Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству  

На правах рукописи

Метлева Анастасия Сергеевна

САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ

БИОТОПОВ ОБЪЕКТОВ ЖИВОТНОВОДСТВА

06.02.02 Ц ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и

иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Омск 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном

образовательном учреждении высшего профессионального образования

Омский государственный аграрный университет

имени П.А. Столыпина

Научный руководитель:	Колычев Николай Матвеевич, заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор
Официальные оппоненты:	Сидоров Геннадий Николаевич доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры зоологии и физиологии, ГОУ ВПО Омский государственный педагогический университет
	Кисленко Виктор Никифорович, доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры эпизоотологии и микробиологии, ФГБОУ ВПО Новосибирский государственный аграрный университет
Ведущая организация:	ФГБОУ ВПО Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана

Защита состоится л__ апреля 2012 г. __ __в часов на заседании диссертационного совета Д. 220.050.03 при ФГБОУ ВПО Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина в Институте ветеринарной медицины и биотехнологии по адресу: 644008, г. Омск, Институтская площадь, 2,  тел. (3812) 24-15-35, факс (3812) 24-39-63, e-mail: leschеva@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВПО ОмГАУ имени П.А. Столыпина.

Автореферат разослан л_________________2012 г.

 

Ученый секретарь

диссертационного совета

канд. ветеринар. наук, доцент Лещева Н.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Животноводческие комплексы и фермы являются крупными источниками загрязнения биотопов окружающей среды. С увеличением объема необеззараженных отходов их утилизация естественным способом становится непосильной для водных, воздушных и почвенных экосистем (Р. Ю. Андреев, 2008).

Загрязнение окружающей среды сопровождается дегенеративными процессами, в т.ч. нарушением процессов самоочищения. В результате, нарушается нормальный, эволюционно сложившийся микробиоценоз атмосферного воздуха, водного бассейна, почвы по качественным и количественным показателям. Нормальная микрофлора замещается чужеродной (Ю.А. Макаров, 2007). Вместе с необеззараженным навозом и сточными водами в питьевую воду, воздух, почву, на поверхность оборудования, инвентаря животноводческих ферм и комплексов попадают антибиотико-резистентные микроорганизмы, способные сохраняться там длительное время. Резистентные микроорганизмы передаются животным через корм и воду, воздух помещений, объекты производственного назначения, способствуя заболеваемости поголовья (А.С. Санников, 1998; Н.М. Колычев, 2009; C. Novais, 2005).

Одним из самых ярких примеров антибиотико-резистентных бактерий, вызывающих заболевания являются ванкомицин-резистентные энтерококки (VRE) (В. М. Бондаренко, 1997; Н. М. Колычев, М. И. Петрова, 2009; K. Hudson, 2002). Энтерококки, широко распространен во внешней среде, обладают факторами вирулентности (цитолизин), устойчивы к подавляющему большинству антибактериальных препаратов, действию физических, химических и биологических факторов (Ю.И. Ворошилов, 1979).

В России исследования по проблеме обсеменения энтерококками биотопов окружающей среды и пищевых продуктов малочисленны (С. В. Сидоренко, 2004; С. А. Шевелева, 2007). А необходимость нормирования уровня бактериального загрязнения пищевого сырья вызвана практически тотальным (93.4 %) несоответствием условий производства сельхозпродукции санитарным правилам, установленным в РФ. (С. А. Шевелева, 2007).

В настоящее время в ветеринарной микробиологии изучению санитарного состояния биотопов животноводческих объектов, в т.ч. наличию на них и в пищевом сырье энтерококков не уделяется должное внимание, что и определило выбор темы и направление наших исследований. 

Цель исследования и задачи. Изучить санитарно-бактериологическое состояние биотопов объектов животноводства и сырья животного происхождения, для разработки объективных показателей их санитарно-бактериологического качества. 

Задачи: 

1. Изучить качественный и количественный состав микрофлоры почвы на территории животноводческих ферм и комплексов; питьевой воды; воздуха помещений; объектов производственного назначения, с определением доминирующих популяций микроорганизмов.
2. Изучить распространение микроорганизмов рода Enterococcus в окружающей среде на животноводческих объектах.
3. Изучить биологические свойства микрофлоры, контаминирующей биотопы животноводческих объектов.
4. Изучить распространение, количество, биологические свойства загрязнителей, в т.ч. микроорганизмов рода Enterococcus, в сыром молоке, парном и охлажденном мясе, определить доминирующие популяции.

Научная новизна. Получены новые данные о видовом составе, биологических свойствах условно-патогенной микрофлоры биотопов животноводческих объектов: почвы, воды, воздуха, объектов производственного назначения; сырого молока и охлажденного мяса. Представлены доминирующие популяции микроорганизмов на изучаемых объектах.

Определена распространенность микроорганизмов рода Enterococcus с гемолитическими и антибиотико-резистентными свойствами на биотопах окружающей среды, в сыром молоке, парном и охлажденном мясе.

Усовершенствована система микробиологического мониторинга санитарного качества питьевой воды, поступающей на животноводческие комплексы.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Результаты санитарно-микробиологического исследования биотопов окружающей среды, свидетельствуют о неудовлетворительном санитарно-гигиеническом состоянии на животноводческих фермах и комплексах Омской области. Объекты внешней среды (почва, вода, воздух, объекты производственного назначения), а так же сырое молоко и охлажденное мясо обсеменены микроорганизмами рода Enterococcus с гемолитическими свойствами, резистентные к большинству антибиотиков, применяемых в исследовательской работе. Результаты микробиологических исследований позволяют определить дополнительные санитарно-показательные микроорганизмы мониторинга объектов внешней среды животноводческих комплексов и пищевого сырья полученного с перерабатывающих предприятий.

Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников и руководств по санитарной микробиологии и гигиене сельскохозяйственных животных.

Внедрение результатов исследований. Отдельные положения диссертационной работы используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсу ветеринарной микробиологии на факультетах ветеринарной медицины Омского ГАУ им. П. А. Столыпина, Красноярского ГАУ, Башкирского ГАУ, Казанской ГАВМ, Новосибирского ГАУ, Дальневосточного ГАУ.

На основании полученных научных данных, разработаны и утверждены методические указания для специалистов ветеринарной службы Бактериологический контроль санитарного качества питьевой воды, поступающей на животноводческие фермы, комплексы, крестьянские и фермерские хозяйства (утв. Ученым советом ГНУ Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии, 2011 г.).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы инновационного развития ветеринарной науки и практики", посвященную 105-летию КазНИВИ 16-17 сентября 2010 г. (Алматы, 2010);  Международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию со дня рождения члена-корреспондента РАСХН, д.в.н., профессора М. М. Джамбулатова Современные проблемы, перспективы и инновационные тенденции развития аграрной науки 25-26 ноября 2010 г. (Махачкала, 2010); Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ Инфекционная патология животных 22 - 25 ноября 2011 г (Омск, 2011).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, том числе одна в издании, рекомендованном ВАК Минобразования Российской Федерации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста, содержит 8 таблиц, 20 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы содержит 138 источников литературы, в том числе 54 иностранных авторов.

Автор искренне благодарен коллективу лаборатории диагностики бактериальных и вирусных инфекций ИВМиБ ОмГАУ им. П.А. Столыпина, а именно Марине Ивановне Петровой, Маргите Яковлевне Домрачевой, Татьяне Анатольевне Цупиковой, за предоставленную тему, и неоценимую помощь в реализации микробиологических исследований.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Биотопы окружающей среды животноводческих объектов и продуктов животного происхождения обсеменены условно-патогенной микрофлорой с антибиотико-резистентными и гемолитическими свойствами, при этом доминирующими популяциями являются бактерии рода Enterococcus spp. (43,8%).

2. Наличие патогенных и резистентных энтерококков в окружающей среде, сыром молоке и охлажденном мясе обусловливает необходимость учета его в качестве санитарно-показательного микроорганизма в СанПиНах.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Собственные исследования проведены в период с 2008 по 2011 гг. на базе лаборатории диагностики бактериальных и вирусных инфекций института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина, в 26 животноводческих хозяйствах Омской области.

За период исследований было отобрано и исследовано бактериологическим методом: 87 проб почвы с территорий животноводческих комплексов и ферм; 44 питьевой воды; 32 воздуха животноводческих помещений; 276 смывов с объектов производственного назначения; 30 сырого молока; 29 парного и 35 охлажденного мяса, с перерабатывающих предприятий Омской области.

0. Пробы почвы отбирали с поверхности, глубины 5 и 25 см и исследовали согласно ГОСТу 17.4.4.02-84 Охрана природы. Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа.

