Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по медицине
На правах рукописи
Рахметуллова Гузель Рашидовна
ПОВЫШЕНИЕ УСТОЙЧИВОСТИ К ОКСИДАТИВНОМУ СТРЕССУ ПРИ ОСТРОМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПАНКРЕАТИТЕ
14.03.03 - Патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва, 2012
Работа выполнена на кафедре общей патологии и патологической физиологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Российский университет дружбы народов Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Тарасова Татьяна Викторовна;
доктор медицинских наук Лещанкина Нина Юрьевна
Официальные оппоненты:
Трубицына Ирина Евгеньевна доктор медицинских наук профессор заведующая лабораторией патологической физиологии НИИ Гастроэнтерологии;
Потемина Татьяна Евгеньевна доктор медицинских наук профессор заведующего кафедрой патологической физиологии ГБОУВПО Нижегородская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России
Ведущая организация:
ГОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова
Защита диссертации состоится л28 ноября 2012 года в л13 часов на заседании диссертационного совета Д212.203.06 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8, медицинский факультет.
С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. МиклухоМаклая, д. 8.
Автореферат разослан л___ 2012 года.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор Г. А. Дроздова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. Среди острых заболеваний органов брюшной полости по частоте встречаемости острый панкреатит занимает лидирующее место.
Высокая заболеваемость, большая продолжительность лечения, значительный уровень летальности при деструктивных формах панкреатита обусловливают актуальность поставленной проблемы. Особенно сложной и трудоемкой проблемой ургентной хирургии является лечение больных с деструктивными формами.
На сегодняшний день этот факт подтверждается стабильно высокими показателями летальности, частотой гнойно-септических и других фатальных осложнений (Савельев В.С. и др., 2008; Багненко С.Ф. и др., 2009; Beger H.G. et al., 2008).
К настоящему времени достаточно полно освещены этиологические аспекты острого панкреатита. Однако патогенетические механизмы этой грозной патологии во многом остаются неясными (Генинг Т.П., 2004; Молодых О.П. и др., 2005; Варналина Н.В., 2011).
К одниму из активно изучаемых патогенетических компонентов при остром панкреатите относят липидный метаболизм, что обусловлено, прежде всего тем, что поджелудочная железа играет значимую роль в регуляции липидного обмена. Доказано важнейшее значение перекисного окисления липидов (оксидативного стресса) в модификации липидного метаболизма при этой грозной патологии. В настоящее время ведутся серьезные разработки по регуляции этого патологического процесса. Предложено множество схем влияния на этот триггерный липидмодифицирующий компонент (Герасименко А.В., 2006; Егорова Н.В., 2009; Федосеева Т.А., 2010; Vinazzer H., 1989).
Поиск патогенетически эффективных способов коррекции липидного метаболизма при остром панкреатите продолжается. Этому вопросу и посвящена настоящая работа.
Цель работы. Дать патофизиологическую оценку эффективности антиоксидантной и ангиопротекторной терапии в коррекции оксидативного стресса при остром экспериментальном панкреатите.
Основные задачи.
1. При остром экспериментальном панкреатите в динамике изучить микроциркуляцию в поджелудочной железе, кишечнике и печени.
2. В тканевых структурах исследованных органов при остром панкреатите исследовать интенсивность процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантный потенциал.
3. Установить при остром панкреатите сопряженность микроциркуляторных нарушений в изученных органах с активностью процессов липопероксидации в их тканях и плазме крови.
4. Оценить эффективность антиоксидантной терапии на примере применения эмоксипина, а также ангиопротекторной терапииа на примере пентоксифилина в коррекции оксидативного стресса на уровне плазмы крови и тканей поджелудочной железы, кишечника, печени при остром панкреатите.
5. Определить патогенетические эффекты комбинированной антиоксидантной и ангиопротекторной терапии в предупреждении прогрессирования процесса перекисного окисления липидов.
Научная новизна.
Экспериментальными исследованиями установлено, что при остром панкреатите уже на самых ранних этапах в органе поражения поджелудочной железе и других органах кишечнике и печени возникают активизация процесса перекисного окисления липидов и существенные нарушения микроциркуляции.
Показано, что интенсификация процесса перекисного окисления липидов в исследованных тканевых структурах находятся в прямой корреляционной зависимости с микроциркуляторными нарушениями в них.
Установлено, что применение антиоксидантной терапии при остром панкреатите приводит к быстрому существенному уменьшению интенсивности процесса перекисного окисления липидов в плазме крови, тогда как в тканевых структурах исследованных органов патогенетическое действие препарата проявляется не столь быстро, особенно в поджелудочной железе. Восстановление микроциркуляции в исследованных органах при такого рода терапии также происходит с запозданием.
Опытами выявлено, что использование ангиопротекторной терапии при остром панкреатите не приводит к быстрой коррекции оксидативного стресса как на уровне плазмы крови, так и тканей исследованных органов. При такой терапии отмечен положительный эффект по восстановлению микроциркуляции, особенно в органах-мишенях - кишечнике и печени, меньше - в органе поражения - поджелудочной железе.
Доказано, что наибольшая эффективность в предупреждении (коррекции) оксидативного стресса отмечается при комбинированном применении исследованных препаратов антиоксидантного и ангиопротекторного действия. Выявленный положительный эффект терапии определен способностью сочетанного применения препаратов влиять на значимые патогенетические звенья этого грозного осложнения.
Практическая значимость.
Экспериментальными исследованиями показана сопряженность активности свободно-радикального окисления липидов в тканях органа поражения - поджелудочной железе и в органах-мишенях - кишечнике и печени при остром панкреатите с микроциркуляторными расстройствами в их тканевых структурах, что определяет направление патогенетической терапии. Установлено, что применение антиоксидантной и ангиопротекторной терапии является наиболее оптимальным в коррекции оксидативного стресса не только на уровне плазмы крови, но и тканевых структур исследованных органов, в том числе и органа поражения.
Положения, выносимые на защиту.
1. При остром панкреатите интенсивность процесса перекисного окисления липидов в тканевых структурах органа поражения - поджелудочной железе и в органах-мишенях - кишечнике и печени находятся в прямой корреляционной зависимости с микроциркуляторными нарушениями в них.
2. В коррекции оксидативного стресса при остром панкреатите патогенетически обосновано применение комбинированной терапии, включающей ан тиоксидант и ангиопротектор. При такого рода терапии происходит быстрая и эффективная коррекция интенсивности процесса липопероксидации не только на организменном, но и тканевом уровне.
Внедрение результатов исследования.
Разработанные диссертационные положения включены в программу и используются при обучении студентов на кафедре факультетской хирургии Медицинского института Мордовского государственного университета им.
Н.П. Огарева.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, из них 1 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на научной конференции молодых ученых (Саранск, 2007Ц2012), IX Международном конгрессе Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации (Москва, 2008), Всероссийской конференции с международным участием Актуальные вопросы медицинской науки (Ярославль, 2009), ХVIII межгородской конференции молодых ученых Актуальные проблемы патофизиологии (Санкт-Петербург, 2012), ХVIII межрегиональной научнопрактической конференции памяти академика Н.Н. Бурденко Актуальные проблемы современного практического здравоохранения (Пенза, 2012), Огаревских чтениях - научноЦпрактической конференции Мордовского государственного университета (Саранск, 2007Ц2012).
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 137 страницах, состоит из введения, обзора литературных данных по проблеме, главы с описанием материалов и методов исследования, четырех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который включает 247 отечественных и иностранных источников. Работа содержит таблиц и 37 рисунков.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования.
Основой работы стали экспериментальные исследования на 48 взрослых беспородных половозрелых собаках обоего пола массой от 9,3 до 15,0 кг. Для решения поставленных задач животные были разделены на следующие группы:
Первая группа (I) - контрольная (n=12). Собакам моделировали острый панкреатит и в динамике заболевания оценивали состояние микроциркуляции тканей поджелудочной железы, кишечника и печени, определяли интенсивность процессов липопереокисления и фосфолипазную активность в исследуемых органах и в плазме крови.
Вторая группа (II) - опытная (n=12). Исследовали данные показатели при включении в традиционную терапию антиоксиданта этоксидола.
Третья группа (III) - опытная (n=12). Изучали влияния ангиопротектора пентоксифиллина на вышеперечисленные показатели состояния.
Четвертая группа (IV) - опытная (n=12). Изучали влияния комбинирован ной терапии (этоксидол+пентоксифиллин) на вышеперечисленные показатели.
Исследования проведены в соответствии с этическими требованиями к работе с экспериментальными животными (Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных (приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.1987 г.) Федеральный закон О защите животных от жестокого обращения от 01.01.19г., Об утверждении правил лабораторной практики (приказ МЗ РФ от 19.06.20г. № 267) и одобрены локальным этическим комитетом.
Модель острого панкреатита воспроизводили по способу В. М. Буянова с соавт. (1989). Взрослым беспородным собакам проводили срединную лапаротомию, пунктировали желчный пузырь, забирали желчь с последующим лигированием места пункции. Затем желчь вводили в паренхиму вертикальной части поджелудочной железы по 0,6 мл в 5 точек - с целью моделирования отечной формы острого панкреатита. Все экспериментальные исследования проводились под внутривенным наркозом с использованием тиопентал-натрия из расчета 0,04 г/кг массы животного. В контрольные сроки (1-е, 3-и и 5-е сутки) животным осуществляли забор крови из бедренной вены, биопсию ткани поджелудочной железы, тонкой кишки, печени, оценивали состояние микроциркуляции в данных органах. В послеоперационном периоде всем животным проводили инфузионную терапию (внутривенные введения 5 % раствора глюкозы и 0,89 % раствора хлорида натрия из расчета 50 мл/кг массы животного).
Второй группе животных в терапию включали внутривенные инфузии этоксидола (10 мг/кг).
Третьей группе животных терапию дополняли внутримышечными введениями пентоксифиллина из расчета 20 мг 2 раза в сутки.
В четвертой группе в терапию включали этоксидол и пентоксифиллин в тех же дозах.
Методы исследования Дизайн исследования представлен в таблице 1.
Полученные цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия t Стьюдента, корреляционную зависимость - коэффициента r. В каждой серии определяли достоверность различия по отношению к исходному или контрольному значению (Р). Вычисления производили на CPU 1600 MHz УIntel Pentium-IVФ с помощью пакета программ Microsoft Office XP.
Таблица Дизайн исследования Группа Модель Методы исследования Терапия IЦконтроль- Изучали активность процессов пере- внутривенные ввеная (n=12) кисного окисления липидов в ткане- дения 5 % раствора вых структурах поджелудочной желе- глюкозы и 0,89 % зы, тонкой кишки, печени и плазме раствора хлорида крови по содержанию диеновых натрия из расчета конъюгатов и малонового диальдеги- 50 мл/кг массы жида. Определяли активность фосфоли- вотного II - опытная пазы А2 в тканях поджелудочной же- То же + внутривен(n=12) лезы, тонкой кишки, печени и плазме ные вливания раскрови. Определяли состояние антиок- твора этоксидола сидантной системы защиты по актив- (10 мг/кг) ности каталазы и супероксиддисмута- То же + внутриIII - опытзы в тканях поджелудочной железы, ная (n=12) мышечные введетонкой кишки, печени и плазме крови.
ния раствора пенДля оценки показателей микроциркулятоксифиллина (ции в исследуемых органах использовали мг/кг) метод лазерной допплеровской флоуметIV - опыт- То же + внутривенрии с помощью анализатора лазерного ная (n=12) ные вливания расмикроциркуляции крови компьютеризи твора этоксидола рованного ЛАКК-02 (ООО НПП Лаз(10 мг/кг)+ внутма, Россия), полученные данные региримышечные ввестрировались и расшифровывались с подения раствора мощью прилагаемого к анализатору пропентоксифиллина граммного обеспечения для PC.
(40 мг/кг) ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Проведенные исследования показали, что модель панкреатита была вполне адекватной для решения цели и основных задач работы. У животных возникал острый панкреатит отечной формы, что было зарегистрировано при макроскопической оценке состояния поджелудочной железы уже на следующие сутки после моделирования патологического процесса.
Экспериментальными исследованиями установлено, что при остром панкреатите на самых ранних этапах в органе поражения поджелудочной железе и других органах кишечнике и печени возникают активизация процесса перекисного окисления липидов. Так, в ткани органа поражения было выявлено повышение содержания первичных и вторичных продуктов ПОЛ. Уровень диеновых конъюгатов в динамике эксперимента возрастал на 110,26Ц205,13 % (р<0,05), показатель малонового диальдегида увеличивался на 88,14Ц266,67 % (р<0,05) относительно нормы. Уровень индуцированного малонового диальдегида был выше исходных данных на 62,52Ц195,80 % (р<0,05). Активность фосфолипазы А2 в ткани поджелудочной железы возрастала на 26,22Ц80,00 % (р<0,05) отно ОСТРЫЙ ПАНКРЕАТИТ ОТЕЧНОЙ ФОРМЫ сительно нормы. Активность супероксиддисмутазы снижалась по сравнению с нормой на 11,46Ц55,43 % (р<0,05) (рис. 1).
4* * 43норма 31-е сутки 2* * 2* 3-и сутки * 1* 5-е сутки * 1* МДА ФЛ А2 СОД Рис. 1. Показатели ПОЛ и активности ферментов в ткани поджелудочной железы при остром отечном панкреатите на фоне традиционной терапии (* - достоверность относительно нормы при р<0,05) Было выявлено, что в ткани тонкой кишки содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ также существенно увеличивалось. Уровень диеновых конъюгатов в динамике эксперимента возрастал на 57,50Ц72,50 % (р<0,05), показатель малонового диальдегида увеличивался на 31,56Ц62,54 % (р<0,05) относительно нормы. Уровень индуцированного малонового диальдегида был выше исходных данных на 58,76Ц92,95 % (р<0,05). Активность фосфолипазы А2 в ткани поджелудочной железы возрастала на 76,98Ц101,0 % (р<0,05) относительно нормы. Активность супероксиддисмутазы снижалась по сравнению с нормой на 9,70Ц36,14 % (р<0,05) (рис. 2).
2* 200 * * * * * * норма * * 11-е сутки 3-и сутки 15-е сутки ДК МДА Fe-МДА Рис. 2. Показатели ПОЛ в ткани тонкой кишки при остром отечном панкреатите на фоне традиционной терапии (* - достоверность относительно нормы при р<0,05) Исследованиями установлены следующие изменения активности ферментов и интенсивности ПОЛ в ткани печени. Уровень диеновых конъюгатов в динамике эксперимента возрастал на 59,46Ц129,73 % (р<0,05), показатель малонового диальдегида увеличивался на 29,58Ц77,50 % (р<0,05) относительно нормы.
Уровень индуцированного малонового диальдегида был выше исходных данных на 26,64Ц101,93 % (р<0,05). Активность фосфолипазы А2 в ткани поджелудочной железы возрастала на 72,70Ц142,99 % (р<0,05) относительно нормы. Ак тивность супероксиддисмутазы снижалась по сравнению с нормой на 26,97Ц 35,10 % (р<0,05).
Наиболее выраженные изменения исследуемых показателей были зарегистрированы в плазме крови (рис. 3).
1413* * 12* 11109норма 81-е сутки 73-и сутки 655-е сутки 4* 3* * * * * * * 2* * * * * * 1ДК МДА Fe-МДА ФЛ А2 Каталаза СОД Рис. 3. Показатели ПОЛ и активности ферментов в плазме крови при остром отечном панкреатите на фоне традиционной терапии (* - достоверность относительно нормы при р<0,05) Таким образом было выявлено, что в динамике острого панкреатита регистрируется существенное увеличение активности процессов перекисного окисления липидов, фосфолипазы А2 на фоне достоверного снижения антиоксидантного потенциала не только в органе поражения, но и в тканях печени и кишечника. Следует отметить системность выявленных нарушений метаболических процессов, что также находит свое подтверждение в повышении интенсивности ПОЛ и изменении ферментативной активности плазмы крови.
Другим аспектом данного исследования стало изучение состояния микроциркуляции тканей органов при остром панкреатите. Были выявлены существенные нарушения микроциркуляции в поджелудочной железе, печени и кишечнике. Так, в ткани поджелудочной железы показатель микроциркуляции достоверно снижался относительно нормы на 21,13Ц31,56 % (р<0,05) на первые и третьи сутки острого отечного панкреатита. Показатель A maxCF1/ A maxLF достоверно повышался в динамике эксперимента на 26,67Ц120,00 % (р<0,05).
Показатель A maxHF1/ A maxLF в ходе динамического наблюдения достоверно повышался относительно нормы на 41,38Ц148,28 % (р<0,05). Нейрогенный тонус в ходе эксперимента повышается относительно нормы на 27,61Ц35,82 % (р<0,05). Миогенный тонус снижался на 25,96Ц31,73 % (р<0,05). Показатель шунтирования в динамике острого отечного панкреатита существенно повышался относительно нормы на 98,81Ц138,10 % (р<0,05) (рис. 4).
А Б Рис. 4. ЛДФ-грамма (показатель микроциркуляции) ткани поджелудочной железы в норме (А) и при остром отечном панкреатите (третьи сутки) (Б) Было выявлено, что в ткани кишки показатель микроциркуляции достоверно снижался относительно нормы на 52,18Ц77,96 % (р<0,05) в динамике эксперимента. Показатель A maxCF1/ A maxLF достоверно повышался в динамике эксперимента на 10,00Ц140,00 % (р<0,05). Показатель A maxHF1/ A maxLF в ходе динамического наблюдения достоверно снижался относительно нормы на 20,99Ц56,79 % (р<0,05). Нейрогенный тонус в ходе эксперимента был выше нормы на 35,71Ц152,38 % (р<0,05). Миогенный тонус достоверно повышался на 44,90Ц101,02 % (р<0,05). Показатель шунтирования в динамике острого отечного панкреатита достоверно повышался относительно нормы на 44,07Ц72,03 % (р<0,05) (рис. 5).
А Б Рис. 5. ЛДФ-грамма (показатель микроциркуляции) ткани тонкой кишки в норме (А) и при остром отечном панкреатите (третьи сутки) (Б) Экспериментально установлено, что в ткани печени показатель микроциркуляции достоверно снижался относительно нормы на 55,43Ц81,83 % (р<0,05) в динамике эксперимента. Показатель A maxCF1/ A maxLF достоверно повышался в динамике эксперимента на 55,56Ц111,11 % (р<0,05). Показатель A maxHF1/ A maxLF в ходе динамического наблюдения достоверно возрастал относительно нормы на 107,32Ц436,59 % (р<0,05). Нейрогенный тонус в ходе эксперимента был выше нормы на 96,55Ц167,82 % (р<0,05). Миогенный тонус достоверно повышался на 97,65Ц195,29 % (р<0,05). Показатель шунтирования в динамике острого отечного панкреатита достоверно повышался относительно нормы на 60,58Ц78,85 % (р<0,05).
Для оценки значимости оксидативного стресса в нарушении микроциркуляции тканей в условиях острого панкреатита был проведен корреляционный анализ между показателями интенсивности ПОЛ и микроциркуляции (табл. 2).
Таблица Коэффициент корреляции между выраженностью процессов ПОЛ и показателем микроциркуляции Показатель ПОЛ Поджелудочная железа ПМ - 0,Кишечник ПМ - 0,Печень ПМ - 0,Примечание: r>0,66 - сильная корреляционная зависимость, 0,33 Таким образом, по результатам контрольной серии экспериментов следует отметить, что при остром панкреатите на самых ранних этапах в плазме крови, а также в органе поражения - поджелудочной железе и органах-мишенях кишечнике и печени возникают активизация процесса перекисного окисления липидов и существенные нарушения микроциркуляции. Особый интерес представляет выявленный факт, что интенсивность процесса перекисного окисления липидов в тканевых структурах органа поражения - поджелудочной железе и в органах-мишенях - кишечнике и печени находятся в прямой корреляционной зависимости с микроциркуляторными нарушениями в них. Отметим, что применение инфузионной терапии не способствовало существенной положительной динамике исследованных показателей в течение пяти суток терапии острого панкреатита, что определило необходимость поиска эффективной схемы лечения с учетом выявленных особенностей патогенеза заболевания. Во второй опытной группе в терапию острого панкреатита включали этоксидол - препарат антиоксидантного типа действия. Проведенные исследования показали, что применение антиоксидантной терапии при остром панкреатите приводит к быстрому существенному уменьшению интенсивности процесса перекисного окисления липидов в плазме крови. Так, на фоне применения этоксидола в плазме крови регистрировалось снижение диеновых конъюгатов на 38,24Ц49,46 % (р<0,05), малонового диальдегида - на 24,32 % (р<0,05) относительно контроля. Индуцированный МДА был ниже контрольного на 23,86Ц11,54 % (р<0,05). Отметим, что к пятым суткам терапии данные показатели достигали нормальных значений. Активность фосфолипазы А2 также существенно снижалась относительно контроля на 11,54Ц74,58 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы превышала контроль на 14,23Ц64,25 % (р<0,05) (рис. 6). 14131211* 10норма 9* 81-е сутки 73-и сутки 655-е сутки 400 * 3* * * * 200 * * 1МДА (к) МДА (о) ФЛ А2 (к) ФЛ А2 (о) СОД (к) СОД (о) Рис. 6. Показатели ПОЛ и активности ферментов в плазме крови при остром отечном панкреатите на фоне терапии этоксидолом (* - достоверность относительно контроля при р<0,05) Изучение влияния этоксидола на выраженность ПОЛ в тканях поджелудочной железы, печени и кишечника показало, что патогенетическое действие препарата проявляется не столь быстро, особенно по отношению поджелудочной железы. Так, в ткани поджелудочной железы исследуемые показатели нормальных значений не достигали даже к концу терапии. Уровень диеновых конъюгатов снижался на 27,73Ц31,96 % (р<0,05), малонового диальдегида - на 16,52Ц 49,85 % (р<0,05) относительно контроля. Индуцированный МДА был ниже контрольного на 43,47Ц51,03 % (р<0,05). Активность фосфолипазы А2 снижалась относительно контроля на 14,61Ц43,95 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы превышала контроль на 14,54Ц57,43 % (р<0,05) (рис. 7). 443норма 31-е сутки 2* * 23-и сутки * * 150 * * * 5-е сутки * * 1МДА (к) МДА (о) ФЛ А2 (к) ФЛ А2 (о) СОД (к) СОД (о) Рис. 7. Показатели ПОЛ и активности ферментов в ткани поджелудочной железы при остром отечном панкреатите на фоне терапии этоксидолом (* - достоверность относительно контроля при р<0,05) Исследованиями установлено, что восстановление микроциркуляции в исследованных органах на фоне терапии этоксидолом происходило с запозданием, что проявилось в виде достоверных изменений показателей только к пятым суткам. Так, в ткани поджелудочной железы показатель микроциркуляции достоверно был выше контроля на 12,88 % (р<0,05). На пятые сутки эксперимента показатель достигал исходных значений. Показатель A maxCF1/ A maxLF достоверно был ниже контрольного на пятые сутки эксперимента на 10,53 % (р<0,05). Показатель A maxHF1/ A maxLF на пятые сутки динамического наблюдения достоверно снижался относительно контроля на 36,17 % (р<0,05). Нейрогенный тонус также снижался относительно контроля на 25,% (р<0,05) к концу наблюдения. Миогенный тонус на данном сроке терапии был выше контроля на 27,27 % (р<0,05). Показатель шунтирования на пятые сутки терапии снижался относительно контроля на 42,51 % (р<0,05) (рис. 8). Рис.8. ЛДФ-грамма (показатель микроциркуляции) ткани поджелудочной железы при остром отечном панкреатите на фоне применения этоксидола (пятые сутки) В ткани кишечника показатель микроциркуляции на фоне применения этоксидола был выше контроля на 23,39 % (р<0,05) на пятые сутки эксперимента, исходных значений не достигая. Показатели отношений амплитуд частотных колебаний достоверно были сопоставимы с контролем. Нейрогенный тонус снижался относительно контроля на 22,42 % (р<0,05) к концу наблюдения. Миогенный тонус на данном сроке терапии был ниже контроля на 8,43 % (р<0,05). Показатель шунтирования на пятые сутки терапии снижался относительно контроля на 26,47 % (р<0,05) (рис. 9). Рис.9. ЛДФ-грамма (показатель микроциркуляции) ткани кишечника при остром отечном панкреатите на фоне применения этоксидола (пятые сутки) Установлено, что в ткани печени показатель микроциркуляции достоверно был выше контроля на 47,39 % (р<0,05) на пятые сутки эксперимента. Показатель A maxCF1/ A maxLF достоверно был ниже контрольного на пятые сутки эксперимента на 22,35 % (р<0,05). Показатель A maxHF1/ A maxLF на пятые сутки динамического наблюдения достоверно снижался относительно контроля на 55,29 % (р<0,05). Нейрогенный тонус был выше контроля на 24,56 % (р<0,05) к концу наблюдения и существенно превышал норму. Миогенный тонус на данном сроке терапии был ниже контроля на 35,47 % (р<0,05). Показатель шунтирования на пятые сутки терапии не снижался относительно контроля и был выше нормы на 50,3 % (р<0,05) (рис. 10). Рис. 10. ЛДФ-грамма (показатель микроциркуляции) ткани печени при остром отечном панкреатите на фоне применения этоксидола (пятые сутки) Таким образом, в заключение второй серии экспериментов следует отметить, что применение антиоксиданта этоксидола способствовало быстрой коррекции оксидативного стресса на организменном уровне, на органном уровне данный эффект был несколько отсрочен, но существенно выражен. Коррекция микроциркуляторных нарушений на фоне применения этоксидола регистриро валась на третьи-пятые сутки терапии, в основном на конечном этапе наблюдения. В третьей опытной группе в терапию острого панкреатита включали ангиопротектор пентоксифиллин. Экспериментально установлено, что использование ангиопротекторной терапии при остром панкреатите не приводит к быстрой коррекции оксидативного стресса как на уровне плазмы крови, так и тканей исследованных органов. Так, на фоне применения пентоксифиллина в ткани печени регистрировалось снижение малонового диальдегида на пятые сутки терапии на 16,84 % (р<0,05) относительно контроля. Индуцированный МДА был ниже контрольного на 39,69 % (р<0,05) к пятым суткам терапии. Активность фосфолипазы А2 снижалась относительно контроля на 41,92 % (р<0,05) к концу наблюдения. Активность супероксиддисмутазы превышала контроль на 25,% (р<0,05) на пятые сутки терапии. В ткани кишечника показатели оксидативного стресса достоверно изменялись относительно контроля лишь к концу терапии. В ткани органа поражения - поджелудочной железы существенное действие препарата на ПОЛ и ферментативную активность также было замедленным темпом (рис. 11). 443норма 31-е сутки 2* 2* 3-и сутки * 1* * 5-е сутки * 1МДА (к) МДА (о) ФЛ А2 (к) ФЛ А2 (о) СОД (к) СОД (о) Рис. 11. Показатели ПОЛ и активности ферментов в ткани поджелудочной железы при остром отечном панкреатите на фоне терапии пентоксифиллином (* - достоверность относительно контроля при р<0,05) Экспериментально установлено, что при использовании пентоксифиллина в терапии острого панкреатита отмечен положительный эффект по восстановлению микроциркуляции, особенно в органах-мишенях - кишечнике и печени, меньше - в органе поражения - поджелудочной железе. Так, в ткани поджелудочной железы показатель микроциркуляции достоверно был выше контроля на 33,64 % (р<0,05) на третьи сутки эксперимента. На данном этапе наблюдения показатель A maxCF1/ A maxLF был ниже контрольного на 34,78 % (р<0,05). Показатель A maxHF1/ A maxLF на третьи сутки динамического наблюдения достоверно снижался относительно контроля на 68,06 % (р<0,05). Нейрогенный тонус также снижался относительно контроля на 25,93 % (р<0,05). Миогенный тонус на данном сроке терапии был выше контроля на 33,80 % (р<0,05). Показатель шунтирования на пятые сутки терапии снижался относительно контроля на 36,53 % (р<0,05). В ткани кишечника показатели микроциркуляции на фоне применения пентоксифиллина восстанавливались быстрее, чем в контроле (рис. 12). Рис. 12. ЛДФ-грамма (показатель микроциркуляции) ткани кишечника при остром отечном панкреатите на фоне применения пентоксифиллина (пятые сутки) Установлено, что в ткани печени показатель микроциркуляции достоверно был выше контроля на 109,51Ц304,35 % (р<0,05) в динамике эксперимента. Показатель A maxCF1/ A maxLF достоверно был ниже контрольного в ходе эксперимента на 15,79Ц23,81 % (р<0,05). Показатель A maxHF1/ A maxLF на в течение динамического наблюдения достоверно снижался относительно контроля на 21,82Ц57,61 % (р<0,05). Нейрогенный тонус был ниже контроля на 27,90Ц36,84 % (р<0,05). Миогенный тонус был ниже контроля на 15,48Ц52,59 % (р<0,05). Показатель шунтирования на пятые сутки терапии снижался относительно контроля на 38,17Ц47,31 % (р<0,05) (рис. 13). Рис. 13. ЛДФ-грамма (показатель микроциркуляции) ткани печени при остром отечном панкреатите на фоне применения пентоксифиллина (пятые сутки) Таким образом, в заключение третьей серии экспериментов следует отметить, что применение ангиопротектора пентоксифиллина не способствовало быстрой коррекции оксидативного стресса. Установлена способность препарата корригировать микроциркуляторные нарушения в тканях исследованных органов, в большей степени в органах-мишенях, в меньшей - в органе поражения. В четвертой группе исследовали эффективность комбинированного применения этоксидола и пентоксифиллина в терапии острого панкреатита. Проведенные исследования показали высокую эффективность комбинированной терапии в коррекции оксидативного стресса. Так, в плазме крови регистрировалось снижение диеновых конъюгатов на 26,32Ц47,31 % (р<0,05), малонового диальдегида - на 13,47Ц28,72 % (р<0,05) относительно контроля. Индуцированный МДА был ниже контрольного на 26,87Ц38,90 % (р<0,05). Отметим, что к пятым суткам терапии данные показатели достигали нормальных значений. Активность фосфолипазы А2 также существенно снижалась относительно контроля на 28,85Ц76,27 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы - на 9,76Ц 57,54 % (р<0,05). Значительные положительные модификации показателей ПОЛ и ферментативной активности на фоне применения комбинированной терапии были выявлены и в тканях печени, кишечника и поджелудочной железы (рис. 14). 443норма 3250 1-е сутки * 200 * 3-и сутки * 1* * * 5-е сутки * * * 1МДА (к) МДА (о) ФЛ А2 (к) ФЛ А2 (о) СОД (к) СОД (о) Рис. 14. Показатели ПОЛ и активности ферментов в ткани поджелудочной железы при остром отечном панкреатите на фоне комбинированной терапии (* - достоверность относительно контроля при р<0,05) Проведенные исследования показали, что при использовании комбинированной терапии острого панкреатита отмечен существенный положительный эффект и по восстановлению микроциркуляции как в органах-мишенях, так и в органе поражения - поджелудочной железе. Так, в ткани поджелудочной железы показатель микроциркуляции был выше контроля на 10,26Ц41,66 % (р<0,05) в динамике эксперимента. В динамике наблюдения показатель A maxCF1/ A maxLF был ниже контрольного на 10,53Ц36,46 % (р<0,05). Показатель A maxHF1/ A maxLF достоверно снижался относительно контроля на 27,66Ц69,44 % (р<0,05). Нейрогенный тонус также снижался относительно контроля на 21,43Ц27,49 % (р<0,05). Миогенный тонус был выше контроля на 12,50Ц42,52 % (р<0,05). Показатель шунтирования снижался относительно контроля на 31,18Ц42,50 % (р<0,05) (рис. 15). Рис. 15. ЛДФ-грамма (показатель микроциркуляции) ткани поджелудочной железы при остром отечном панкреатите на фоне применения комбинированной терапии (пятые сутки) В ткани кишечника и печени при остром панкреатите на фоне комбинированной терапии также отмечен быстрый темп восстановления микроциркуляции. В заключение четвертой серии экспериментов следует отметить, что при комбинированном применении исследованных препаратов антиоксидантного и ангиопротекторного действия отмечается наибольшая эффективность в предупреждении (коррекции) оксидативного стресса. Выявленный положительный эффект терапии определен способностью сочетанного применения препаратов влиять на значимые патогенетические звенья этого грозного осложнения. Таким образом, проведенными экспериментальными исследованиями показана значимая роль оксидативного стресса в развитии и прогрессировании острого панкреатита, установлена патогенетическая целесообразность применения комбинированной антиоксидантной и ангиопротекторной терапии с целью купирования этого важнейшего триггерного механизма данной грозной патологии. ВЫВОДЫ 1. При остром панкреатите на самых ранних этапах в плазме крови, а также в органе поражения - поджелудочной железе и органах-мишенях кишечнике и печени возникают активизация процесса перекисного окисления липидов и существенные нарушения микроциркуляции. Выявленные нарушения находятся в прямой корреляционной зависимости. 2. Применение антиоксидантной терапии при остром панкреатите приводит к быстрому существенному уменьшению интенсивности процесса перекисного окисления липидов в плазме крови. Действие терапии по отношению тканевых структур исследованных органов проявляется не столь быстро и эффективно, особенно в поджелудочной железе. Восстановление микроциркуляции в исследованных органах при такого рода терапии также происходит низким темпом. 3. Использование ангиопротекторной терапии при остром панкреатите не приводит к быстрой коррекции оксидативного стресса как на уровне плазмы крови, так и тканей исследованных органов. При такой терапии отмечен положительный эффект по восстановлению микроциркуляции, особенно в органахмишенях - кишечнике и печени, меньше - в органе поражения - поджелудочной железе. 4. При комбинированном применении исследованных препаратов антиоксидантного и ангиопротекторного действия отмечается наибольшая эффективность в предупреждении оксидативного стресса. Быстрый эффект такой терапии отмечается как на организменном, так и органном уровнях. 5. Выявленный положительный лечебный антиоксидантный эффект во многом пределен способностью сочетанного применения препаратов улучшать микроциркуляцию в органе поражения - поджелудочной железе и других органах - кишечнике и печени. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ В патогенетической терапии острого панкреатита целесообразно применение комбинированной антиоксидантной и ангиопротекторной терапии, которая позволяет существенно уменьшить патогенное влияние оксидативного стресса на организменном и органном уровнях. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Роль оксидативного стресса в патогенезе острого панкреатита // Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицины. Сборник научных работ. - Саранск, 2007. С.93-94. Тарасова Т.В., Лещанкина Н.Ю., Рахметуллова Г.Р. 2. Роль фармакорегуляции липидного метаболизма в патогенетической терапии // Материалы I Международной научно-практической конференции Современные проблемы медико-биологической и фармацевтической промышленности. Развитие инновационного и кадрового потенциала Пензенской области. - Пенза, 2011. Электронное научное издание ФГУП НТЦ Информрегистр, Депозитарий электронных изданий.С. 129-131. Власова Т.И., Хаирова О.А., Рахметуллова Г.Р., Келоева К.Х., Спирина М.А., Ярусова В.В. 3. Патогенетические основы повышения детоксикационной способности организма // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. 2011. № 4. С. 3-11. Власов А.П., Шибитов В. А., Власова Т.И., Рахметуллова Г.Р., Гашимова С.К., Васильев В.В. 4. Модуляция функциональной активности форменных элементов крови при эндотоксикозе // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте : материалы науч. конф. XL Огаревские чтения Мед. ин-та Мордов. гос. ун-та. Вып. 15. Саранск : Изд-во Мордов. унта, 2011. С. 10.12. Гашимова С.К., Рахметуллова Г.Р., Хаирова О.А., Поляков А.Н., Паршкова Т.Ю. 5. Патогенетические основы совершенствования интенсивной терапии острого панкреатита // МедиАль. 2012. № 1 (4). С. 33-36. www.medial-jornal.ru Анаскин С.Г., Григорьева Т.И., Рахметуллова Г.Р., Катков С.В., Власова В.П., Тингаев С.В. 6. Основы эффективности терапии острого панкреатита//Актуальные проблемы патофизиологии : ХVIII межгородской конференции молодых ученых. СПб.: Изд-во СПбГМУ, 2012. С. 124-126. Суслов А.В., Тингаев С.В., Рахметуллова Г.А., Логинов М.А., Тимошкин С.П. 7. Пути повышения детоксикационной способности организма// Актуальные проблемы современного практического здравоохранения: сборник трудов ХVIII межрегиональной научно-практической конференции памяти академика Н.Н. Бурденко. Пенза, 2012. С. 9-10. Анаскин С.Г., Власова Т.И., Рахметуллова Г.Р., Хаирова О.А., Кульченко А.А., Тингаев С.В. 8. Повышение детоксикационной способности организма при эндотоксикозе//Социально-гуманитарные и естественно-научные исследования: теория и практика взаимодействия: межвузовский сборник научных трудов. Вып. 3. Саранск. 2012. С.317-319. Быханова О.Н., Рахметуллова Г.Р., Гашимова С.К., Волкова М.В. 9. Оптимизация терапии при остром панкреатите и ее мониторинг// Материалы Пленума правления Ассоциации хирургов-гепатологов Россиии и стран СНГ. Ижевск, 2012. С.154-156. Власов А.П., Анаскин С.Г., Власов П.А., Тингаев С.В., Рахметуллова Г.Р. РЕЗЮМЕ Рахметуллова Г. Р. Повышение устойчивости к оксидативному стрессу при остром экспериментальном панкреатите Экспериментальными исследованиями установлено, что при остром панкреатите уже на самых ранних этапах в органе поражения поджелудочной железе и других органах кишечнике и печени возникают активизация процесса перекисного окисления липидов и существенные нарушения микроциркуляции, особенно в поджелудочной железе и кишечнике. Доказано, что наибольшая эффективность в предупреждении (коррекции) оксидативного стресса отмечается при комбинированном применении препаратов антиоксидантного и ангиопротекторного действия. Выявленный положительный эффект терапии определен способностью сочетанного применения препаратов влиять на значимые патогенетические звенья этого грозного осложнения. SUMMARY Rahmetullova G. R. Increased resistance to oxidative stress in acute experimental pancreatitis By experimental studies it is established that at acute pancreatitis there is an activization of process of lipids peroxidation and essential disturbances of microcirculation already at the earliest stages in a lesion organ a pancreas both other organs an intestine and a liver, especially in a pancreas and an intestine. It is proved that the greatest efficiency in the prevention (correction) of an oksidativny stress becomes perceptible at the combined application of preparations of antioxidatic and angioprotektion action. The taped positive effect of therapy is defined by ability of combined application of preparations to influence significant pathogenetic links of this terrible complication.