объеме по 3 мл (500 млн м.к.).
За подопытными и контрольными животными проводили клиническое наблюдение с измерением температуры тела в течение 10 дней.
Через 35 сут после заражения лабораторных животных обескровливали и проводили патологоанатомические, серологические и бактериологические исследования.
У подопытных ярок до и после вакцинации на 5-, 15-, 20- и 30-ый дни определяли количество общего белка (биуретовым методом), бактерицидную (фотонефелометрически) и фагоцитарную активность крови (методом А.И. Иванова и Б.А. Чухлова, 1987).
Экономическую эффективность научных разработок рассчитывали согласно Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий (утв. ГУВ МСХ СССР в 1982 г.), а также в соответствии с Методикой определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений (утв. МСХ СССР в 1983 г.).
Методики отдельных экспериментов изложены в соответствующих разделах диссертационной работы.
Цифровой материал диссертации обработан статистически по критерию Стьюдента для проверки достоверности различий. Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при p≤0,05 (Лакин Г.Ф., 1990).
За основу выводов и практических предложений взяты результаты контролируемых опытов в лабораторных и производственных условиях.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Эпизоотологический мониторинг
бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза МРС
в районах республиканского подчинения
Наиболее распространенными возбудителями заболеваний репродуктивных органов животных в овцеводческих хозяйствах Таджикистана являются бруцеллы, сальмонеллы, хламидии, кампилобактерии и пастереллы. Бруцеллез животных наибольшее распространение получил в Центральной Азии, Казахстане, в регионах Сибири, Урала, Поволжья, Кавказа и некоторых других.
В 2001 - 2005 гг., по данным СГВН МСХ РТ, в РРП серологически исследованы 174685 гол. МРС, в том числе 124648 (71,4%) - общественных, 50037 (28,6%) - частных, среди которых бруцеллез выявлен у 3691 животных (2,1%).
Зараженность частных животных (2,7%) была выше, чем общественных (1,9%). Наибольшее количество больного МРС выявлено в 2002 г. (2,8%), наименьшее - в 2005 г. Соответствующие значения в общественном секторе - 2,2% (2004 г.), 1,4 (2002 г.), в частном - 4,6 (2002 г.), 1,0% (2005 г.).
Пик заболеваемости овец бруцеллезом в целом по РРП - 2002 г., когда болезнью были поражены 2,8% исследованных животных. В общественных хозяйствах отмечали два (2001 г. - 2,0%, 2004 г. - 2,2%), среди частного МРС один пик заболеваемости (2002 г. - 4,6%).
Распространению бруцеллеза среди овец и коз в РРП способствуют:
- неполный охват животных иммунизацией против бруцеллеза;
- непроведение комплексных серологических исследований МРС в полном объеме в связи с условиями отгонно-пастбищного овцеводства и изменением формы собственности хозяйств;
- неэффективность проводимых мероприятий по уничтожению возбудителя болезни во внешней среде, невыполнение своевременно и в полном объеме работ по санитарному ремонту загонов и близлежащей территории;
- смешивание различных в эпизоотическом отношении групп животных, особенно в период их стойлового содержания;
- контакт различных в эпизоотическом отношении групп овец при перегоне;
- использование молодняка, полученного от больного бруцеллезом МРС, для воспроизводства стада;
- торговля больными бруцеллезом животными и перемещение их из одного региона в другой.
В результате бактериологических исследований в 2001 - 2005 гг., по данным Национального центра ветеринарной диагностики СГВН МСХ РТ, из 133 проб патологического материала (абортированные плоды) от овец не выделен возбудитель бруцеллеза. Однако по данным серологических исследований количество больных бруцеллезом животных составило 1,6 - 2,8%.
В этот период также изучены 4777 проб патологического материала (абортированные плоды и паренхиматозные органы) от овец на сальмонеллез и 1663 - на пастереллез, возбудители которых выделены соответственно в 3,8 и 29,2% проб. Наибольше количество положительных проб на сальмонеллез и пастереллез получено в 2001 г. (соответственно 71,4 и 88,6%), наименьшее - 2005 г. (соответственно 0,6 и 9,6%).
Распространение сальмонеллеза и пастереллеза в овцеводческих хозяйствах РРП обусловлено непроведением прививок против этих болезней, которые протекали как в виде моноинфекций, так и ассоциаций, что определяет необходимость применения ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза, разработанной Ветеринарным институтом ТАСХН (Сатторов И.Т. и др., 1999).
В 2001 - 2005 гг. нами исследованы сыворотки крови (12872 пробы) и патологический материал (92 абортированные плода и пробы паренхиматозных органов) от МРС разного возраста трех овцеводческих хозяйств Гиссарского и Варзобского районов и частных животных двух кишлаков (в последних иммунизация овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза не проводилась) Шахринавского района.
Больных бруцеллезом овец в частных хозяйствах больше (3,0 - 8,7%), чем в общественных (0,5 - 0,8%), что обусловлено непроведением серологической диагностики, перемещением больных животных (купля / продажа) в частном секторе, содержанием больных овец, которых из экономических соображений владельцы не сдают на мясо, отсутствием специфической профилактики болезни.
При бактериологическом исследовании 36 абортированных плодов выделили 9 сальмонелл (25,0%), 7 хламидий (19,4%), 3 бруцеллы (8,6%) и 4 ассоциации бруцелл с сальмонеллами (11,0%).
От вынужденно забитого подозрительного на сальмонеллез и пастереллез МРС разного возраста при бактериологическом исследовании 56 проб патологического материала (паренхиматозные органы) выделили 33 пастереллы (58,9%), 13 сальмонелл (23,2%), 10 ассоциаций сальмонелл с пастереллами. Антитела против бруцеллеза обнаружены в сыворотках крови соответственно у 6 (18,2%), 2 (15,3%) и 2 (20%) животных.
Широкое распространение бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза в овцеводческих хозяйствах РРП осложняется их ассоциированным течением, что определяет необходимость разработки метода одновременного применения средств специфической профилактики бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
3.2. Эпизоотологический мониторинг бруцеллеза
среди МРС и КРС в индивидуальных и фермерских хозяйствах РРП
В 2005 - 2007 гг. в четырех неблагополучных по бруцеллезу кишлаках Шахринавского района проведено полевое исследование на бруцеллез.
МРС исследовали два раза в год: перед отгоном животных на летние пастбища и после возвращения с них или в этот период (для кишлаков, в которых овец и коз не отгоняют на летние пастбища).
Количество животных обследованных в 1-ый визит в 5-ый визит сократилось на 45,87%. Из 800 гол. МРС, которые исследованы в 1-ый визит, до 5-го остались в стаде 433 гол., в том числе 216 гол. (49,88%) овцематок, 217 (50,12%) козематок, что свидетельствует о значительном обороте МРС. Если в 1-ый визит было 275 овцематок, а во-2-ой их количество незначительно увеличилось на 6 гол., то за соответствующий период количество ягнят уменьшилось на 59,65%.
Серологическим исследованием на бруцеллез в целом в 1-ый визит выявлено 4,25% больного МРС, затем его количество увеличилось до 5,43% во 2-ой визит и стало снижаться в 3-ий и 4-ый визиты (соответственно 5,11 и 5,0%), однако в 5-ый визит было выявлено значительное количество положительно реагирующих на бруцеллез овец и коз - 6%.
С учетом вида животного в целом установлено, что овцы болеют бруцеллезом чаще, чем козы. Наблюдалось постоянное увеличение положительно реагирующих овец с 4,56% в 1-ый до 7,53% в 5-ый визит. Заболеваемость коз имела волнообразный характер: в 1-ый визит выявлено 3,95%, во 2-ой - 4,43, в 3-ий - 3,62, 4-ый - 3,2 и 5-ый - 4,1% положительно реагирующих животных.
Между заболеваемостью овцематок и ярок, а также козематок и козочек не выявлено зависимости, однако положительно реагирующих ярок и козочек выделяли чаще, чем соответственно овце- (кроме 1-го визита) и козематок (кроме 1- и 2-го визитов). Заболеваемость ярок с 1-го по 4-ый визит резко выросла (с 4,17 до 9,9%), а в 5-ый визит незначительно снизилась (9,26%). Рост количества положительно реагировавших овцематок был не таким резким (1-ый визит - 4,73%, 2-ой - 6,1, 3-ий - 5,83, 4-ый - 4,6 и 5-ый - 6,97%).
Сравнивая в целом заболеваемость козематок и козочек, можно утверждать о неполном параллелизме между этими показателями. В 1-ый и 2-ой визиты зависимости между соответствующими показателями не выявлено (козематки: 1-ый визит - 4,14, 2-ой - 4,72%; козочки: 1-ый визит 3,48, 2-ой - 3,22%), однако в 3-ий - 5-ый визиты число положительно реагировавших козематок и козочек сначала снижалось (соответственно с 3,4 до 2,84 и с 4,62 до 4,3%), а затем увеличивалось (соответственно до 3,4 и 6,25%).
Учитывая, что больное животное выделяет заразное начало во внешнюю среду, передачу возбудителя при контакте здоровых животных с больными, а также имеющиеся сообщения о межвидовой передаче инфекционного начала, нами в рамках полевого исследования на бруцеллез в РРП в 2007 г. изучена возможность миграции бруцелл от мелкого рогатого скота к крупному и наоборот.
Исследования проведены как в частных хозяйствах, в которых изучалось распространение бруцеллеза среди овец и коз, так и в соседних частных хозяйствах, в которых эти виды животных не подвергали исследованию или не содержатся.
Серологическому исследованию на бруцеллез в 1-ый визит подвергнута 621, во 2-ой - 463 коровы в возрасте от 1 года до 16 лет Наибольшее количество животных 137 (22,06%) из 621 было в возрасте 1 года.
В большинстве исследованных домохозяйств не наблюдали случаев болезни мелкого и крупного рогатого скота. В 2 из 4 частных хозяйств, в которых выделены больные овцы и козы, наблюдали положительно реагировавших на бруцеллез коров, однако в 2 частных хозяйствах, несмотря на то, что в них регистрировали больной бруцеллезом МРС, заболевание среди коров не отмечали. Но примечателен факт, что больные бруцеллезом коровы выделены только в кишлаках, в которых овец и коз не отгоняют на летние пастбища, поэтому здесь крупный и мелкий рогатый скот содержится совместно и выпасается в одном месте. Следовательно, возможность заражения крупного рогатого скота от мелкого не исключается.
3.3. Дифференциация поствакцинальных реакций
от реакций при естественном бруцеллезе
Способ дифференциации вакцинированных животных от больных бруцеллезом с помощью теста: пробы с меркептан-этанолом, риванолом, определение терморезистентности и диффузной преципитации в агаровом геле - не позволяет надежно дифференцировать вакцинированных от больных бруцеллезом животных.
Для дифференциации поствакцинальных реакций от реакций при естественном бруцеллезе исследуемая сыворотка проверяется в РА, РСК со стандартным биофабричным антигеном, изготовленным из S-формы бруцелл и антигеном, полученным из штамма R-1096. При получении положительного результата в РА или РСК с R-1096 антигеном реакцию считаю вакцинальной. Однако в случае наличия в сыворотке крови животных одновременно противобруцеллезных антител вакцинного и вирулентного штаммов дифференцировать поствакцинальные реакция от реакций при естественном бруцеллезе невозможно.
Для повышения эффективности метода дифференциальной диагностики животных привитых вакциной из штамма 82 от естественно больных бруцеллезом животных мы предлагаем к исследуемой сыворотке добавлять антиген, полученный из S-R-формы вакцинного штамма 82, культуры бруцелл которого находятся в S-R-форме, следовательно, в сыворотке крови животных, привитых этой вакциной, вырабатываются S-R-антитела, способные вступать во взаимодействие с родственным R-82 антигеном, в результате чего образуется комплекс R-антитело + S-R-антиген, который при центрифугировании осаждается на дне пробирок, после чего РА и РСК становятся отрицательными. Если после центрифугирования в РА и РСК результат положительный, то реакция считается бруцеллезной.
При применении предложенного нами метода к 1,5 мл исследуемой сыворотки добавляли 0,2 мл (100 млрд м.к.) взвеси антигена, полученного из штамма SR-82 термическим путем (80оС в течение 30 мин). Сыворотку с антигеном встряхивали в течение 3 - 4 мин и оставляли в термостате на 1 ч для контакта, после чего суспензию центрифугировали при 1000 - 1500 об/мин в течение 10 мин. После этого надосадочную жидкость переносили в чистую пробирку и исследовали в РА и РСК со стандартным биофабричным антигеном. При положительной реакции животное считали больным бруцеллезом.
При исследовании 251 сыворотки крови КРС (хозяйство им. Л. Муродова Гиссарского района РТ), привитого вакциной из штамма 82, в РА и РСК со стандартным биофабричным антигеном реакции были положительными, но разработанным нами методом с антигеном, полученный из S-R-формы вакцинного штамма 82, культуры бруцелл которого находятся в S-R-форме, эти реакци были отнесены к вакцинным.
При исследовании 185 проб сывороток крови КРС (хозяйство им. Л. Муродова Гиссарского района РТ), 1,5 - 2 года назад привитого вакциной из штамма 82, в 11 случаях сыворотки были отнесены к полевому штамму.
Использование предлагаемого способа позволит легко, безошибочно дифференцировать вакцинированных от больных бруцеллезом животных.
3.4. Экспресс-метод диагностики бруцеллеза кров
Разработанная нами роз-бенгал проба с молоком (РБПМ) является наиболее простым и доступный методом диагности бруцеллеза у коров, не требующим особых лабораторных условий и оборудования, а также пригодным для широкого практического применения, в том числе и в полевых условиях.
Реакцию проводили на чистых, сухих металлических эмалированных пластинках с лунками или на предметном стекле с лункой. Исследуемую пробу молока в дозе 0,05 мл (одна капля) вносили на дно лунки глазной пипеткой, которую после каждой пробы молока промывали физиологическим раствором или теплой водой.
Затем в каждую лунку с молоком пипеткой вносили 0,05 мл (одна капля) 6,8%-ного раствора гидрокарбоната натрия (питьевая сода), смешивали, вносили антиген для РБП в дозе 0,05 мл, в течение 1 - 2 мин тщательно перемешивали до получения однородной смеси, покачивая осторожными вращательными движениями.
При положительной реакции в однородной смеси появляются хлопья агглютината розового цвета.
В начале определения ставили контроль антигена с негативной и позитивной агглютинирующей сывороткой в тех же дозах, а также контроль антигена на спонтанную агглютинацию (к 0,05 мл антигена добавляли 0,05 мл физиологического раствора).
Реакцию оценивали визуально в течение 4 мин после смешивания молока с антигеном. Агглютинацию, которая наступает позже, не учитывали. Реакцию считали положительной при выраженной агглютинации в виде мелких или крупных хлопьев розового цвета, четко выделяющихся на белом фоне лунки. При отсутствии агглютинации (смесь гомогенна, равномерно окрашена) реакцию считали отрицательной.
По этой методике нами исследовано молоко и сыворотка крови 500 коров из 3-х животноводческих хозяйств РРП. Для постановки РБПМ использовали диагностикумы, изготовленные в лаборатории по изучению бруцеллеза Ветеринарного института ТАСХН. Для подтверждения диагноза сыворотки крови положительно реагировавших животных исследованы в РБП и РА.
Из 500 проб молока из Хатлонской области специфические антитела были выявлены в 15 пробах. При исследовании животных в РРП специфические антитела в исследуемых пробах не выявлены. При исследовании 12 проб сыворотки крови вышеуказанных животных в РА и РБП полученные результаты подтвердились.
Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что разработанный метод является высокочувствительным, специфичным и нетрудоемким.
3.5. Специфическая профилактика бруцеллеза
МРС вакциной из штамма Рев-1
3.5.1. Подкожный метод вакцинации
молодняка овец полной дозой и взрослых животных малой дозой
На протяжении ряда лет бруцеллез МРС был широко распространен во всех областях Таджикистана. До 1974 г. оздоровление овцеводческих хозяйств проводилось путем систематического исследования животных, выделения больных и сдачи их на убой, а с 1975 г. в комплексе противобруцеллезных мероприятий стали применять вакцину из штамма Рев-1.
С 1975 по 1988 гг. этим препаратом иммунизировали только молодняк овец и коз однократно в возрасте 3 - 6 месяцев (ежегодно 130 - 140 тыс. гол.).
При исследовании аллергическим методом животных в 1986 г. было 0,4% положительно реагировавших, в 1987 г. - 0,5, а в 1988 - 1989 гг. МРС аллергическим методом не исследовался.
В 1987 - 1988 гг. по сравнению с 1985 - 1986 гг. в 2 - 3 раза увеличилось количество исследований проб сыворотки крови, но на одном и том же уровне оставалось число животных, привитых вакциной из штамма Рев-1.
В 1989 г. в хозяйствах Таджикистана против бруцеллеза вакциной из штамма Рев-1 начали прививать овцематок.
Специфика животноводства Таджикистана такова, что ежегодно весной на пастбища хозяйства перегоняют более 2 млн овец и коз по одним и тем же трассам, пролегающим по разным регионам. В этот период на скотопрогонах сосредотачивается большое количество животных, что способствует перезаражению их бруцеллезом. Отдельные хозяйства отгоняют животных на пастбища, находящиеся на расстоянии до 500 км, что исключает возможность уничтожения возбудителя бруцеллеза на протяжении всей трассы. В таких условиях оздоровление овцеводческих хозяйств невозможно без использования противобруцеллезной вакцины. Такой препарат из штамма Рев-1 в Таджикистане применяется более 20 лет, однако овцеводческие хозяйства республики не получили обнадеживающих результатов.
Вышеизложенное объясняется следующими обстоятельствами: во-первых, вакцина используется еще не во всех овцеводческих хозяйствах, во-вторых, даже там, где она применяется, нет полного охвата овцепоголовья и не выполняются правильно наставления по ее применению, согласно которым молодняк вакцинируют в возрасте 3 - 5 месяцев, как правило, у привитых в этом возрасте животных серологические поствакцинальный реакции угасают через 12 месяцев.
В отдельных хозяйствах иммунизируют животных в возрасте 8 - 10 месяцев, а исследуют спустя год. К этому сроку у молодняка, привитого в старшем возрасте, поствакцинальная серопозитивность сохраняется, и он может положительно реагировать на бруцеллез. Такие животные не опасны в эпизоотическом отношении, но они создают неясную обстановку по заболеваемости.
Следует отметить ряд недостатков, которые также способствуют распространению бруцеллеза. Это неполный охват исследованиями овцепоголовья; несвоевременное выделение из отар положительно реагирующих на бруцеллез животных; перегруппировка овец без учета эпизоотической ситуации в каждой отаре; неорганизованное формирование обособленных отар из привитых против бруцеллеза ярок; неполный охват исследованиями животных индивидуального сектора, находящихся в общественных отарах.
Одно из грубейших распространенных нарушений - это перегруппировка овец без учета эпизоотической ситуации в каждой отаре. В ряде случаев ее проводят без ведома ветеринарных специалистов, что влечет за собой перезаражение животных бруцеллезом.
Разработана система профилактических и оздоровительных мероприятий от бруцеллеза МРС и инфекционного эпидидемита баранов с применениям вакцины из штамма Рев-1, в соответствии с которой предусмотрена вакцинация молодняка полной дозой (2 млрд. м.к.) и ежегодная ревакцинация взрослых животных малой дозой (2 млн. м.к.).
Такая схема вакцинации улучшила эпидемиологическую и эпизоотическую обстановку в Республике Таджикистан. Однако с образованием мелких фермерских хозяйств и в связи с неполным охватом диагностическими исследованиями и вакцинаций животных обострилась эпидемиологическая и эпизоотическая ситуация, которые требуют разработки нового подхода к борьбе с бруцеллезом МРС.
Наблюдения на отдельных овцефермах показали, что прорыв иммунитета происходит через 2 - 2,5 года: появляются реагирующие животные. Поэтому разработана новая система применение вакцины из штамма Рев-1: животных иммунизируют в возрасте 3 - 5 месяцев и ревакцинируют через 2 года. Но реиммунизация вызывает длительную серопозитивность овец, что препятствует дифференциации вакцинированных и больных животных. Нами изучена возможность ежегодной реиммунизации овец в малых дозах.
В овцеводческом совхозе им. Калинина района Рудаки здоровых ярок разделили на 5 групп. Животных 1-й группы иммунизировали вакциной из штамма Рев-1 в дозе 2 млрд м.к., 2-й - 1 млрд, 3-й - 500 млн, 4-й - 250 млн м.к. Контрольных ярок (5-я группа) не вакцинировали. Через 15, 90, 150 дней и 1 год после иммунизации сыворотку крови от 40 - 50 животных каждой группы изучали сероаллергическими методами.
Через 15 дней после вакцинации сыворотки крови от ярок всех опытных групп дали положительный результат в сероаллергических реакциях. Зависимости титров антител от дозы вакцины не отмечали. На 90 день исследования титр антител снизился у животных 4-й группы (доза вакцины - 250 млн м.к.), а на 150 день - всех опытных групп.
Через 1 год после иммунизации животных опытных и контрольной групп исследовали на бруцеллез. В 1-й группе (доза вакцины - 2 млрд м.к.) положительно реагировало 2,1%, во 2-й (доза вакцины - 1 млрд м.к.) - 1,2, в 3-й (доза вакцины - 500 млн м.к.) - 1,8, в 4-й (доза вакцины - 250 млн м.к.) - 0,2, а в 5-й (непривитой) группе - 7,9% животных.
