Geum.ru
Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству  

На правах рукописи

       

СЮТКИНА

АННА СЕРГЕЕВНА

Применение пробиотика субалин на пушных зверях семейства Canidae



06.02.02 - ветеринарная микробиология,

вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией

и иммунология






АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук


Н.Новгород - 2012

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Вятская государственная сельскохозяйственная академия и ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства (ВНИИОЗ) имени профессора Б.М. Житкова Российской академии сельскохозяйственных наук


Научный руководитель:

Доктор ветеринарных наук, профессор, директор ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт

охотничьего хозяйства и звероводства им. проф. Б.М. Житкова Российской академии сельскохозяйственных наук,

г. Киров




Домский Игорь Александрович

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, доцент,

ФГБОУ ВПО Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия, доцент кафедры эпизоотологии, паразитологии и ветсанэкспертизы,

Куликова Ольга Леонидовна

Кандидат ветеринарных наук, ст.научный сотрудник, ученый секретарь ГНБУ НИВИ НЗ РФ Россельхозакадемии

Гладкова Надежда Алексеевна


Ведущая организация: Государственное научное учреждение Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева Российской академии сельскохозяйственных наук.

Защита состоится л 01   ноября 2012 г. в 1100 часов на заседании диссертационного совета  Д 220.047.02 при ФГБОУ ВПО Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия (603107, г. Н. Новгород, пр. Гагарина, д. 97).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО НГСХА (603107, г. Н. Новгород, пр. Гагарина, д. 97).

Автореферат разослан л 28 сентября 2012 г.

Ученый секретарь        

диссертационного совета А.В.Пашкин

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В последнее время для профилактики, лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта и повышения продуктивности животных широко применяют пробиотики. Их использование - один из простых и эффективных способов в процессе технологии выращивания разных видов животных, основанный на экологически безопасных механизмах поддержания высокого уровня колонизационной резистентности кишечника (Овод А.С., 2007; Бовкун Г.Ф., 2008; Злобин С.В., 2008; Tournot J., 1989; Isolauri E., 1994; Biourge V., 1998; Cavazzoni V., 1998; Rowland I., 1999; Kyriakis S.C., 1999; Hoa N.T., 2000; Rolfe R.D., 2000; Dalmin G., 2001; Nikoskelainen S., 2001; Jadamus A., 2002 Alexopoulos C., 2004). Пробиотики обеспечивают физиологическую целостность многих систем организма, связанных с формированием иммунной, гормональной, эндокринной и др. систем (Сидоров М.А., 2000; Стегний Б.Т., 2005). Их широко применяют при проведении лечебно-профилактических мероприятий, для борьбы с дисбактериозами различного происхождения, для профилактики стрессов, а также в качестве стимуляторов роста для животных (Красочко П.А., 2006; Rolfe R.D., 2000; Dalmin G., 2001; Nikoskelainen S., 2001; Jadamus A., 2002).

В настоящее время пробиотики на практике применяют:

- в скотоводстве для коррекции микрофлоры, повышения живой массы, стимуляции иммунобиологической реактивности телят, стимуляции продуктивности дойных коров, лечения эндометритов (Тараканов Б.В., 2002; Епишин В.А., 2004; Каврус М.А., 2005; Гордеева И.В., 2008; Данилевская Н.В., 2008);

- в свиноводстве для повышения темпов роста поросят, их жизнеспособности, профилактики желудочно-кишечных болезней (Малик Н.И., 2002; Белявский В.Н., 2005; Грязнева Т.Н., 2005; Злобин С.В., 2008; Fuller R., 1978; Jasek S., 1998; Kyriakis S.C. 1999; Jadamus A., 2002; Alexopoulos C. 2004);

- в птицеводстве пробиотики применяют наиболее широко, их используют на курах, гусях, перепелах, утках для усиления естественной резистентности, коррекции кишечного микробиоценоза, профилактики диарей и стресса, активизации роста мышечной ткани (Белявская В.А., 2001; Егоров И.А., 2004; Оганов Э.О., 2004; Тараканов Б.В., 2004; Филоненко В., 2004; Гласкович М.А., 2005; Данилевская Н.В., 2005; Крюков О., 2005; Мартыненко С., 2005; Тараканов Б.В., 2005; Брылин А.П., 2006; Иванова А.Б., 2007; Ноздрин Г.А., 2007; Cavazzoni V. 1998 и др.);

- в рыбоводстве  для профилактики инфекционных болезней и направленного формирования микробиоценоза личинок на ранних стадиях эмбрионального развития, (Асадчан Р.Л., 2005; Бурлаченко И.В., 2007; Nicoskelainen S., 2001).

В целях развития российского пушного звероводства в первую очередь необходимо обратить внимание на совершенствование технологических приемов содержания, кормления и профилактики инфекционных болезней пушных зверей (Домский И.А.,2003). В последнее время все чаше появляется информация о применении пробиотиков в звероводстве. По данным Лоенко Н.Н. (2002) применение пробиотических препаратов на основе бифидобактерий, оказывают благоприятное воздействие на сохранность щенков песца. Барабаш Б. (2002) оценивал результаты использования пробиотиков в кормлении нутрий по влиянию на активность  пищеварительных ферментов, жизнеспособность молодняка и прирост массы тела зверей.

По данным Тинаева Н.Н. и Емельяненко П.А. (2006), пробиотики оказывают положительное влияние на воспроизводительную способность самок норок, плодовитость, увеличение выхода щенков в расчете на одну самку. Дорошева А.М. (2009) проводила пробиотиком фармакокоррекцию микрофлоры песцов больных токсокарозом. 

Во всех случаях получен положительный результат, но вся информация по их применению представлена только отдельными публикациями, характеризующими действие разных пробиотических препаратов.

Таким образом, получение новых комплексных данных о воздействии пробиотиков на организм зверей является актуальным направлением исследований, способствующих получению новых научных данных и практических результатов.

Цель работы. Изучить влияние пробиотика субалин на организм пушных зверей семейства Canidae и дать предложения по его практическому использованию в звероводстве.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

  1. изучить микрофлору ЖКТ пушных зверей семейства Canidae и ее изменения после применения пробиотика;
  2. изучить влияние пробиотика на сохранность молодняка, его рост и развитие;
  3. изучить влияние пробиотика на иммунные процессы в организме после вакцинации зверей вирусными и бактериальными антигенами;
  4. дать рекомендации по внедрению препарата в ветеринарную и зоотехническую практику звероводства.

Научная новизна. Впервые получены комплексные данные по влиянию пробиотика субалин на организм разных видов пушных зверей (енотовидной собаки, красной лисицы и серебристого песца), а именно: 

  • изучена нормальная микрофлора желудочно-кишечного тракта пушных зверей семейства Canidae, получены данные по влиянию пробиотика на ее изменение в период применения препарата;
  • установлено, что субалин способствует увеличению темпов роста молодняка и повышению сохранности пушных зверей;
  • изучено влияние пробиотика субалин на поствакцинальные процессы после иммунизации песцов против чумы плотоядных и сальмонеллеза.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработана схема применения пробиотика субалин для пушных зверей семейства Canidae. Даны рекомендации по его использованию в ветеринарной практике звероводства, что обеспечивает практическую целесообразность и экономическую эффективность его применения. Подготовлены дополнения для внесения в наставление по применению субалина на пушных зверях.

Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации доложены и обсуждены:

  • на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и фармакологии, ФГОУ ВПО ВГСХА протокол № 2 от 9 октября 2007 г;
  • на седьмой научной конференции аспирантов и соискателей Науке нового века - знание молодых, Вятская ГСХА, 2007 г., г.Киров;
  • на восьмой научной конференции аспирантов и соискателей Науке нового века - знание молодых, Вятская ГСХА, 2008 г., г.Киров;
  • на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и фармакологии, ФГОУ ВПО ВГСХА протокол № 3 от 20 ноября 2008 г;
  • на Ученом совете факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО ВГСХА, протокол № 2 от 27 ноября 2008 г;
  • на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения П.Г. Петского, Вятская ГСХА, 2009 г., г.Киров;
  • на Международной научно-практической конференции Современные научно-практические достижения в ветеринарии, посвященной 80-летию Вятской государственной сельскохозяйственной академии, ВГСХА,  2010 г., г. Киров;
  • на Международной научно-практической конференции: Современные научно-практические достижения в ветеринарии, ВГСХА, 2011 г., г. Киров;
  • на расширенном заседании кафедры морфологии и микробиологии ФГБОУ ВПО ВГСХА протокол № 4 от 25 января 2012 г.


Основные положения,  выносимые на защиту:

  • микроорганизмы Bifidobacterium, Lactobacillus, Staphylococcus, Streptococcus, E.coli, бактерии рода Proteus, Clostridium, Salmonella sp. Цявляются основными составляющими энтероценоза молодняка пушных зверей семейства Canidae;
  • применение пробиотика субалин молодняку пушных зверей нормализует их энтероценоз, снижая относительное количество микроорганизмов группы стафилококков, стрептококков, эшерихий, обеспечивая полную элиминацию клостридий, сальмонелл и протея, способствует активному размножению пристеночной облигатно-анаэробной резидентной микрофлоры более чем на 90% представленной бифидо - и лактабактериями;
  • применение субалина на молодняке пушных зверей повышает уровень их популяционного здоровья и хозяйственно-товарной полезности.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в которых изложены основные результаты проведенных исследований. Работы опубликованы в научных изданиях, в т.ч. 3 работы в журналах, рекомендованных ВАК, 3 работы в сборниках материалов международных научных конференций.

Объем и структура работы:

Диссертационная работа изложена на 140 страницах машинописного текста, состоит из ведения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и производственных испытаний, обсуждения, выводов и практических предложений, списка использованной литературы, включающего 189 источников, из них 58 на иностранных языках,  приложений. Диссертация иллюстрирована 19 таблицами и 22 рисунками.

  1. Материалы и методы

Научные исследования выполнены в период с 2007 по 2011 г. на кафедре морфологии и микробиологии ФГБОУ ВПО Вятская ГСХА, в лаборатории ветеринарии ГНУ ВНИИОЗ им. проф. Б.М. Житкова Россельхозакадемии. Экспериментальную часть работы на зверях проводили на базе ООО Зверохозяйство Вятка и звероферме ООО Велюр (Кировская область).

Материалы

Животные. Для проведения исследований использовали пушных зверей семейств Canidae: песцы (Alopex lagopus) от 2 до 8 месячного возраста - 400 голов; красные лисицы (Vulpes vulpes) от 2 до 8 месячного возраста - 100 голов; енотовидные собаки (Nyctereutes procyonoides) в возрасте 2,5 до 7 месяцев  - 200 голов. Опытные группы зверей сформированы по методу аналогов.

Биопрепараты и штаммы микроорганизмов. В работе использован пробиотик субалин, изготовленный ГНЦ Вектор по ТУ 9383-004-00479379-98 серия 020906, годен до 12. 2010. В основе препарата использован штамм Ваc. subtilis 2335 (105) ВКПМ В4759.

Схемы применения препарата. 

Презентацию пробиотика щенкам пушных зверей проводили в течение 3-4 циклов, начиная с 1,5 - 2,5 месячного возраста (период отсадки и перехода на основной рацион) по следующей схеме: 5 дней давали субалин в дозе 100-200 *106 КОЕ/кг, затем 10 дней перерыв.

Для изучения влияния пробиотика на иммунные процессы его давали зверям за 2 дня до вакцинации и 2 дня после нее.

Вакцинацию щенков песца проводили живой вакциной против чумы плотоядных Бионор - D, изготовленную Биоцентром по ТУ 9384-008-11525378, серия 07, контроль 02, годен до 09. 2010 г..

Для вакцинации против сальмонеллеза пушных зверей использовали опытную серию живой вакцины из аттенуированных штаммов: Salmonella typhimurium № 3, Salmonella dublin № 6, Salmonella cholerasuis № 9 по ТУ 9484-041-00494189-01. Вакцинации проводили, согласно инструкции по применению препаратов.

Вирулентный штамм сальмонелл: Salmonella typhimurium № 371 использовали для постановки БАСК, ОФР.

Все вакцинные штаммы, используемые в работе, депонированы в России и получены из Федерального государственного учреждения Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ) г. Москва.

Методы исследований

Общеклинические. У зверей отмечали наличие аппетита, анализировали все случаи отклонения от нормального физиологического состояния: снижение активности, угнетение, заболевание, гибели и др. Выборочно измеряли температуру тела. В течение всего периода следили за изменением живой массы тела животных. Не менее 30% зверей всех групп через каждые 14 дней взвешивали согласно методикам, принятым в зоотехнической практике звероводства (Берестов В.А., 2002).

Гематологические. Отбор проб крови у зверей проводили через 5 дней после применения пробиотика. Для этого у щенков кровь брали из вены бедра задней конечности (v. saphena).  Показатели крови определяли на гематологическом анализаторе PCE - 90. Подсчет лейкограммы проводили согласно общепринятой методике (Берестов В.А., 2002). Проведено 350 гематологических исследований, из них 170 на гематологическом анализаторе.

Биохимические и иммунологические. Определение фракций белка в сыворотке крови  (альбуминов, -, -, - глобулинов) проводили  нефелометрическим методом (Кондрахин И.П., 1985),  определение общих иммуноглобулинов (по Барановскому П.В. и Данильшину В.С., 1983), определение общего белка рефрактометрическим методом (Кондрахин И.П., 1985). Выполнено 180 биохимических исследований.

Определение бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК) проводили по методу Кузьминой Т.А. и Смирновой О.В. (1966). Фагоцитарную активность нейтрофилов изучали в опсонофагоцитарной реакции (Лабинская А.С., 1978). Проведено более 800 исследований

Серологические. Реакцию агглютинации использовали для изучения динамики образования специфических антител-агглютининов к возбудителям сальмонеллеза (Антонов В.Я., 1971). Реакцию нейтрализации и иммуноферментный анализ использовали для изучения динамики образования специфических антител к вирусу чумы плотоядных (Сюрин В.Н., 1984; Троценко Н.И., 1999).

Бактериологические. Микрофлору желудочно-кишечного тракта исследовали по методике Бактериологическая диагностика дисбактериоза (Казань, 1989). Исследовано 200 проб, выполнено более 6400 бактериологических посевов.

Определение антагонистической активности пробиотического штамма к выделенным из кишечника зверей микроорганизмам проводили  по методикам Бергера М.О., (1983), Воронина Е.С., (2002). Проведено 150 исследований.

Товароведческую оценку качества шкур лисицы  проводили согласно ГОСТу 2790-88 - Шкурки лисицы клеточного разведения невыделанные.

Статистическая обработка массовых цифровых материалов проводилась на персональном компьютере IBM с использованием пакета статистических программ BioStat. Использовали общепринятые методы математической статистики (Ашмарин И.П., 1962), оценку достоверности некоторых статистических показателей производили по критерию Стьюдента.

Благодарности. Автор выражает искреннюю благодарность и признательность за помощь в выполнении диссертационной работы сотрудникам лаборатории ветеринарии ГНУ ВНИИОЗ: старшим научным сотрудникам, кандидатам ветеринарных наук Бельтюковой З.Н., Окуловой И.И., кандидату биологических наук Беспятых О.Ю.; сотрудникам кафедры морфологии и микробиологии ФГОУ ВПО Вятской ГСХА: доктору медицинских наук, профессору Романову В.Е, доктору ветеринарных наук, профессору  Тетереву И.И., кандидату ветеринарных наук, доценту Тимошенко Т.А., декану факультета ветеринарной медицины, кандидату ветеринарных наук, профессору Копылову С.Н. за методическую помощь и научные консультации при проведении лабораторных исследований; а также, главному ветеринарному врачу Филатовой М.С. ветеринарному врачу Тюфякову С.Н., бригадиру Леоновой З.С. ООО Зверохозяйства Вятка за организацию работы в производственных условиях и практическую помощь в сборе биоматериала.

  1. Результаты собственных исследований.

2.1. Влияние пробиотика субалин на состав кишечной микрофлоры пушных зверей. 

Изучение количественного и качественного состава микрофлоры ЖКТ у щенков енотовидной собаки, красной лисицы, серебристого песца проводили следующим образом: были изучены показатели микрофлоры у зверей в возрасте 1,5-2,5 месяцев при содержании их на стандартном рационе. В результате бактериологических исследований выделены следующие основные группы микроорганизмов, которые являются постоянными (резидентными) или транзиторными обитателями ЖКТ: Bifidobacterium, Lactobacillus, Staphylococcus, Streptococcus, E.coli, бактерии рода Proteus, Clostridium, Salmonella sp. и B.subtilis (рис. 1, 2, 3).

1 - Bifidobacterium,  2 - Lactobacillus,  3 - Staphylococcus, 4 - Streptococcus,  5 - E.coli,  6 - сероводород образующие E.coli, 7 - Clostridium, 8 - Proteus,  9 - дрожжи, 10 - B.subtilis,

Рис. 1. Результаты исследования микрофлоры желудочно-кишечного тракта и ее изменения после применения субалина у щенков енотовидной собаки

1- Bifidobacterium,  2- Lactobacillus,  3- Staphylococcus, 4- Streptococcus,  5- E.coli,  6- сероводород образующие E.coli, 7- Clostridium, 8- Proteus,  9 Цдрожжи ,  10 - B.subtilis, 11 ЦSalmonella.




Рис. 2. Результат исследования микрофлоры желудочно-кишечного тракта и ее изменения после применения субалина у щенков красной лисицы


1- Bifidobacterium,  2- Lactobacillus,  3- Staphylococcus, 4- Streptococcus,  5- E.coli, 6- сероводородоб-разующие E.coli,  7-Clostridium,  8- Proteus, 9 Цдрожжи,  10- B.subtilis,  11 - Salmonella.

Рис. 3. Результат исследования динамики микрофлоры желудочно-кишечного тракта у щенков серебристого песца

В результате проведенных исследований нами установлено, что при введении в рацион молодняка пушных зверей субалина происходит коррекция микрофлоры ЖКТ. Результаты бактериологических исследований микробного состава ЖКТ щенков енотовидной собаки, красной лисицы и серебристого песца аналогичны. Нами установлены следующие закономерности: во всех опытных группах зверей наблюдается снижение в ЖКТ уровня стафилококков, стрептококков, эшерихий; происходит элиминация (полное вытеснение) анаэробных бактерий рода Clostridium, а так же условно-патогенных бактерий рода Proteus и Salmonella; увеличение количества представителей резидентной микрофлоры: бифидо- и лактобактерий; полная элиминация из ЖКТ штамма входящего в состав пробиотика субалин происходит на 5 день после окончания применения. Видовую принадлежность выделенных из кишечника культур микроорганизмов не определяли.


2.2. Определение антагонистической активности субалина к штаммам микроорганизмов выделенных из кишечника зверей. 

Исследование антагонистического действия культуры пробиотического штамма проводили в отношении выделенных групп микроорганизмов из ЖКТ пушных зверей, а именно в отношении следующих групп бактерий: Staphylococcus, Streptococcus, E.coli, бактерии рода Proteus, Salmonella sp. 

Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты изучения антагонистической активности пробиотического штамма в отношении микроорганизмов, выделенных из ЖКТ пушных зверей.

Культуры

микроорганизмов

Диаметр зоны подавления роста микробов в опыте с выделенными от зверей штаммами, мм (Mm)

Енотовидная собака

Красная лисица

Песец

Стафилококк

150,01

170,01

190,01

Стрептококк

250,012

220,01

240,02

E.coli

150,01

190,01

250,012

Proteus

170,012

250,012

250,01

Salmonella

190,012

200,012

200,01

В ходе работы установлена способность пробиотического штамма подавлять рост условно-патогенной микрофлоры - стафилококков, стрептококков, а так же возбудителей кишечных инфекций (E.coli, Proteus s.p, Salmonella sp) выделенных из желудочно-кишечного тракта пушных зверей. Более чувствительными к пробиотическому штамму во всех исследованиях были стрептококки.


2.3. Влияние пробиотика субалин на иммунные процессы после введения вирусных и бактериальных антигенов песцам.

2.3.1. Вакцинация против сальмонеллеза.

Установлено, что после двукратного перорального введения живой вакцины против сальмонеллеза в опытной и контрольной группах зверей происходят следующие изменения биохимического состава крови.

На 7 день после вакцинации щенков песца установлено, что уровень -глобулинов в опытной группе зверей был на 43% выше, чем в контрольной группе (рис.4). В результате дальнейших исследований отмечалось увеличение количества -глобулинов к 14 дню, в опытной группе этот показатель был выше на 34%, чем в контрольной. К 21 дню исследований установлено увеличение количества -глобулинов в опытной группе на 45,9% (p<0,05). При последующих исследованиях происходило незначительное снижение уровня -глобулинов в сыворотке крови в обеих группах.

Рис. 4 Динамика количества -глобулинов после вакцинации щенков серебристого песца против сальмонеллеза

Рис. 5 Динамика бактерицидной активности сыворотки крови у песцов после вакцинации против сальмонеллеза

Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) на 7 день у зверей опытной группы была выше на 64,1%, чем в контрольной (рис.5). К 14 дню происходит увеличение БАСК и составило 65,3% в опытной группе, а в контрольной группе - 27%. На 21 день исследований БАСК в опытной группе зверей была 74,4%, что 35,6% больше, чем в контроле. При дальнейших исследованиях происходило незначительное снижение БАСК в обеих группах.

В результате определения фагоцитарной активности нейтрофилов (рис.6) установлено, что на 7 день после вакцинации в опытной группе щенков показатель опсонофагоцитарной реакции (индекс Штритера) на 32,8% выше, чем в контрольной группе. На 14 день исследования этот показатель в обеих группах повышается, однако в опытной он достоверно выше и достигает  42,2%. Затем к 21 дню происходит снижение индекса Штритера в обеих группах, но в опытной группе он остается выше на 29,8 %, чем в контроле.


Рис. 6. Динамика фагоцитарной активности нейтрофилов у песцов после вакцинации против сальмонеллеза

Установлено, что выделение вакцинных штаммов сальмонелл из кишечника щенков начинается через 2-3 дня после первой вакцинации. Элиминация вакцинных  стрептомицинустойчивых штаммов сальмонелл из желудочно-кишечного тракта щенков в контрольной группе в 80% случаев проходила через 14-21 день после ревакцинации. У зверей опытной группы элиминация сальмонелл происходила значительно быстрее, и через 7 - 10 дней выделение из кишечника вакцинных штаммов сальмонелл прекращалось.

Определение титров антител-агглютитинов проводили в отношении 3 штаммов сальмонелл, применяемых для вакцинации щенков: Salmonella dublin № 6, Salmonella typhimurium № 3, Salmonella cholera suis № 9 (рис. 7, 8, 9).

В результате исследования установлено, что до вакцинации щенков опытной и первой контрольной группы (без субалина) ко всем вакцинным штамма сальмонелл агглютинация наблюдалась в разведении 1:20.

Затем, на 7 день после иммунизации в опытной группе щенков происходит увеличение титров антител до 1:160, а это в 2 раза выше, чем в контрольной  группе.

Рис. 7. Динамика титров антител в сыворотке крови песцов к штамму Salmonella dublin № 6 после вакцинации против сальмонеллеза

Нарастание титров продолжалось к 14 дню после иммунизации зверей в обеих группах, однако, в опытной группе к этому периоду достигало 1:480, в контрольной - 1:200. К 21 дню происходит снижение титров, в опытной группе - 1:320, однако, этот показатель выше, чем в контрольной группе 2 раза. К 28 дню исследования продолжается постепенное снижение титров: до 1:160 - в опытной и 1:80 - в контрольной группе.


