Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по медицине  

1. На правах рукописи
4. ДЕНЧИК ДАНИЛА АЛЕКСАНДРОВИЧ
2. Клинико-генетические особенности листовидных опухолей молочных желез

14.01.12 - онкология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина Российской академии медицинских наук

Директор академик РАН и РАМН  Давыдов Михаил Иванович

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор  Воротников Игорь Константинович

доктор медицинских наук Любченко Людмила Николаевна

Официальные оппоненты:

Хайленко Виктор Алексеевич                 д.м.н, профессор, ведущий научный сотрудник

  отделения диагностики опухолей

  НИИ КО УРОН - им.Н.Н. БлохинаФ РАМН

Насеткина Татьяна Васильевна  д.б.н.,                 профессор руководитель группы анализа

генома человека лаборатории биологических

микрочипов Института молекулярной биологии

  им. В.А. Энгельгардта РАН

Ведущее учреждение:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Защита диссертации состоится л20 _апреля__2012 года в 10.00 часов на заседании диссертационного совета (Д.001.017.02) при ФГБУ РОН - им. Н.Н.Блохина РАМН (115478, Москва, Каширское шоссе, 24)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина Российской академии медицинских наук.

Автореферат разослан л ______________2012 года

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор                                 Барсуков Юрий Андреевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы исследования

истовидные опухоли встречаются в онкологической практике сравнительно редко и не превышают 2% от всех новообразований молочных желез (Григорук О.Г., с соавт., 2005).

Редкостью данных новообразований, своеобразием клинического течения и полиморфизмом морфологического строения объясняются ограниченная осведомленность о них врачей и разнородность их взглядов, как на природу указанных процессов, так и на принципы лечебных подходов.

Способность к рецидивированию, малигнизации с развитием саркомы молочной железы и отдаленному метастазированию являются основными особенностями листовидных опухолей, в связи с чем остается много вопросов, касающихся этиологии и патогенеза данной нозологической группы.

Молекулярный патогенез онкологических заболеваний, включает каскад генетических и эпигенетических событий, ведущих к активации онкогенов и инактивации генов опухолевой супрессии, лежащих в основе злокачественной трансформации. Ген TP53 (17р13.1 OMIM 19170) является одним из ключевых генов-супрессоров опухолевого роста, функция которого направлена на ограничение вероятности возникновения генетически нестабильных клеток, путем регуляции большого спектра клеточных процессов, включая клеточную дифференцировку, пролиферацию и апоптоз (Чумаков П.М., 2007; Vousden K.H. et. al., 2007; Копнин Б.П. 2008).

Активность белка TP53 и функциональные нарушения гена ТР53 в значительной степени модифицированы как соматическими мутациями, так и генетическим полиморфизмом, наиболее значимым и информативным из которого являются точечная замена гуанина на цитозин в 72-м кодоне 4-го экзона (Ex4+119G>C, Arg72Pro, rs1042522) (Whibley et al. 2009; Denisov E. et al., 2011) а так же локус с вариабельным числом тандемных повторов (variable number of tandem repeats - VNTR) в 1-м интроне гена ТР53 - VNTR1. Определение потери гетерозиготности (Loss of heterozigosity - LOH) высоко информативных внутригенных локусов является определяющей информацией в отношении изучения клинико-генетических корреляций при доброкачественных и злокачественных новообразованиях (Ridenpa M. et al., 1995; Friedrich M. et al., 2000; Labe R. et al. 2007)

Все вышесказанное указывает на актуальность исследований, учитывающих генотипические варианты в гене TP53, которые могут определять потенциальные механизмы его участия в развитии и прогрессии листовидных опухолей.

Полученные данные послужат основой для определения дополнительных критериев прогноза клинического течения заболевания.

Цель исследования

Оптимизация и улучшение диагностики и результатов лечения листовидных опухолей с учетом структурно-функциональных перестроек гена TP53.

Задачи исследования

1 Определить частоту соматических мутаций и потерю гетерозиготности гена TP53 в различных компонентах листовидных опухолей.

2. Сопоставить клинические и генетические картины листовидных опухолей.

3. Провести анализ клинического течения в зависимости от генотипических характеристик.

4. На основании клинико-генетического анализа изучить прогностическую значимость структурно-функциональных перестроек гена TP53 в листовидных опухолях.

5. На основании клинико-генетического анализа оценить выбор адекватного хирургического лечения листовидных опухолей.

Научная новизна

Впервые на уникальном материале, собранном в ФГБУ РОН - им. Н.Н. Блохина РАМН с 1994 по 2009г. установлена взаимосвязь между изменениями на генетическом уровне с клиническим течением листовидных опухолей, что открывает совершенно новые возможности в диагностике и прогнозе данного заболевания.

Впервые на значительном клиническом материале листовидных опухолей выполнен молекулярно-генетический анализ по генотипированию соматических мутаций и анализ потери гетерозиготности высокоинформативных внутригенных локусов гена TP53.

На основании проведенного исследования показано, что потеря гетерозиготности гена TP53 в локусах VNTR1 и R72P характерна для злокачественных листовидных опухолях и не выявлена в доброкачественном и пограничном вариантах листовидных опухолей.

Впервые в российской популяции определена частота соматических мутаций гена TP53 и потери гетерозиготности в специфических внутригенных локусах гена ТР53 - VNTR1 и R72P при листовидных опухолях.

Определена прогностическая роль соматических мутаций и потери гетерозиготности участков VNTR1 и R72P гена TP53 в развитии рецидива, малигнизации рецидива и отдаленного метастазирования листовидных опухолей. На основании результатов исследования определены рациональные объемы хирургического лечения.

Практическая значимость

Результаты проведенной работы могут быть использованы в профессиональной деятельности специалистов - маммологов при обследовании женщин с подозрением на листовидную опухоль.

МолекулярноЦгенетическая диагностика с целью определения соматических мутаций и потери гетерозиготности специфических внутригенных локусов гена ТР53 может являться дополнительным диагностическим методом с целью прогнозирования течения данного заболевания.

Полученные результаты планируется использовать в практической деятельности врачей - маммологов, онкологов, генетиков, а так же для разработки методических рекомендаций.

Апробация работы

Апробация диссертации состоялась 17 января 2012 года на совместной научной конференции с участием хирургических отделений: диагностики опухолей, опухолей молочных желез, опухолей женской репродуктивной системы, реконструктивной и сосудистой хирургии, радиохирургии, патологоанатомического отделения, лаборатории клинической онкогенетики НИИ КО ФГБУ УРОН - им. Н.Н. БлохинаФ РАМН, кафедр онкологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, Московского государственного медико-стоматологического университета, Российской медицинской академии последипломного образования.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 3 печатных работы в журналах рекомендованных ВАК РФ, 2 тезиса и 2 статьи в журналах.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 107 страницах машинописного текста, состоит из введения, трех глав, заключения, выводов и списка литературы, включающего 30 источников отечественной и 120 источников зарубежной литературы. Иллюстрирована 39 таблицами и 26 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу диссертационной работы положен ретроспективный анализ 76 историй болезни пациенток получавших лечение и наблюдающихся по поводу листовидных опухолей молочных желез в ФГБУ УРОН - им. Н.Н. БлохинаФ РАМН за период с 1994 по 2009 годы включительно.

Основным критерием включения являлось гистологическое заключение, подтверждающее диагноз листовидной опухоли: доброкачественной, пограничной или злокачественной (рис. 1).

Рис. 1. Распределение больных с листовидными опухолями молочной железы в зависимости от гистологического диагноза.

истовидные опухоли молочных желез выявлены во всех возрастных группах. Возрастной интервал варьировал от 12 до 75 лет, однако чаще всего данное заболевание было диагностировано у женщин в возрасте от 30 до 50 лет (рис. 2).

Рис. 2. Распределение больных с листовидными опухолями молочной железы по возрасту.

Больше чем у половины - 56,5% (43/76) пациенток диагностированы различные фоновые и доброкачественные изменения в молочных железах: диффузная фиброзно-кистозная мастопатия у 40,8% (31/76) пациентки; фиброаденома - у 13,1% (10/76) больных; мастит в анамнезе отмечен в 2,6% (2/76) случаях.

Нарушения менструального цикла, такие как раннее (раньше 13 лет) или позднее (старше 15 лет) появление месячных; дисфункция яичников выявлена у 13,1% (10/76) пациентов. Интересным наблюдением явилась диагностика листовидных опухолей у двух девочек 12-ти и 13-ти лет до установления менструального цикла. Миомы матки и кисты яичников наблюдались у 9,2% (7/76) больных.

Среди клинических данных прогностическое значение в определении типа листовидной опухоли имеет длительность существования опухоли с момента ее обнаружения пациенткой до обращения за медицинской помощью и темпы роста.

Анализируя темпы роста оказалось, что в 43 (56,5%) случаях был выявлен медленный рост, в 22 (28,9%) случаях отмечено двухфазное течение, и в 11 (14,4%) случаях быстрый рост образования.

Пальпируемые лимфатические узлы эластической консистенции на стороне поражения были выявлены у 11,8% (9/76) пациенток, увеличение регионарных узлов (в аксиллярных областях) всегда носило реактивный характер.

Важную роль играет размер опухоли молочной железы. Размер листовидной опухоли молочной железы колебался от 1 см., до 27 см. Средний размер в группе доброкачественных листовидных опухолей составил 5,6 см., в то время как при злокачественном варианте - 9,3 см., и при пограничном варианте - 8,3 см. Показано, что с увеличением размера опухолевого узла увеличивается процент листовидных опухолей пограничного и злокачественного вариантов.

Макроскопически доброкачественная листовидная опухоль представлена  узлом как правило четко отграниченным от окружающей ткани молочной железы и не имеющем истиной капсулы. На разрезе представлен плотноэластической тканью серого цвета с характерными крупными сосочковыми структурами.

Микроскопическая картина характеризуется наличием крупных сосочковых структур, образованных рыхлой, либо плотной соединительной тканью, покрытой двумя слоями эпителиальных клеток (рис. 3).

Рис. 3. Микроскопическая картина доброкачественной листовидной опухоли.

Макроскопическая картина пограничных листовидных опухолей не отличалась от доброкачественных. Микроскопическая картина пограничных листовидных опухолей отличалась от типичного варианта строения участками с повышенной клеточностью стромы, в которых появляются крупные уродливые клетки с гиперхромными ядрами, встречаются фигуры митоза в большом количестве чем при доброкачественных опухолях (6-10 в 10 полях зрения). Эпителиальный компонент опухоли мало отличается от такового при доброкачественном варианте: встречаются очаги пролиферации эпителия в протоках, реже это фокусы дольковой атипической гиперплазии, склерозирующего аденоза, фокусы плоскоклеточной метаплазии эпителия в отдельных протоках (рис. 4).

Рис. 4. Микроскопическая картина пограничной листовидной опухоли.

Макроскопически злокачественные листовидные опухоли характеризуются на разрезе серо-розовой тканью мягко-эластической консистенции, на отдельных участках ткань узла напоминает Урыбье мясоФ, что характерно для сарком или содержит фокусы костной и хрящевой плотности. Границы опухоли нечеткие, ткань ее переходит незаметно в прилежащие отделы молочной железы почти по всему периметру узла в отличие от доброкачественных и пограничных вариантов.

Микроскопически: на первый план выходит стромальный компонет, почти полностью представляющий узел. Иногда видны участки типичного сосочкового строения с довольно заметным эпителиальным компонентом. Поля соединительнотканного компонента образованы плотно или рыхло лежащими полиморфными клетками с уродливыми или овально-округлыми ядрами с заметным гиперхроматизмом. Отличительной чертой является большое число фигур митоза, от 11 до 23 в 10 полях зрения. Отдельные участки стромального злокачественного компонента имеют строение, соответствующее той или иной форме стромальных первичных сарком мягких тканей. Для злокачественной листовидной опухоли так же характерно наличие фокусов некроза разной степени выраженности (рис. 5).

Рис. 5. Микроскопическая картина злокачественной листовидной опухоли.

Основным методом, применявшимся при лечении листовидных опухолей молочных желез являлся хирургический.

В условиях ФГБУ РОН - им. Н.Н. Блохина РАМН оперативное лечение было проведено у всех 76 больных с листовидными опухолями, включенных в исследование. Анализируя лечебные подходы при листовидных опухолях можно констатировать, что использовался весь спектр оперативных вмешательств, выполняющихся при заболеваниях молочных желез (рис.6).

Рис. 6. Распределение больных с листовидными опухолями молочной железы по вариантам хирургического лечения.

После проведения хирургического лечения рецидивы заболевания были отмечены у 18,4% (14/76) пациентов: при доброкачественном варианте - у 13,2% (5/38) больных, а в случаях пограничной и злокачественной листовидных опухолях - 20% (3/20) и 26% (6/23), соответственно. В 4 случаях наблюдалась малигнизация рецидива: в 13% (3/23) случаев при злокачественных и 2,6% (1/38) при доброкачественных листовидных опухолях.

Механизмы, лежащие в основе феномена потери гетерозиготности на участке 17p13.1 обуславливают утрату аллелей гена TP53 на высоко вариабельном участке (VNTR) 1-го интрона гена TP53 и у гетерозиготных по Ex4+119G>C (R72P) полиморфизму больных раком молочной железы (Bonafe et al., 2003; Kyndi et al., 2006), в связи с чем в качестве молекулярных маркеров при изучении листовидных опухолей были выбраны соматические мутации и потеря гетерозиготности высокоспецифичных внутригенных локусов гена ТР53.

Молекуляро-генетическое исследование выполнено на образцах ДНК, выделенных из опухолевой ткани (стромального, эпителиального компонентов и нормальной ткани молочной железы) 76 пациенток. Во всех исследованных срезах эпителиальный и мезенхимальный компоненты были четко разграничены, что позволяло анализировать их отдельно (табл. 1).

Таблица 1

Изучаемые внутригенные маркеры

окус TP53	Экзон	Аллели	Компоненты
VNTR1	1 интрон	LOH1 LOH2	Стромальный Эпителиальный
R72P	4 экзон	LOH1 LOH2	Стромальный Эпителиальный

Выделение геномной ДНК из опухолевой ткани каждого компонента (стромального, эпителиального и нормальной ткани) проводили с использованием протеинкиназы К по стандартной методике (Garner, 1994).

На первом этапе исследовали всю кодирующую часть гена ТР53 (3-8 экзон) с целью выявления соматических мутаций, с использованием полимеразно-цепной реакции и однонитевого конформационно-чувствительного электрофореза (SSCP). На следующем этапе проводился микросателлитный анализ с целью выявления аллельного дисбаланса, а именно потери гетерозиготности гена TP53 c использованием полимеразно-цепной реакции и электрофоретического метода. Последовательность праймеров и пример электрофореза представлена в таблице 2 и на рисунке 7.

Таблица 2

Последовательности праймеров

Регион		Праймеры	п.н.	Ссылка
	4-й экзон (Ex4+119G>C)	F5'-TTGCCGTCCCAAGCAATGGATGA-3' R5'-TCTGGGAAGGGACAGAAGATGAC-3'	199	(Ara et al., 1990)
	VNTR (1-й интрон гена TP53)	F5'-ACTCCAGCCTGGGCAATAAGAGCT-3' R5'-ACAAAACATCCCCTACCAAACAGC-3'	131	(Hahn et al., 1993)

296 п.н. 169 п.н. 127 п.н.

1         2  3  4  5  6  7

Рис.7. Пример электрофоретического разделения продуктов рестрикции.

Статистический анализ

Информация вносилась в специально созданную реляционную базу данных. Критериями учета признаков являлись их наличие и степень выраженности. Обработку показателей проводили с использованием описательной статистики (среднее значение, медиана), а также с помощью методов медико-биологической статистики. Различия считались значимыми, если значение УpФ было менее 0,05. Анализ выживаемости производился с помощью метода Каплан-Майера (1958). Статистическая обработка полученных в ходе исследования результатов проводилась с помощью программы Statistica for Windows 6.0 (StatSoft Inc.).

Количественные признаки описывались с помощью медианы (Ме) и 95% доверительного интервала (ДИ) (Меа[-95%ДИ; +95%ДИ]). Для оценки статистической достоверности  различий между группами определялись следующие параметры:

1. количественные показатели, две независимые группы - метод Манна-Уитни.
2. количественные показатели, более двух независимых групп - метод Краскела-Уоллиса.
3. качественные показатели - метод хи-квадрат, при необходимости с поправкой Йетса.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

С целью проведения статистического анализа больные были разделены на три группы. Критерием разделения являлся гистологический вариант: доброкачественный, пограничный и злокачественный.

Показано, что доброкачественная листовидная опухоль статистически достоверно возникает в более раннем возрасте по сравнению с пограничным (p=0,002) и злокачественным вариантом (p=0,0002). Различия по возрасту между пограничным и злокачественным вариантами не достоверны (p>0,05). Медиана возраста больных доброкачественным вариантом составила 38 лет, а при пограничном и злокачественном вариантах - 50 и 51 год соответственно.

При проверке статистической значимости для доброкачественного и злокачественного вариантов листовидной опухоли по двухфазному течению заболевания выяснилось, что, несмотря на то, что p = 0,04, отношения шансов =2,9; [0,9; 9,2] доверительный интервал включает в себя единицу, т.е. большую вероятность двухфазного течения злокачественного варианта по сравнению с доброкачественным корректнее было бы определить в качестве тенденции. Для групп сравнения пограничная и злокачественная листовидные опухоли различия по двухфазному течению заболевания были статистически достоверны p=0,03; ОШ = 5,09; [1,04; 34,01]. Не было выявлено статистической достоверности между доброкачественным и пограничным вариантами листовидных опухолей и темпами роста (p>0,05).

Размеры опухолевого узла при доброкачественном варианте статистически достоверно меньше размера опухолевого узла злокачественного варианта листовидной опухоли (p=0,0057), что касается размеров опухолевого узла пограничного варианта листовидной опухоли, разница не достоверна (p>0,05). Не было выявлено статистических различий между размерами пограничных и злокачественных листовидных опухолей (p>0,05).

Для дальнейшего анализа влияния размера опухолевого узла на вероятность гистологического варианта листовидной опухоли проведена категоризация данных. За точку разделения была принята середина отрезка между средними значениями опухолевого узла для доброкачественного и злокачественного вариантов листовидной опухоли (рис. 8 точка А), таким образом, в одну группу вошли пациенты с размером узла <5,5 см; во вторую ≥5,5 см.

Рис. 8 Гистологический вариант в зависимости от размеров опухолевого узла.

Различия между группами оказались статистически достоверными; p=0,01; ОШ = 3,6; [1,2; 11,0].

При выполнении молекулярно-генетического исследования с целью определения соматических мутаций (кодирующая часть гена ТР53: 3-8 экзоны) и потери гетерозиготности внутригенных локусов VNTR1 и R72P гена ТР53 в изучаемой выборке больных (n=76) показано, что инактивация гена ТР53 характерна для 14,4% (11/76) листовидных опухолей.

Частота соматических мутаций гена ТР53 в злокачественных листовидных опухолях составила 34,7% (8/23) с достоверным преобладанием в стромальном компоненте - 87,5% (7/8) по сравнению с эпителиальным - 12,5% (1/8) компонентом опухолей.

Средний возраст больных у которых развитие злокачественных листовидных опухолей было ассоциировано с соматическими мутациями гена ТР53 (mtТР53) был на 5 лет меньше и составил 47 лет по сравнению с пациентами, опухоли которых содержали копию гена дикого типа (wtТР53) - 52 года.

Частота потери гетерозиготности локусов VNTR1 и R72P, изучаемая в стромальном и эпителиальном компонентах листовидных опухолей пациентов всех групп составила 14,4%(11/76).

Интересным фактом явилось отсутствие потери гетерозиготности в изучаемых внутригенных локусах при доброкачественных и пограничных листовидных опухолях, тогда как частота потери гетерозиготности VNTR1 и R72P локусов ТР53 в стромальном и эпителиальном компонентах злокачественных листовидных опухолях составила 47,8% (11/23), с 4-х кратным превышением этого показателя в стромальном компоненте листовидных опухолей: 39,1 (9/23) по сравнению с 8.6% (2/23) - в эпителиальном опухолевом компоненте злокачественных листовидных опухолей (рис. 9).

Рис. 9. Анализ мутаций и потери гетерозиготности гена TP53.

При анализе участков гена TP53 VNTR1 и R72P в нормальной ткани молочной железы не было выявлено потери гетерозиготности по изучаемым внутригенным локусам.

При изучении клинико-генетических корреляций показано, что при наличии потери гетерозиготности в локусах VNTR1 и R72P гена TP53 пациенты имели различные клинические проявления (рис. 10).

Рис. 10. Прогностическое значение потери гетерозиготности VNTR1 и R72P гена ТР53.

Показано, что на развитие рецидива злокачественной листовидной опухоли статистически достоверно (р<0,05) влияет наличие соматических мутаций гена TP53 и потеря гетерозиготности локусов VNTR1 и R72P (табл. 3, 4).

Таблица 3

Распределение больных в зависимости от наличия рецидива и TP53-мутаций

Рецидив	wtTP53	mtTP53
Нет	13(87%)	4(50%)
Есть	2(13%)	4(50%)
Всего	15(100%)	8(100%)

Таблица 4

Распределение больных в зависимости от наличия рецидива и статуса гена ТР53

Рецидив	отсутствие LOH VNTR1 и R72P wtTP53	наличие LOH VNTR1 и R72P mtTP53
Нет	11(92%)	6(55%)
Есть	1(8%)	5(45%)
Всего	12(100%)	11(100%)

При оценке безрецидивной выживаемости больных в зависимости от наличия соматических мутаций гена TP53 в опухоли, показано снижение показателей безрецидивной выживаемости пациентов, злокачественными листовидными опухолями которые были ассоциированы с соматическими мутациями ТР53 - 82 ± 8,1%, по сравнению с группой больных без генетических мутационных изменений- 91 ± 6% (рис. 11).

Рис. 11. Безрецидивная выживаемость больных в зависимости от мутантного статуса гена TP53.

Безрецидивная выживаемость больных при наличии потери гетерозиготности локусов VNTR1 и R72P, а так же соматических мутаций гена TP53 в опухоли составила 78 ± 8,8%, тогда как при отсутствии генетических изменений - 95,7 ± 4,3% (рис. 12).

Рис. 12. Безрецидивная выживаемость больных в зависимости от статуса ТР53.

В 13% (3/23) случаях у больных диагностирован малигнизированный рецидив злокачественной листовидной опухоли. В 8,6% (2/23) малигнизация рецидива была ассоциирована с наличием соматических мутаций и потери гетерозиготности локусов VNTR1 и R72P гена TP53, в связи с чем можно констатировать тенденцию возникновения малигнизированного рецидива злокачественной листовидной опухоли при патологическом ТР53-генотипе (р < 0,05) ОШ = 5,7; [0,5; 64,3].

Гематогенные метастазы нами отмечены в 4 случаях злокачественной листовидной опухоли, при доброкачественном и пограничном вариантах отдаленных метастазов не выявлено. Все больные с отдаленными проявлениями заболевания умерли в течение трех лет после операции (рис. 13).

Медиана наблюдения пациентов со злокачественными листовидными опухолями составила 8 лет. Общая выживаемость больных составила 83 ± 8%.

Рис. 13. Общая выживаемость больных злокачественными листовидными опухолями.

При оценке развития отдаленных метастазов злокачественных листовидных опухолей в зависимости от потери гетерозиготности локуса VNTR1 в опухоли показано статистически достоверная зависимость (p<0,05) (табл. 5).

Таблица 5

Распределение больных в зависимости от наличия отдаленных метастазов и LOH локуса VNTR1

Метастазы	отсутствие LOH VNTR1	наличие LOH VNTR1
Нет	15(94%)	4(57%)
Есть	1(6%)	3(43%)
Всего	15(100%)	7(100%)

Соответственно, показатели общей выживаемости больных злокачественными листовидными опухолями при наличии потери гетерозиготности локуса VNTR1 были  ниже и составили 87 ± 7,1%, по сравнению с таковыми у пациентов без потери гетерозиготности  в изучаемом локусе - 95,7 ± 4,3% (рис. 14).

Рис. 14 Общая выживаемость больных в зависимости от наличия LOH локуса VNTR1.

Таким образом определение соматических мутаций и потери гетерозиготности внутригенных специфических локусов гена TP53 в листовидных опухолях может быть использовано в качестве дополнительного молекулярно-генетического диагностического метода с целью прогнозирования течения заболевания и оптимизации тактики лечения больных.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что инактивация гена ТР53 характерна для 14,4% листовидных опухолей.
2. Впервые в российской популяции определена частота соматических мутаций гена TP53 (34,7%) и потери гетерозиготности в специфических внутригенных локусах VNTR1 (30,4%) и R72P (17,3%) в злокачественных листовидных опухолях. Частота потери гетерозиготности в стромальном компоненте (39,1%) в четыре раза превышает соответствующий показатель в эпителиальном (8,6%).
3. Наличие соматических мутаций гена ТР53 и потеря гетерозиготности специфических внутригенных локусов в опухоли достоверно влияет на развитие рецидива болезни (p<0,05). Безрецидивная выживаемость больных при наличии LOH VNTR1, R72P и соматических мутаций гена TP53 составила 78 ± 8,8%, а при отсутствии 95,7 ± 4,3%.
4. Сочетание соматических мутаций и потери гетерозиготности внутригенных локусов гена ТР53 в опухоли достоверно влияет на развитие малигнизированного рецидива (p<0,05).
5. Наличие потери гетерозиготности локуса VNTR1 гена TP53 достоверно повышает риск развития отдаленных метастазов. (p<0,05 ). Общая выживаемость больных при наличии LOH VNTR1 составила 87 ± 7,1%, а при отсутствии LOH VNTR1 95,7 ± 4,3.%
6. Достаточный объем оперативного вмешательства при доброкачественных и пограничных листовидных опухолях - секторальная резекция молочной железы. При тотальном поражении или больших размерах опухолевого узла - мастэктомия. Для злокачественных листовидных опухолей достаточный объем оперативного вмешательства - мастэктомия. Нет оснований для выполнения лимфодиссекции.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Денчик Д.А. Особенности листовидных опухолей / Д.А. Денчик, И.К. Воротников, Л.Н. Любченко, О.А. Анурова, А.В. Быкова // Опухоли женской репродуктивной системы 2010г.- №3 с. 21-24.

2. Денчик Д.А. Листовидные опухоли молочных желез / Д.А. Денчик, И.К. Воротников, А.В. Быкова, О.А. Анурова, Л.Н. Любченко // Научно-практический рецензируемый медицинский журнал Справочник акушера-гинеколога-2011.- №5-6 с.15-17.

3. Воротноков И.К. Саркомы и листовидные опухоли молочных желез. Клинико-генетические особенности / И.К. Воротников, Д.А. Денчик // Саркомы костей, мягких тканей и опухоли кожи 2010г.- №4 с. 24-30.

4. Быкова А.В. . Рак молочных желез у мужчин: некоторые генетические аспекты / А.В. Быкова, И.К. Воротников, Л.Н. Любченко, Е.М. Погодина, Е.А. Ким, Д.А. Денчик // Материалы VI съезда онкологов и радиологов стран СНГ Ч Душанбе. -2010г.- с. 141 с. 27.

5. Быкова А.В. Рак молочной железы у мужчин: генетические аспекты / А.В. Быкова, И.К. Воротников, Л.Н. Любченко, Д.А. Денчик // Материалы научно-практической конференции Достижения современной онкологии Барнаул 2010г - с. 15.

6. Быкова А.В. Роль мутации генов BRCA 1 и BRCA 2 в возникновении рака молочных желез у мужчин / А.В. Быкова, И.К. Воротников, Л.Н. Любченко, Я.В. Вишневская, Д.А. Денчик // Опухоли женской репродуктивной системы. 2011г.- №1 с. 29-32.

7. Быкова А.В. Проблема рака молочной железы у мужчин / А.В. Быкова, И.К. Воротников, Я.В. Вишневская, Д.А. Денчик, Л.Н. Любченко // Сибирский онкологический журнал- 2011г.- №4. г.Томск с. 64-68.

   Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по медицине