Значительное число положительно реагирующих овец в контрольной группе указывает на существующую угрозу заражения поголовья. Наименьшее количество положительно реагирующих животных (0,2%) выявили в группе, вакцинированной в дозе 250 млн м.к., в 1 - 3-й опытных группах иммунизация сокращала количество положительно реагирующих овец в 3,8 - 6,6 раза по сравнению с контрольной группой.
Через 2 года после вакцинации, каждую опытную группу после удаления положительно реагирующих животных разделили на 2 подгруппы и реиммунизировали по схеме представленной в таблице 1. В каждой подопытной группе 140 - 150 овец оставлены непривитыми (контроль).
Динамику образования и уменьшения поствакцинальных антител у 15 - 20 животных каждой подгруппы изучали сероаллергическими методами через 15, 90, 150 дней и 1 год после ревакцинации.
Таблица 1
Схема ревакцинации овец, м.к.
Подгруппа | Группа | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
1 | 2 млрд | 1 млрд | 500 млн | 250 млн |
2 | 2 млн | 1 млн | 1 млн | 1 млн |
Через 15 дней после реиммунизации положительно реагирующих на бруцеллин животных в опытных группах не выявили. Через 90 дней после реиммунизации овцы подгрупп, привитых в дозах 1 и 2 млн м.к., утрачивали поствакцинальную серопозитивность, но отдельные животные положительно реагировали на введение бруцеллина. К этому сроку овцы всех опытных групп реагировали в сероаллергических реакциях. На 150 день после реиммунизации сероаллергические реакции полностью угасали у овец, которым вводили малые дозы (1 и 2 млн м.к.), снизился титр постревакцианальных антител у животных, которым вводили полные дозы.
Через 1 год овцы, привитые малыми дозами, реагировали отрицательно, а в подгруппах, привитых полными дозами, положительно реагировали 5 - 12% животных, что указывает на сохранение у них поствакцинальной серопозитивности. В контрольных группах положительно реагировало 2,2 - 5,0% овец, то есть во всех отарах имело место распространение бруцеллеза.
Животным, реиммунизированным малыми дозами, через 1 год еще раз вводили вакцину в тех же дозах. Через 12 месяцев во всех опытных отарах получены отрицательные результаты на бруцеллез, что подтверждает отсутствие к этому сроку поствакцинальной серопозитивности и наличие достаточного иммунитета.
Таким образом, нами установлена эффективность малой дозы вакцины из штамма Рев-1 для ревакцинации МРС: животные, привитые малыми дозами, быстро утрачивают серопозитивность и при контакте с больными не заражаются бруцеллезом.
Разработана система профилактических и оздоровительных мероприятий от бруцеллёза МРС и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Рев-1 в хозяйствах Республики Таджикистан, в соответствии с которой овец и коз вакцинируют в полной дозе (2 млрд м.к.) в возрасте 3 - 5 месяцев, не исследуя на бруцеллез, взрослых животных ежегодно реимунизируют через 2 года после иммунизации в малой дозе (2 млн м.к.).
3.5.2. Конъюнктивальный метод вакцинации
абораторией по изучению бруцеллеза Ветеринарного института ТАСХН разработан конъюнктивальный метод иммунизации МРС вакциной из штамма Рев-1 в дозе 0,03 мл (50 млн м.к.), обеспечивающей напряженный иммунитет.
Заболевание бруцеллезом порождает иммунобиологические сдвиги в организме не только при проникновении бруцелл через кожу, но и через слизистые оболочки. Доказано, что бруцеллы вирулентных штаммов легко проникают в организм через слизистые оболочки глаз. В лабораторной практике считается очень удобным проводить заражение подопытных животных культурами вирулентных штаммов бруцелл через конъюнктиву.
Поэтому мы исследовали вопрос о безвредности конъюнктивального способа иммунизации животных вакциной из штамма Рев-1 и его иммуннологическую эффективность по сравнению с подкожным методом.
Сначала был проведен опыт на 74 морских свинках, разбитых на 3 группы. Первую группу свинок (n=32) иммунизировали конъюнктивально в дозе 1 млрд. м.к. Для этого глазной пипеткой вводили в конъюнктивальный мешок по одной капле (0,03 мл) 1-млрд взвеси бруцелл. Вторую группу (n=32) иммунизировали такой же дозой в объеме 1 мл подкожно. Третью, контрольную группу (n=10) не иммунизировали. Для иммунизации морских свинок была применена двухсуточная культура, полученная из сухой вакцины.
У морских свинок, привитых подкожно, на месте введения прощупывались маленькие инфильтраты, рассасывавшиеся через 3 - 4 дня, у животных, вакцинированных конъюнктивальным методом местной реакции не наблюдали.
В первой части опыта на 24 морских свинках, привитых подкожным и конъюнктивальным методами, вначале изучали степень обсемененности внутренних органов бруцеллами вакцинного штамма. Для этого на 30, 60, 90 и 120-й дни после иммунизации в каждой группе было убито по 3 свинки с целью проведения патологоанатомического, серологического и бактериологического исследований.
При патологоанатомическом исследовании выявлены изменения в органах привитых морских свинок, характерные для вакцинального процесса: гиперплазия лимфатических узлов, небольшое увеличение селезенки, наличие на поверхности печени участков серовато-бурого цвета. Серологическое и бактериологическое исследования морских свинок, привитых конъюнктивальным методом, показало, что сыворотки крови лабораторных животных в РА, РСК и РБП постоянно давали отрицательный результат. При бактериологическом исследовании, проведенном через 30 дней после вакцинации, от морских свинок выделили 18 культур бруцелл, а через 60 дней - 8 культур. Спустя 90 дней были получены 3 культуры от 2 свинок, а через 120 дней результаты бактериологического исследования были уже отрицательными.
Установлено, что через 30 дней после иммунизации все морские свинки, вакцинированные подкожно, реагировали в РА в небольших разведениях (10 - 20 ME). От всех убитых свинок при бактериологическом исследованим внутренних органов и лимфатических узлов выделили 17 культур. Спустя 60 дней в РА и РСК положительно реагировали по одной морской свинке (в титре 1:10). Всего выделили 9 культур от 3 свинок. Через 3 месяца после иммунизации все морские свинки в РА, РСК и РБП на бруцеллез реагировали отрицательно. Четыре культуры выделены от трех морских свинок. Спустя 120 дней от морских свинок культур бруцелл не выделили.
Результаты бактериологических исследований морских свинок, привитых вакциной из штамма Рев-1 конъюнктивальным и подкожным методами, свидетельствуют, что к 90-му дню ИИ по группам значительно уменьшился, а спустя 120 дней морские свинки были свободными от бруцелл вакцинного штамма.
Нами установлено, что по сравнению с подкожным методом конъюнкнтивальный по степени обсемененности и срокам нахождения бруцелл в организме морских свинок, существенного различия не имеет.
Через 4,5 месяца после иммунизации морских свинок, привитых подкожно (16) и конъюнктивально (15), а также контрольных (10) заразили культурой вирулентного штамма Br. melitensis в дозе 10 ИД.
Спустя 35 дней после заражения всех морских свинок убили для патологоанатомического, серологического и бактериологического исследований. При патологоанатомическом исследовании у контрольных свинок отмечены изменения, характерные для бруцеллеза. В частности, на печени обнаружены некротические серовато-желтые очажки, отмечены гиперплазия и увеличение лимфатических узлов, увеличение селезенки, закругленность ее краев, дряблость пульпы. У вакцинированных морских свинок после заражения патологоанатомических изменений во внутренних органах не обнаружено. В РА и РСК все контрольные морские свинки реагировали положительно.
Из 15 свинок, привитых конъюнктивальным методом, заразилась лишь одна, от которой получили две культуры. Из 16 морских свинок, вакцинированных подкожным методом, оказались зараженными две, от которых получили семь культур. Культуры выделили из подчелюстных, шейных, аксиллярных, паховых лимфатических узлов и селезенки. Зараженные свинки в РА и РСК реагировали положительно. При патологоанатомическом исследовании у них обнаружено увеличение лимфатических узлов и селезенки, а на печени - мелкие некротические очажки.
Бактериологическое исследование привитых морских свинок после заражения показало, что от всех морских свинок контрольной группы выделены культуры вирулентного штамма. У них отмечалась генерализованная форма заражения.
Морские свинки, иммунизированные конъюнктивальным методом, оказались устойчивыми к 10-кратной заражающей дозе вирулентного штамма на 93,3%, а привитые подкожно - на 87,5%.
Проведенные нами исследования показали, что иммунитет, выработавшийся от введения вакцины из штамма Рев-1 через конъюнктиву, по своей напряженности не уступает иммунитету, выработанному при применении подкожного метода.
После установления эффективности и безвредности конъюнктивального метода иммунизации вакциной из штамма Рев-1 на лабораторных животных, мы приступили к испытанию этого способа на МРС в производственных условиях.
В первый опыт взяли 500 гол. молодняка 2 - 3-месячного возраста и 205 овцематок в различной стадии суягности. Подопытных животных разделили на 2 группы, каждую из них - на 4 подгруппы. Животных первой группы иммунизировали путем закапывания в конъюнктивальный мешок по 0,03 мл взвеси бруцелл вакцинного штамма Рев-1 в дозе 10, 25, 50 и 100 млн м.к. Вторую группу животных вакцинировали такими же дозами, но подкожно в объеме 2 мл.
Перед иммунизацией взятый в опыт МРС на бруцеллез в РА и РСК реагировал отрицательно. За привитыми животными вели клиническое наблюдение. Кроме того, их исследовали на бруцеллез в РА и РСК.
После подкожного введения вакцины из штамма Рев-1 у животных отмечали кратковременное повышение температуры тела на 1 - 1,5оС и небольшое угнетение общего состояния. Из 105 овцематок, вакцинированных подкожным способом в различной стадии суягности и не имеющих иммунного фона против бруцеллеза, абортировали 25 (23,8%).
В группе животных, привитых конъюнктивальным методом, поствакцинальных осложнений не отмечали, отелы проходили нормально.
Результаты исследований сыворотки крови суягных животных после прививки обоими методами показали, что через 7 дней после иммунизации овцематки, привитые конъюнктивально в дозе 10 млн м.к., в РА показали отрицательные результаты, а привитые подкожно реагировали в титре 36 ME.
На 7-й и 14-й день исследований средний титр агглютининов в группе животных, привитых подкожно, превышал этот показатель у привитых конъюнктивально. Через 60 дней животные на бруцеллез не реагировали.
К 14-му дню у некоторых животных, вакцинированных в дозах 50 и 100 млн м.к., устанавили в РСК комплементсвязывающие антитела. К 30-му дню наблюдалось снижение титра агглютининов, а животные после введения вакцины конъюнктивально в большинстве случаев в РА не реагировали.
В сыворотке крови животных, привитых конъюнктивально, при исследовании в РА не выявили агглютининов через 2 месяца после иммунизации, а у вакцинированных подкожно - через 3 месяца.
У овцематок, вакцинированных подкожно, уже на 7-й день в сыворотке крови появились агглютинины в титре 400 ME и выше, а у привитых конъюнктивально их обнаруживали в значительно низких титрах и они быстро утрачивались.
Экспериментальные исследования и производственные испытания конъюнктивального метода иммунизации МРС вакциной из штамма Рев-1 проведены в производственных кооперативах им. Л. Муродова, К. Маркса Гиссарского и частных хозяйствах Шахринавского районов.
3.6. Комплексная вакцинация
против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза
3.6.1. Экспериментальные исследования
эффективности одновременной иммунунизации
3.6.1.1. Опыты на морских свинках
В двух опытах на морских свинках (массой 350 - 400 г) изучали эффективность комплексной вакцинации против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза. В первом на трех группах (n=10) серонегативных животных (отрицательный результат в РА и РСК) исследовали напряженность иммунитета против бруцеллеза. Вакциной из штамма Рев-1 в объеме 1 см3 (доза - 1 млрд м.к.) подкожно прививали морских свинок 1-ой, указанным препаратом в той же дозе и одновременно ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в дозе 2 см3 двукратно с интервалом 10 сут - 2-ой группы. Контрольных животных (3-я группа) не иммунизировали. По количеству иммунных морских свинок оценивали эффективность вакцинации.
После прививки общее состояние животных обеих групп было удовлетворительным. На месте введения вакцин(ы) прощупывались небольшие инфильтраты, которые через 3 - 4 дня рассасывались, кроме которых других проявлений поствакцинальной реакции не отмечали.
На 90-ый день после вакцинации подопытных и контрольных морских свинок для проверки напряженности иммунитета подкожно в область паха заразили вирулентной культурой Br. melitensis в объеме 1 мл (100 м.к. - 10 ИД). Через 35 сут после заражения морских свинок обескровливали, проводили патологоанатомические, серологические и бактериологические исследования.
У контрольных животных при вскрытии наблюдали четко выраженные патологоанатомические изменения, характерные для бруцеллеза: на печени имелись множественные некротические серовато-белые очаговые узелки, селезенка была сильно увеличена, лимфатические узлы гиперплазированы и увеличены. Установлена генерализованная форма инфекции.
Сыворотки крови всех морских свинок этой группы положительно реагировали в РА и РСК, из внутренних органов и лимфатических узлов животных изолированы вирулентные культуры (38), которыми заражали, ИИ составил 31,6.
Об отсутствии отрицательного воздействия на иммуногенность вакцины из штамма Рев-1 ее комплексного введения с ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза свидетельствует противостояние морских свинкок 1-ой (вакцина из штамма Рев-1) и 2-ой (одновременная иммунизация) групп заражению в 80% случаев (табл. 2).
Одновременная вакцинация против бруцеллеза не уступает по эффективности прививки вакциной из штамма Рев-1, однако у иммунизированных комплексно морских свинок культура, которой заражали, выделена только из регионарных лимфатических узлов, тогда как у одного животного 1-ой группы отмечали генерализованную форму заражения.
Таблица 2
Результаты заражения морских свинок возбудителем бруцеллеза
Группа | |||||||
1 | 2 | 3 (контроль) | |||||
Кол-во животных, гол. | 10 | 10 | 10 | ||||
Заразилось, гол. | регионарно | 1 | 2 | 2 | 2 | Ц | 10 |
генерализовано | 1 | Ц | 10 | ||||
Выделено культур | 3 | 3 | 38 | ||||
ИИ | 2,5 | 2,5 | 31,6 | ||||
Кол-во иммунных животных, гол. | 8 (80) | 8 (80) | Ц | ||||
Примечание. В скобках указано процентное значение.
При изучении динамики выработки специфических антител (второй опыт) против бруцеллеза и приживаемости культур вакцинного штамма две группы (n=10) серонегативных (отрицательный результат в РА и РСК) морских свинок (массой 350 - 400 г) подкожно прививали вакциной из штамма Рев-1 в дозе 1 см3 (1-я группа) и одновременно вышеназванным препаратом и ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в дозе 2 см3 двукратно с интервалом 10 дней.
В серологических реакциях сыворотки крови подопытных животных обеих групп активно реагировали (табл. 3), через 7 сут после иммунизации в этих сыворотках обнаружили агглютинины, а на 30-ый день - комплементсвязывающие вещества к штамму Br. melitensis Рев-1.
Через 35 сут после прививки подопытных животных забили и проводили патологоанатомические и бактериологические исследования, в результате которых выявили однотипные и характерные для поствакцинального процесса патологические изменения: лимфатические узлы незначительно гиперплазированы, селезенка увеличена и др.
При бактериологическом исследовании животных 1-ой группы (вакцина из штамма Рев-1) изолирована 41 культура вакцинного штамма (5 - из костного мозга, 6 - селезенки и 30 - подчелюстных, шейных, аксиллярных, паховых и парааортального лимфатических узлов); 2-ой группы (комплексная иммунизация) - 34 культуры вакцинного штамма (4 - из костного мозга, 6 - селезенки, 32 - подчелюстных, шейных, аксиллярных, паховых и парааортального лимфатических узлов). ИИ в 1-ой группе составил 34,1, во 2-ой - 35.
Таким образом, в организме морских свинок при прививке как только вакциной из штамма Рев-1, так и одновременно этим препаратом и ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза происходит сравнительно быстрое и широкое расселение бруцелл вакцинного штамма, что обусловливает выраженный иммунный ответ.
Таблица 3
Результаты серологических исследований морских свинок
№ животного | Группа | |||
1 | 2 | |||
Срок исследования, день после иммунизации | ||||
7 | 30 | 7 | 30 | |
РА | РСК | РА | РСК | |
1 | 20 | 1:10 | 20 | 1:10 |
2 | 10 | 1:5 | 10 | 1:5 |
3 | 20 | 1:5 | 20 | 1:10 |
4 | 20 | 1:10 | 40 | 1:10 |
5 | 10 | 1:5 | 10 | 1:10 |
6 | 20 | 1:10 | 10 | 1:10 |
7 | 20 | 1:10 | 20 | 1:10 |
8 | 20 | 1:10 | 20 | 1:5 |
9 | 10 | 1:10 | 10 | 1:10 |
10 | 20 | 1:5 | 20 | 1:5 |
3.6.1.2. Опыты на кроликах
Эффективность одновременного метода вакцинации против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза в отношении двух последних инфекций изучена в опыте на 24 кроликах (массой 2,0 - 2,3 кг), которых по принципу аналогов разделили на 4 группы (n=6). Животные были здоровыми в отношении бруцеллеза (отрицательный результат в РА и РСК), сальмонеллеза и пастереллеза (клинические признаки заболеваний отсутствовали, отрицательный результат в РА).
Кроликов 1-ой группы подкожно прививали вакциной из штамма Рев 1 в объеме 1 см3 (доза - 1 млрд м.к.), 2-ой - ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в дозе 2 см3 двукратно с интервалом 10 сут, 3-ей - комплексно вышеназванными препаратами в тех же дозах. Контрольных животных, которых разделили на три подгруппы (n=2) не иммунизировали.
После вакцинации общее состояние подопытных кроликов было удовлетворительным. На месте введения препарата(ов) прощупывались небольшие инфильтраты, которые рассасывались через 3 - 4 дня. Других проявлений поствакцинальной реакции не наблюдали.
Через 30 дней после вакцинации для проверки выработки иммунитета против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза животных 1-ой подопытной группы подкожно заразили в область паха вирулентной культурой Br. melitensis в объеме 1 мл (100 м.к. - 10 ИД), 2-ой - культурами вирулентных штаммов S. dublin и Р. multocida в объеме 1 мл (по 500 млн м.к.), 3-ей - соответствующими культурами в тех же объемах и концентрациях; 1-ой контрольной подгруппы - вирулентной культурой Br. melitensis в объеме 1 мл (100 м.к. - 10 ИД), 2-ой контрольной подгруппы - S. dublin в объеме 1 мл (500 млн м.к.), 3-ей контрольной подгруппы - Р. multocida в объеме 1 мл (500 млн м.к.). По сохранности подопытных животных оценивали эффективность вакцинации.
Через 35 дней после заражения оставшихся живыми кроликов обескровливали и проводили патологоанатомическое, серологическое и бактериологическое исследования.
Животные 1-ой, 2-ой и 3-ей подопытных групп противостояли заражению в 83,3% случаев, что свидетельствует об отсутствии отрицательного влияния биологических препаратов при одновременном введении на иммуногенность друг друга.
При патологоанатомическом вскрытии контрольных кроликов отмечали четко выраженные изменения, характерные для бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза.
Сыворотки крови животных 1-ой контрольной подгруппы положительно реагировали в РА и РСК, из внутренних органов и лимфатических узлов изолированы культуры бруцелл (6), которыми заражали. Во 2-ой и 3-ей контрольных подгруппах на 3 - 7-е сутки после заражения пали все кролики, от которых при бактериологическом исследовании проб внутренних органов выделили соответственно 7 культур S. dublin и 5 - Р. multocida. ИИ в 1-ой, 2-ой и 3-ей контрольных подгруппах составил соответственно 8,3; 9,7 и 6,9.
3.6.1.3. Опыты на ярках
Результаты изучения эффективности одновременной иммунизации морских свинок и кроликов против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза послужили основанием для проведения трех опытов на 2- - 6-месячных ярках гиссарской породы в д/х Таджикистан (Варзобский район), в котором выделяли больной бруцеллезом, сальмонеллезом и пастереллезом МРС.
С целью изучения эффективности комплексной вакцинации против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза (первый опыт, отара, состоявшая из 200 овцематок и 98 ярок) здоровых в отношении бруцеллеза, сальмонеллеза и пастреллеза ярок разделили на три группы (n=15). Животных 1-ой группы подкожно прививали вакциной из штамма Рев-1 в дозе 2 см3 (2 млрд м.к.), 2-ой - ассоциированной формолвакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в дозе 2 см3 двукратно с интервалом 10 дней и 3-ей группы - комплексно вышеназванными препаратами в тех же дозах. Контрольных ярок (n=53) не иммунизировали. По сохранности подопытных животных оценивали эффективность вакцинации.
На 2 - 4-е сут у привитых ярок незначительно повышалась температура тела (на 0,6 - 0,8оС). Местная реакция выражалась в появлении на месте инъекции горячей болезненной припухлости, которая через 4 дня исчезала. Других видимых отклонений от физиологической нормы при клиническом осмотре вакцинированных животных не отмечали. Общее состояние и аппетит у всех привитых ярок были удовлетворительными.
Через 7, 14, 30, 60, 90, 120 и 150 сут после иммунизации в РА и РСК исследовали динамику антигенной активности вакцины из штамма Рев-1, в РА - ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза.