Рис. 8. Динамика титров антител в сыворотке крови песцов к штамму Salmonella typhimurium № 3 после вакцинации против сальмонеллеза

При исследовании сывороток крови песцов на наличие антител к штамму Salmonella typhimurium № 3 на 7 день после вакцинации отмечено увеличение титров в опытной группе щенков до 1:140, а в контрольной - 1:100. К 14 дню продолжается нарастание количества антител в обеих группах: 1:480 - в опытной, 1:400 - в контрольной группах. Однако к 21 дню исследований наблюдается снижение титров в обеих группах зверей, в опытной - до 1:320, в контрольной - 1:160. Снижение титров антител продолжается к 28 дню исследований. Однако, в опытной группе этот показатель остается в 2 раза выше, чем в контрольной.

При определении титров к штамму Salmonella cholera suis № 9 отмечено, что на 7 день после иммунизации происходит увеличение специфических антител в опытной и контрольной группах 1:120 и 1:54 соответственно (рис. 9).

К 14 дню происходит повышение титров в опытной группе до 1:480, в контрольной - 1:320, после чего к 21 дню наблюдений отмечается снижение титров в опытной группе - 1:450, а в контрольной до 1:160. Затем, при определении специфических антител на 28 день исследований установлено, что в опытной группе щенков снижение титров продолжается до 1:160, в контрольной группе - 1:80.

Рис. 9. Динамика титров антител в сыворотке крови песцов к штамму Salmonella cholerasuis № 9 после вакцинации против сальмонеллеза.

В качестве второго контроля исследовали сыворотку крови, полученную от невакцинированных щенков, у которых в течение всего периода исследования титры антител находились на уровне  1:20.

Следует отметить, что и в опытной, и в контрольной группе зверей максимальное увеличение титров специфических антител  наблюдалось на 14 день после вакцинации, однако в опытной группе щенков эти показатели выше.


2.3.2. Вакцинация против чумы плотоядных.

В результате исследований установлено, что уровень - глобулинов на 7 день после вакцинации зверей в опытной группе на 14,8% выше, чем в контрольной группе (рис. 10).

Рис. 10. Динамика уровня -глобулинов у песцов после вакцинации против чумы плотоядных

К 14 дню исследований уровень -глобулинов составил 11,5%, что на 47,8% выше, чем в контрольной группе. К 21 дню после иммунизации этот показатель в опытной группе достигал 23,64%, что на 58,5% выше, чем в контрольной (p<0,05).

Бактерицидная активность сыворотки крови в опытной группе зверей на 7 день после вакцинации была в 4 раза выше, чем в контрольной группе (рис. 11)

Рис. 11. Результаты определения БАСК у песцов после вакцинации против чумы плотоядных

На 14 день исследования происходит увеличение БАСК в опытной группе - 78,87%, в контрольной группе - 42,4%. К 21 дню исследования происходит снижение БАСК в опытной группе - 72,6%, в контрольной группе - 26,6% (p< 0,05).

В результате определения фагоцитарной активности нейтрофилов (рис.12) установлено, что на 7 день после вакцинации в опытной группе щенков показатель опсонофагоцитарной реакции (индекс Штритера) на 40,3% выше, чем в контрольной группе.

Рис. 12. Динамика фагоцитарной активности нейтрофилов у песцов после вакцинации против чумы плотоядных

На 14 день исследования индекс Штритера в обеих группах повышается, однако в опытной он достоверно выше. К 21 дню происходит снижение индекса Штритера в обеих группах, но в опытной группе он остается выше, чем в контрольной.

При определении уровня антител методом ИФА (рис. 13) установлено, что на 7 день после иммунизации  в опытной группе происходит увеличение количества антител на 18%, на 14 день - 23%, на 21 день - 8,7%, по сравнению с контрольной группой

Рис. 13. Динамика титров антител, в сыворотке крови песцов вакцинированных против чумы плотоядных (метод ИФА).

Результаты исследования динамики титров антител, в сыворотке крови песцов вакцинированных против чумы плотоядных в реакции нейтрализации отражены на рис. 14.

Рис. 14. Динамика титров антител, в сыворотке крови песцов вакцинированных против чумы плотоядных (в РН).

В результате исследований установлено, что применение cубалина при вакцинации песцов против чумы плотоядных происходит достоверное увеличение титров антител в опытной группе: на 7 день исследований титр составил - 1:8, на 14 день происходит повышение титров до 1:16, на 21 день отмечено снижение до 1:8, в дальнейшие сроки исследования на 28 и 35день - снижение до 1:4, в контрольной группе титры антител в РН достоверно ниже.


3. Результаты производственного испытания пробиотика субалин.


3.1. Влияние субалина на сохранность пушных зверей. Учитывали сохранность зверей опытной и контрольной групп енотовидной собаки (n=200). В результате исследований установили, что сохранность щенков опытной группы составляла 100%, контрольной - 98% соответственно.

В результате исследования субалина на молодняке красной лисицы (n=100) установлено, что сохранность зверей опытной группы составляла 100%, контрольной - 92%.

В период проведения исследований на молодняке серебристого песца (n=400) установлено, что сохранность зверей опытной группы составляла 100%, контрольной - 96,7%.

Гибель животных контрольных групп происходила по причине заболеваний желудочно-кишечного тракта, сопровождающихся диареей и истощением, в некоторых случаях булимией, тимпанией и разрывом желудка; заболеванием дыхательного тракта - ларингит, бронхит и пневмония.

3.2. Влияние субалина на динамику роста пушных зверей.

В результате учета прироста живой массы молодняка пушных зверей, установлено, что в период применения пробиотика субалин в опытных группах происходит повышение темпов роста животных, которое наиболее ярко наблюдается к 42 дню исследования (рис. 15). У молодняка енотовидной собаки в опытной группе к этому периоду отмечено достоверное (p<0,05) увеличение массы тела на 7,2%, а на 56 день эта разница составляла 8,2 %.

Перед убоем проводили контрольное взвешивание щенков опытной и контрольной групп, установлено, что средняя масса зверей в  опытной группе к 8 месячному возрасту достигала 11,240,26, что на 18,1% выше, чем в  контрольной группе. Разница полученных результатов достоверна (p< 0,05).

У щенков серебристого песца к 42 дню исследований также происходило достоверное увеличение прироста массы тела в опытной группе и составляло 3,860,26 кг, что на 7,3 % выше, чем в контрольной группе. Перед убоем установлено, что средняя масса щенков опытной группы к 8 месячному возрасту достигала 8,70,3, что на 11,5% выше, чем в контрольной группе. Разница полученных результатов достоверна (p< 0,05).

Рис. 15. Динамика средней массы молодняка пушных зверей

В результате исследований, проведенных на молодняке красной лисицы, установлено, что наибольший прирост живой массы в опытной группе зверей отмечен на 42 день применения субалина. Средняя масса  тела у щенков опытной группы составляла 5,50,35 кг, что на 22,1% выше, чем в контрольной группе. Разница полученных результатов достоверна (p<0,05).

Обобщая результаты исследования на разных видах пушных зверей семейства Canidae, получавших пробиотик в течение 3 - 4 курсов, следует отметить, что происходит достоверное увеличение массы тела, как в период применения, так и после окончания применения субалина. При этом наиболее высокие показатели прироста наблюдали у молодняка красной лисы.


3.3. Товароведческие методы оценки качества шкур лисицы.

По результатам комплексной оценки шкурок молодняка красной лисицы (n=50) получены следующие данные: средняя площадь шкур опытной группы - 21,3 дм2 , контрольной группы - 20,48 дм2 . С учетом размера, цвета и дефектности шкурок зачет по опытной группе составил 116%; в контрольной - 109,08%.

Согласно прайс-листу за 2009 год ООО Зверохозяйство Вятка цена за 1 дм2 невыделанной шкурки лисицы красной Огневка Вятская составляла 125 руб.

В итоге средняя стоимость шкурки из опытной группы составляет  - 3088,5 рублей, стоимость шкурки из контрольной группы - 2810,88, что на 277, 62 рублей меньше.

С учетом стоимости препарата, которая  в 2008 году составляла 18 руб за 1 дозу. 1 доза препарата рассчитана на 50 кг живой массы. В результате исследований установлено, что затраты препарата на 1 щенка на 3 курса применения в среднем составляют 2 дозы.

В результате производственных испытаний пробиотика Субалин на щенках красной лисицы получен реальный экономический эффект (241,62 руб за 1 дм2 шкурки).

Выводы:

  1. Микроорганизмы Bifidobacterium, Lactobacillus, Staphylococcus, Streptococcus, E.coli, сероводородобразующие и лактозонегативные E.coli, дрожжи, бактерии рода Proteus, Clostridium, Salmonella sp. Цявляются основными составляющими энтероценоза молодняка пушных зверей семейства Canidae.
  2. Использование пробиотика субалин на пушных зверях приводит к снижению ЖКТ количества стафилококков, стрептококков, эшерихий, полной элиминации клостридий, протея и сальмонелл, а также способствует активному размножению пристеночной облигатно-анаэробной резидентной микрофлоры, более чем на 90 % представленной бифидо - и лактобактериями.
  3. Установлено, что штамм, составляющий основу пробиотического препарата, обладает высокой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов желудочно-кишечного тракта пушных зверей.
  4. Полное выведение пробиотического штамма из организма пушных зверей происходит через 5 дней после окончания его применения.
  5. После применения субалина установлены следующие закономерности в изменении гематологических показателей пушных зверей: эритроцитоз, повышение уровня гемоглобина на 12%, снижение лейкоцитов  до 28%, сдвиг лейкограммы вправо (снижение нейтрофилов, увеличение количества лимфоцитов).
  6. В сыворотке крови у щенков пушных зверей происходит снижение уровня альбуминов, но значительно повышается количество общих иммуноглобулинов, особенно -глобулинов.
  7. При  вакцинации зверей вирусными и бактериальными антигенами пробиотик стимулирует иммунный ответ. Отмечено практически 2- кратное увеличение титров специфических антител, увеличение бактерицидной активности сыворотки крови повышении фагоцитарной активности нейтрофилов.
  8. Применение субалина на молодняке пушных зверей обеспечивает высокий уровень сохранности щенков во всех опытных группах животных, получавших препарат.
  9. Применение пробиотика субалин способствует увеличению массы тела у молодняка пушных зверей: у енотовидной собаки - на 7,2%, песца - на 7,3%. Наиболее высокие показатели отмечены у щенков красной лисицы - на 22,1%,.
  10. По результатам оценки качества шкур лисицы установлено, что применение пробиотика субалин  способствует увеличению площади шкур зверей опытной группы на 0,82 дм2 , повышению качества пушно-мехового сырья. Средняя стоимость шкурки опытных зверей на 241, 62 рублей больше, чем в контроле, что обеспечивает реальный экономический эффект.

Практические предложения

В целях повышения эффективности звероводства:

- подготовлено дополнение к наставлению по применению субалина на пушных зверях;

- даны рекомендации по применению пробиотика субалин в ветеринарной и зоотехнической практике звероводства;

- результаты исследований используются в учебном процессе факультета ветеринарной медицины по специальности Ветеринария в курсе Ветеринарная микробиология и иммунология.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

  1. Соловьева А.С. Пробиотики и перспективы применения их в звероводстве / И.А. Домский, А.С. Соловьева //Науке нового века - знание молодых: Материалы докладов 7-й научной конференции аспирантов и соискателей: Сборник научных статей. - Киров, 2007 с. 73-75 (ветеринарные науки).
  2. Соловьева А.С. Эффективность применения пробиотика Субалин на щенках енотовидной собаки / А.С.Соловьева, И.А.Домский // Науке нового века-знания молодых: Сборн. Статей 8 научной конференции аспирантов и соискателей. Часть 2 Киров 2008 с. 28-31.
  3. Соловьева А.С. Влияние пробиотика Субалин на состав микрофлоры енотовидной собаки/ А.С. Соловьева // Достижения Ветеринарной науки и практики / Киров 2008 с. 137-140.
  4. Соловьева А.С. Результаты применения пробиотика Субалин на молодняке енотовидной собаки и красной лисы / А.С.Соловьева, И.А.Домский // Современные научно-практические достижения в ветеринарии. / Сборник статей Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию Вятской государственной сельскохозяйственной академии 15-16 апреля 2010 года /Выпуск 1, Киров. - 2010. - с. 188-190.
  5. Соловьева А.С. Влияние пробиотика Субалин на состав кишечной микрофлоры серебристого песца / А.С. Соловьева, И.А.Домский // Современные научно-практические достижения в ветеринарии. / Сборник статей Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию Вятской государственной сельскохозяйственной академии 15-16 апреля 2010 года /  Выпуск 1, Киров. - 2010. - с.190-192.
  6. Соловьева А.С. Эффективность применения пробиотика Субалин при вакцинации щенков песца против сальмонеллеза. / А.С. Соловьева, И.А Домский., З.Н. Бельтюкова, И.И Окулова./ Актуальные проблемы биологии в животноводстве. / Материалы 5 Международной конференции, посвященной 50-летиб ВНИИФБиП/  Боровск 2010 с. 219-220.
  7. Соловьева А.С. Коррекция микрофлоры желудочно-кишечного тракта серебристого песца пробиотиком Субалин/ А.С. Соловьева, И.А. Домский, З.Н. Бельтюкова, Т.А. Тимошенко / Аграрная наука евро-северо-востока № 1, 2011 с. 57-62.
  8. Соловьева А.С. Эффективность применения Субалина при вакцинации щенков песца против чумы плотоядных // А.С. Соловьева, И.А. Домский, З.Н. Бельтюкова, О.Ю. Беспятых// Ветеринарная медицина № 1, 2011 с 25-27.
  9. Соловьева А.С. Эффективность применения Субалина при вакцинации щенков песца против сальмонеллеза // А.С. Соовьева, И.А. Домский, З.Н. Бельтюкова, Ю.С. Овсянников // Ветеринарная медицина № 3-4, 2011 с 122-124.

Сюткина Анна Сергеевна

Применение пробиотика субалин на пушных зверях

семейства Canidae

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Корректор 

Компьютерный набор и верстка А.С. Сюткина

Подписано в печать :

Формат 60/90 1/16. Печать трафаретная. Бумага офсетная.

Объем. Печ.л. - 1,0. Тираж - 100 экз. Заказ №

Типография НГСХА, 603107, Н. Новгород, пр. Гагарина,97

Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству