Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по сельскому хозяйству
На правах рукописи
БАЖЕНОВ МИХАИЛ СЕРГЕЕВИЧ
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕТОДИК ОТБОРА УСТОЙЧИВЫХ К ПРОРАСТАНИЮ НА КОРНЮ ФОРМ ОЗИМОЙ ТРИТИКАЛЕ
Специальность 06.01.05 - селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Москва - 2012
Работа выполнена на кафедре селекции и семеноводства полевых культур и в научно-образовательном центре молекулярной биотехнологии Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К.А. Тимирязева
Научный консультант:
доктор биологических наук Пыльнев Владимир Валентинович
Официальные оппоненты:
Медведев Анатолий Михайлович доктор сельскохозяйственных наук, член-корреспондент РАСХН, профессор, Российская академия сельскохозяйственных наук, отделение растениеводства, академик-секретарь Соловьёв Александр Александрович доктор биологических наук, профессор, Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева, кафедра генетики и биотехнологии, заведующий кафедрой
Ведущая организация:
ГНУ Московский НИИСХ Немчиновка Российской академии сельскохозяйственных наук
Защита состоится л14 ноября 2012 г. в 14 час. 30 мин. на заседании диссертационного совета Д 220.043.10 при Российском государственном аграрном университете - МСХА имени К. А. Тимирязева по адресу:
127550, г. Москва, ул. Тимирязевская, д. 49. Факс (499) 976-24-92, e-mail: genetics@timacad.ru
С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке имени Н.И. Железнова РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева Автореферат разослан л 12 октября 2012 г. и размещён на сайте университета www.timacad.ru
Ученый секретарь диссертационного совета Л.С. Большакова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследований. Основными направлениями использования тритикале являются производство фуражного зерна и зелёной массы. Мука из зерна тритикале может быть использована для производства хлебобулочных изделий, а также диетического питания - хлебцев, хлопьев.
Низкое качество изделий, получаемых из чистой муки тритикале, часто объясняется слабой клейковиной, плохой набухаемостью крахмала и повышенной активностью гидролитических ферментов. Отчасти это является следствием предуборочного прорастания зерна в колосе, которому подвержены многие современные сорта почти во всех регионах возделывания этой культуры. Предуборочное прорастание в колосе также сокращает долговечность семян при хранении. Таким образом, создание сортов тритикале, устойчивых к предуборочному прорастанию зерна в колосе, является актуальной задачей селекции.
Степень разработанности проблемы. Чаще всего отбор на устойчивость к предуборочному прорастанию зерна ведут путём оценки образцов с помощью различных методик искусственной провокации прорастания (Беркутова, 1982; Flamme, 1991; Нгуен, 2011; Bizova, 2011).
Отбор из генетически полиморфных популяций по отдельным растениям, колосьям и зерну используется реже, но также является эффективным (Hucl, 1995).
В связи с низкой наследуемостью устойчивости к прорастанию зерна в колосе и трудоёмкостью её оценки считается перспективным поиск молекулярных маркеров данного свойства. У гексаплоидной тритикале молекулярному маркированию устойчивости к прорастанию зерна в колосе посвящено мало работ. Известно о связи данного свойства с R/Dхромосомными замещениями, состоянием гена Vp-1B, микросателлитным маркером Xgwm155 (Rybka, 2003; Майер, 2011).
Прорастание зерна в колосе тритикале сильно зависит от погодных условий (Нгуен, 2011). Однако специальных исследований влияния погодных условий на покой семян у данной сельскохозяйственной культуры не проводилось.
Цель и задачи исследований. Целью работы является изучение генетического и средового контроля покоя семян как показателя устойчивости к предуборочному прорастанию зерна в колосе гексаплоидной озимой тритикале, а также оценка эффективности отбора с помощью молекулярных маркеров в сравнении с отбором по фенотипу на устойчивость к предуборочному прорастанию.
В задачи исследования входило:
1. Определение влияния температуры, осадков, полива и азотной подкормки на покой семян тритикале по данным полевых и вегетационных экспериментов.
2. Скрининг коллекции озимой тритикале кафедры селекции и семеноводства полевых культур по 2R/2D-замещению и аллельному состоянию гена Rht1 (Rht-B1).
3. Оценка влияния 2R/2D-хромосомного замещения на покой семян, элементы зерновой продуктивности и морфологические параметры растений тритикале.
4. Оценка влияния гена Rht1 (Rht-B1) на покой семян, элементы зерновой продуктивности и морфологические параметры растений тритикале.
5. Определение наследуемости уровня покоя семян по годам.
6. Оценка связи некоторых пшеничных микросателлитных маркеров устойчивости к предуборочному прорастанию с индексом прорастания у озимой тритикале.
7. Поиск морфологических маркеров устойчивости к прорастанию зерна в колосе.
8. Определение эффективности отбора с помощью маркеров.
Научная новизна исследований. В результате работы впервые показан характер влияния температуры воздуха и увлажнения почвы в период от цветения до созревания зерна на покой семян тритикале.
Впервые показана распространённость аллеля низкостебельности RhtB1b и 2R/2D-замещения среди образцов гексаплоидной озимой тритикале различных регионов происхождения.
С помощью молекулярных маркеров на рекомбинантных линиях изучено влияние 2R/2D-замещения и аллелей гена Rht-B1 на покой семян, высоту растений и элементы зерновой продуктивности озимой тритикале.
Впервые на тритикале установлена связь устойчивости к мучнистой росе с микросателлитным маркером Xwmc104.
Положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Влияния температуры, осадков, полива и азотной подкормки на покой семян тритикале, наследуемость индекса прорастания зерна по годам.
2. Влияния 2R/2D-хромосомного замещения и гена Rht-B1 на покой семян, элементы зерновой продуктивности и морфологические параметры растений тритикале.
3. Связь покоя семян с выполненностью зерна тритикале.
4. Распространённость аллелей гена Rht-B1 и 2R/2D-замещения среди сортообразцов гексаплоидной озимой тритикале.
Практическая значимость. С помощью ПЦР-маркеров проведён анализ 134 образцов гексаплоидной озимой тритикале кафедры селекции и семеноводства полевых культур РГАУ-МСХА на наличие 2R/2D-замещения и аллелельное состояние гена низкостебельности Rht-B1 (аллели a и b).
Показано влияние гена Rht-B1 и 2R/2D-замещения на продуктивность колоса и её элементы, высоту растений, устойчивость к полеганию, выполненность зерна и покой семян, как фактор устойчивости к прорастанию зерна в колосе.
Полученные результаты могут быть использованы для планирования селекционной работы (создания модели сорта на генетической основе, подбора пар для гибридизации). Показана связь устойчивости к мучнистой росе тритикале с микросателлитным маркером Xwmc104.
Достоверность результатов. Эксперименты проведены в соответствии с общепринятыми методическими принципами. Достоверность выводов основывается на статистической обработке данных.
Апробация работы. Результаты исследований были доложены на XI молодёжной научной конференции Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии в ГНУ ВНИИСБ Россельхозакадемии (Москва, 2011 г.), конференции молодых учёных и специалистов в РГАУМСХА имени К.А. Тимирязева (Москва, 2011 г.), II международной школеконференции молодых учёных Генетика и селекция растений, основанная на современных генетических знаниях и технологиях (Звенигород, 2011 г.), международной летней школе "Биотехнологии в сельском хозяйстве (AgroBioTech-12)" в РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева (Москва, 2012 г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них две - в изданиях, рекомендуемых ВАК.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 1страницах и состоит из введения, 3 глав, выводов, рекомендаций производству, списка литературы и приложения. Она содержит 37 таблиц и рисунков. Список использованной литературы включает 197 наименований, в том числе 161 - на иностранных языках.
УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ Для оценки связи покоя семян с молекулярными SSR-маркерами, 2R/2D-замещением и аллельным состоянием гена Rht-B1 использовались растения F (около 70-и на комбинацию) и семьи растений F - F (40Е50 на 2 3 комбинацию) гибридных комбинаций 21759/97 Александр, 21759/97 Fidelio и Александр Ставропольский 2.
В вегетационном опыте по изучению влияния климатических факторов на покой семян озимой тритикале и некорневой подкормки мочевиной использовали самоопылённые линии 313 (отобрана из сортообразца 21759/97) и 435 (отобрана из сорта Fidelio).
Из четырёх лет исследования 2009-ый год по температуре воздуха был наиболее близок к климатической норме. Период вегетации 2010-го года характеризуется повышенной температурой (на 5Е8С выше среднемноголетних значений) и засухой, создавшейся во время налива и созревания зерна. Температура воздуха в 2011 году была на 3Е5С выше, чем в среднем за много лет наблюдений, а дефицит влаги в этот год приходился на время выхода в трубку и начало цветения растений.
Температурные условия 2012 года близки к таковым в 2011 году. В то же время, в 2012 году выпало достаточное количество осадков.
Поиск внутрисортового полиморфизма устойчивости к прорастанию зерна в колосе проводился на пяти сортообразцах: Fidelio, Александр, Ставропольский 2, 21759/97 и №2. Из каждого образца в течение 2008-20гг. было получено по 20 линий путём индивидуального отбора. Отобранные устойчивые и неустойчивые к прорастанию зерна в колосе линии испытывались в 2011 г. на делянках площадью 1 м2 в трёхкратной повторности при размещении на поле методом рендомизированных повторений. Степень внутрисортового полиморфизма изучаемых сортообразцов также оценивалась по электрофоретическим спектрам спирторастворимых запасных белков зерна (глиадинов) по методикам Singh (1991) и Шишкиной (2009). Использовалось по 100 зёрен каждого сортообразца.
Изучение гибридных популяций. Гибридизация образцов тритикале проводилась в 2008 году с использованием механической кастрации и ограниченно-свободного опыления. Гибриды F выращивались в течение 2008-2009 гг. с изоляцией индивидуальных колосьев. В 2010 г. в F после колошения на каждой делянке отмечалось по 70 растений с отбором листовой ткани для выделения ДНК. После пожелтения колосья срезались для дозревания в условиях лаборатории. Отмечались морфологические признаки колоса, учитывались элементы его продуктивности, визуально оценивалась выполненность зерна, определялся индекс прорастания (20Езёрен с каждого растения).
Осенью 2010 года семена, полученные в результате самоопыления растений F, были посеяны семьями на однорядковых делянках длиной 1 м с междурядьем 30 см. Учёт большинства параметров в дальнейшем производился по каждой семье в целом. Визуально определялся процент перезимовки, отмечались даты наступления фаз развития растений. Уборка растений (с корнями) в 2011 году производилась после пожелтения колосьев.
В снопе проводился подсчёт числа растений и продуктивных стеблей, измерялась высота 10-и случайно выбранных растений. В главных колосьях подсчитывалось число колосков, и измерялась длина колосового стержня, определялась продуктивность колоса, масса 1000 зёрен, выполненность зерна. Две пробы по 100 зёрен использовались для изучения динамики прорастания зерна в чашках Петри.
Исследования в 2012 году проводились по той же схеме, как и в 2011 г.
Оценка устойчивости к полеганию проводилась в предуборочный период с использованием шкалы, рекомендованной для государственного сортоиспытания. Оценка устойчивости к мучнистой росе проводилась через неделю после колошения путём визуальной оценки процента поражённой площади поверхности листьев.
Уровень покоя семян оценивался по динамике их прорастания в чашках Петри в течение 14 дней с последующим расчётом индекса ИП = (14 n1 + 13 n2 +... + 1 n14) /(D N) прорастания по формуле:, где n, n, Е 1 n - число вновь проросших зерен за первые, вторые и последующие сутки;
N - общее число жизнеспособных зерен; D - общее число дней испытания;
14, 13, Е, 1 - веса, данные числам проросших зерен в первый, второй и последующие дни соответственно (Walker-Simmons, 1988). Индекс прорастания варьирует в пределах от 0 до 1, при этом, чем более глубокий покой имеют семена, тем ниже значение данного индекса.
Устойчивость к прорастанию зерна в колосе оценивалась путем подсчета доли проросших зерен в колосьях во влажной камере на 8-ые сутки по методике, предложенной Нгуен Т.Т.Л. (2011). Использовалось по колосьев с каждой делянки опыта.
Исследование влияния климатических факторов на покой семян тритикале проводилось в оранжереях и климатических камерах. В качестве одного из факторов опыта выступал режим полива с вариантами: 1) до 70% полезной влагоёмкости (ПВ) 3Е4 раза в неделю, 2) до 40% ПВ 2Е3 раза в неделю. В качестве другого фактора - температурный режим в период от цветения до полной спелости с вариантами в 2011 году: 1) +25С днём, +15С ночью, 2) +15С днём, +13С ночью; в 2012 году - 1) +26С днём, +19С ночью, 2) +18С днём, +11С ночью. Освещение - 18 часов в сутки.
Проращивание зерна в данном опыте в 2011 году проводилось при +20C, а в 2012 году - при +25С. В 2011 году повторность была четырёхкратная, в 2012 году - семикратная.
Исследование влияния некорневой подкормки мочевиной на покой семян тритикале. Использовались линии 313 и 435, выращенные в оранжерее в сосудах. Опрыскивание растений 10%-ным водным раствором мочевины проводилось через 5 и 20 дней после середины цветения. Контрольный вариант опрыскивался водой. Повторность опыта пятикратная.
Выделение ДНК проводилось по методике Bernatzky и Tanksley (1986) с некоторыми модификациями.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Для аллелей гена Rht-Bиспользовались праймеры, разработанные Ellis (2002). Для детекции 2Rхромосомы использовали праймеры к гену Sec2, разработанные Lee (1994).
Для амплификации микросаталлитных последовательностей использовались праймеры, найденные в базе данных GrainGenes 2.( ПЦР проводили на Tetrad Peltier Thermal Cycler (Bio-Rad, США) при условиях, рекомендуемых авторами праймеров. Продукты амплификации разделялись электрофорезом в горизонтальных пластинках 2%-ного агарозного геля с трис-боратным (TBE) буферным раствором c добавлением бромистого этидия при напряжённости электрического поля 6 В/см. В качестве маркера размеров использовали л100 bp Ladder (лFermentas, Литва). Визуализация результатов электрофореза производилась в ультрафиолетовом свете.
Статистический анализ данных. Наличие связи количественных признаков с молекулярными маркерами устанавливалось методом дисперсионного анализа. Для расчётов использовались данные только гомозиготных по маркеру растений. Связь качественных признаков и признаков, оцениваемых в баллах, с молекулярными маркерами устанавливалась на основе точного теста Фишера. Связь количественных признаков между собой оценивалась методом корреляционного анализа.
Использовались пакеты программ Statistica 7, MS Excel 2000, AGROS 2.11 и программы интернет-сайта in-silico.net.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Влияние факторов среды на покой семян тритикале Эксперимент в климатических камерах проводился в течение двух лет (2011-2012 гг.). В оба года исследования оказалось значимым взаимодействие факторов генотип и температурный режим выращивания, что указывает на неодинаковую реакцию покоя семян различных генотипов на одинаковые изменения температуры воздуха. Покой семян линии 313 в меньшей степени колеблется под действием внешних условий, чем покой семян линии 435.
В 2011 году эффект генотипа линии тритикале в среднем оказался несущественным (табл. 1). В 2012 году линия 313 в среднем показала меньший индекс прорастания зерна (т.е. более глубокий покой семян), чем линия 435 (табл. 2). В обоих экспериментах многофакторный дисперсионный анализ выявил существенное влияние фактора температуры на покой семян тритикале. Зерно, созревшее при более низкой температуре, обладало более глубоким покоем, чем зерно, созревшее при высокой температуре. Данный результат согласуется с результатами работ, проведённых на пшенице (Reddy, 1985).
Таблица Влияние температуры и влажности почвы во время созревания на индекс прорастания зерна тритикале, 2011 г.
иния Среднесуточная Максимальная Индекс тритикале температура в период влажность почвы, % прорастания (генотип) созревания зерна, С от полезной при 20 C (A) (B) влагоёмкости (C) 70 0,14,40 0,370 0,22,40 0,70 0,14,40 0,470 0,22,40 0,НСР для факторов A, B, C 0,НСР для взаимодействий A*B, A*C, B*C 0,НСР для взаимодействия A*B*C 0,Исследования показали, что влажность почвы во время созревания зерна слегка модифицирует действие температуры на покой семян тритикале.
При этом восприимчивость к влажности почвы зависит от генотипа растения.
У линии 313 в условиях имитации почвенной засухи высокие температуры в период созревания зерна не так сильно ослабляют покой семян, как при достаточном увлажнении почвы. Для линии 435 влажность почвы в период созревания зерна почти не влияет на индекс прорастания после уборки.
Таблица Влияние температуры и влажности почвы во время созревания на индекс прорастания зерна тритикале, 2012 г.
иния Среднесуточная Максимальная Индекс тритикале температура в период влажность почвы, % прорастания (генотип) созревания зерна, С от полезной при 25 C (A) (B) влагоёмкости (C) 70 0,40 0,370 0,40 0,70 0,40 0,470 0,40 0,НСР для факторов A, B, C 0,НСР для взаимодействий A*B, A*C, B*C 0,НСР для взаимодействия A*B*C 0,Эффект некорневой подкормки мочевиной, изученный в отдельном эксперименте, оказался несущественным (табл. 3).
Таблица Влияние некорневой подкормки мочевиной на покой семян тритикале, 2012г.
Индекс прорастания, Линия Вариант обработки 25С Контроль (вода) 0,313 Мочевина через 5 дней* 0,Мочевина через 20 дней* 0,Контроль (вода) 0,435 Мочевина через 5 дней* 0,Мочевина через 20 дней* 0,НСР (линия) 0,НСР (вариант обработки) 0,НСР (взаимодействие) 0,* - дней после цветения Нами определено существенное различие в чувствительности зародышей зерна, не прошедшего период послеуборочного дозревания, к абсцизовой кислоте (АБК) у линий 313 и 435. У линии 313 на растворе АБК (5 мкМ) зародыши прорастали существенно медленнее, чем на дистиллированной воде. Некорневая подкормка мочевиной не оказала существенного влияния на чувствительность к АБК зародышей линии 435.
Для линии 313 отмечено существенное снижение чувствительности зародышей к АБК под действием подкормки через 5 дней после цветения.
В течение 2009-2012 гг. нами проводилась оценка уровня покоя семян сортообразцов озимой тритикале, участвовавших в исследованиях по изучению внутрисортового полиморфизма и послуживших материалом для гибридологического анализа устойчивости к прорастанию зерна в колосе. Из них относительно глубоким покоем семян обладали образцы Александр, 21759/97 и №2. Образцы Ставропольский 2 и Fidelio отличались слабым покоем семян (табл. 4).
Таблица Характеристика сортообразцов по индексу прорастания Сортообразцы 2009 г. 2010 г. 2011 г. 2012 г. Средние 21759/97 0,58 0,36 0,75 0,81 0,№2 0,69 0,30 0,82 0,85 0,Fidelio 0,76 0,44 0,79 0,79 0,Александр 0,50 0,35 0,81 0,82 0,Ставропольский 2 0,70 0,56 0,77 0,85 0,Средние 0,65 0,40 0,79 0,83 0,НСР сортообразец = 0,07; НСР год = 0,06; НСР взаимодействие = 0,13.
05 05 Условия среды имеют решающее значение в определении уровня покоя семян (табл. 4). Двухфакторный дисперсионный анализ выявил существенность взаимодействия генотип год, что указывает на неодинаковость реакции различных сортообразцов на изменение погодных условий.
Использование 2R/2D-замещения в селекции гексаплоидной озимой тритикале В результате скрининга коллекции озимой тритикале с помощью ПЦР-маркеров 2R- и 2D-хромосом (Xwmc111 и Sec2) было обнаружено образцов, предположительно имеющих 2R/2D-замещение: 21759/97, АДК1359t, Каприз, Полукарлик 1 x EM1, ПРАГ-344, ПРАГ-341, Саргау, ТИ17 и Эллада. У образца 21759/97 с помощью специфичных для 2D-хромосомы микросателлитных маркеров - Xbarc228, Xbarc1143, Xgwm539, Xgwm301, Xgwm102, Xgwm157, Xbarc168, Xgwm484, Xwmc111, Xgwm261 - подтверждено наличие целой хромосомы 2D. Одновременно у растений этого образца отсутствовала хромосома 2R, о чем говорит отсутствие амплификации STS-маркера гена Sec2. Наличие других хромосом D-генома у растений образца 21759/97 с помощью SSR-маркеров не было выявлено.
Кроме того, положительные результаты при ПЦР-анализе дали маркеры Sec(на первую хромосому ржи) и RYE (маркер, позволяющий находить интрогрессии ржаной ДНК в геном пшеницы).
Все обнаруженные нами образцы коллекции с 2R/2D-замещением имеют происхождение из южных регионов России или Украины. Три из них (ТИ17, Саргау и Каприз) занесены в Гос. реестр селекционных достижений, допущенных к использованию на территории РФ (2012).
С помощью маркеров Sec2 и Xwmc111 в 2010 году в F комбинации 21759/97 Александр было обнаружено 28 гомозиготных растений по 2R/2D-замещению, 31 растение без 2D-хромосомы и 11 гемизигот, несущих 2R и 2D-хромосому одновременно. В 2011-2012 гг. в F и F данной 3 гибридной комбинации изучалось 15 семей с 2R/2D-замещением и 24 семьи без замещения. В F гибридной комбинации 21759/97 Fidelio было получено 17 растений, гомозиготных по 2R/2D-замещению, 20 гемизиготных растений и 33 растения без 2D-хромосомы в геноме. В F и F данной 3 гибридной комбинации в расчётах принимали участие 8 семей с 2D/2Rзамещением и 33 семьи без замещения. Гемизиготные растения в F и семьи растений F и F, расщепляющиеся по 2R/2D-замещению, в расчетах не 3 учитывались.
Высота растений. В гибридной комбинации 21759/97 Александр было отмечено существенное снижение высоты растений под действием 2R/2D-замещения (в среднем на 17 см в 2011 году и на 25 см в 2012 году.) Таблица Влияние 2R/2D-замещения на высоту растений Гибридная Год У растений с У растений с Уровень комбинация 2R/2D- полным значимости замещением ржаным различий (p) геномом Высота растения, см 21759/97 2011 75 92 <0,001*** Александр 2012 108 133 <0,001*** 21759/97 Fidelio 2011 68 75 0,02012 107 127 <0,001*** Здесь и далее для оценки уровня значимости различий использовался критерий F-Фишера.
(табл. 5). В гибридной комбинации 21759/97 Fidelio снижение высоты растений под действием 2R/2D-замещения было слабо существенным в 20году (в среднем на 7 см) и существенным в 2012 году (на 20 см).
Элементы структуры урожая. В 2011 году в гибридных комбинациях 21759/97 Александр и 21759/97 Fidelio 2R/2D-замещение снизило продуктивность колоса растений примерно в 2 раза, а в 2012 году - в 1,5 раза (табл. 6). Снижение продуктивности колоса произошло за счёт уменьшения числа колосков в колосе и озернённости колоска. В гибридной комбинации 21759/97 Александр в 2011 году линии с 2R/2D-замещением имели достоверно большую массу 1000 зёрен, чем линии с полным ржаным Таблица Влияние 2R/2D-замещения на элементы структуры урожая У растений с Уровень У растений с Гибридная комбинация Год полным ржаным значимости 2R/2D-замещением геномом (p) Масса зерна в колосе, г 21759/97 2011 1,0 1,9 <0,001*** Александр 2012 1,7 2,7 <0,001*** 2011 0,7 1,8 <0,001*** 21759/97 Fidelio 2012 1,9 2,6 <0,001*** Число колосков в колосе 2010 22 29 <0,001*** 21759/97 2011 19 25 <0,001*** Александр 2012 22 28 <0,001*** 2010 20 28 <0,001*** 21759/97 Fidelio 2011 18 25 <0,001*** 2012 22 27 <0,001*** Озернённость колоска 2010 1,2 1,5 0,121759/97 2011 0,9 1,5 0,004** Александр 2012 1,2 1,4 <0,001*** 2010 1,3 1,5 0,121759/97 Fidelio 2011 0,9 1,4 0,009** 2012 1,4 1,5 0,6Масса 1000 зёрен, г 21759/97 2011 58 52 0,035* Александр 2012 66 66 0,92011 46 48 0,221759/97 Fidelio 2012 62 63 0,2геномом. В гибридной комбинации 21759/97 Fidelio у растений с 2R/2Dзамещением наблюдалась слабая тенденция к снижению продуктивной кустистости (в 2011 году) и зимостойкости. В гибридной комбинации 21759/97 Александр 2R/2D-замещённые линии обладали несколько меньшей полевой всхожестью, чем линии с полным ржаным геномом.
Устойчивость к полеганию. В благоприятных для оценки образцов на устойчивость к полеганию условиях 2012 г. в гибридной комбинации 21759/97 Александр было обнаружено достоверное (p=0,009 по результату точного теста Фишера) положительное влияние 2R/2D-замещения на устойчивость. При этом у всех линий с данным замещением полегания не наблюдалось (15 линий), а среди линий без 2D-хромосомы насчитывалось полностью устойчивых линий, 9 линий со слабым отклонением стеблей и линия со средней степенью полегания (отклонение стеблей на 45). В гибридной комбинации 21759/97 Fidelio влияние 2R/2D-замещения на устойчивость к полеганию статистически недостоверно (p=0,14). Среди восьми 2R/2D-замещённых линий были только полностью устойчивые к полеганию, в то время как среди линий без замещения насчитывалось полностью устойчивая линия, 10 линий со слабым отклонением стеблей и линии с отклонением стеблей на 45 от вертикали.
Покой семян. Значимая связь 2R/2D-замещения с индексом прорастания была отмечена в гибридной комбинации 21759/97 Fidelio в 2010- и 2011-ом годах (табл. 7). При этом наличие 2R/2D-замещения снижало индекс прорастания зерна. В комбинации 21759/97 Александр и в комбинации с участием сорта Fidelio в 2012 году достоверной связи индекса прорастания с 2R/2D-замещением не было обнаружено. Двухфакторный дисперсионный анализ индекса прорастания показал существенное влияние Таблица Связь индекса прорастания с 2R/2D-замещением У растений с У растений с Уровень Гибридная полным Год 2R/2D- значимости комбинация ржаным замещением различий (p) геномом Индекс прорастания 2010 0,416 0,455 0,521759/97 2011 0,774 0,775 0,7Александр 2012 0,797 0,777 0,02010 0,193 0,352 0,004** 21759/97 Fidelio 2011 0,737 0,773 0,043* 2012 0,760 0,788 0,1условий года в обеих гибридных комбинациях и существенное взаимодействие генотип год только в комбинации 21759/97 Fidelio.
Качество зерна. Визуальная оценка качества зерна, выраженная в баллах, является интегральным показателем выполненности зерна и гладкости его поверхности. В комбинации 21759/97 Александр в оба года исследования и в комбинации 21759/97 Fidelio в 2012 году 2R/2Dзамещение значительно снизило выполненность зерна (табл. 8).
Таблица Влияние 2R/2D-замещения на качество зерна У растений с Уровень У растений с Гибридная полным значимост Год 2R/2Dкомбинация ржаным и различий замещением геномом (p) Выполненность зерна, балл2010 3 5 0,005** 21759/97 2011 2 и 3 4 <0,001*** Александр 2012 3 5 <0,001*** 2010 4 5 0,721759/97 Fidelio 2011 3 4 0,02012 4 5 0,002** Для определения значимости различий использовался точный тест Фишера.
5 - отличная, 4 - хорошая, 3 - удовлетворительная, 2 - плохая.
Сроки наступления фенологических фаз. В 2010 году в комбинации 21759/97 Fidelio растения, гомозиготные по 2R/2D-замещению, созревали на 1Е2 дня раньше растений без данного замещения (уровень значимости p<0,05). В комбинации 21759/97 Александр существенной связи между наличием замещения хромосомы 2R на хромосому 2D и сроком созревания зерна нами не было обнаружено. В 2011-2012 годах в обеих комбинациях 2R/2D-замещение не повлияло существенно на наступление фаз выхода в трубку и восковой спелости зерна, но существенно ускорило наступление фаз колошения (на 2Е5 дней, p<0,05) и цветения (на 2Е4 дня, p<0,001). 2R/2Dзамещение сократило период от выхода в трубку до колошения, но при этом несколько удлинило период от колошения до цветения.
Влияние аллельного состояния гена Rht-B1 на высоту, продуктивность растений и покой семян озимой тритикале Для определения наличия аллеля низкостебельности Rht-B1b и аллеля дикого типа Rht-B1a нами были использованы доминантные STS-маркеры, позволяющие выявить точковую мутацию, состовляющую различие аллелей Rht-B1a и Rht-B1b. Для определения генотипа растения требуется проведение двух ПЦР - с парой праймеров BF-MR1 для обнаружения аллеля карликовости и с парой праймеров BF-WR1 для обнаружения аллеля дикого типа (Ellis, 2002). При наличии соответствующего аллеля, с матричной ДНК растения амплифицируется фрагмент размером 237 пар нуклеотидов.
В изучаемой нами коллекции был обнаружен 51 образец, обладающий аллелем низкостебельности Rht-B1b и 53 образца, не обладающих таковым.
Общая доля образцов с аллелем Rht-B1b, таким образом, составила 49%.
Однофакторный дисперсионный анализ показал достоверную связь аллельного состояния гена Rht-B1 с высотой растений (p=0,001**). В среднем высота растений с аллелем низкостебельности Rht-B1b составила 1105 см, а с аллелем дикого типа Rht-B1a - 1257 см.
В числе сортообразцов, несущих аллель низкостебельности Rht-B1b:
21406/96, 21759/97, AD Boreas, AD-Modus, Alamo, Bolero, Fidelio, Kitaro, KS88T, Marho, Monica, Prado, Presto, Purdy, RAH 121/94, Tewo, TF30TL1, Августо, АД-252, Адась, АДМ 7, Амфидиплоидная 45, Антей, Виктор, Водолей, Гармония, Гермес, Дон, Дубрава, Идея, Каприз, Кастусь, Кишиневский АД4, Корнет, Л-71, Л-96, Мара, Микола, Михась, Модуль, ПРАГ 152, ПРАГ 441, ПРАГ 488, ПРАГ 489, Простор, Рунь, Славянка, Тарасовский 1, Тарасовский юбилейный, ТИ-17, Фламинго.
В числе сортообразцов, несущих аллель дикого типа Rht-B1a: 2-237783, B 322-1, Colina, E-590, KH-88-109T40-46, № 205, № 222, №154, №257, Pinokio, Salvo, АД 157/1931, АД 285, АД 41, АД 43, АД 751, АД-285, АД-44, АД-4996, АДЕ 567, АДМ-9, АДП 256, Аллегро, В-176 х АД206, Валентин 90, Гренадер, Двуручка 77, Доктрина 110, Е-775, Закарпатская многозерная, Зерновой гигант, Кентавр, Л-19, Л-9, Линия 14, Никлап, Полесский 10, Полукарлик 1хЕМ-1, ПРАГ-1-230/3, ПРАГ-344, ПРАГ-Д 242/2, ПРАГ-Д 246/2, ПРАГ-С-230/3, Пушкинский 111/2, Рондо, Саргау, Стрельна 11, Талисман, Таловский 1, Тальва 100, Торнадо, ТПГ-17-79, Эллада.
Аллель низкостебельности Rht-B1b наиболее распространён среди образцов из Белоруссии и Польши, а в России - среди образцов из Ростовской области. У образцов тритикале из Ставропольского края аллель Rht-B1b отсутствовал. Можно считать, что высокая доля встречаемости аллеля в том или ином регионе указывает на большую адаптивность образцов, им обладающих, к местным почвенно-климатическим условиям.
Аллель низкостебельности Rht-B1b наиболее часто встречается у сортов, выведенных в зоне достаточного увлажнения и реже - в зоне недостаточного увлажнения. Достоверной связи между обеспеченностью территории теплом и долей сортов тритикале с аллелем Rht-B1b нами не обнаружено.
Кроме того, нами была дана оценка влияния гена Rht-B1 (с аллелями Rht-B1a и Rht-B1b) на параметры структуры урожая, высоту растений и покой семян озимой тритикале на материале гибридов F и сестринских линий комбинации 21759/97 Александр.
Высота растений. Растения, гомозиготные по аллелю Rht-B1b, примерно на 10 см ниже растений, гомозиготных по аллелю Rht-B1a (табл. 9).
Устойчивость к полеганию. Нами не было обнаружено существенной связи между состоянием гена Rht-B1 и степенью полегания растений.
Таблица Влияние Rht-B1-гена на высоту растений У растений с У растений с Уровень Гибридная аллелем Rht-B1b аллелем значимости Год комбинация низкостебель- Rht-B1a различий ности дикого типа (p) Высота растения, см 21759/97 2011 78 89 0,013* Александр 2012 114 124 0,008** Уровень значимости: * - p<0,05, ** - p<0,01.
Таблица Влияние Rht-B1-гена на элементы структуры урожая У растений с У растений с Уровень Гибридная аллелем Rht-B1b аллелем Год значимости комбинация низкостебель- Rht-B1a различий (p) ности дикого типа Масса зерна в колосе, г 21759/97 2011 1,4 1,6 0,2Александр 2012 2,2 2,1 0,4Число колосков в колосе 2010 26 25 0,121759/97 2011 23 21 0,017* Александр 2012 25 24 0,2Озернённость колоска 2010 1,4 1,3 0,321759/97 2011 1,1 1,3 0,4Александр 2012 1,3 1,2 0,3Масса 1000 зёрен, г 0,033* 2011 52 21759/97 Александр 0,22012 66 Элементы структуры урожая. В большинстве случаев, различий по элементам структуры продуктивности между растениями с аллелями Rht-B1a и Rht-B1b не обнаружено (табл. 10).
Сроки наступления фенологических фаз. В 2010-2011 гг. аллельное состояние Rht-B1 гена не было значимо связано со сроком созревания зерна.
У растений с аллелем Rht-B1b (в сравнении с гомозиготами по аллелю RhtB1a) позже наступили фазы выхода в трубку (на 3 дня, p<0,001), колошения (на 5 дней при отсутствии 2R/2D-замещения, p<0,001), цветения (на 2 дня, p<0,01). В 2012 году у растений, гомозиготных по аллелю Rht-B1b, наблюдалась задержка развития на 2Е4 дня в течение всей вегетации по сравнению с растениями, гомозиготными по аллелю дикого типа. Подобный эффект можно объяснить замедлением ростовых процессов.
Таблица Связь индекса прорастания с аллельным состоянием гена Rht-BУ растений с У растений с Уровень Гибридная аллелем Rht-B1b аллелем Год значимости комбинация низкостебель- Rht-B1a различий (p) ности дикого типа Индекс прорастания 21759/97 2010 0,421 0,450 0,6Александр 2011 0,763 0,786 0,22012 0,794 0,806 0,3Покой семян. Связь индекса прорастания с аллельным состоянием гена Rht-B1 оказалась несущественной (табл. 11). Это согласуется с результатами исследований влияния данного гена на покой семян пшеницы.
Качество зерна. Присутствие аллеля Rht-B1b способствовало меньшей морщинистости зерна у растений гибридной комбинации 21759/ Александр в течение всех трёх лет испытания (табл. 12).
Таблица Влияние Rht-B1-гена на качество зерна У растений с У растений с Уровень Гибридная аллелем Rht-B1b аллелем Год значимости комбинация низкостебель- Rht-B1a различий (p) ности дикого типа Выполненность зерна, балл2010 5 3 0,004** 21759/97 2011 4 2 0,016* Александр 2012 4 3 0,007** Для определения значимости различий использовался точный тест Фишера.
5 - отличная, 4 - хорошая, 3 - удовлетворительная, 2 - плохая.
Микросателлитные маркеры устойчивости к прорастанию зерна в колосе и мучнистой росе у тритикале В изучаемых гибридных комбинациях нами была проведена оценка связи индекса прорастания и состояния полиморфных микросателлитных локусов, перечисленных в таблице 13.
Таблица Полиморфные маркеры в гибридных комбинациях 21759/97 Александр 21759/97 Fidelio Александр Ставропольский Xwmc1Xbarc55 Xbarc55 XbarcXgwm155 Xgwm1По результатам дисперсионного анализа ни один из вышеуказанных маркеров не имел достоверной связи с индексом прорастания.
В 2012 году сложились благоприятные условия для мучнистой росы тритикале (Erysiphe graminis). Из использованных нами микросателлитных маркеров только Xwmc104 в гибридной комбинации 21759/97 Fidelio показал достоверную связь со степенью поражения растений (p<0,001).
инии, несущие микросателлитный фрагмент малой молекулярной массы, принадлежащий родительскому сорту Fidelio, почти не поражались мучнистой росой (рис. 1). По литературным данным, локус Xwmc104-1A сцеплен с пшеничным геном устойчивости к мучнистой росе Pm3, локализованном на 1A-хромосоме ( 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Рис. 1. Продукты амплификации микросателлита Xwmc104 с использованием ДНК растений F2 комбинации 21759/97 Fidelio. Образцы 4, 7, 9, 11, 15, 16, устойчивы к мучнистой росе.
Морфологические маркеры устойчивости к прорастанию зерна в колосе у тритикале Одним из маркерных признаков устойчивости к прорастанию зерна в колосе исключительно для тритикале предлагалась морщинистость зерна (Сергеев, 1989). Для каждого года в отдельности нами была рассчитана связь индекса прорастания и балла морщинистости зерна (табл. 14). Как можно заметить, достоверная связь индекса прорастания с морщинистостью зерна проявляется, главным образом, в 2010-ом году. Однако в данный год погодные условия сильно отклоняются от климатической нормы и менее способствуют прорастанию зерна в колосе, чем в 2011 и 2012 гг. Таким образом, традиционно используемый в селекции пшеницы и тритикале визуальный отбор по выполненности зерна может повысить устойчивость к прорастанию зерна в колосе, но не в любых погодно-климатических условиях.
Таблица Связь индекса прорастания с выполненностью зерна, корреляционное отношение 21759/97 21759/97 Александр Год Александр Fidelio Ставропольский 2010 0,516*** 0,481*** 0,660*** 2011 0,250 0,156 0,32012 0,510** 0,025 0,2** - уровень значимости p<0,01; *** - p<0,001.
Дисперсионный анализ индекса прорастания в 2010 году не показал существенных отличий между группами растений с различной степенью остистости, опушения, воскового налёта и плёнчатости. Однако в 2012 году в комбинациях 21759/97 Александр и Александр Ставропольский 2 у инбредных линий, в которых преобладали растения с практически безостыми колосьями, наблюдался существенно меньший индекс прорастания зерна, чем у линий с остистыми колосьями. Так как 2012-ый год был наиболее благоприятным для прорастания зерна в колосе, можно считать, что безостость является хорошим кандидатом в маркерные признаки для отбора на устойчивость к прорастанию зерна в колосе тритикале.
Эффективность маркер-опосредованной селекции в сравнении с традиционным отбором Lande и Thompson (1990) предлагали проводить одновременное фенотипирование и генотипирование растений по множеству маркеров, плотно покрывающих всю рекомбинационную карту вида для повышения эффективности однократного отбора за счёт уточнения селекционной ценности особей по их генотипу. При отборе по маркерам полностью устраняется влияние микроусловий среды на количественный признак, мешающее вести эффективный отбор по фенотипу. Достаточное повышение эффективности отбора, однако, наблюдается только при очень низких коэффициентах наследуемости (h2<0,25).
Индекс прорастания, используемый нами как показатель устойчивости к прорастанию зерна в колосе, при анализе однолетних данных по повторениям полевого опыта показывает весьма высокий коэффициент наследуемости (табл. 15). Таким образом, покой семян мало варьирует под действием пестроты почвенного плодородия, и отбор по молекулярным маркерам или косвенным признакам с использованием селекционных индексов не имеет смысла. Генотипы в пределах одного года хорошо различимы по индексу прорастания.
Таблица Коэффициенты наследуемости индекса прорастания сортообразцов и линий 2009 г. 2010 г. 2011 г. 2012 г.
0,90 0,79 0,89 0,Если рассматривать коэффициент наследуемости индекса прорастания по годам, то его значение незначимо отличается от нуля. Таким образом, любой молекулярный маркер или морфологический признак, показавший достоверную связь с индексом прорастания в среднем за несколько лет, может существенно повысить эффективность отбора. Однако, в связи с низкой генотипической дисперсией признака и наличием взаимодействия генотип-среда, ни один из изученных нами молекулярных маркеров или морфологических признаков не показал существенной связи с индексом прорастания. При вычленении эффекта года и взаимодействия генотип-год, достоверную связь с индексом прорастания получает только 2R/2Dзамещение в гибридной комбинации 21759/97 Fidelio.
Изучение внутрисортового полиморфизма озимой тритикале по устойчивости к прорастанию зерна в колосе Известно, что у тритикале весьма распространённым способом получения новых сортов является внутрисортовой отбор.
Результаты испытания отобранных по доле проросших зёрен в колосе во влажной камере самоопылённых линий из полиморфных сортов тритикале представлены в таблице 16. Существенные различия между линиями по индексу прорастания в пределах одного сортообразца наблюдаются почти во всех случаях, кроме сорта Александр в 2011 и образца 21759/97 в 2012 году.
Наиболее существенные различия между линиями наблюдались у сортов Ставропольский 2 и Fidelio. Линия 512, полученная из сорта Ставропольский 2, проявляет наиболее глубокий покой семян по сравнению с другими линиями, и может быть использована в качестве источника устойчивости к прорастанию зерна в колосе. В 2012 год по индексу прорастания выделилась линия 449 сорта Fidelio. Существенные различия по урожайности были отмечены только лишь между линиями сорта Fidelio.
Таблица Урожайность и устойчивость к прорастанию зерна в колосе линий тритикале, полиморфность исходных сортообразцов по электрофоретическим спектрам проламинов Индекс прорастания Исходный образец (P-полиморфность;
H - ожидаемая о гетерозиготность) 205 0,01 76 0,80 0,82 Александр 212 0,01 69 0,82 0,80 (P=0,05; H =0,004) о 219 0,12 45 0,81 0,80 328 0,08 44 0,72 0,80 21759/338 0,00 82 0,74 0,80 (P=0,08; H =0,01) о 342 0,02 64 0,76 0,79 426 0,20 72 0,82 0,86 Fidelio 436 0,02 79 0,80 0,82 (P=0,33; H =0,12) о 449 0,08 106 0,77 0,78 512 0,04 51 0,65 0,78 Ставропольский 528 0,64 39 0,80 0,85 (P=0,16; H =0,04) о 533 0,20 67 0,69 0,83 603 0,02 81 0,80 0,85 Образец №627 0,27 97 0,82 0,87 (P=0,09; H =0,02) о 643 0,02 108 0,79 0,85 НСР - - 0,03 0,02 г).
(2011 г.) Зерновая Линия, № рядка, г (2010 г.) 2011 г.
2012 г.
продуктивность 0,5 м Доля проросших зёрен Урожайность зерна, ц/га во влажной камере (20Таким образом, можно утверждать, что внутрисортовое разнообразие по А Б В Г Д устойчивости к прорастанию зерна в колосе у тритикале существует и отбор из популяции сорта может быть эффективным.
Чтобы понять, в каком случае такой отбор эффективен, нами был проведён анализ полиморфизма проламинов пяти исходных образцов тиритикале методом электрофореза в полиакриламидном геле. Результаты данного анализа представлены на рисунке 2 и в таблице 16 в графе с названиями образцов. Наибольшим числом разнообразных белковых спектров обладал в нашем исследовании сорт Fidelio (31 тип спектра).
Наименьшим числом биотипов среди изученных образцов обладали линия 21759/97 и сорт Александр (рис. 2 А, Б).
Как можно заметить, эффективность отбора из популяции сорта по урожайности и индексу прорастания заметно выше в том случае, если данная популяция обладает достаточно высоким генетически обусловленным разнообразием (оцененным нами по электрофоретическим спектрам проламинов).
Таким образом, наличие внутрипопуляционного разнообразия проламиновых спектров может косвенно указывать на неоднородность сорта по хозяйственно-значимым свойствам растений и, соответственно, на эффективность внутрисортового отбора. Отбор из сортов по показателям устойчивости к прорастанию в колосе может быть эффективным, однако требует испытания самоопылённых линий в течение нескольких лет.
ВЫВОДЫ 1. В период от цветения до созревания зерна низкая температура воздуха делает покой семян более глубоким. Увлажнение почвы при высокой температуре (22Е25С) ослабляет, а при низкой (15Е16С) - усиливает покой семян. Некорневая подкормка мочевиной после цветения не влияет на покой семян озимой тритикале.
2. Анализ коллекции гексаплоидной озимой тритикале (134 образца) с помощью молекулярных маркеров показал, что аллель Rht-B1b (Rht1) встречается примерно у 50%, а 2R/2D-замещение - у 9% сортообразцов. Аллель Rht-B1b характерен для образцов из Белоруссии, Польши, Ростовской области. Аллель Rht-B1a характерен для образцов из Ставропольского края. 2R/2D-замещение встречается преимущественно у сортообразцов из южных регионов России.
3. Ген Rht-B1 не оказывает существенного влияния на покой семян озимой тритикале и продуктивность растений. Аллель низкостебельности Rht-B1b существенно снижает морщинистость зерна и сокращает длину стебля на 10Е15 см по сравнению с аллелем дикого типа Rht-B1a.
4. 2R/2D-замещение повышает устойчивость к полеганию, к прорастанию зерна в колосе, но снижает продуктивность растений. Связь 2R/2Dзамещения с покоем семян зависит от генотипа скрещиваемых родительских форм и погодных условий.
5. У тритикале молекулярный маркер Xwmc104 сцеплен с геном устойчивости к мучнистой росе.
6. Линии тритикале с гладким зерном и безостым колосом в отдельные годы проявляют более глубокий покой семян, чем линии с морщинистым зерном и остистым колосом.
7. Обнаружена сортоспецифичная реакции уровня покоя семян на изменение условий выращивания.
8. Сортообразцы тритикале Ставропольский 2 и Fidelio популятивны по устойчивости к прорастанию зерна в колосе.
Рекомендации производству 1. Испытание селекционных образцов тритикале на устойчивость к предуборочному прорастанию зерна в колосе при выращивании растений в поле следует проводить в течение ряда лет.
2. Многолетние испытания можно заменить однолетними при использовании установок искусственного климата (фитотронов, климатических камер) для выращивания растений. При этом следует подбирать температуру воздуха и полив в соответствии со среднемноголетними погодными условиями местности.
3. 2R/2D хромосомное замещение может быть использовано в селекции гексаплоидной тритикале на устойчивость к полеганию и к прорастанию зерна в колосе в умеренном климатическом поясе.
4. Аллель низкостебельности Rht-B1b может быть использован для создания низкорослых сортов тритикале и улучшения технологических свойств зерна за счёт снижения его морщинистости.
5. Выявленные сортообразцы озимой тритикале с аллелем Rht-B1b и 2R/2D-замещением, могут быть использованы в качестве доноров.
6. Для повышения устойчивости к прорастанию зерна в колосе при отборе следует отдавать предпочтение образцам с гладким зерном и безостыми колосьями.
7. Отбор с помощью молекулярных маркеров на устойчивость к прорастанию зерна в колосе можно применять только в гибридных комбинациях, для которых доказана их эффективность.
8. Сорт Fidelio можно использовать в качестве донора устойчивости к мучнистой росе, ведя при этом отбор по микросателлитному маркеру Xwmc104.
Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Баженов, М. С. Изучение образцов озимой тритикале на наличие хромосомных замещений и их связь с устойчивостью к прорастанию на корню / М. С. Баженов, М. Г. Дивашук, В. В. Пыльнев, Г. И.
Карлов, В. С. Рубец // Известия ТСХА. - 2011. - № 2. - С. 20-26.
2. Баженов, М. С. Влияние факторов окружающей среды на покой семян и прорастание зерна в колосе озимой тритикале / М. С. Баженов, В. В.
Пыльнев, И. Г. Тараканов // Известия ТСХА. Ч 2011. Ч № 6. Ч С.
30Ц38.
3. Баженов, М. С. Поиск молекулярных мареров устойчивости к прорастанию в колосе у гексаплоидной озимой тритикале // XI молодёжная научная конференция Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. - М.: ВНИИСБ РАСХН, 2011. - С. 810.
4. Баженов, М. С. Отбор на устойчивость к прорастанию зерна в колосе у тритикале с помощью молекулярных и морфологических маркеров // II Международная школа-конференция молодых учёных Генетика и селекция растений, основанная на современных генетических знаниях и технологиях. - Звенигород: Цифровичок, 2011. - С. 18.
5. Баженов М. С. Изучение внутрисортового полиморфизма озимой тритикале по устойчивости к прорастанию зерна в колосе // Тритикале: Материалы международной научно-практической конференции Тритикале и его роль в условиях нарастания аридности климата и секции тритикале отделения растениеводства РАСХН. - Ростов-на-Дону, 2012. - С. 16-20.
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по сельскому хозяйству