Максимальное количество агглютининов (450 МЕ) у ярок 1-ой группы (вакцина из шт. Рев-1) наблюдали на 14-ый день. Соответствующий показатель у комплексно иммунизированных животных (3-я группа) в этот срок составил 455 МЕ. В дальнейшем у животных обеих групп титры агглютининов в крови снижались до 30 МЕ на 150-е сутки после прививки (рис. 1).
Рис. 1. Динамика накопления агглютининов в сыворотках крови привитых ярок (1-ый опыт).
В 1-ой и 3-ей группах наиболее высокие титры (80 ЕД) в РСК отмечены на 30-й день после вакцинации, затем у животных обеих групп количество комплементсвязывающих веществ в крови уменьшалось до 10 ЕД на 150-е сутки после иммунизации (рис. 2).
В сыворотках крови животных 2-ой (ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и пастереллеза) и 3-ей (одновременная иммунизация) групп агглютинины в диагностических титрах были обнаружены на 7-ой (сальмонеллез - 1:600, пастереллез - 1:400), а в максимальном количестве - на 14-ый день после прививки (соответственно сальмонеллез - 1:800 и 1:900, пастереллез - 1:600, 1:550). На 150-е сутки после вакцинации этот показатель составил 1:100 МЕ.
В течение 12 месяцев после иммунизации (срок наблюдения) в 1-ой группе одно животное заболело пастереллезом, во 2-ой - бруцеллезом. В контрольной группе из 53 непривитых овец у 18 (33,96%) диагностировали пастереллез, 8 (15,1%) - сальмонеллез и 4 (7,5%) животных положительно реагировали на бруцеллез.
Следовательно, комплексная вакцинация против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза обеспечивает сохранность 100% животных.
Рис. 2. Динамика накопления комплементсвязывающих веществ в сыворотках крови иммунизированных ярок (1-ый опыт).
Одним из показателей иммуногенности живой бруцеллезной вакцины является способность бруцелл вакцинного штамма приживаться в организме и генерализованно распространяться в органах привитых животных, изучение которой проведено на 16 ярках, здоровых в отношении бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза (второй опыт).
Животных 1-ой группы (n=8) подкожно прививали вакциной из штамма Рев-1 в объеме 2 см3 (доза - 2 млрд м.к.), 2-ой (n=8) - одновременно вышеназванным препаратом в той же дозе и ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в дозе 2 см3 двукратно с интервалом 10 сут.
На 15-, 30-, 60- и 90-ый дни после иммунизации, когда для бактериологического исследования забивали по 2 животных из каждой группы, определяли степень обсеменения и сроки нахождения бруцелл вакцинного штамма в организме ярок. Из подчелюстных, заглоточных, предлопаточных, паховых, тазовых, парааортального лимфатических узлов, а также из печени и селезенки проводили бактериологические высевы в две пробирки с соевым агаром и одну - с МППГГБ. Посевы бактериологической массы выдерживали в термостате при температуре 37оС в течение 30 сут.
Через 15 дней после прививки только вакциной из штамма Рев-1 у ярок 1-ой группы выделили 8 культур, ИИ - 33,3 (табл. 4). Из проб патологического материала от комплексно иммунизированных животных (2-я группа) изолировали 7 культур, ИИ - 29,2. На 30-е сут исследования эти показатели составили соответственно 10; 41,7 и 12; 50,0, через 60 дней после прививки - в обеих группах соответственно - 3 и 12,5. На 90-е сут при бактериологическом исследовании культуры вакцинного штамма в обеих группах не выделены.
Таблица 4
Приживаемость бруцелл вакцинного штамма Рев-1 в организме ярок
Группа | ||||
1 | 2 | |||
День исследования после иммунизации | 15 | кол-во животных, гол. | 2 | 2 |
реагировали, гол. | 2 | 2 | ||
получено культур | 8 | 7 | ||
ИИ | 33,3 | 29,2 | ||
30 | кол-во животных, гол. | 2 | 2 | |
реагировали, гол. | 2 | 2 | ||
получено культур | 10 | 12 | ||
ИИ | 41,7 | 50,0 | ||
60 | кол-во животных, гол. | 2 | 2 | |
реагировали, гол. | 2 | 2 | ||
получено культур | 3 | 3 | ||
ИИ | 12,5 | 12,5 | ||
Установлено, что штамм Рев-1 в одинаковой степени приживается в организме как ярок, привитых только вакциной из этого штамма, так и в организме животных, иммунизированных данным препаратом одновременно с ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза, которая не оказывает существенного влияния на приживаемость бруцелл.
На 30 серонегативных ярках, разделенных на 3 группы (n=10) изучали безвредность и иммуногенность комплексной вакцинации против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза (третий опыт).
В 1-ой подопытной группе применяли подкожно вакцину из штамма Рев-1 в дозе 2 см3 (2 млрд м.к.), во 2-ой - ассоциированную вакцину против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных в дозе 2 см3 двукратно с интервалом 10 сут, в 3-ей - комплексно вышеназванные препараты в соответствующих дозах.
У подопытных ярок в течение 10 дней после иммунизации утром и вечером измеряли температуру тела. У 90% животных 1-ой группы на 2-е сут после прививки отмечали повышение температуры тела против исходной на 0,6оС при утреннем измерении. Кратковременное повышение температуры тела на 0,1 - 0,8оС у ярок 2-ой группы наблюдали на 2 - 4-ый дни после вакцинации, у одного животного температура тела оставалась в пределах нормы. На 2-е сутки после вакцинации у 70% животных 3-й группы регистрировали повышение температуры тела на 0,1 - 1,2оС, которое продолжалось 5 дней. Необходимо отметить, что температурная реакция у комплексно и ассоциировано иммунизированных ярок была более выраженной, чем у привитых только вакциной из штамма Рев-1.
При клиническом осмотре подопытных животных каких-либо отклонений от физиологической нормы не отмечали. Общее состояние и аппетит у всех иммунизированных ярок оставались без изменений.
В сыворотках крови животных 1-ой группы (вакцина из штамма Рев-1) на 5-, 15-, 20- и 30-е сутки после прививки количество общего белка существенно не изменялось (табл. 5).
Таблица 5
Количество общего белка
в сыворотках крови иммунизированных ярок, г%
Группа | ||||
1 | 2 | 3 | ||
До прививки | 7,20,3 | 6,80,9 | 6,90,4 | |
День после иммунизации | 5 | 7,80,8 | 7,80,04 | 8,60,001 |
15 | 7,00,4 | 7,90,3 | 8,40,3 | |
20 | 6,80,3 | 6,90,4 | 7,80,4 | |
30 | 6,80,9 | 6,90,9 | 6,70,1 | |
На 5-е сутки после прививки у животных 1- (вакцина из штамма Рев-1) и 2-ой групп (ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и пастереллеза) регистрировали повышение количества общего белка по сравнению с соответствующим показателем до иммунизации (P<0,5). Увеличение количества общего белка статистически достоверным (P>0,5) было у ярок 3-ей группы (вакцина из штамма Рев-1 + ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и пастереллеза) на 5-, 15- и 20-ый дни, а на 30-е сутки наблюдали снижение этого показателя до исходного уровня.
Незначительное повышение бактерицидной активности сывороток крови животных 1-ой группы (вакцина из штамма Рев-1) установили на 5- и 15-ый дни после прививки, а на 20- и 30-е сутки этот показатель снизился (табл. 6).
Таблица 6
Бактерицидная активность
сывороток крови иммунизированных ярок, %
Группа | ||||
1 | 2 | 3 | ||
До прививки | 36,2 | 39,4 | 38,0 | |
День после иммунизации | 5 | 49,0 | 57,0 | 63,0 |
15 | 47,2 | 54,0 | 65,0 | |
20 | 38,0 | 43,0 | 51,2 | |
30 | 37,0 | 38,4 | 36,2 | |
Бактерицидная активность сыворотки крови животных, вакцинированных ассоциировано против сальмонеллеза и пастереллеза (2-я группа) и одновременно против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза (3-я группа), была значительно выше, чем у иммунизированных только против бруцеллеза (1-я группа).
Фагоцитарная активность лейкоцитов крови у ярок, привитых ассоциировано (ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и пастереллеза) и комплексно (вакцина из штамма Рев-1 + ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и пастереллеза), также была выше, чем у животных, иммунизированных только против бруцеллеза (табл. 7).
Таблица 7
Фагоцитарной активности лейкоцитов
в периферической крови иммунизированных ярок, %
Группа | ||||
1 | 2 | 3 | ||
До прививки | 57 | 60 | 55 | |
День после иммунизации | 5 | 60 | 72 | 70 |
15 | 64 | 73 | 67 | |
20 | 64 | 64 | 66 | |
30 | 57 | 62 | 57 | |
В серологических реакциях сыворотки крови животных, привитых раздельно и одновременно, активно реагировали. На 14-е сутки после иммунизации в сыворотках крови ярок 1-ой (вакцина из штамма Рев-1) и 3-ей групп (вакцина из штамма Рев-1 + ассоциированная вакцина против сальмонеллеза и пастереллеза) обнаруживали противобруцеллезные агглютинины в средних титрах соответственно 415 и 420 МЕ, а на 30-ый день - комплементсвязывающие вещества в среднем титре 80 ЕД. Титры агглютининов и комплементсвязывающих антител у животных 1-ой и 3-ей групп через 90 суток после прививки начали снижаться.
На введение ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза животные 2-ой (ассоциированно против сальмонеллеза и пастереллеза) и 3-ей (комплексно против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза) групп реагировали одинаково. Агглютинины обнаруживали на 7-е сутки в средних титрах соответственно сальмонеллез - 1:200 и 1:300, пастереллез - 1:150 и 1:200 МЕ, которые начали снижаться в обеих группах через 90 дней после прививки.
Таким образом, при одновременном применении вакцины из штамма Рев-1 и ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза бруцеллы вакцинного штамма быстро и широко расселяются в организме ярок. Использование комплексного метода безвредно и эффективно стимулирует выработку клеточного и гуморального иммунитета. При одновременном введении указанных препаратов между ними не происходит отрицательного взаимодействия: выработка и угасание специфических поствакцинальных антител происходят так же, как и при применении только вакцины из штамма Рев-1 (различий в напряженности иммунитета не выявлено). В экспериментальных условиях комплексная вакцинация обеспечивает защиту от бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза 100% животных.
3.6.2. Производственные проверка эффективности
одновременной иммунизации овец
против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза
В 2004 г. на базе ПК им. Л. Муродова Гиссарского района проведены производственные испытания в отаре, в которой в феврале - июне 2004 г. были выявлены бруцеллез, сальмонеллез и пастереллез, на 60 овцематках и 60 ярках 3 - 5-месячного возраста. Контролем служили 64 овцематки и 28 ярок (в возрасте 3 - 6 месяцев), которых не вакцинировали.
По принципу аналогов подопытных овец и ярок разделили на три группы (n=20). Животных 1-ой группы подкожно прививали вакциной из штамма Рев-1 в дозах 1 см3 (овцы; 2 млн м.к.) и 2 см3 (ярки; 2 млрд м.к.), 2-ой - ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в дозах 3 см3 (овцы) и 2 см3 (ярки) двукратно с интервалом 10 суток, 3-ей - комплексно вышеназванными препаратами в тех же дозах.
Для иммунизации овец против бруцеллеза использовали сухую живую вакцину из штамма Br. melitensis Рев-1, а для профилактики сальмонеллеза и пастереллеза применяли ассоциированную формолвакцину против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных.
Местная реакция у привитых животных выражалась в появлении на месте инъекции горячей болезненной припухлости, которая через 4 дня исчезала.
Выборочно в каждой группе у 5 животных ежедневно в течение 10 суток измеряли температуру тела. Наиболее выраженную гиперемию (40,4 - 41,0оС), которая начиналась через день после иммунизации и продолжалась 5 суток, отмечали у овцематок и ярок, вакцинированных комплексно. Слабая температурная реакция (40,1 - 40,9оС) была у овцематок и ярок, привитых только вакциной из штамма Рев-1. Эффективность вакцинации МРС оценивали по завершении окота.
В 1-ой группе овцематок, привитых только против бруцеллеза, случаев аборта не регистрировали, но при серологических исследованиях сывороток крови этих животных в РБП, РА и РСК через 12 месяцев после иммунизации у одной установили инфицированность бруцеллезом.
При бактериологическом исследовании паренхиматозных органов двух вынужденно забитых ярок из группы, вакцинированной только против бруцеллеза, у одной выделен возбудитель сальмонеллеза, у второй - пастереллеза. При серологическом исследовании сывороток крови этих животных в РБП, РА и РСК через 12 месяцев после прививки на бруцеллез получили отрицательный результат.
Из числа иммунизированных ассоциировано против сальмонеллеза и пастереллеза овцематок 2-ой группы абортировала одна (неинфекционный характер патологии), остальные дали нормальный приплод. В этой группе случаев бруцеллеза у овцематок не наблюдали, но при серологическом исследовании сывороток крови через 12 месяцев после прививки одна ярка положительно реагировало на бруцеллез, у еще одной в этот период диагностировано ассоциированное течение сальмонеллеза с пастереллезом.
В группе овцематок, иммунизированных одновременно против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза (3-я группа), случаев аборта и рождения нежизнеспособных ягнят не отмечали. При серологических исследованиях сывороток крови этих овец в РБП, РА и РСК через 12 месяцев одно животное положительно реагировало на бруцеллез и одно животное в течение года заболело пастереллезом.
Три случая аборта сальмонеллезной этиологии отмечали у контрольных овцематок. Через 12 месяцев при серологическом исследовании сывороток крови овцематок и ярок контрольной группы у 4 овцематок и 3 ярок обнаружили антитела к бруцеллезу. При бактериологическом исследовании патматериала (паренхиматозных органов) 4 вынужденно забитых овцематок в двух случаях были выделены пастереллы, а в двух - ассоциации сальмонелл и пастерелл. У шести вынужденно забитых и павших ярок в 3 случаях диагностирован сальмонеллез, 2 - пастереллез, 1 - ассоциация этих инфекций.
Таким образом, одновременная иммунизация ярок (вакциной из штамма Рев-1 в дозе 2 см3 (2 млрд м.к.) и ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в дозе 2 см3 двукратно с интервалом 10 суток) и овцематок (вакциной из штамма Рев-1 в дозе 1 см3 (2 млн м.к.) и ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в дозе 3 см3 двукратно с интервалом 10 дней) против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза по эффективности не уступает иммунизации только против бруцеллеза и ассоциированной прививке против сальмонеллеза и пастереллеза и формирует одновременно иммунитет против указанных инфекций.
Разработанный метод комплексной вакцинации МРС против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза сокращает материальные и трудовые затраты, сроки между прививками, что крайне важно в условиях отгонно-пастбищного ведения овцеводства.
3.7. Дезинфицирующие свойства Бровадез плюс
Источником инфекции является больное животное в течении всей болезни бруцеллезом. Больше всего бруцелл попадает во внешнюю среду во время рождения потомства или выкидыша у больной самки. Известно, что возбудитель бруцеллеза в состоянии сохранять способность к жизнедеятельности в сухой земле - до двух месяцев; в водоемах - до двух с половиной недель; в мягких сортах сыра - до двух месяцев; в навозе и на шерсти больных животных - до четырех месяцев. Исходя из этого, специалисты считают, что бруцеллез животных в природе полностью уничтожить невозможно. Поэтому домашние животные всегда находятся под угрозой заражения, а вместе с ними и люди, контактирующие с ними или продукцией от них (Студенцов К.П., 1975; Косилов И.А., 1999). Предусматривается, что мясо от больных животных может идти лишь на изготовление консервов методом проварки или тушения в течение трех часов. Иные авторы допускают, что измельченное на мелкие кусочки мясо после длительной проварки или тушения в особых случаях можно употреблять (Иванов Н.П., 1988).
Для дезинфекции помещения применяется концентрированный (15 - 20%) раствор хлорной извести, 3%-ный горячий раствор едкого натрия и 2%-ный раствор формальдегида. Предельно тщательной должна быть дезинфекция в период окота, отела, опороса, а также при абортах у животных. Для обеззараживания рук можно применять 1%-ный раствор хлорамина, 5%-ный раствор уксусной кислоты, 0,5%-ный раствор едкого натрия (Иванов Н.П., 1988).
Нами изучены бактерицидные свойства нового дезинфектанта Бровадез-плюс в отношении возбудителей бруцеллеза.
Исследование проводилось в Таджикском аграрном университете им. Ш. Шотемура и Сумском национальном аграрном университете Республики Украина.
В опыте использовали новый дезинфектант Бровадез-плюс производства Научно-производственной фирмы Бровафарма (Республика Украина). Препарат содержит синергическую композицию из четвертичных аммонийных соединений в виде солей алкил диметил-бензил аммония хлорида - 10%, дидецил-диметил аммония хлорида - 5%, этилендиамин-тетра-уксусной кислоты - 7%, вспомогательные компоненты для эмульгирования, пенообразования, стабилизации, расцветки и деминерализированную воду - до 100%.
Для проведения исследований смесь культуры бруцелл стерильной пипеткой по 0,2 см3 помещали в 2 флакона (1 - опытный, 1 - контрольный) объемом 20 cм3. Затем в опытный флакон добавляли 10 см3 1% препарата Бровадез-плюс, в контрольный флакон вместо дезинфектанта вносили 10 см3 стерильного изотонического раствора. Содержимое флаконов перемешивали и выдерживали 24 ч. После этого содержимое флаконов переносили в центрифужные пробирки, которые центрифугировали при 1500 об/мин на протяжении 30 мин. Для прекращения действия дезинфицирующего эффекта препарата в опытной пробе, осадок, который образовался при центрифугировании, а также контрольную пробу два раза отмывали стерильным изотоническим раствором на центрифуге. Полученный осадок опытной и контрольной проб ресуспензировали в 5 см3 стерильного изотонического раствора и стерильной пипеткой высевали в пробирки с питательной средой для культивирования бруцелл. Пробирки с высевами выдерживали в термостате при температуре 37оС, через 24, 48 и 72 часов проводили осмотр наличия роста культур. Отсутствие роста колоний бруцелл указывало на наличие бактерицидного действия дезинфектанта. Паралельно аналогично исследовали 1,5 и 2% концентрации дезинфектанта.
Кроме того, исследования проводили на тест-обьектах, в качестве которых использовали оцинкованное железо, дерево, штукатурку и кирпич размером 10×10 см. Перед нанесением тест-культур осуществляли полную дезинфекцию поверхности. После подсыхания тест-обьекты раскладывали горизонтально и наносили 2-млрд взвесь изучаемых культур из расчета 0,5 см3 на 100 см2. Культуры бруцелл равномерно распределяли по поверхности стеклянным шпателем, подсушивали при комнатной температуре (18 - 20оС) и относительной влажности 50 - 60%.
Потом тест-обьекты раскладывали горизонтально и вертикально и пипеткой обрабатывали дезинфицирующим 1,5% препаратом Бровадез-плюс в количестве 200 см3/м2. После орошения оставляли тест-обьекты до полного высыхания. Контрольные тест-объекты орошали стерильной водопроводной водой в том же количестве. Контроль качества дезинфекции проводили с помощью стерильного влажного тампона, который отмывали в 10 мл воды с бусами на протяжении 10 мин. Смывы, которые получали с опытных пластинок вносили в чашки Петри и заливали бруцелл-агаром при температуре 40 - 50оС. Смывы с контрольных пластинок перед посевом разводили в 100 см3 стерильного изотонического раствора для равномерного распределения микроорганизмов в агаре. Посевы выдерживали в термостате при 37оС, а потом подсчитывали количество колоний, которые выросли на чашках Петри. Определяли плотность контаминации на 100 см2 и процент обезвреживания. Результаты подсчитывали по формуле:
Х = а × 100 / в, где
а - количество микробных клеток на опытных пластинках;
в - количество микробных клеток на контрольных пластинках.
Нами проведено исследование по определению бактерицидного действия препарата Бровадез-плюс к тест-культурам Brucella melitensis и Brucella abortus. Бактерицидное дейстивие определили в растворах и на тест-обьектах. Результаты этих исследований представлены в таблице 8, из которой следует, что препарат в 1% концентрации действует бактерицидно на культуры бруцелл.
Таблица 8
Результаты определения суспензионным методом
бактерицидной активности
препарата Бровадез-плюс в отношении бруцелл
Тест-культура | Концентрация препарата, % | Экспозиция, ч | Опыт | Контроль |
B. melitensis | 1,0 | 24 | + | ++++ |
B. abortus | 1,0 | 24 | + | ++++ |
B. melitensis | 1,5 | 24 | Ц | ++++ |
B.abortus | 1,5 | 24 | Ц | ++++ |
B. melitensis | 2,0 | 24 | Ц | ++++ |
B.abortus | 2,0 | 24 | Ц | ++++ |
Примечание. Ц - рост колоний бруцелл не установлен; л+ - рост от 10 до 20 колоний бруцелл на поверхности питательной среды; л++++ - рост больше чем 50 колоний бруцелл на поверхности питательной среды.
Результаты последующих исследований подтверждают высокую степень бактерицидной активности дезинфектанта Бровадез-плюс в отношении бруцелл в концентрации 1,5 - 2%.
При исследовании бактерицидных свойств препарата Бровадез-плюс на тест-обьектах установлена высокая степень бактерицидной активности данного препарата в отношении бруцелл в концентрации 1,5% при экспозиции 24 ч из расчета рабочего раствора препарата 1 л на м2 (табл. 9).
Таблица 9
Результаты определения на тест-обьектах бактерицидного действия
препарата Бровадез-плюс (концентрация Ц 1,5%) в отношении бруцелл
Культура | Экспозиция, ч | Тест-обьект | Опыт | Контроль |
B. melitensis | 24 | дерево | Ц | ++++ |
железо | Ц | ++++ | ||
штукатурка | Ц | ++++ | ||
кирпич | Ц | ++++ | ||
B. abortus | 24 | дерево | Ц | ++++ |
железо | Ц | ++++ | ||
штукатурка | Ц | ++++ | ||
кирпич | Ц | ++++ |
Примечание. Ц - рост колоний не отмечен; л++++ - рост больше чем 50 колоний бруцелл на питательной среде.
Таким образом, нами установлена высокая бактерицидная активность растворов препарата Бровадез-плюс в отношении возбудителей бруцеллеза.
ВЫВОДЫ
1. В 2001 - 2010 гг. в РРП выявлено 2,1% больных овец из числа исследованных. Зараженность частных животных (2,7%) была выше, чем общественных (1,9%). Результаты собственных исследований, которые согласуются с данными ветеринарной отчетности, также свидетельствуют, что больного бруцеллезом МРС в частных хозяйствах больше (3,04 - 8,7%), чем в общественных (0,5 - 0,8%).
2. В 2001 - 2010 гг. возбудители сальмонеллеза и пастереллеза в РРП выделены соответственно в 3,8 и 29,2% проб патологического материала от овец. Нами при бактериологическом исследовании абортированных плодов и проб патологического материала от овец выделены возбудители пастереллеза (58,9%), сальмонеллеза (соответственно 25,0 и 23,2%), хламидиоза (19,4%) и бруцеллеза (8,6%).
3. При комплексном исследовании МРС в 17,9% случаев диагностированы смешанные инфекции сальмонеллеза с пастереллезом, 11,0% - бруцеллеза с сальмонеллезом. 18,2% овец, больных сальмонеллезом, 15,3 - пастереллезом, и 20% животных, от которых изолировали ассоциации сальмонелл с пастереллами, положительно реагировали в серологических реакциях на бруцеллез.
4. В 2005 - 2007 гг. в четырех неблагополучных по бруцеллезу населенных пунктах Шахринавского района при полевом исследовании на бруцеллез в 1-ый визит серологически выявлено 4,25% больного МРС, затем его количество увеличилось до 5,43% во 2-ой визит и стало снижаться в 3-ий и 4-ый визиты (соответственно 5,11 и 5,0%), однако в 5-ый визит было выявлено значительное количество положительно реагирующих на бруцеллез овец и коз - 6%.
5. Для повышения эффективности метода дифференциальной диагностики животных привитых вакциной из штамма 82 от естественно больных бруцеллезом животных предложен антиген, полученный из S-R-формы вакцинного штамма 82.
6. При профилактических и оздоровительных мероприятиях от бруцеллёза МРС и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Рев-1 в хозяйствах Республики Таджикистан овец и коз необходимо вакцинировать в полной дозе (2 млрд м.к.) в возрасте 3 - 5 месяцев, не исследуя на бруцеллез, взрослых животных ежегодно реимунизировать через 2 года после иммунизации в малой дозе (2 млн м.к.).
7. В экспериментальных условиях определена эффективность конъюнктивального метода вакцинации при бруцеллезе по сравнению с подкожным методом.
8. Конъюнктивальный метод ежегодной иммунизации МРС независимо от пола и возраста вакциной из штамма Рев-1 в дозе 0,03 мл (50 млн м.к.) обеспечивает напряженный иммунитет.
9. При введении только вакцины из штамма Рев-1 и одновременно этого препарата с ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза в организме морских свинок, кроликов и ярок происходит сравнительно быстрое и широкое расселение бруцелл вакцинного штамма.
10. При комплексном применении морским свинкам и кроликам указанные биопрепараты не влияют отрицательно на иммуногенность друг друга: отсутствует суммация реактогенности и у привитых животных формируется напряженный и продолжительный иммунитет против этих инфекций.
11. В эксперименте одновременная прививка против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза, являясь безвредной и иммуногенной, предохраняет животных от заражения вышеназванными инфекциями.
12. Комплексное применение вакцины из штамма Рев-1 и ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза способствует формированию клеточного и гуморального иммунитета у привитых животных. Метод не оказывает отрицательного влияния на факторы естественной резистентности организма овец.
13. В производственных условиях одновременная прививка овец против бруцеллеза (вакциной из штамма Рев-1), сальмонеллеза и пастереллеза (ассоциированной вакциной против сальмонеллеза и пастереллеза) по эффективности (95%) не уступает раздельной иммунизации против бруцеллеза и ассоциированной прививке против сальмонеллеза и пастереллеза.
14. При исследовании бактерицидных свойств препарата Бровадез-плюс на тест-обьектах установлена высокая степень бактерицидной активности данного препарата в отношении бруцелл в концентрации 1,5% при экспозиции 24 ч из расчета рабочего раствора препарата 1 л на м2.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).
2. Технические условия на ассоциированную гидроокисьалюминиевую формолвакцину против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).
3. Наставление по применению ассоциированной гидроокисьалюминиевой формолвакцины против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).
4. Система профилактических и оздоровительных мероприятий против бруцеллеза мелкого рогатого скота и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Рев-1 в хозяйствах Республики Таджикистан (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).
5. Методические указания по серологической диагностике бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота (утв. ГУВ МСХ РТ, 2003).
6. Инструкция по изготовлению и контролю антигена цветного для роз-бенгал пробы (РБП) при диагностике бруцеллеза у животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
7. Технические условия на антиген цветной для роз-бенгал пробы (РБП) при диагностике бруцеллеза у животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
8. Наставление по применению антигена цветного для роз-бенгал пробы (РБП) при диагностике бруцеллеза у животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
9. Инструкция по изготовлению и контролю единого антигена для РА, РСК, РДСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
10. Технические условия на единый антиген для РА, РСК, РДСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
11. Наставление по применению единого антигена для РА, РСК, РДСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
12. Система профилактических и оздоровительных мероприятий против бруцеллеза мелкого рогатого скота и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Br. melitensis Рев-1 (утв. ГУВ МСХ РТ, 2005).
13. Наставление по диагностике бруцеллеза животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2006).
14. Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных (утв. ГУВ МСХ РТ, 2006).
15. Рекомендации по применению комплексной иммунизации мелкого рогатого скота против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастерелеза (утв. ГУВ МСХ РТ, 2006).
16. Система профилактических и оздоровительных мероприятий от бруцеллеза мелкого рогатого скота и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Рев-1 в хозяйствах РТ (утв. СГВН МСХ РТ, 2011).
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Турдиев Ш.А. Эффективность системы профилактических и оздоровительных мероприятий от бруцеллеза мелкого рогатого скота и инфекционного эпидидимита баранов с применением вакцины из штамма Рев-1 в хозяйствах Республики Таджикистан / Ш.А. Турдиев // Докл. ТАСХН, посвящ. 1100-летию государства Сомонидов. - Душанбе, 1999. - С. 48 - 49.
2. Турдиев Ш.А. Влияние иммунопептида - тимоцина на антигенную активность вакцины из штамма Рев-1 / Ш.А. Турдиев, У.А. Абдуллоев // Научное обеспечение ветеринарного благополучия животноводства: матер. Междунар. конф., посвящ. 75-летию УзНИВИ. - Самарканд, 2001. - С. 54 - 55.
3. Сатторов И.Т. Эффективность витагина-1 при эндометрите у коров / И.Т. Сатторов, Ш.А. Турдиев, Ш.Р. Мирзоахмедов, П. Асоев // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: матер. Междунар. науч.-практ. конф. - Воронеж, 2002. - С. 510 - 511.
4. Турдиев Ш.А. Возможность применения комплексной иммунизации против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза в экспериментальных условиях / Ш.А. Турдиев, У.А. Абдуллоев, К.И. Идиев // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условыях: матер. Междунар. науч.-практ. конф. - Воронеж, 2002. - С. 618 - 619.
5. Турдиев Ш.А. Исследование и применение координационных соединений железа с дибазолом / Ш.А. Турдиев, У.Р. Раджабов, З.Ю. Юсупов // Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях: матер. Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 60-летию ТаджНИВИ. - Душанбе, 2003. - С. 143 - 144.
6. Турдиев Ш.А. Комплексобразование в системе Cu(O) Cu(II) имидазол-вода / Ш.А. Турдиев, У.Р. Раджабов, З.Ю. Юсупов // Состояние и преспективы развития ветеринарной науки и практики: матер. Междунар. науч. конф., посвящ. госпрограмме Аул / КазНИВИ. - Алматы, 2003. - С. 192 - 193.
7. Турдиев Ш.А. Конъюнктивальный метод иммунизации лабораторных животных и мелкого рогатого скота против бруцеллеза вакциной из штамма Рев-1 / Ш.А. Турдиев, А. Муминов, А.Х. Махмудов // Актуальные проблемы инфекционной патологии животных: матер. Междунар. науч. конф., посвящ. 45-летию ФГУП ВНИИЗЖ. - Владимир, 2003. - С. 244 - 249.
8. Турдиев Ш.А. Конъюнктивальный метод иммунизации мелкого рогатого скота против бруцеллеза живой вакциной из штамма Рев-1 / Ш.А. Турдиев, А. Муминов, А.Х. Махмудов // Информ. листок / НПИЦентр РТ. - Душанбе, 2003. - №11. - 2 с.
9. Турдиев Ш.А. Координационные соединения, образующиеся в системе Fe (II) и Fe (III) бензимидазол-вода / Ш.А. Турдиев, У.Р. Раджабов, З.Ю. Юсупов // Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях: матер. Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 60-летию ТаджНИВИ. - Душанбе, 2003. - С. 145 - 147.
10. Турдиев Ш.А. Опыт оздоровления совхоза Тебалай Хатлонской области Республики Таджикистан от бруцеллеза мелкого рогатого скота / Ш.А. Турдиев, А. Муминов, К.У. Идиев // Состояние и преспективы развития ветеринарной науки и практики: матер. Междунар. науч. конф., посвящ. госпрограмме Аул / КазНИВИ. - Алматы, 2003. - С. 245 - 247.
11. Турдиев Ш.А. Распространение бруцеллеза коз в частном секторе Республики Таджикистан / Ш.А. Турдиев, А. Махмадшоев // Современное состояние и перспективы оздоровления хозяйств от инфекционных и инвазионных болезней животных и человека: матер. Междунар. науч.-практ. конф. - Бишкек, 2003. - С. 288 - 289.
12. Турдиев Ш.А. Результаты иммунизации лабораторных животных живой вакциной из штамма Рев-1 конъюнктивальным способом / Ш.А. Турдиев, А. Муминов, К.У. Идиев, А.Х. Махмудов // Актуальные проблемы болезней животных в современных условыях: матер. Междунар. науч-практ. конф., посвящ. 60-летию ТаджНИВИ. - Душанбе, 2003. - С. 45 - 46.
13. Турдиев Ш.А. Физико-химические и биологические особенности координационного соединения дибаферола / Ш.А. Турдиев, И.Т. Сатторов, У.Р. Раджабов, З.Ю. Юсупов // Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях: матер. Междунар. науч-практ. конф., посвящ. 60-летию ТаджНИВИ. - Душанбе, 2003. - С. 145.
14. Турдиев Ш.А. Эффективность РБПМ в диагностике бруцеллеза у коров / Ш.А. Турдиев, А. Махмадшоев, З.С. Кельдибекова, Ж.Б. Касымбеков // Современное состояние и перспективы оздоровления хозяйств от инфекционных и инвазионных болезней животных и человека: матер. Междунар. науч.-практ. конф. - Бишкек, 2003. - С. 287 - 288.
15. Турдиев Ш.А. Эффективность Рев-1 в оздоровлении животноводческих хозяйств от бруцеллеза / Ш.А. Турдиев, А. Муминов, К.У. Идиев // Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях: матер. Междунар. науч-практ. конф., посвящ 60-летию ТаджНИВИ. - Душанбе, 2003. - С. 78 - 79.
16. Сатторов И.Т. Координационные соединения Fe (II) и Fe (III), обладающие противомикробной активностью / И.Т. Сатторов, Ш.А. Турдиев, У.Р. Раджабов, З.Ю. Юсупов // Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных: матер. II междунар. науч. конф. - Самарканд, 2004. - С. 159 - 161.
17. Сатторов И.Т. Способ определения состава и получения противомикробных препаратов / И.Т. Сатторов, Ш.А. Турдиев, У.Р. Раджабов, З.Ю. Юсупов // Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных: матер. II междунар. науч. конф. - Самарканд, 2004. - С. 162 - 165.
18. Турдиев Ш.А. Эпизоотологические особенности распространения бруцеллеза животных в Таджикистане / Ш.А. Турдиев // Докл. ТАСХН, посвящ. 80-летию города Душанбе. - Душанбе, 2004. - С. 80 - 82.
19. Турдиев Ш.А. Методы диагностики бруцеллеза животных в Таджикистане / Ш.А. Турдиев, А. Муминов, К.У. Идиев // Актуальные проблемы диагностики болезней животных: матер. II Междунар. конф. - Алматы, 2005. - С. 304 - 305.
20. Турдиев Ш.А. Сравнительное изучение эффективности роз бенгал антигенов, производимых в отдельных странах / Ш.А. Турдиев, А. Муминов, К.У. Идиев // Актуальные проблемы диагностики болезней животных: матер. II Междунар. конф. - Алматы, 2005. - С. 218 - 219.
21. Турдиев Ш.А. Ассоциированное течение у овец бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза и комплексный метод их специфической профилактики / Ш.А. Турдиев, К.У. Идиев // Кишоварз. - Душанбе, 2006. - №3. - С. 20 - 21.
22. Турдиев Ш.А. Бруселлёзи чорвои хурди шохдор - пешгири ва муборизаи зидди он / Ш.А. Турдиев // Ветеринария. - Душанбе, 2006. - №3. - С. 24 - 26.
23. Турдиев Ш.А. Система профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота в Таджикистане с применением вакцины из штамма Рев-1 / Ш.А. Турдиев, А.М. Муминов // Ветеринария. - Душанбе, 2006. - №3. - С. 20 - 23.
24. Турдиев Ш.А. Специфичность роз-бенгал теста при диагностике бруцеллеза животных / Ш.А. Турдиев // Состояние и преспективы развития ветеринарных биопрепаратов: матер. III Междунар. конф. - Алматы, 2006. - С. 240 - 242.
25. Турдиев Ш.А. Экспресс-метод диагностики бруцеллеза у коров / Ш.А. Турдиев // Ветеринария. - Душанбе, 2006. - №3. - С. 18.
26. Турдиев Ш.А. Эффективность комплексной иммунизации овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза / Ш.А. Турдиев, К.У. Идиев // Состояние и преспективы развития ветеринарных биопрепаратов: матер. III Vеждунар. конф. - Алматы, 2006. - С. 243 - 244.
27. Турдиев Ш.А. Влияние витаминной обеспеченности на сохранность молодняка и послеродовые осложнения у коров / Ш.А. Турдиев, К.У. Идиев, З.Н. Абдуллоев, В.А. Сидоркин // Кишоварз. - Душанбе, 2008. - №2. - С. 20 - 21.
28. Саттори И. Комплексные антибактериальные препараты и их эффективность при болезнях животных / Н.Р. Хасанов, Ш.А. Турдиев, Н.Р. Сатторов // Докл. ТАСХН. - Душанбе, 2009. - №1. - С. 40 - 44.
29. Турдиев Ш.А. Бруцеллёз мелкого рогатого скота в частном секторе Таджикистана / Ш.А. Турдиев, А.Х. Махмудов // Науч.-техн. бюлл. - Львов, 2009. - №10. - С. 315 - 318.
30. Муминов А. Специфическая профилактика бруцеллёза мелкого рогатого скота в Таджикистане / А. Муминов, Ш.А. Турдиев // Докл. ТАСХН. - Душанбе, 2010. - С. 48 - 51.
31. Турдиев Ш.А. Лечение эндометрита коров / Ш.А. Турдиев, К.У. Идиев // Ветеринария. - Душанбе, 2010. - №4. - С. 25 - 27.
32. Турдиев Ш.А. Определение бактерицидных свойств препарата Бровадез-плюс в отношении возбудителей бруцеллеза / Ш.А. Турдиев, С.М. Мухиддинов, А.А. Фотина // Кишоварз. - Душанбе, 2010. - №4. - С. 30 - 35.
33. Турдиев Ш.А. Совершенствование профилактики бруцеллёза мелкого рогатого скота в Таджикистане / Ш.А. Турдиев // Науч. вестн. вет. медицины: сб. науч. тр. Белоцерковского Национального аграрного университета. - Белая Церковь, 2010. - Вып. №6 (79). - С. 118 - 120.
34. Турдиев Ш.А. Эпизоотологический мониторинг и методы специфической профилактики бруцеллёза мелкого рогатого скота / Ш.А. Турдиев, А.Р. Мухидинов // Кишоварз. - Душанбе, 2010. - №3. - С. 32 - 33.
35. Турдиев Ш.А. Эффективность лактовита при лечении мастита коров в сухостойном периоде / Ш.А. Турдиев, К.У. Идиев // Кишоварз. - Душанбе, 2010. - №1. - С. 19 - 20.
36. Комплексное лечение острого послеродового эрдометрита коров / Ш.А. Турдиев, К.У. Идиев, Т.М. Давлатмуродов, З.Н. Абдуллоев // Матер. Междунар. конф., посвящ. 20-летию государственной независимости Республики Таджикистан и 80-летию ТАУ им. Ш. Шотемура - Душанбе 2011. - С. 25 - 27.
37. Турдиев Ш.А. Brucellosis of small ruminants in Tadjikistan / Ш.А. Турдиев // Veterinary problems of Central Asia - Food security: The use of modern ways of diagnostics and prophylaxis of infectious diseases of animals: матер. Междунар. конф. UNINET, посвящ. 80-летию ТАУ им. Ш. Шотемура. - Душанбе, 2011. - С. 42 - 43.
38. Турдиев Ш.А. Determination bactericidal properties of the preparation УBrovadez plusФ against brucellosis / Ш.А. Турдиев // Research and clinical application of traditional medicine in Xinjiang and Neighbouring countries. - Material Conference: abstracts. - Урумчи, 2011. - С. 39 - 44.
39. Турдиев Ш.А. Производственные испытания вакцины из штамма Рев-1 в малых дозах / Ш.А. Турдиев, А. Муминов // Кишоварз. - Душанбе, 2012. №3. - С. 20 - 22.
40. Патент TJ 390. Республика Таджикистан. Способ получения лечебно-профилактического биопрепарата Субтилбен / Сатторов И.Т., Джуманкулов Х.Д., Сангинов Б.С., Султонова М.Х., Турдиев Ш.А., Каландаров З.С., Саидов Ш., Махмудов К.Б., Носиров С. // Бюлл. 38. - 2005. - С. 4.
41. Патент TJ 395. Республика Таджикистан. Препарат Шодмон для лечения инфекционных энтеритов телят / Сатторов И.Т., Турдиев Ш.А., Махмудов К.Б., Саидов Ш., Салимов Т.М., Сатторов Н.Р., Носиров С. // Бюлл. 35. - 2004. - С. 6.
42. Патент TJ 403. Республика Таджикистан. Дибаферол, проявляющий противомикробную активность / Юсупов З.Н., Раджабов У.Р., Сатторов И.Т., Турдиев Ш.А., Имомов Р.П., Махмудов К.Б., Сатторов Н.Р. // Бюлл. 37. - 2005. - С. 12.
43. Патент TJ 404. Республика Таджикистан. Дибакупрол, проявляющий антибактериальную и антигрибковую активность / Юсупов З.Н., Раджабов У.Р., Сатторов И.Т., Турдиев Ш.А., Имомов Р.П., Махмудов К.Б., Сатторов Н.Р. // Бюлл. 37. - 2005. - С. 13.
44. Патент TJ 405. Республика Таджикистан. Препарат витагин для лечения эндометритов животных / Сатторов И.Т., Турдиев Ш.А., Махмудов К.Б., Саидов Ш., Салимов Т.М., Сатторов Н.Р., Давлатмуродов Т.М., Бобоев Ч., Юсупов З.Н., Раджабов У.Р. // Бюлл. 37. - 2005. - С. 8.
45. Патент TJ 406. Республика Таджикистан. Препарат лактовит для лечения маститов коров / Сатторов И.Т., Турдиев Ш.А., Махмудов К.Б., Саидов Ш., Салимов Т.М., Сатторов Н.Р., Давлатмуродов Т.М., Бобоев Ч., Юсупов З.Н., Раджабов У.Р. // Бюлл. 37. - 2005. - С. 8.
46. Патент TJ 42. Способ дифференциации поствакцинальных реакций от реакции при естественном бруцеллезе / Турдиев Ш.А., Муминов А., Идиев К.У., Махмудов А.Х. // Бюлл. 43. - 2006. - С. 4.
47. Патент TJ 50. Республика Таджикистан. Комплексная иммунизация овец против бруцеллеза, сальмонеллеза и пастереллеза / Сатторов И.Т., Турдиев Ш.А., Муминов А., Идиев К.У. // Бюлл. 43. - 2006. - С. 33.
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по сельскому хозяйству