Пробы воды исследовали согласно МУКу 4.2.1018-01 Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды методом мембранной фильтрации. Нормирование качества воды проводили согласно СанПиНу 2.1.4.2580-10. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества и СанПиНу 2.1.4.1175 - 02 Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников. В качестве дополнительного показателя загрязнения воды исследовали наличие энтерококка, для этого фильтры помещали на среду Энтерококкагар.

Пробы воздуха исследовали седиментационным методом Коха (для ориентировочной оценки санитарного состояния) и аспирационным методом с применением аспиратора ПУ-1Б, с использованием мясопептонного агара (МПА) (для определения общего микробного числа (ОМЧ)), желточно-молочно-солевого агара (ЖМСА) (для определения S.aureus), Энтерококкагара (для определения энтерококков).

Смывы с объектов производственного назначения пересевали со среды накопления (1%-ый глюкозный мясопептонный бульон (МПБ)) на среды: Эндо, Энтерококкагар, ЖМСА, Плоскирева, кровяной агар (КА), висмут-сульфит агар (ВСА).

Исследование сырого молока проводили в соответствии с Федеральным законом (ФЗ) Российской Федерации от 12 июня № 88-ФЗ Технический регламент на молоко и молочную продукцию, где определяли КМАМФАнМ и бактерии рода Salmonella (ГОСТ Р 52814-2007 Продукты пищевые. Также в сыром молоке определяли: БГКП (по ГОСТу 9225-84); S.aureus (ГОСТ 10444.2-94 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества S.aureus); Метод выявления бактерий рода Salmonella); энтерококки (ГОСТ 28566-90 Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества энтерококков).

Исследование парного и охлажденного мяса проводили согласно ГОСТу 2123 - 75 Мясо. Методы бактериологического анализа. Для определения наличия энтерококков из каждого разведения делали высев в среду накопления (1%-ый глюкозный МПБ), инкубировали при 37 С, 18-24 ч., затем делали высев из каждого разведения на Энтерококкагар.

Определение родовой и видовой принадлежности выделенных микроорганизмов проводили согласно общепринятых методик (В.И. Покровский, 1999).

Гемолитические свойства определяли с использованием КА. Антибиотико-резистентные свойства на среде АГВ диско-диффузионным методом согласно МУКу 4.2.1890-04. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам.

Полученные данные обрабатывали статистически с использованием компьютерной программы Microsoft Office Excel 2003; достоверность среднеарифметических величин оценивали по критериям Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Микрофлора почвы с территорий животноводческих ферм и комплексов Омской области

Из почвы выделили 277 культур, из них 95 (34,2 %) выделили из проб с поверхности; 81 (29,2 %) с глубины 5 см; 101 (36,4 %) с глубины 25 см.

В почве, преобладали микроорганизмы видов: E.coli 62 культур (21 %), в т.ч. 24 (38,7 %) обладали гемолитическими свойствами; K.pneumoniae 30 (15,5 %), в т.ч. 18 (41,8 %) обладали гемолитическими свойствами; E.faecium 68 (29,9 %); в т.ч. 38 (55,8 %) обладали гемолитическими свойствами; E.faecalis 43 (18,9 %), в т.ч. 19 (44,1 %) обладали гемолитическими свойствами. Качественный состав и соотношение микрофлоры почвы на разных слоях не имеет существенных различий.

Степень загрязнения почвы выражали в индексах БГКП и энтерококков. Преобладала чрезвычайно опасная степень эпидемической опасности: по индексу БГКП 36 проб (41,3 %) и по индексу энтерококков 34 (39 %).

Культуры E.faecium обладали резистентностью к ванкомицину (10,5 %); цефуроксиму (36,7 %); гентамицину (21 %); бензилпенициллину (28,9 %); тетрациклину (2,6 %); эритромицину (5,2 %); ципрофлоксацину (13 %). E.faecalis к ванкомицину (6,6 %); цефуроксиму (23,2 %); гентамицину (10,5 %); бензилпенициллину (33,3 %); тетрациклину (6,6 %); эритромицину (6,6 %); ципрофлоксацину (6,6 %); ампициллину (3,3 %).

Культуры E.coli обладали резистентностью к цефуроксиму (6,0 %); гентамицину (3,0 %), ампициллин (3,0 %). K.pneumoniae к цефуроксиму, ампициллину, канамицину (46 %).

Почва на территории животноводческих ферм и комплексов обсеменена условно-патогенными микроорганизмами, что представляет потенциальную опасность для заражения людей и животных. Необходим контроль за санитарно-микробиологическим состоянием почвы на территории животноводческих ферм и комплексов.

3.2. Микрофлора воды, поступающей на животноводческие фермы и комплексы

Установили превышение предельно допустимых норм общего микробного числа (ОМЧ) в 12 пробах (27,2 %); общих колиформных бактерий (ОКБ) в 28 пробах (63,6 %); термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) в 13 пробах (29,5 %). Энтерококки обнаружили в 33 пробах (75 %).  Требованиям СанПиН 2.1.4.1175-02 не соответствовали 28 проб воды (63,6 %).

Выделили 100 культур условно-патогенной микрофлоры, из них 23 E.coli (23 %), в т.ч. 7 (30,4 %) обладали гемолитическими свойствами; E.cloacae 9 (9 %), в т.ч. 3 культуры (33,3 %) обладали гемолитическими свойствами; 11 E.faecium (11 %), в т.ч. 6 (54,5 %) обладали гемолитическими свойствами; 32 E.faecalis (32 %), в т.ч. 19 (59,3 %) обладали гемолитическими свойствами; K.pneumoniae 4 (4 %), в т.ч. 3 (75 %) обладали гемолитическими свойствами; P.morganii - 2 (2 %); P.mirabilis 4 (4 %), E.aerogenes - 1 (1%), C.freundii - 5 (5 %), P.vulgaris - 2 (2 %); НФГО - 7 (7 %).

При изучении чувствительности выделенных культур установлено, что E.faecalis обладали резистентностью к ванкомицину (26,8 %); бензилпенициллину (15,3 %); тетрациклину (16,9 %); эритромицину (30,7 %); амоксициллину (7,6 %); цефуроксиму (30,7 %). E.faecium к ванкомицину (54 %); тетрациклину (18,1 %); ципрофлоксацину (45,4 %). 

Культуры K.pneumoniae обладали резистентностью к амоксициллину и стрептомицину (50 %); E.coli к амикацину (50 %); амоксициллину (25 %); левомицетину (25 %). P.mirabilis к цефуроксиму и амикацину (50 %); E.cloacae к  ампициллину и канамицину (100 %); C.freundii к амикацину, стрептомицину, карбенициллину (100%).

Питьевая вода, поступающая на животноводческие комплексы для выпаивания животным, мойки доильного молочного оборудования, содержит условно-патогенные микроорганизмы с патогенными и резистентными свойствами, что представляет потенциальную опасность для обсеменения сырого молока. Преобладание энтерококков, с патогенными и резистентными свойствами в воде обусловливает необходимость введения его в качестве санитарно-показательного в СанПиНы. 

3.3 Микрофлора воздуха животноводческих помещений

При исследовании микрофлоры воздуха седиментационным методом среднее количество нормируемых показателей в родильных отделениях составляло: ОМЧ - 1,80,9104 КОЕ/м3 (Р>0,95); стафилококков - 1,360,63104 КОЕ/м3 (Р>0,95); энтерококков - 14,211,1103 КОЕ/м3. В помещениях для содержания телят разных возрастов: ОМЧ - 4,84,1104 КОЕ/м3 (Р>0,95); стафилококков - 2,01,2104 КОЕ/м3 (Р>0,99); энтерококков - 2,21,7104 КОЕ/м3 (Р>0,99). В помещениях для содержания дойных коров: ОМЧ - 2,30,7104 КОЕ/м3 (Р>0,95); стафилококков - 3,82,9104 КОЕ/м3 (Р>0,95); энтерококков - 3,22,7104 КОЕ/м3.

При исследовании микрофлоры воздуха аспирационным методом с использованием аспиратора ПУ-1Б среднее количество нормируемых показателей в родильных отделениях составляло: ОМЧ - подсчету не подлежит, сплошной рост споровой микрофлоры; стафилококков - 5,9103 КОЕ/м3; энтерококков - 5,5102 КОЕ/м3. В помещениях для содержания телят разных возрастов: ОМЧ - 2,41,46103 КОЕ/м3 (Р>0,99); стафилококков - 5,585,34103 КОЕ/м3 (Р>0,95); энтерококков - 1,60,8104 КОЕ/м3 (Р>0,99). В помещениях для содержания дойных коров: ОМЧ - 7,00,2103 КОЕ/м3 (Р>0,95); стафилококков - 1,7104 КОЕ/м3; энтерококков - 6,225,4103 КОЕ/м3 (Р<0,95).

Из воздуха было изолировано 80 культур микроорганизмов: S.epidermidis 17 (21,25 %); S.aureus 2 (2,5 %); S.saprophyticus 18 (22,5 %); E.faecalis 28 (35 %), в т.ч. 18 (51,4 %) с гемолитическими свойствами; E.faecium 15 (18,75 %), в т.ч. 3 (20 %) с гемолитическими свойствами.

Культуры S.epidermidis обладали резистентностью к тетрациклину (50 %); эритромицину (66,6 %); линкомицин (33,3 %); бензилпенициллину (50 %); ампициллину и оксациллину (16,6%). S.saprophyticus к линкомицину, бензилпенициллину, ампициллину (35,7 %); эритромицину (28 %); оксациллину (14,2 %). S.aureus к тетрациклину, линкомицину, цефазолину, эритромицину (100 %); бензилпенициллину (50 %).

Культуры E.faecalis обладали резистентностью к ванкомицину (3,8 %); тетрациклину (23 %); ампициллину (38,4 %); эритромицину (46,1%); цефтриаксону (19,1 %); амикацину (34,6 %); гентамицину (3,8 %). E.faecium к ванкомицину (10 %); к тетрациклину (30%); бензилпенициллину (20 %); ампициллину (40 %); гентамицину (10 %); амикацину (60 %); эритромицину (30 %).

Воздух животноводческих помещений содержит кокковую микрофлору с патогенными свойствами, способную вызывать заболевания животных с поражением органов дыхания. Энтерококки и стафилококки, в т.ч. S.aureus, необходимо использовать в качестве СПМО при санитарно-микробиологическом исследовании воздуха животноводческих помещений.

3.4. Микрофлора объектов производственного назначения

С объектов внешней среды было отобрано 276 смывов, из которых выделили 693 культуры микроорганизмов: E.faecalis 230 (33,1 %); E.faecium 68 (9,8 %); E.coli 132 (19 %); P.vulgaris 13 (1,8 %); P.mirabilis 9 (1,2 %); P.morganii 1 (0,1 %); C.freundii 7 (1,0 %); E.aerogenes 9 (1,2 %); E.cloacae 25 (3 %); K.pneumoniae 32 (4.6 %); K.ozaenae 3 (0,4 %); K.oxytoca 9 (1,2 %); S.epidermidis 68 (9.8 %); S.aureus 41 (5,9 %); S.saprophyticus 16 (2,0 %); P.aeruginosa 21 (3.0 %); Acinetobacter spp. 6 (0.8 %); Alcaligenes spp. 6 (0,8 %).

Микрофлоры не обнаружено в 4 пробах (1,4 %).

E.faecalis 150 культур (65,2 %) и E.faecium 24 (35,2 %) обладали гемолитическими свойствами.

Культуры E.faecalis обладали резистентностью к ванкомицину (30,7 %); к тетрациклину (34,5 %); бензилпениллину  (14 %); ципрофлоксацину (1,2 %); гентамицину (2,5 %); амоксициллину (12,7 %). E.faecium к цефуроксиму (25 %); тетрациклину (50 %).

Культуры S.aureus обладали резистентностью к тетрациклину (22,2 %); бензилпенициллину (71,1 %); левомицетину (5,5 %); оксациллину (49,9 %); цефазолину и ампициллину (11 %); амикацину и амоксициллину (5,5 %); к линкомицину (11,1 %). S.epidermidis к тетрациклину (36 %); безилпенициллину (68 %); левомицетину (28 %); оксациллину (44 %); ампициллину (12 %); амикацину (4 %). S.saprophyticus к бензилпенициллину (83,2 %); оксациллину и линкомицину (50 %); тетрациклину и амоксициллину (33,3 %); эритромицину и ампициллину (16,6 %).

E.coli обладали резистентностью к тетрациклину (23 %); левомицетину (15,3 %); цефуроксиму (7,6 %). K.pneumoniae тетрациклину (13,3 %); левомицетину (6,6 %); ампициллину (46,6 %); амоксициллину (20 %); цефуроксиму (13,3 %); амикацину (6,6 %); P.vulgaris к тетрациклину (16,6 %); левомицетину (33,3 %); амоксициллину (33,3 %); цефуроксиму (16,6 %); C.freundii к тетрациклину (66,6 %); E.cloacae к левомицетину (27,2 %); ампициллину и амикацину (9 %); тетрациклину и амоксициллину (18,1 %). P.aeruginosa к левомицетину (28,5 %); амоксициллину, ампициллину и амикацину (14,2 %); к цефуроксиму (57,1 %); ципрофлоксацину (14,2 %); тетрациклину (28,4 %).

На объектах производственного назначения присутствуют микроорганизмы, способные вызвать заболевания у людей и животных или/и ухудшить состояние продовольственного сырья, получаемого от животных (молоко). Для контроля над санитарным состоянием на животноводческих фермах и комплексах необходимо помимо БГКП учитывать наличие энтерококков, стафилококков, а так же микроорганизмов рода Pseudomonas. При проведении контроля качества мойки доильного молочного оборудования и дезинфекции на фермах и комплексах нужно контролировать отсутствие всех трех групп микроорганизмов.

3.5. Микрофлора сырого молока с молокоперерабатывающих предприятий Омской области

Исследовали 30 проб сырого молока. Выделили 92 культуры микроорганизмов: E.faecalis 24 (26%), в т.ч. 9 (37,5%) обладали гемолитическими свойствами; E.faecium 3 (3,2%), в т.ч. 2 (75%) обладали гемолитическими свойствами; S.aureus 19 (20,6%); S.epidermidis 9 (9,7%); P.vulgaris 13 (14,1%); E.coli 7 (7,6%); P.mirabilis и P.aeruginosa по 5 (5,4%); C.freundii и K.pneumoniae по 3 (3,2%). 

Средняя арифметическая КМАМФАнМ составила 2,690,93105 (Р>0,999). Показатели контаминации сырого молока МАМФАнМ, стафилококками, энтерококками в таблице 2.

В сыром молоке обнаружили БГКП, стафилококки, энтерококки в 27 пробах (90% от числа исследуемых проб). Из БГКП преобладает P.vulgaris - представитель гнилостной микрофлоры и возбудитель пищевых токсикоинфекций (ПТИ). В 18 (60 %) пробах обнаружен S.aureus

Таблица 1.

Количество проб	Кол-во изолятов	Число находок (абс.) и %% обнаружения к количеству проб
		E. сoli	C.freundii	Proteus spp.	K.pneumoniae	P.aeruginosa	S.aureus	S.epidermidis	Enterococcus spp.
30	92	7 (23,3)	3 (10)	18 (60)	3(10)	5 (16,6)	18 (60)	9 (30)	27 (90)

Микрофлора сырого молока

Таблица 2.

Показатели контаминации сырого молока МАМФАнМ,

стафилококками, энтерококками.

№ п/п	Количество проб содержащих контаминант		Содержание КОЕ/г
	Абс.	%%	Min	Max	Me
МАМФАнМ	30	100	6,0103	Обильный рост	3,0105
Стафилококки	27	90	2,0101	1,0105	1,0102
Энтерококки	27	90	1,0101	1,2104	3,7102
БГКП	27	90	_____	____	____

Частое обнаружение в сыром молоке микроорганизмов рода Enterococcus spp. с патогенными свойствами обусловливает введение этих микроорганизмов, в качестве санитарно-показательных, в микробиологический контроль пастеризованного молока и готовой молочной продукции, с целью определения эффективности их термической обработки. 

3.6. Микрофлора парного и охлажденного мяса крупного рогатого скота

В партии № 1, состоящей из 14 проб охлажденного мяса, средняя арифметическая величина КМАМФАнМ составляла 3,52,2102 КОЕ/0,1г (Р>0,999).. Максимальное значение КМАМФАнМ составляло 3,7102, минимальное - 1,1102, медиана - 3,05102. КМАМФАнМ обнаружили во всех исследуемых пробах. БГКП не обнаружили. Энтерококки - в четырех пробах (28,5 %).

В партии № 2, из 11 проб охлажденного мяса, минимальное значение КМАМФАнМ составляла 2101, максимальное - 1,4104, медиана - 6101. МАМФАнМ обнаружили в 5 пробах (45,4 %). БГКП обнаружили в 10 пробах (90,9 %). Энтерококки обнаружили в четырех пробах (36,3 %).

В партии № 3, из 10 проб охлажденного мяса, минимальное значение КМАМФАнМ - 6101, максимальное - 7,0105, медиана - 4,5102. МАМФАнМ обнаружили во всех пробах. БГКП не обнаружили. Энтерококки обнаружили в двух пробах (20 %).

В партии № 4, из 13 проб парного мяса, средняя арифметическая КМАМФАнМ составляла 2,60,5106 КОЕ/1,0 г (Р>0,999). Максимальное значение КМАМФАнМ - 3,6106 , минимальное - 1,6106, медиана - 2,5106. МАМФАнМ обнаружили во всех исследуемых пробах. БГКП обнаружили в шести пробах (46,1 %). Энтерококки обнаружили в 12 пробах (92,3 %).

В партии № 5, из 16 проб парного мяса, средняя арифметическая КМАМФАнМ составляла 2,10,4106 КОЕ/1,0 г (Р>0,999). Максимальное - 2,8106, минимальное - 1101, медиана - 9105. МАМФАнМ обнаружили в 12 пробах (75%). БГКП обнаружили в 15 пробах (93,7%). Энтерококки обнаружили в 15 пробах (93,7%). КМАМФАнМ в пробах парного и охлажденного мяса указаны в таблице 3.

Таблица 3.

Показатели контаминации парного и охлажденного мяса МАМФАнМ

№ партии мяса	Количество проб содержащих контаминант		Содержание КОЕ/г
	Абс.	%%	Min	Max	Мe
1(охлажденное)	14	100	1,1102	3,7102	3,05102
2(охлажденное)	5	45,4	2,0101	1,4104	6,0101
3(охлажденное)	10	100	6,0101	7,0105	4,5102
4(парное)	13	100	1,1102	3,6106	2,5106
5(парное)	8	6,6	1,0101	2,8106	1,9105

В 35 пробах охлажденного мяса обнаружили 20 изолятов УПМ: БГКП и Enterococcus spp. по 10 (28,5 %); а из 29 проб парного мяса изолировали 21 культуру БГКП

(72,4 %) и 27 (93,1 %) энтерококков. У Enterococcus spp. идентифицировали виды: E.faecalis 32 (86,4 %), в т.ч. 19 с гемолитическими свойствами (59,3 %); E.faecium 5 (13,5 %), в т.ч. два с гемолитическими свойствами (40%). Патогенные микроорганизмы не обнаружили. Количество микроорганизмов из парного и охлажденного мяса указаны в таблице 4.

Таблица 4.

Количество микроорганизмов парного и охлажденного мяса

Продукт	Кол-во проб	Кол-во изолятов	Число находок (абс.) и %% обнаружения к количеству проб
			БГКП	Enterococcus spp.
Охлажденное мясо	35	20	10 (28,5)	10 (28,5)
Парное мясо	29	48	21 (72,4)	27 (93,1)

Культуры E.faecalis обладали резистентностью к амикацину (45,4 %); тетрациклину, эритромицину, стрептомицину (36,3 %); ванкомицину (18,1%); пенициллину и левомицетину (9 %).

В связи с обнаруженными у энтерококков патогенными свойствами, а так же их количественного преобладания над БГКП, их необходимо включить в микробиологический контроль санитарного качества парного или охлажденного мяса. 

4. Выводы

1. Микробиоценозы животноводческих объектов представлены различными видами условно-патогенных микроорганизмов, в основном: E.faecium; E.coli; E.faecalis; S.saprophyticus; S.epidermidis.
2. Соотношения выделенных микроорганизмов на биотопах объектов животноводства имеют различия: в почве E.faecium - 29,9 %, E.coli - 21 %, E.faecalis - 18,9 %; в воде 11 %, 23 %, 32 % соответственно; в воздухе E.faecium - 18,75 %, E.faecalis - 35 %, S.epidermidis - 21,25 %; S.saprophyticus - 22,5 %; на объектах производственного назначения 9,8 %, 33,1%, 9,8 %, 2 % соответственно.
3. Из числа выделенных культур с объектов животноводства патогенными свойствами обладают E.faecalis - 64,8 %, E.faecium - 43,8 %; E.coli - 36,4 %.
4. Микрофлора сырого молока представлена в основном видами: E.faecalis - 26 %; S.aureus - 20,6 %, и родом Proteus spp. - 19,5 %. Патогенными свойствами обладают E.faecalis - 37,5 %, E.faecium - 75 %.
5. Микрофлора парного и охлажденного мяса представлена в основном видами: E.faecalis - 57 %, E.faecium - 8,1 %. Патогенными свойствами обладают E.faecalis - 54,2 %, E.faecium - 40 %. Энтерококки, выделенные из охлажденного мяса резистентны к амикацину, тетрациклину, эритромицину, стрептомицину, пенициллину, левомицетину, ванкомицину.
6. Выделенные с биотопов объектов животноводства энтерококки резистентны к бензилпенициллину, гентамицину, цефуроксиму, ципрофлоксацину, эритромицину, тетрациклину, амоксициллину, ванкомицину; энтеробактерии к ампициллину, амикацину, левомицетину и цефуроксиму; стафилококки к оксациллину линкомицину, ампициллину, эритромицину, тетрациклину, бензилпенициллину, амикацину.
7. Наличие патогенных энтерококков в питьевой воде, воздухе, объектах производственного назначения животноводческих ферм и комплексов, а так же в сыром молоке и мясе обусловливает применение этих микроорганизмов в качестве санитарно-показательных при микробиологическом контроле качества этих объектов.

5. Практические предложения

1. На основании проведенных исследований разработаны Методические указания Бактериологический контроль за санитарным состоянием питьевой воды, поступающей на животноводческие фермы, комплексы, крестьянские и фермерские хозяйства, (утв. Ученым советом ГНУ Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии, 27 декабря 2011 г.). 
2. Предлагаем руководству природоохранной прокуратуры, ветеринарно-санитарной службы, Центра гигиены и эпидемиологии Омского района и главному управлению ветеринарии Омской области обратить внимание на результаты наших исследований и принять необходимые меры. Мы со своей стороны, готовы оказать необходимую научно-методическую помощь по исследованию микрофлоры биотопов среды обитания животных и пищевого сырья, производимого на территории Омского района.
3. Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников и руководств по ветеринарной микробиологии.

6. Список опубликованных работ

1. Егорова* А. С. Санитарная оценка почвы, отобранной с территории животноводческих ферм Омской области / А. С. Егорова, Н. М. Колычев, М. И. Петрова// Актуальные проблемы инновационного развития ветеринарной науки и практики: сб. науч. тр./ Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт. - Алматы, 2010. - С. 210 - 215.

2. Егорова* А. С. Санитарная оценка воды, взятой с разводящей системы животноводческих ферм Омской области / А. С. Егорова, Н. М. Колычев, М. И. Петрова// Актуальные проблемы инновационного развития ветеринарной науки и практики: сб. науч. тр./ Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт. - Алматы, 2010. - С. 205 - 210.

3. Егорова* А. С. Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды из разводящей сети децентрализованных водоисточников животноводческих ферм Омской области / Егорова А. С., Колычев Н. М., Петрова М. И.// Вестник ОмГАУ. - № 3. - 2011. - С. 72 - 74.

4. Егорова* А. С. Санитарно-микробиологическая оценка воды, поступающей на животноводческие фермы и комплексы, почвы на территориях животноводческих ферм, комплексов Омской области / А. С. Егорова, Н. М. Колычев // Материалы международной научно-практической конференци, посвященной 90-летиб СибНИВИ-ВНИИБТЖ "Инфекционная патология животных". - Омск, 2011. - С. 273-276.

5. Егорова* А. С. Санитарная оценка проб воздуха и смывов с различных объектов внешней среды, отобранных на животноводческих фермах Омской области. / А. С. Егорова, М. И. Петрова// Материалы научно-практической конференции, посвященной 85-летию со дня рождения члена-корреспондента РАСХН, д.в.н., профессора М. М. Джамбулатова Современные проблемы, перспективы и инновационные тенденции развития аграрной науки. - Махачкала, 2010. - С. 274 - 279.

6. Егорова* А. С. Санитарная оценка проб почвы и воды, отобранных на животноводческих фермах Омской области. / А. С. Егорова, М. И. Петрова// Материалы научно-практической конференции, посвященной 85-летию со дня рождения члена-корреспондента РАСХН, д.в.н., профессора М. М. Джамбулатова Современные проблемы, перспективы и инновационные тенденции развития аграрной науки. - Махачкала, 2010. - С. 279 - 285.

7. Егорова* А. С. Микробиоценоз верхних дыхательных путей у телят с клиническими признаками бронхопневмонии и микрофлора воздуха животноводческих помещений / А. С. Егорова, В. И. Плешакова, Т. В. Ермакова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана Ц Т.210. Ц 2012. Ц С. 149-154.

* - в связи с вступлением в брак фамилия сменена на Метлеву.

Подписано к печати 16.03.2012. Формат бумаги 6084, 1/16.

Печать оперативная. Гарнитура Times New Roman.

Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз.

Отпечатано в редакционно-полиграфическом отделе

Издательство ФГБОУ ВПО ОмГАУ имени П.А. Столыпина

при институте ветеринарной медицины и биотехнологии

644122, г. Омск, Октябрьская, 92.

  Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству