Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству  

На правах рукописи

Русанов Иван Анатольевич

Морфологические изменения иммунокомпетентных органов и микробиоценоз кишечника телят с диарейным синдромом  при применении пробиотика Биокорм - Пионер и препарата АСД-2Ф

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

06.02.02 Ц Ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Москва 2012

Работа выполнена на кафедре Незаразные болезни в ФГБОУ ВПО "Московский государственный университет пищевых производств" Министерства образования и науки РФ.

Научные руководители:	Ц Уша Борис Вениаминович, доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАСХН ФГБОУ ВПО "Московский государственный университет пищевых производств"
	Ц Малик Евгений Васильевич, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник ФГБУ Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов
Официальные оппоненты:	Ц Ватников Юрий Анатольевич, доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО Российский университет дружбы народов
	Ц Грязнева Татьяна Николаевна, доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина Россельхозакадемии
Ведущая организация:	ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии

Защита состоится л 21    декабря  2012 года в  16-00 часов на заседании диссертационного  совета  по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.148.09. ФГОУ ВПО "Московский государственный университет пищевых производств" (МГУПп).

Адрес: Россия, 109316, г. Москва, ул. Талалихина, д. 33

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО "Московский государственный университет пищевых производств"

Автореферат разослан л 20   ноября 2012 г.

Автореферат размещен на сайте Министерства образования и науки РФ л 20   ноября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук, профессор Андрианова Т.Г.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние годы ведутся исследования в направлении поиска эффективных средств профилактики и лечения  болезней телят с синдромом диареи, так как они  наносят ощутимый экономический ущерб животноводству. В отдельных хозяйствах переболевает 70-100 % телят и, несмотря на проводимое лечение, погибает в среднем 13-15 % животных (Бригадиров Ю.Н. и др., 1999; Литвина Л.А., 2000, 2001; Гаффаров X.3. и др., 2002; Кондрахин И.П., 2003; Безбородов П.Н., 2004; Павлов Д.К., 2006; Мосолков А.Е., 2006; Девришов Д. А. и др., 2009; А.Г. Шахов и др., 2009).

В настоящее время считается бесспорным факт того, что этиология и патогенез желудочно-кишечных болезней молодняка животных имеет тесную ассоциативную связь с нарушениями динамики становления нормальной кишечной микрофлоры и процессами формирования местной иммунной системы слизистых (Сидоров М.А., с соавт., 2000, 2001; Субботин В.В., 2001; Бурталкин Б.В., 2001; Панин А.Н. с соавт., 2004; 2011; Безбородов П.Н., 2005; Федоров Ю.Н., 2008; Олейник А.В., 2009). При отсутствии своевременной коррекции нарушений нормомикрофлоры весьма высока вероятность развития у них тяжелых рецидивирующих инфекционных заболеваний, вторичных иммунодефицитов и других болезней (Данилевская Н.В. с соавт., 2004; Зароза В.Г. с соавт. 2007; Овод А.С., 2007).

В этой связи особое внимание ветеринарных специалистов привлекают пробиотики, которые являются экологичными, безопасными и направленными на коррекцию кишечного биоценоза, нейтрализацию патогенной микрофлоры, повышение колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника к избыточной контаминации условно патогенной микрофлорой (Субботин В.В., Данилевская Н.Н., 1998; Панин А.Н с соавт., 2000, 2005, 2007, 2011; Тараканов Б.В. с соавт., 2000, 2002; Малик Н.И. с соавт., 2001, 2006; Бовкун Г.Ф., 2002, 2007; Ноздрин Г.А. с соавт., 2003, 2007; Овод А.С., Мосейчук В.В.,  2007).

Вместе с тем, проводимые лечебно-профилактические мероприятия постоянно нуждаются в совершенствовании и конкретизации с учетом факторов, вызывающих заболевание. В работах многих авторов сообщается об эффективности использования пробиотических препаратов в комплексной терапии с другими средствами (Маннапова Р.Т., 1998; Якушин И.В., 2003; Безбородов П.Н., 2004; Vanopdenbosch Е. et al., 1996; Hartmann H. et al., 1997; Babinska I., 2005). В немалой степени решению этих вопросов может способствовать сочетанное применение пробиотиков и препаратов с иммунокоррегирующей направленностью действия, которые способны активизировать защитно-приспособительные механизмы адаптации новорожденных к развитию диарейного синдрома (Бутько Л.П. и др., 1990; Грязнева Т.Н., 1990; Липатов A.M. и др., 1999; Ракова Т.Н.,  2000; Топурия Л.Ю. и др., 2002, 2008; Аксененко С.А., 2006; Антипов В.А., 2009). Постановка данного вопроса вызвана тем, что в работах многих авторов  сообщается об эффективности использования пробиотических препаратов в комплексной терапии с другими средствами, в том числе, с тканевыми препаратами иммуномодулирующего действия, препарат АСД-2Ф занимает особое место среди существующих средств тканевой терапии. Он является мощным стимулятором жизненных функций организма как при пероральном, так и парентеральном способах введения (Мозгов И.Е.,1964).

Однако механизмы развития и становления иммунитета, иммуноморфологических перестроек в центральных и периферических органах иммуногенеза, микробно-микологической экологии кишечника телят на фоне развития диарейного синдрома и оценка эффективности комплексной терапии с применением  пробиотика Биокорм-Пионер в сочетании его с препаратом АСД-2Ф остаются малоизученными и не являются фундаментальной основой для разработки обоснованной системы профилактики и лечения диарейного синдрома у телят.

В этой связи целью исследований явилось изучение состояния иммунного статуса, иммунной морфологии лимфоидных органов, микробиоценоза кишечника телят при развитии диарейного синдрома на фоне комплексной терапии с применением пробиотика Биокорм-Пионер и препарата АСД-2Ф.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Определить характер иммуноморфологических перестроек в Т- и В- зависимых структурных компонентах лимфоидных органов (брыжеечного лимфатического узла, селезенки и тимуса) при диарее у телят и на фоне комплексной терапии с применением пробиотика Биокорм-Пионер и препарата АСД-2Ф.

2. Изучить иммуноклеточные реакции в миелограмме при диарее у телят при разных методах терапии с применением пробиотика Биокорм-Пионер и препарата АСД-2Ф.

3. Изучить состояние показателей естественной резистентности у телят с диарейным синдромом  на фоне терапии пробиотиком Биокорм-Пионер и АСД-2Ф с учетом изменения динамики лизоцимной и бактерицидной активности и бета- лизинов сыворотки крови.

4. Установить влияние диарейного синдрома у телят на показатели фагоцитоза.

5. Определить динамику становления и развития показателей Т- и В-систем иммунитета на фоне диарейного синдрома и комплексной терапии пробиотиком Биокорм-Пионер и АСД-2Ф у телят.

6.  Провести сравнительные исследования влияния пробиотика Биокорм-Пионер и препарата АСД-2Ф на динамику изменения содержания сывороточных иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgE) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) при диарейном синдроме у телят.

7. Установить состояние микробиоценоза кишечника на фоне диареи и терапии пробиотиком Биокорм-Пионер и АСД-2Ф у телят с учетом динамики изменения содержания нормофлоры, условно патогенных микроорганизмов и микрогрибов из родов Candida и  Aspergillus.

Научная новизна. Научно обоснована концепция использования комплексной терапии желудочно-кишечных болезней телят с диарейным синдромом пробиотиком Биокорм-Пионер и тканевым препаратом АСД-2Ф.

Впервые определены характер и степень иммуноморфологических перестроек в Т- и В-зависимых зонах лимфатических узлов, селезенки и тимуса, установлены  иммуноцитологические реакции в костном мозге при использовании пробиотика Биокорм-Пионер в комплексе с препаратом АСД-2Ф, установлено влияние комплексной терапии на состояние естественной резистентности, фагоцитоз, показатели Т- и В-систем иммунитета, баланс сывороточных иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgЕ) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Разработана научно-обоснованная концепция восстановления микробиоценоза кишечника при диарейном синдроме у телят с применением пробиотика Биокорм-Пионер и препарата АСД-2Ф.

Практическая значимость работы. Метод применения пробиотика Биокорм-Пионер в комплексе с препаратом АСД-2Ф для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней у телят способствует сокращению сроков лечения, повышению общей сохранности больных телят и среднесуточных приростов живой массы у переболевших животных, что позволяет рекомендовать его производству для повышения ветеринарного благополучия животноводческих хозяйств.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- этиопатогенетическими факторами в развитии диарейного синдрома у новорожденных телят являются деструктивные иммуноморфологические изменения в центральных и периферических иммунокомпетентных органах: лимфатических узлах, селезенке, тимусе, сопровождающиеся уменьшением площадей Т- и В-зависимых зон и иммуноцитологическим истощением красного костного мозга, а также дефицит факторов естественной резистентности, нарушение баланса сывороточных иммуноглобулинов, повышение уровня циркулирующих иммунных комплексов в сочетании с выраженными дисбиотическими процессами в кишечнике больных животных.

- разработанный метод лечения желудочно-кишечных болезней у телят с использованием пробиотика Биокорм-Пионер в комплексе с тканевым препаратом АСД-2Ф способствует полному восстановлению морфологической структуры центральных и периферических органов иммунной системы, продукции лимфоидных клеток костным мозгом, показателей естественной резистентности и микробиоценоза желудочно-кишечного тракта.

- у телят, получавших терапию пробиотиком Биокорм-Пионер в комплексе с тканевым препаратом АСД-2Ф  повышаются естественные защитные реакции организма, активизируются Т- и В-лимфоциты, увеличивается активность Т-хелперов и повышается уровень IgG, снижается содержание IgМ, IgЕ и уровень циркулирующих иммунных комплексов, восстанавливается нормобиоценоз желудочно-кишечного тракта, сокращается длительность клинического проявления заболевания. В результате этого сокращаются сроки лечения и реабилитации больных телят, повышается сохранность и восстанавливается продуктивность.

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты проведенных исследований внедрены в практику выращивания телят в ЗАО Агрокомплекс ГОРКИ-2 Одинцовского района Московской области. Материалы работы используются в учебном процессе на кафедре внутренних незаразных болезней ветеринарно-санитарного факультета ФГБОУ ВПО  МГУПП.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены: в виде ежегодных отчетов по темам госзаданий на заседаниях ученого совета и методической комиссии ФГБОУ ВПО МГУПП (2009-2011 гг.); на Международной научной конференции, посвященной 85-летию ФГБУ ВГНКИ (Москва, 2011); на расширенном заседании кафедры внутренних незаразных болезней ветеринарно-санитарного факультета ФГБОУ ВПО МГУПП.

Публикации. Основные положения диссертационной работы  опубликованы в 4 научных статьях, 2 из них в изданиях по перечню, рекомендованному ВАК для публикации материалов кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 141 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы и практические предложения. Работа иллюстрирована 24 таблицами, 23 рисунками, в т.ч. 9 - графиками, 14 микрофотографиями. Список литературы включает 152 источника, из них 25 зарубежных авторов. В приложении представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

ичный вклад автора заключается в формулировании проблемы, постановке цели и задач исследований, методологическом обосновании путей решения поставленных задач, непосредственном планировании экспериментов и выполнении исследований, обобщении и интерпретации результатов. Автор принимал личное участие в научно-практических и лабораторных экспериментах и в подготовке научных публикаций.

Мы благодарим за помощь в выполнении отдельных этапов работы следующих научных сотрудников: д-ра вет. наук, проф. Маннапову Р.Т. (РГАУ МСХА им. К.А.Тимирязева), д-ра биол. наук, проф. Малик Н.И., канд. вет. наук, вед. науч. сотр. Малика Е.В, канд. биол. наук, ст. науч. сотр. Гулейчик И.А., канд. биол. наук, ст. науч. сотр. Чупахину Н.А. (ФГБУ ВГНКИ), ветврачей хозяйства ЗАО Агрокомплекс ГОРКИ-2 Квасовского А.А. и Федорову Н.Ф. Всех соавторов настоящих исследований автор искренне благодарит.

Особую благодарность автор выражает академику РАСХН, д-ру вет. наук, профессору Уша Б.В., директору ФГБУ ВГНКИ, академику РАСХН Панину А.Н. и всем сотрудникам лаборатории качества и стандартизации пробиотиков ФГБУ ВГНКИ за неоценимую помощь в выполнении данной работы.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы

Работа выполнялась с 2009 по 2011 гг. в условиях ЗАО Агрокомплекс ГОРКИ-2 Одинцовского района Московской области, лаборатории качества и стандартизации пробиотиков ФГБУ ВГНКИ, на кафедре незаразных болезней ветеринарно-санитарного факультета ФГБОУ ВПО Московский государственный университет пищевых производств (МГУПП), кафедре микробиологии и иммунологии РГАУ МСХА им. К.А.Тимирязева.

Исследования проведены в родильном отделении и профилактории Ершовского животноводческого комплекса хозяйства ЗАО Агрокомплекс ГОРКИ-2 на телятах в 2 опытах в осенне-зимний период. Основное дойное стадо ЗАО Агрокомплекс ГОРКИ-2 насчитывает 1220 высокоудойных коров. Отелы планомерные (в среднем по 100 телят в месяц), пик отелов приходится на ноябрь-февраль. Применение антибиотиков в ЗАО Агрокомплекс ГОРКИ-2 запрещено и контролируется  инспекцией Еврокомиссии. Структура рациона коров-матерей в сухостойный период по грубым, сочным и концентрированным кормам выдерживается, однако отмечено не всегда сбалансированное кормление и  преобладание силосно-концентратного типа кормления. Содержание коров беспривязное, но наблюдали недостаток моциона стельных коров. В рационе стельных коров в зимне-стойловый период за 15 дней до ожидаемого отела из рациона кормления не был исключен силос. У коров после родов часто отмечается задержание последа, телята ослабленные. В опытные группы подбирали телят 10 - 12-дневного возраста с выраженным диарейным синдромом. Больные телята были размещены в отдельных клетках, проходили ежедневный клинический осмотр. Условия содержания телят, схемы проведения опытов и учет результатов были идентичными. В каждом опыте использовали 30 голов телят, которых разделили на 5 групп, по 6 голов в каждой. Препараты задавали индивидуально каждому животному с помощью пищевого зонда, в дозах, рекомендованных утвержденными Инструкциями по применению. Схема опытов представлена в табл. 1.

Телята I  группы (интактный контроль) - клинически здоровые

Телята II группы (опытная) - контрольные больные животные, которым на протяжении исследуемого периода применяли симптоматическую терапию.

Телятам III группы (опытная) выпаивали по 100 мл 2%-го водного раствора препарата АСД-2Ф в течение 15 дней.

Телятам IV группы (опытная) выпаивали взвесь пробиотика Биокорм-Пионер из расчета 3 дозы на голову в течение 15 дней.

Телятам V группы (опытная) применяли комплексное лечение АСД-2Ф и пробиотика Биокорм-Пионер в указанных выше дозах.

После проведенного курса лечения учитывали количество выздоровевших по клиническим признакам телят (отсутствие диареи), а также среднесуточный прирост (г) массы животных.

До начала опытов, затем через 10, 20, 30 и 60 дней проводили взятие крови из яремной вены телят и отбор образцов фекалий из содержимого толстого отдела кишечника, а на 30 и 60-е сутки - взвешивание и убой для изучения морфологических изменений в лимфоидных органах.

Таблица 1 Ц Схема  научно-производственных опытов

Группа телят	Клиническое состояние	Условия проведения опыта
I Контрольная (интактная)	Клинически здоровые	ечебные манипуляции не проводились
II опытная	Больные с диарейным синдромом	Антибиотикотерапия с применение препаратов Байтрил и Котазол
III опытная	Больные с диарейным синдромом	Выпаивание 2%-го водного раствора препарата АСД-2Ф,
IV опытная	Больные с диарейным синдромом	Выпаивание пробиотика Биокорм-Пионер
V опытная	Больные с диарейным синдромом	Выпаивание 2% водного раствора АСД-2Ф + Биокорм- Пионер

Биохимические и иммунологические исследования сыворотки крови проводили по общепринятым клиническим методам.

Процентное содержание сывороточного лизоцима определяли турбометрическим методом (Дорофейчук Г.Ф., 1968); бактерицидную активность сыворотки крови определяли по Болотникову А.И. и Образцовой А.М. (1976), Колабской Л.С. и др. (1980), фагоцитарную активность нейтрофилов устанавливали по Е.А. Кост (1989). В работе использовали тест-штаммы: S.aureus 112; Micrococcus lysodeicticus АТСС №4698; Е.coli 1230. Для оценки функциональной активности нейтрофилов определяли фагоцитарную активность (ФА) - процент фагоцитировавших клеток от общего числа исследованных нейтрофилов и фагоцитарный индекс (ФИ) - отношение количества фагоцитированных микробов к числу активных фагоцитов.

Выделение В-лимфоцитов проводили с эритроцитами быка, Т-лимфоцитов с эритроцитами барана методом теста розеткообразования. Определение субпопуляций Т-лимфоцитов проводили в реакции с теофиллином (Т-хелперы - теофиллинрезистентные, Т-супрессоры - теофиллинчувствительные)  (Limtibui S.  et al., 1978). Сывороточные иммуноглобулины определяли методом радиальной иммунодиффузии с использованием моноспецифичных антисывороток моноклональных антител. Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) определяли посредством преципитации их полиэтиленгликолем-6000 с последующим измерением оптической плотности исследуемых образцов на спектрофотометре Spekol-II при 450 нм по методу Гриневич Ю.А. и Алферова А.И. (1981).

Для гистоморфологических исследований вторичных иммунокомпетентных органов кусочки органов (костный мозг, предлопаточные лимфоузлы, селезенка, тимус) фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине. Окрашивание гистосрезов проводили гематоксилином и эозином, азур II эозином согласно методам классической гистотехники. Микроскопирование и фотодокументирование материала проводили на микроскопе Ломо с использованием микрофотонасадки МФН-11. Площадь зон лимфоидных органов определяли с помощью окуляр-сетки по Г.Г. Автандилову (1973). При этом подсчитывали количество точек (пересечений линий сетки) на всю измеряемую зону и полученные числовые показатели переводили в проценты. Мазки из пунктата костного мозга окрашивали по Паппенгейму.

Микробиоценоз кишечника изучали методом группового количественного анализа, согласно методическим рекомендациям Минздрава СССР "Дисбактериозы кишечника. Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями, диагностика и лечение дисбактериозов кишечникаФ (1988), и рассчитывали количество микроорганизмов в lg КОЕ/г по Ашмарину И.П. и Воробьеву А.А. (1962). Определяли количество микроорганизмов, выросших на дифференциально-диагностических средах (фирмы HiMedia) для культивирования клостридий, стафилококков, бифидобактерий, лактобацилл и микроскопических грибов. Результаты переводили в десятичные логарифмы и устанавливали относительное соотношение различных групп микроорганизмов в кишечной популяции (lgКОЕ/г).

Полученные цифровые данные обрабатывали статистически с использованием программ Statistica v.5.5 для Windows 98 по Стьюденту (Лакин Г.Ф., 1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Динамика становления иммунного статуса и его коррекция

пробиотиком Биокорм-Пионер и АСД-2Ф при диарейном синдроме у телят

Данные по исследованию динамики  изменения показателей бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки крови, бета-лизинов и фагоцитарной активности  лейкоцитов крови телят представлены на рис. 1.

Рис. 1. Динамика показателей бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки крови,  бета Ц лизинов и фагоцитарной активности лейкоцитов

Исследования показали, что диарея у телят развиваются на фоне общего дефицита активности факторов естественной резистентности: бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, уровня бета-лизинов в сыворотке крови.

Терапия с применением только АСД-2Ф или пробиотика способствует некоторой активизации естественных защитных механизмов в организме, но является недостаточной.

Полное восстановление показателей естественной резистентности возможно при комплексной терапии с использованием пробиотика Биокорм-Пионер на фоне применения АСД-2Ф.

Сывороточные иммуноглобулины, ЦИК в сыворотке крови телят при

диарейном синдроме и их коррекция пробиотиком Биокорм-Пионер и АСД-2Ф

Уровень IgG в сыворотке крови больных телят 2-й группы был снижен. Фоновое значение данного показателя у телят 3, 4 и 5-й опытных групп составило 18,7-19,1 %. Лечебные мероприятия, проведенные с больными животными 3, 4 и 5-й групп, способствовали повышению активности IgG. Их уровень в сыворотке крови телят опытных групп, к 10 дню от начала исследований, превысил контрольную цифру по 3, 4 и 5-й группам в 1,08; 1,05 и 1,18 раза (на 1,6; 1,1 и 3,5 %). Эта тенденция в период проводимого лечения нарастала, и к 20 дню опыта содержание IgG по этим группам было выше, чем в контроле в 1,2; 1,21 и 1,27 раза (на 3,6; 3,9 и 4,9 %), к  30 дню - в 1,39; 1,37 и 1,42 раза (на 6,4; 6,1 и 7,0 %), к 60 дню - в 1,51; 1,48 и 1,53 раза (на 8,0; 7,6 и 8,4 %).

Содержание иммуноглобулина М в сыворотке крови телят 2-й группы и его фоновое значение у животных 3, 4, 5-й групп было высоким, по сравнению с физиологическими нормами для телят этой возрастной группы. Данный показатель в сыворотке крови телят опытных групп имел тенденцию к снижению в сторону физиологических норм: на 10 день исследований - в 1,2; 1,27  и 1,37 раза (на 0,51; 0,64 и 0,8 %), на 20 день - в 2,08; 2,1 и 2,12 раза (на 2,14; 2,16 и 2,18 %), на 30 день - в 1,52; 1,4 и 1,66 раза (на 1,18; 1,0 и 1,37 %), на 60 день - в 1,66; 1,49 и 1,8 раза (на 1,34; 1,11 и 1,5 %).

Фоновые значения содержания IgE в сыворотке крови больных животных 2 и  3, 4, 5-й опытных групп были повышены и колебались на уровне от 129,4 до 132,5 %. Показатель уровня IgE в сыворотке крови телят 2-й группы в период проведения опытов имел тенденцию к дальнейшему повышению. Процесс увеличения уровня IgE в сыворотке крови телят 2 группы продолжался до 90 дня опыта. К этому сроку они превысили фоновый показатель на 38,2 % и в последующие сроки исследований  до конца опытов оставались на этом уровне.

Показатель уровня IgE в сыворотке крови животных опытных групп постепенно снижался, уступая контрольному значению животных 2-й группы на 10 день исследований по 3, 4 и 5-й группам в 1,21; 1,15 и 1,32 раза (на 24,3; 18,9 и 34,0 %), к 20 дню - в 1,68; 1,7 и 1,81 раза (на 63,5; 57,0 и 70,0 %), к 30 дню - в 2,22; 2,0 и 2,55 раза (на 90,2; 82,4 и  99,7 %), к 60 дню - в 2,59; 1,85 и 2,82 раза (на 103,0; 77,1 и 108,3 %).

Уровень ЦИК к началу опытов в сыворотке крови телят 2 контрольной и 3, 4 и 5-й опытных групп был несколько повышен. Данный показатель в сыворотке крови телят контрольной группы по ходу опытов имел  тенденцию к дальнейшему увеличению. Максимальное его значение в контроле регистрировали к 30 дню опыта - превышение фонового уровня в 1,4 раза (на 14,1 %). Содержание ЦИК в сыворотке крови телят 3, 4 и 5 опытных групп постепенно снижалось по срокам опытов. На 10 день исследований данный показатель был ниже контрольной цифры по 3, 4 и 5-й группам в 1,23; 1,27 и 1,46 раза (на 7,7; 8,4 и 12,2 %), на 20 день - в 1,58; 1,6 и 1,84 раза (на 17,1; 17,6 и 21,2 %), на 30 день - в 1,64; 1,68 и 1,87 раза (на 18,8;  19,5 и  22,3 %), на 60 день - в 1,73; 1,8 и 1,91 раза (на 21,0; 22,1 и 23,8 %).

Показатели Т- и В-систем иммунитета при диарейном синдроме и их коррекция пробиотиком Биокорм-Пионер и препаратом АСД-2Ф у телят

Диспепсии новорожденных телят вызывали дисбаланс иммунокомпетентных клеток Т- и В-систем иммунитета, который проявлялся в  виде затормаживания активности хелперных и активизации супресорных реакций.

Результаты исследования динамики содержания в крови телят Т- лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-лимфоцитов представлены на рис. 2.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что лечение телят с диарейным синдромом пробиотиком Биокорм-Пионер в комбинации с  АСД-2Ф способствует стабилизации  иммунной реактивности животных. В организме телят этой группы показатели естественной резистентности, фагоцитоза, Т- и В-систем иммунитета, содержание  IgA, IgG, IgE  и ЦИК  восстанавливаются до уровня физиологических норм.

Рис. 2.  Динамика Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров и В-лимфоцитов в крови (обозначения те же, что и на рис. 1)

Иммуноморфологическая перестройка в структурных компонентах лимфоидных органов телят

В брыжеечном лимфатическом узле телят  2 и 5-й групп площадь коркового плато к началу опытов была расширена - в 1,27-1,32 раза (на 5,1-5,9 %). В лимфатическом узле животных 2-й группы в процессе опыта наблюдалось дальнейшее расширение площади коркового плато органа. К 30 дню она превысила фоновый и контрольный уровень в  1,15 и 1,35 раза (на 3,7 и 7,4 %), к 60 дню - в 1,2 и 1,44 раза (на 5,1 и 9,1 %).

В лимфоузле телят 5-й группы в ходе экспериментов наблюдалось уменьшение площади коркового плато органа. Она уступала фоновому показателю на 30 день опыта в  1,3 раза (на  5,5 %), на 60 день - в 1,31 раза (на  5,6 %).  С 30 дня данный показатель в описываемой группе был ниже, чем в контроле: на 30 день - в 1,14 раза (на 2,6 %), на 60 день - в 1,13 раза (на 2,4 %).

Площадь лимфатических узелков без светлых центров в лимфатическом узле телят в контрольной группе колебалась на уровне  7,2-7,5 %. При диарейной недостаточности отмечалось уменьшение данного показателя в 1,3-1,32 раза  (на 1,7-1,8 %). В лимфатическом узле животных 2-й группы процесс уменьшения площади, занимаемой лимфатическими узелками без светлых центров, прогрессировал. Здесь к 30 дню опыта площадь лимфоузелков без светлых центров уступала фоновому и контрольному показателям в 1,14 и 1,56 раза  (на 0,7 и 2,7 %), к 60 дню - в 1,1 и 1,44 раза (на 0,5 и 2,2 %).

В 5-й опытной группе отмечалось расширение площади лимфоузелков без светлых центров, по сравнению с первоначальным показателем. Она превысила фоновый показатель к 30, 60 дням опыта в 1,51 и 1,58 раза (на 2,9 и 3,3 %), значения  их в контроле - в 1,13, в 1,23  раза (на 1,7 и 1,0 %).

Доля лимфатических узелков со светлыми центрами на гистопрепарате лимфоузла телят 1-й контрольной группы составляла 2,9-3,7 %. Данный показатель у телят с 2 и 5-й групп с синдромом диареи к началу опытов был снижен в 1,7-1,81 раза (на 1,2 и 1,3 %).

В лимфатическом узле животных 2-й группы площадь лимфатических узелков со светлыми центрами имела тенденцию к дальнейшему уменьшению, по сравнению с фоном и контролем: к 30 дню Ц  в 2,66 и 6,16 раза (на 1,0 и 3,1 %), к 60 дню - в 4,0 и 9,0 раза ( на 1,2 и 3,2 %).

Площадь лимфатических узелков со светлыми центрами на гистопрепаратах лимфатического узла телят  5-й опытной группы  по периодам опыта расширялась, и с 30 дня превышала контроль: на 30 день - в 1,13 раза (на 0,5 %), на 60 день - в 1,27 раза (на 1,0 %).

Паракортикальная зона на гистопрепарате лимфатического узла телят 1-й контрольной группы занимала площадь от 14,9 до 16,0 %. В лимфоузле животных 2 и 5-й групп фоновый уровень данного показателя был ниже контрольного значения в 1,46-1,56 раза (на 4,7-5,4 %). У телят 2-й группы наблюдалось дальнейшее уменьшение площади, занимаемой паракортикальной  зоной.  Данный показатель был ниже фонового и контрольного уровня на 30 день опыта в 1,34 и 2,1 раза (на 2,6 и 8,4 %), на 60 день - в 1,34 и 2,1 раза (на 3,8 и 9,3 %). Площадь Т-зависимой паракортикальной зоны в лимфоузлах телят 5-й опытной группы имела тенденцию к расширению, по срокам исследований она превысила фоновый и контрольный уровень на 30 день опыта в  2,11 раза (на 10,9 %) и в 1,29 раза (на 4,7 %), на 60 день - в  2,17 раза (на  11,0 %) и в 1,35 раза (на 5,6 %).

Мякотные тяжи на гистопрепарате лимфатического узла телят 1-й контрольной группы занимали площадь от 17,9 до 18,9 %. При диарейном синдроме в организме телят данный показатель был понижен в 1,14-1,24 раза (на 2,4-3,6 %). В лимфатическом узле телят 2-й группы площадь мякотных тяжей прогрессивно уменьшалась по сравнению с фоновым и контрольным уровнем: к 30 дню - в 1,22 и 1,43 раза (на 3,2 и 5,7 %), к 60 дню - в 1,47 и 1,67 раза (на 5,2 и 7,4 %).

В 5-й опытной группе регистрировалось расширение площади мякотных тяжей органа.  К 30 дню опыта они превысили показатель контроля в 1,19 раза (на 3,7 %), животных 2-й группы - в 1,71 раза (на 9,4 %). К 60 дню опыта показатель площади  мякотных тяжей телят 5-й группы был выше параметров животных 1 и 2-й групп соответственно в 1,32, в 2,21 раза (на 6,0 и 13,4 %).

В селезенке животных 2-й группы с диарейным синдромом, и не подвергнутых лечению, красная пульпа органа к началу исследований была расширена и занимала площадь, превышающую контрольный уровень в 1,1 раза (на 5,8 %). Эта тенденция нарастала, и через 30 дней описываемый показатель превысил контрольный уровень в 1,14 раза (на 8,2 %), через 60 дней - в 1,25 раза (на 14,6 %). Площадь периваскулярных лимфоидных муфт, напротив, уменьшалась, и к 30 дню исследований была меньше, чем в контроле, в 1,15 раза (на 3,7 %), к 60 дню - в 2,03 раза (на 6,8 %). В селезенке телят 2-й группы площадь лимфатических узелков без светлых центров и со светлыми центрами также уменьшалась:  к 30 дню эксперимента была ниже контрольных цифр в 1,73 и 1,77 раза (на 6,6 и 1,7 %), к 60 дню - в 2,05 раза и 3,0 раза (на 7,7 и 3,0 %).

В селезенке телят 5-й группы площадь красной пульпы динамично и прогрессивно уменьшалась по срокам опыта. К 30 дню она была меньше, по сравнению с фоновым показателем в 1,08 раза (на 5,1 %), к 60 дню - в 1,13 раза (на 7,7 %) и соответствовала физиологическим нормам.

Параллельно с уменьшением площади красной пульпы селезенки у телят 5-й группы отмечалось увеличение площади, занимаемой белой пульпой органа. Так, площадь периваскулярных лимфоидных муфт увеличилась по сравнению с первоначальным уровнем к 30 дню опыта в 1,26 раза (на 2,4 %), к 60 дню - в 1,43 раза (на 3,9 %). 

имфатические узелки без светлых центров в селезенке телят 5-й группы занимали площадь, превышающую фоновое значение  на 30 день в 1,48 раза (на 4,8 %), на 60 день - в 1,59 раза (на 5,8 %). К 60 дню исследований описываемый показатель по 5-й группе был выше контрольной цифры в 1,04 раза (на 0,6 %).

Площадь лимфатических фолликулов со светлыми центрами достигала контрольного уровня и превысила к 30 дню опыта фоновое и контрольное значение в 1,93 и  1,15 раза (на 2,17 и 0,6 %). К 60 дню исследований эта разница, в сторону превышения, с фоном была в 2,06 раза (на 2,47 %), с контролем - незначительна.

Исследования тимуса показали, что корковое вещество органа у телят с диарейным синдромом подвергнуто выраженному деструктивному изменению в виде уменьшения занимаемой площади при расширении площади мозгового вещества. Фоновый показатель площади коркового вещества тимуса телят 2 и 5-й групп в начале  опытов был меньше, чем в контроле, в 1,17-1,23 раза (на 9,2-11,7 %). Площадь коркового вещества тимуса телят 2-й группы в дальнейшем в процессе опытов уменьшалась: на 30 день уступала фоновому и контрольному показателям в  1,3 и 1,59 раза (на 12,3 и 23,8 %), на 60 день - в 1,64 и 1,94 раза (на 20,1 и 29,6 %). Описываемый  показатель в тимусе телят 5-й опытной группы, в процессе опыта имел тенденцию к увеличению. На 30 день эксперимента площадь коркового вещества тимуса телят 5-й группы расширилась по сравнению с первоначальным фоновым значением в 1,31 раза (на 15,7 %). При этом данный показатель превышал контроль в 1,03 раза (на 1,7 %). До конца опытов он оставался на высоком уровне  и был выше фонового и контрольного значений в 1,48 и 1,2 раза (на 24,3 и 12,3 %)

Анализируя данные, полученные в результате исследований, можно прийти к заключению, что у больных телят с признаками диарейного синдрома происходят глубокие деструктивные изменения в лимфоидных органах: лимфатических узлах, селезенке, тимусе, сопровождающиеся уменьшением площадей Т- и В-зависимых зон. Комплексная терапия с применением  АСД-2Ф на фоне пробиотикотерапии с Биокормом-Пионер способствует восстановлению их иммуннокомпетентных структурных компонентов.

Иммуноцитологические перестройки в миелограмме при диарейном

синдроме и на фоне терапии пробиотиком Биокорм-Пионер и АСД-2Ф  у теят

Результаты исследования динамики клеток зернистого ростка лейкоцитов в миелограмме телят представлены в табл. 2.

Содержание клеток эритроидного ростка в миелограмме телят 2, 3, 4, 5-й групп с синдромом диареи к началу опытов (фон), было ниже контрольного значения и уступало ему в 1,47-1,53 раза (на 9,9-10,7 %).

Таблица 2 Ц Динамика клеток зернистого ростка лейкоцитов в миелограмме телят (в %, М + m, СV%,  P ≥ 0,95)

Группы, использованные препараты	Статистиче-ский показатель	Сроки исследования в днях
		Фон	30	60
1 - Контроль - здоровые	M m	40,20 0,28	42,40 0,11	43,00 0,18
	CV, %	2,66	4,85	1,29
2 - Контроль - больные	M m	30,70 0,14	18,30 0,18	12,20 0,24
	CV, %	1,10	1,15	4,92
3 - АСД-2Ф	M m	30,00 0,16	52,30 0,18*	51,60 0,20
	CV, %	2,90	1,06	3,21
4 - Биокорм-Пионер	M m	30,40 0,36**	55,70 0,14	53,70 0,22
	CV, %	0,65	2,78	1,30
5 - АСД-2Ф +  Биокорм- Пионер	M m	29,60 0,18	64,70 0,14***	59,90 0,17
	CV, %	1,37	2,71	6,89

Примечание: * при Р<0,05 , ** Р<0,01 , *** Р<0,001 Ц  разница достоверна

Содержание клеток эритроидного ростка в миелограмме телят 2, 3, 4, 5-й групп с синдромом диспепсии к началу опытов (фон) было ниже контрольного значения и уступало ему в 1,47-1,53 раза (на 9,9-10,7 %).

Имела место тенденция к дальнейшему выраженному снижению количества клеток эритроидного ростка в костном мозге телят 2-й группы по срокам опыта. К 30 дню от начала опытов содержание этих клеток у животных 2-й группы  снизилось по сравнению с фоновым уровнем в 1,44 раза (на 6,2 %), с контрольным значением - в 2,23 раза (на 17,2 %). На 60 день исследований эта разница, в сторону снижения, составила с фоном в 2,71 раза (на 12,7 %), с контролем - в 4,38 раза (на 25,0 %). Лечение телят с синдромом диареи препаратом АСД-2Ф способствовало повышению продукции костным мозгом клеток эритроидного ростка. Значение этого показателя увеличилось в миелограмме телят 3-й группы к 30 дню опыта по сравнению с фоновым показателем в 1,3 раза (на 6,3 %), с показателем больных телят 2 группы - в 1,92 раза (на 12,8 %), но не достигало его уровня у контрольных животных 1-й группы, уступая ему в 1,16 раза (на 4,4 %). К 60 дню исследований содержание клеток эритроидного ростка в миелограмме телят описываемой группы имело тенденцию к дальнейшему повышению. Его значение превысило показатель предыдущего срока исследования в 1,11 раза (на 3,0 %), фоновый уровень - в 1,45 раза (на 9,3 %), но уступало контрольной группе - в 1,09 раза (на 2,7 %).

Подобным образом изменялась динамика клеток эритроидного ростка в миелограмме телят 4-й группы, однако данный процесс был более выраженным. Максимальное увеличение активности костного мозга отмечалось у телят 5-й группы: содержание клеток эритроидного ростка достигло к 30 дню опыта максимума и превысило фоновый показатель в 1,96 раза (на 19,7 %), контрольный - в 1,29 раза (на 9,1 %), показатель больных  телят 2-й группы - в 2,89 раза (на 26,3 %). До конца опыта уровень клеток эритроидного ростка в миелограмме телят 5-й группы оставался на самом высоком физиологическом уровне, превысив фон в 1,93 раза (на 19,2 %),  контроль - в 1,22 раза (на 7,3 %), показатель телят 2-й группы - в 5,36 раза (на 7,3 %).

Содержание лимфоидных клеток в костном мозге животных с диарейным синдромом к началу опытов было снижено в 2,13-2,35 раза (на 4,9-5,3 %). В миелограмме телят 2-й группы содержание лимфоидных клеток  в процессе опытов интенсивно  снижалось и уступало фоновому и контрольному значениям к 30 дню исследований  в 1,65 и 3,76 раза (на 1,7 и 7,2 %), к 60 дню  - 2,86 и 6,2 раза (на 2,8 и 7,8 %).

Показатель содержания лимфоидных клеток в костном мозге телят 3, 4 и 5-й опытных групп изменялся в процессе опытов в сторону повышения. Этот процесс имел разную степень выраженности.  Уровень лимфоидных клеток в миелограмме животных 3-й группы увеличился к 30 дню эксперимента по сравнению с показателем фона в 1,38 раза (на 1,5 %), с показателем телят 2-й группы - в 2,07 раза (на 2,8 %),  но уступал контрольной группе животных 1 группы в 1,81 раза (на  4,4 %). К 60 дню опыта  значение данного показателя увеличилось по сравнению с первоначальным уровнем в 1,82 раза (на 3,2 %),  с показателем телят 2-й группы - в 4,73 раза (на 5,6 %), но было ниже контрольной цифры в 1,3 раза (на 2,2 %).

Подобным образом, с небольшим превышением, изменялась активность  лимфоидных клеток в миелограмме телят 4-й группы.  Максимальное повышение продукции лимфоидных клеток костным мозгом регистрировалось в 5-й группе. Здесь к 30 дню описываемый показатель превысил фоновый уровень в 2,25 раза (на 5,0 %), показатель телят 2-й группы - в 3,46 раза (на 6,4 %). На этот срок опыта содержание лимфоидных клеток в миелограмме телят 5-й группы значительно приблизилось к контрольной цифре, составив 9,0 % (контроль - 9,8 %). Самый высокий процент лимфоидных клеток  выделялся в 5-й группе к 60 дню опыта. В этот период исследований описываемый показатель превысил фоновое значение в 2,55 раза (на 6,2 %), показатель телят 2-й группы - в 6,8 раза (на 8,7 %), контрольной группы - в 1,09 раза (на 0,9 %).

Микробно-микологическая экология кишечника и ее коррекция 

пробиотиком Биокорм-Пионер и АСД-2Ф при диарейном синдроме у телят

В процессе опытов содержание бифидобактерий в кишечнике телят 1 контрольной группы находилось в пределах от 11,6 до 12,8 lg KOE/г. Уровень их в кишечнике больных телят 2-й группы имел тенденцию к снижению. Данный показатель уступал контролю  на 10, 20, 30 и 60 дни - в 1,46; 1,71; 1,97 и 2,15 раза (на 3,7; 5,3; 6,0 и 6,2 lg KOE /г).

Показатели бифидобактерий в кишечнике телят 3-й группы превышали данные животных 2-й группы на эти сроки опыта  в 1,22; 1,39; 1,82 и 1,96 раза (на 1,8; 2,9; 5,1 и 5,2 lg KOE/г). При этом они уступали контрольным цифрам, соответственно, в 1,19 раза (на 1,9 lg KOE/г), в 1,23 раза (на 2,4 lg KOE/г), в 1,08 раза (на 0,9 lg KOE/г) и 1,09 раза (на 1,0 lg KOE/г). Параметры бифидобактерий в кишечнике телят 4-й группы, динамично повышаясь, к 30 дню исследований достигли контрольных данных и даже несколько превысили их - в 1,02 раза (на 0,2 lg KOE/г).

Содержание бифидобактерий в кишечнике телят 5-й группы было выше, чем у животных 2, 3 и 4-й групп, соответственно, на 10 день - в 1,43 раза (на 3,5 lg KOE/г), в 1,17 раза (на 1,7 lg KOE/г) и 1,07 раза (на 0,8 lg KOE/г); на 20 день - в 1,67 раза (на 5,0 lg KOE/г), в 1,20 раза (на 2,1 lg KOE/г) и 1,05 раза (на 0,6 lg KOE/г); на 30 день - в 2,0 раза (на 6,2 lg KOE/г), в 1,1 раза (на 1,1 lg KOE/г) и 1,0 раз (на 0,0 lg KOE/г); на 60 день - в 2,2 раза (на 6,5 lg KOE/г), в 1,12 раза (на 1,3 lg KOE/г) и 1,03 раза (на 0,4 lg KOE/г).

Результаты исследования динамики изменения содержания  лактобацилл в кишечнике телят представлены в табл. 3.

Фоновый показатель лактобацилл в кишечнике телят 1 контрольной группы составил 11,6 lg KOE/г, остальных групп (со 2 по 5) был снижен и колебался от 6,8 до 7,4 lg KOE/г. В процессе опыта у телят 1 контрольной группы он не имел существенных изменений и находился в пределах от 10,5 до 11,8 lg KOE/г. Уровень лактобацилл в кишечнике телят 2 группы имел тенденцию к дальнейшему значительному понижению и уступал контрольным цифрам во все сроки исследований.

Параметры содержания лактобацилл в кишечнике больных телят 3 группы превышали данные животных 2 группы на 10, 20, 30 и 60 дни опытов, соответственно, в 1,15, 1,27, 1,5 и в 1,7 раза, но уступали контрольным цифрам телят 1 группы на 10 день - в 1,36, на 20 день - в 1,38, на 30 день - в 1,23, на 60 день - в 1,38 раза.

Количество лактобацилл в кишечнике телят 4 группы превышало данные больных животных 2 и 3 групп, соответственно, на 10 день - в 1,27 раза (на 1,8 lg KOE/г) и 1,1 раза (на 0,8 lg KOE/г), на 20 день - в 1,55 раза (на 3,4 lg KOE/г) и в 1,22 раза (на 1,7 lg KOE/г), на 30 день - в 1,68 раза (на 4,0 lg KOE/г) и 1,13 раза (на 1,1 lg KOE/г), на 60 день - в 1,84 раза (на 4,2 lg KOE/г) и 1,08 раза (на 0,7 lg KOE/г). Однако эти показатели продолжали уступать данным здоровых телят 1 группы на 10, 20, 30 и 60 дни исследований

Максимального уровня лактобациллы достигли в кишечнике телят 5 группы. К 30 дню опыта они превысили контрольные цифры животных 1 группы в 1,06 раза (на 0,6 lg KOE/г) и были выше  данных телят 2, 3 и 4 групп: на 10 день - в 1,4 раза (на 2,7 lg KOE/г), в 1,22 раза (на 1,7 lg KOE/г) и 1,11 раза (на 0,9 lg KOE/г), на 20 день - в 1,71 раза (на 4,4 lg KOE/г), в 1,34 раза (на 2,7 lg KOE/г) и 1,1 раза (на 1,0 lg KOE/г), на 30 день - в 1,95 раза (на 5,5 lg KOE/г), в 1,29 раза (на 2,6 lg KOE/г) и 1,15 раза (на 1,5 lg KOE/г), на 60 день - в 2,14 раза (на 5,7 lg KOE/г), в 1,26 раза (на 2,2 lg KOE/г) и 1,16 раза (на 1,5 lg KOE/г).

Таблица 3 Ц Динамика изменения содержания лактобацилл в кишечнике телят  (lg КОЕ/г, Mm, Сv, %, Р)

Опытные группы и использованные препараты	Статисти-ческий показатель	Фон	Сроки исследования, в днях от начала опыта
			10	20	30	60
1 Контроль Ц здоровые	M	11,6	10,5	10,9	10,7	11,8
	m	0,18	0,11	0,13	0,20	0,14
	Cv, %	3,47	2,34	2,67	4,18	2,65
2 Контроль - больные	M	7,4	6,7	6,2	5,8	5,0
	m	0,12	0,18	0,14	0,10	0,07
	Cv, %	3,63	6,01	5,05	3,86	3,13
	P	***	***	***	***	***
3 АСД-2Ф	M	6,8	7,7	7,9	8,7	8,5
	m	0,13	0,03	0,20	0,13	0,12
	Cv, %	4,27	0,87	5,66	3,34	3,16
	P	***	***	***	**	***
4 Биокорм-Пионер	M	7,0	8,5	9,6	9,8	9,2
	m	0,18	0,13	0,14	0,20	0,06
	Cv, %	5,75	3,42	3,26	4,56	1,46
	P	***	***	**	*	***
5 АСД-2Ф + Биокорм-Пионер	M	7,2	9,4	10,6	11,3	10,7
	m	0,16	0,14	0,19	0,14	0,10
	Cv, %	4,97	3,33	4,01	2,77	2,09
	P	***	**	Ц	Ц	**

Примечание: * - Р≥0,95, ** - Р≥0,99, *** - Р≥0,999.

Фоновый показатель стафилококков в кишечнике телят 1 контрольной группы составил 5,0 lg KOE/г, остальных групп (со 2 по 5-ю) был повышен до 8,6 - 9,2 lg KOE/г. В процессе опыта у телят 1-й контрольной группы количество стафилококков находилось в пределах от 4,6 до 5,3 lg KOE /г.

Уровень стафилококков в кишечнике телят 2-й группы значительно повышался, и превышал контрольные цифры животных 1-й группы на 10, 20, 30 и 60 дни - в 1,77; 2,10; 2,54 и 2,89 раза (на 4,1; 6,6; 7,1 и 8,9 lg KOE /г).

Содержание стафилококков в кишечнике телят 3-й группы снижалось, но превышало данные животных 1-й контрольной группы на 10, 20, 30 и 60 дни опыта  в 1,57; 1,55; 1,35 и 1,36 раза на 3,0; 2,7; 1,6 и 1,7 lg KOE/г.

Подобным образом  и примерно на таком уровне изменялась динамика стафилококков в кишечнике телят 4-й группы. Интенсивный процесс снижения количества стафилококков наблюдался в кишечнике телят 5-й группы. Однако он продолжал  незначительно превышать контрольные цифры животных 1-й группы на 10, 20, 30 и 60 дни опытов, соответственно, в 1,19; 1,04 и 1,02 раза (на 1,0; 0,2 и 0,1 lg KOE/г). При этом  их уровень был ниже показателей телят 2, 3 и 4-й групп, соответственно: на 10 день - в 1,49; 1,31 и 1,14 раза (на 3,1; 2,0 и 0,9 lg KOE/г), на 20 день - в 2,02; 1,49 и 1,27 раза (на 5,2; 2,5 и 1,4 lg KOE/г), на 30 день - в 2,49; 1,32 и 1,06 раза (на 7,0; 1,5 и 0,3 lg KOE/г), на 60 день - в 2,83; 1,33 и 1,08 раза (на 8,8; 1,6 и 0,4 lg KOE/г).

Фоновый уровень клостридий у телят 1-й контрольной группы составил 4,5 lg KOE/г, остальных групп (со 2 по 5-ю) колебался от 10,5 до 11,3 lg KOE/г. В процессе опытов показатели клостридий  в контрольной  группе не имели существенных изменений. Содержание клостридий в кишечнике телят 2-й группы имело тенденцию к динамичному повышению и превышало контрольные цифры на 10, 20, 30 и 60 дни - в 2,47; 2,90; 2,93 и 3,15 раза (на 6,9; 8,0; 8,5 и 9,9 lg KOE/г).

Уровень клостридий в кишечнике телят 3-й группы по срокам исследований оставался значительно повышенным по сравнению с контрольным значением. Он уступал лишь показателям животных 2-й группы: на 10, 20, 30 и 60 дни  - в 1,16; 1,33; 1,77 и 2,38 раза (на 1,6; 3,0; 5,6 и 8,4 lg KOE/г).

Содержание клостридий в кишечнике телят 4-й группы превышало данные животных 1-й группы на 10, 20, 30 и 60 дни опыта, соответственно, в 2,02; 1,97; 1,48 и 1,28 раза (на 4,8; 4,1; 2,1 и 1,3 lg KOE /г), но было ниже, чем у телят 2 и 3-й групп, на 10 день в 1,22 и 1,05 раза (на 2,1 и 0,5 lg KOE/г), на 20 день - в 1,46 и 1,11 раза (на 3,9 и 0,9 lg KOE/г), на 30 день - в 1,98 и 1,12 раза (на 6,4 и 0,8lg KOE/г), на 60 день - в 2,46 и 1,03 раза (на 2,45и 02 lg KOE/г).

Максимально приблизился к контрольным цифрам телят 1-й группы уровень клостридий в кишечнике животных 5-й группы. К 10, 20, 30 и 60 дням исследований этот показатель был ниже его значений у больных телят 2-й группы соответственно в 1,43 раза (на 3,5 %), в 1,6 раза (на 4,6 %), в 3,0 раза (на 8,6 %) и в 3,29 раза (на 10,1 %). Во все сроки опытов уровень клостридий в кишечнике телят описываемой группы был ниже его содержания у животных 2, 3 и 4-й групп.

Показатели изменения в кишечнике телят содержания микрогрибов из рода Candida в динамике, представлены в табл. 4.

Таблица 4 Ц Динамика изменения содержания микрогрибов из рода Candida в кишечнике телят (в lg КОЕ/г, Mm, Сv %, Р)

Опытные группы и использованные препараты	Статистический показатель	Фон	Сроки исследования, в днях от начала опыта
			10	20	30	60
1 Контроль Ц здоровые	M	5,0	4,6	5,3	4,8	4,7
	m	0,11	0,13	0,09	0,07	0,13
	Cv, %	4,92	6,32	3,80	3,26	6,18
2 Контроль - больные	M	7,6	8,9	10,1	11,2	11,7
	m	0,13	0,09	0,23	0,17	0,26
	Cv, %	3,82	2,26	5,09	3,39	4,97
	P	***	***	***	***	***
3 АСД-2Ф	M	8,2	7,1	6,3	6,0	6,2
	m	0,08	0,16	0,10	0,11	0,18
	Cv, %	2,18	5,04	3,55	4,10	6,49
	P	***	***	**	***	**
4 Биокорм- Пионер	M	8,0	6,5	6,1	5,6	5,7
	m	0,10	0,11	0,11	0,18	0,09
	Cv, %	2,80	3,78	4,03	7,19	3,53
	P	***	***	**	*	**
5 АСД-2Ф + Биокорм- Пионер	M	7,4	6,0	5,4	5,5	5,4
	m	0,10	0,16	0,14	0,12	0,10
	Cv, %	3,02	5,96	5,80	4,88	4,14
	P	***	**	Ц	**	*

Примечание: * - Р≥0,95, ** - Р≥0,99, *** - Р≥0,999.

В кишечнике здоровых телят микрогрибы из рода Aspergillus не выделялись. Фоновый уровень микрогрибов из рода Aspergillus в кишечнике больных животных опытных групп (со 2 по 5-ю) колебался от 2,7 до 3,3 lg KOE/г.

Содержание микрогрибов в кишечнике телят 2-й группы значительно превышало фоновое значение на 10, 20, 30 и 60 дни опыта в 1,21; 1,52; 1,69 и 1,93 раза (на 0,6; 1,5; 2,0 и 2,7 lg KOE/г).  Уровень микрогрибов в кишечнике телят 3-й группы незначительно варьировал по сравнению с фоновым показателем, и во все сроки опыта был ниже по сравнению с данными животных 2-й группы.

Показатели микрогрибов из рода Aspergillus в кишечнике телят 4-й группы были ниже их уровня у животных 2 и 3-й групп соответственно на 10 день - в 1,13 и 1,09 раза (на 0,4 и 0,3 lg KOE/г), на 20 день - в 2,44 и 1,83 раза (на 2,6 и 1,5 lg KOE/г), на 30 день - в 4,08 и 2,91 раза (на 3,7 и 2,3 lg КOE/г), на 60 день - в 28,0 и 17,0 раз (на 5,4 и 3,2 lg KOE/г).

Содержание микрогрибов из рода Aspergillus в кишечнике  телят 5-й группы динамично снижалось: на 10 день исследований - 1,0 lg KOE/г, на 20 день - лишь 0,4 lg KOE/г. В последующие сроки опытов микрогрибы из рода Aspergillus из содержимого кишечника телят 5 группы не выделялись.

Таким образом, диарея у телят вызывает глубокие вторичные дисбактериозы, проявляющиеся дисбалансом между нормальными и условно патогенными микроорганизмами и микроскопическими грибами в виде значительного снижения уровня бифидобактерий и лактобацилл, повышения популяционного уровня стафилококков, клостридий, микрогрибов из рода Candida, появлением и активным размножением микроскопических грибов из рода Aspergillus.

Средняя живая масса телят при рождении составила в 1-й группе 24,4 кг, во 2 группе - 27,3 кг,  в 3 группе - 26,8 кг, в 4 группе - 27,5 кг, в 5 группе - 26,9 кг. К 30 дню опыта  показатель живой массы телят имел резкие отличия по группам. Его значение уступало контрольной цифре телят 1-й группы по 2, 3, 4, и 5-й группам на 5,7; 2,9; 2,6; 1,3 кг. К 60-дневному возрасту телят живая масса животных 2-й группы уступала показателю телят 1-й контрольной группы на 9,5 кг, 3 группы - на  2,7 кг  и 4 группы - на 1,4 кг, а  5-й группы было выше, чем в контроле на 0,4 кг. При этом абсолютный и (среднесуточный) прирост живой массы составили по 1-й группе - 28,2 кг (470,0 г), по 2 группе - 17,8 кг (296,7 г), по 3 группе - 25,1 кг (418,3 г), по 4 группе - 25,7 кг (428,3 г), по 5 группе - 28,1 кг (468,3 г).

ВЫВОДЫ

1. Диарейный синдром у телят приводит к развитию в организме вторичных иммунодефицитов, характеризующихся:

а)  снижением факторов естественной резистентности;

б)  затормаживаем фагоцитарной активности лейкоцитов крови;

в)  уменьшением продукции в организме бета-лизинов;

г) нарушением баланса иммунокомпетентных клеток  Т- и В-систем иммунитета в виде снижения содержания Т-лимфоцитов, Т-хелперов, В-лимфоцитов на фоне активизации Т-супрессоров;

д) деструктивными изменениями  в центральных и периферических органах иммуногенеза: в тимусе - уменьшение площади коркового вещества, при расширении мозгового; в брыжеечных лимфатических узлах - уменьшение площади, занимаемой лимфатическими узелками без светлых и со светлыми центрами, паракортикальной зоной, мякотными тяжами;  в селезенке - уменьшение площади лимфатических узелков без светлых и со светлыми центрами, периваскулярных лимфоидных муфт, расширение площади, занимаемой красной пульпой;

е) иммуноцитологическим истощением красного костного мозга в виде снижения продукции лимфоидных клеток, клеток зернистого и эритроидного ростка лейкоцитов;

ж) нарушением в сыворотке крови баланса иммуноглобулинов IgG, IgМ, IgE, повышением уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

2. Диарейный синдром у телят приводит к глубоким дисбактериозам, сопровождающимся:

- снижением содержания нормофлоры: бифидобактерий и лактобацилл;

- повышением уровня условно патогенных  микроорганизмов: стафилококков и клостридий;

- активизацией  микрогрибов из рода Candida, появлением и активным размножением микрогрибов из рода Aspergillus.

3. Положительное влияние на состояние естественной резистентности, фагоцитоза, показатели Т- и В-систем иммунитета в крови, уровень иммуноглобулинов и ЦИК, иммуноморфологические перестройки в структурных компонентах лимфоидных органов, иммуноцитологические реакции в миелограмме, микробиоценоз кишечника при диарейном синдроме телят  оказывает пробиотикотерапия с применением Биокорм-Пионер или лечение животных с использованием препарата АСД-2Ф. При этом многие перечисленные параметры достигают уровня, соответствующего нижней границе физиологических норм.

4. Биокорм-Пионер в комплексе с АСД-2Ф при лечении телят с синдромом диареи способствует активизации процессов пролиферации и дифференциации клеток костного мозга, проявляющихся в миелограмме увеличением содержания клеток зернистого ростка лейкоцитов на 47,7 %, эритроидного ростка - на 32,3 %, лимфоидных клеток - на 8,7 %.

5. Комплексная терапия телят с синдромом диареи пробиотиком Биокорм- Пионер и препаратом АСД-2Ф активизирует иммунокомпетентные структуры в Т- и В-зависимых зонах лимфоидных органов:

- в тимусе в виде расширения площади коркового вещества на 24,3 %;

- в брыжеечном лимфатическом узле в виде увеличения площади лимфатических узелков без светлых центров на 3,9 %, со светлыми центрами - на 4,2 %, мякотных тяжей - на 13,4 %,  паракортикальной зоны - на 14,9 %, на фоне уменьшения площади коркового плато на 11,5 %;

- в селезенке в виде расширения площади лимфатических узелков без светлых центров на 8,3 %,  со светлыми центрами - на 3,3 %, периваскулярных лимфоидных муфт - на 6,3 %, на фоне уменьшения площади красной пульпы - на 16,6  %.

6. комплексная терапия  с использованием пробиотика Биокорм-Пионер на фоне применения препарата АСД-2Ф способствует полному восстановлению иммунного статуса телят с диарейным синдромом.  При этом по сравнению с данными больных животных:

- повышаются естественные защитные реакции организма: бактерицидная активность сыворотки крови на 42,9 %, лизоцимная - на 28,6 %, уровень бета-лизинов - на 27,8 % , усиливается ФА на 50 %, повышается ФЧ на 6,3 ед.

- активизируются в крови Т-лимфоциты на 32,9 %, Т-хелперы - на 18,7 %, В-лимфоциты - на 10,7 % и снижается уровень Т-супрессоров до физиологических норм - на 9,2 %;

- увеличивается синтез IgG на 8,4 %,  при снижении содержания  IgМ на 1,11 %, IgЕ - на 108,3 %, ЦИК - на 23,8 %.

7. Применение пробиотика Биокорм-Пионер в комплексе с препаратом АСД-2Ф для лечения телят с синдромом диареи  способствует восстановлению естественного микробиоценоза кишечника, выражающегося:

- активизацией и увеличением содержания бифидо- и лактобактерий на 6,5 и 5,7 lgКOE/г;

- уменьшением количества стафилококков  на 8,8 lgКOE/г, клостридий - на 10,1 lgКOE/г;

- снижением уровня микрогрибов из рода Сandida на 6,3 lgКOE/г;  и исчезновением из кишечника микрогрибов из рода Aspergillus.

8. Комплексное лечение телят с синдромом диареи  пробиотиком Биокорм- Пионер с АСД-2Ф способствует повышению сохранности поголовья и приростов живой массы телят.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В ранний постнатальный период развития телят с целью профилактики развития диарейного синдрома, сопровождающегося вторичными иммунодефицитами и дисбактериозами, для повышения иммунного статуса, восстановления естественного микробиоценоза  кишечника, повышения продуктивности и сохранности поголовья животных использовали композицию с применением пробиотика Биокорм-Пионер в комплексе с АСД-2Ф.

2. Полученные результаты исследований использованы при составлении научной и информационной литературы, в учебном процессе, при проведении лекционных и лабораторно-практических занятий по иммунологии, микробиологии, морфологии ФГБОУ ВПО МГУПП, а также в ветеринарной практике.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Маннапова Р.Т. Иммуноцитологические реакции в костном мозге  и их коррекция при диарейном синдроме у новорожденных телят / Р.Т. Маннапова, Е. В. Малик, Б.В. Уша, И.А. Русанов //  Аграрный вестник Урала. Ц 2011. Ц № 7.  Ц С. 19-20.

2. Малик Н.И. Антагонистическая активность молочнокислых бактерий для отбора пробиотических штаммов / Н.И. Малик, Е.В. Малик, И.А. Гулейчик, Н.А. Чупахина, И.А. Русанов // Лекарственные препараты для животных (разработка, производство, эффективность и качество): мат. Межд. научн. конф. - М.,  2011. - С. 99-101.

3. Малик Е.В. Восстановление колонизационной резистентности при диарейном синдроме у новорожденных телят / Е.В. Малик, Б.В. Уша, И.А. Русанов // Аграрный вестник Урала. Ц 2011. Ц № 12-1 (91). Ц С. 8-10.

4. Малик Е.В. Влияние пробиотика Биокорм-Пионер на антиоксидантный статус и параметры эндогенной интоксикации цыплят промышленного стада / Е.В. Малик, А.Н. Адамов, И.Ю. Вершинина, И.А. Русанов // Лекарственные препараты для животных (разработка, производство, эффективность и качество): мат. Межд. научн. конф. - М., 2011. - С. 104-105.

Подписано в печать 19.11.2012. Усл. печ. л. 1,68. Тираж 100 экз. Заказ

МГУПП. 109316, Москва, ул. Талалихина, 33.

ООО Франтера. 109316, Москва, ул. Талалихина, 33.

Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству