Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по медицине
На правах рукописи
головков
Дмитрий Анатольевич
Клиническая значимость ключевых маркеров ангиогенеза,
апоптоза и системы активации плазминогена в сыворотке крови и опухоли больных колоректальным раком
14.00.46 - клиническая лабораторная диагностика
14.00.14 - онкология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
доктора медицинских наук
Москва - 2008 г.
Работа выполнена на кафедре клинической биохимии и лабораторной диагно-
стики ФПДО Московский государственный медико-стоматологический уни-
верситет Росздрава
Научные консультанты:
член-корреспондент РАМН, профессор Н.Е.Кушлинский
доктор медицинских наук В.В.Делекторская
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук Н.Ю.Полонская
доктор медицинских наук М.Н. Обушева
доктор медицинских наук, профессор Ю.А.Барсуков
Ведущая организация: Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова
Защита диссертации состоится л__________________2008г. на заседании Диссертационного Совета Д.208.071.04 при Российской медицинской
академии последипломного образования по адресу: (123995 Москва,
ул.Баррикадная, д. 2/1).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российской медицинской академии последипломного образования (125445, г. Москва, ул.Беломорская ,19). Автореферат разослан л_________________208г.
Ученый секретарь Диссертационного Совета
доктор медицинских наук, профессор В.Т.Морозова
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. В последние годы в большинстве стран мира, в том числе и в нашей стране наблюдается рост заболеваемости колоректальным раком (Г.И.Воробьев и соавт., 2005; Hawk Е.Т. et al., 2002; Levin В. et al., 2005). Ежегодно в мире регистрируется около 1 млн. новых случаев рака прямой и ободочной кишки (3-й по частоте показатель заболеваемости среди онкологических болезней), а умирает почти 500 тыс. человек (4-е место по показателю смертности) (Engstrom P.F., 2000; Parkin D.M. et al., 1999; В.В.Мартынюк, 2000; Н.Н.Симонов и соавт., 2000; Н.Н.Трапезников и соавт., 2000).
По прогнозу ожидается, что в XXI веке в России рак данной локализа-
ции займет первое место в структуре онкологической заболеваемости
(Н.Н.Симонов и соавт., 1997; Н.А.Яицкий и соавт., 2004; Е.М.Аксель и со-
авт., 2004). В России ежегодно колоректальным раком заболевают 50 тыс.
человек (3-е место у мужчин после рака легких и желудка и 2-е место у жен-
щин после рака молочной железы) при ежегодной смертности, равной 35 тыс.
Метастазы являются основным фактором, отягощающим прогноз коло-
ректального рака. Поэтому, в настоящее время проводится активный поиск дополнительных маркеров, которые предсказывают высокий риск опухолевой прогрессии (В.И.Киселев и соавт., 2005).
В настоящее время бурно развивается направление молекулярной ди-
агностики и оценки прогноза этих опухолей, а исследование особенностей
биологического поведения опухоли является в настоящее время одной из
наиболее актуальных областей онкологии (А.А.Новик и соавт., 2004; Von
Kleist S., 2008). Расширяются возможности иммуногистохимического выявления в клетках колоректального рака и в структурах внеклеточного матрикса особенностей экспрессии молекулярных маркеров, отражающих специфику биологической активности опухоли (В.В.Делекторская и соавт., 2008; Muller W. et al., 1998; Sarris M. et al., 2001; Ahmed F.E. et al., 2005). Среди опухолеассоциированных протеолитических ферментов ведущую роль играет система активаторов плазминогена, представленная двумя протеазами - тканевым и урокиназным активаторами плазминогена (uРА и tPA), а также металлопротеиназная система, состоящая из 25 представителей (Н.Е.Кушлинский и соавт., 2008). Ключевую роль в семействе металлопротеиназ играют ММР-2 и ММР-9, функция которых связана с гидролизом коллагена базальных мембран (Е.С.Герштейн и соавт., 2008). uРА и tPA превращают неактивный зимоген плазминоген в плазмин, расщепляющий фибрин и белки внеклеточного матрикса, а также активирующий ММР-2 и ММР-9. Эти процессы способ-
ствуют разрушению базальных мембран и облегчают инвазию опухолевых
клеток. При этом важную роль в опухолевой прогрессии играют и их эндо-
генные ингибиторы (TIMP и PAI), которые могут способствовать протеоли-
тическому действию ферментов (Gershtein E. et al., 2007). ММР, сериновые
протеазы (uPA, tPA) не только облегчают опухолевый рост, раковую инвазию
и метастазирование, но и могут являться мишенью для противоопухолевой
терапии и лечения метастазов (Е.С.Герштейн и соавт., 2007; Mysliwill A.G. et
al., 2002; Waas E.T. et al., 2002; Gontero P. et al., 2004).
Основные белки базальных мембран (коллаген IV типа и ламинин) яв-
яются не только структурным барьером для метастатического распростра-
нения раковых клеток, но и важной функциональной единицей, участвующей
в опухолевой прогрессии (Galbavy S. et al., 2002).
При этом деградирующие матрикс протеиназы не только ремоделиру-
ют архитектуру внеклеточного матрикса, но и воздействуют на различные
пути передачи сигнала в клетке, усиливают ангиогенез и способствует укло-
нению опухоли от программы апоптоза (Г.И.Абелев и соавт., 2008). Так, из-
вестно, что ключевым проангиогенным фактором является VEGF - гликопро-
теин, стимулирующий пролиферацию эндотелиальных клеток. Этот фактор
усиленно продуцируется также клетками ряда новообразований, способствуя
неоваскуляризации опухоли и усилению проницаемости сосудов (Gershtem
E.S. et al., 2006; Shin J.E. et al., 2007).
Апоптоз или его отдельные элементы выполняют важные физиологи-
ческие функции, при этом преодоление апоптоза является необходимым ус-
овием успешного развития опухоли (С.Г.Аббасова и соавт., 2007). Один из
механизмов, регулирующих эти процессы в опухоли, связан с активностью
апоптоз-специфических белков системы Fas/FasL (Bennett M.W. et al., 2001;
O'Connell J. et al. 2000; Zhu Q. et al., 2005; Song E. et al., 2001).
Относительно недавно получены первые клинические исследования по
неоангиогенезу и Fas-зависимому апоптозу при солидных опухолях, в том
числе и колоректальном раке (С.Г.Аббасова и соавт., 2007). Показано, что
повышенный уровень продукции ключевого активатора ангиогенеза - VEGF
и ингибитора апоптоза - растворимого Fas-антигена (sFas) у больных некото-
рыми злокачественными новообразованиями может свидетельствовать о вы-
соком метастатическом потенциале опухоли, что является неблагоприят-
ным прогностическим фактором (А.А.Фильченков и соавт., 1999;
С.М.Киселев и соавт., 2003). Однако эти данные основаны пока на незначи-
тельном числе наблюдений. Кроме того, не изучали одновременно факторы
ангиогенеза и апоптоза с использованием малоинвазивных биохимических
методов исследования в сыворотке крови, что также затрудняет обсуждение
представленных в литературе результатов.
Несмотря на то, что накапливается все больше данных о нарушениях
нормальной экспрессии и функционирования молекулярных факторов при
раке толстой кишки, их влияние на клиническое течение и прогноз заболева-
ния изучено недостаточно. Многие вопросы, касающиеся корреляции клини-
ко-морфологических характеристик опухоли и изменений биологических по-
казателей, происходящих в процессе прогрессирования рака толстой кишки,
нуждаются в уточнении. Этим определяется актуальность изучения молеку-
ярных критериев, прогнозирующих агрессивность течения колоректального
рака.
Цель работы.
Изучение особенностей экспрессии молекулярно-биологических мар-
керов внеклеточного матрикса, ангиогенеза, апоптоза в опухоли, сыворотке
крови больных раком толстой кишки и роли комплекса этих факторов в
оценке прогноза заболевания.
Задачи исследования.
1. Изучить биохимические и иммуногистохимические особенности
экспрессии ММР-9 в первичных опухолях больных раком толстой кишки и в
прилежащей к опухоли непораженной слизистой оболочке.
2. Исследовать особенности экспрессии структурных компонентов ба-
зальных мембран (коллагена IV типа) в злокачественных опухолях толстой
кишки.
3. Провести сравнительный анализ особенностей экспрессии фермен-
тов внеклеточного матрикса и компонентов базальных мембран и выявить их
взаимосвязь с основными клиническими и морфологическими параметрами
заболевания.
4. Провести иммуноферментное определение молекулярно-
биологических маркеров неоангиогенеза (VEGF) и апоптоза (sFas) в сыво-
ротке крови больных раком толстой кишки и изучить корреляцию биохими-ческих показателей с основными клинико-морфологическими параметрами
заболевания.
- Провести иммуноферментное определение содержания компонентов
системы активации плазминогена (uPA, tPA, PAI-1) в опухоли больных коло-
ректальным раком и изучить корреляцию биохимических показателей с ос-
новными клинико-морфологическими характеристиками заболевания. - Определить прогностическую значимость биохимических и имму-
ногистохимических особенностей экспрессии белковых маркеров у больных
раком толстой кишки. - Провести статистическую обработку данных и на основании много-
факторного анализа результатов исследования выделить значимые и незави-
симые прогностические показатели при раке толстой кишки.
Научная новизна.
Проведен комплексный клинический, морфологический и
биохимический анализ современных молекулярно-биологических маркеров у
больных раком толстой кишки, таких как протелитические ферменты и ком-
поненты внеклеточного матрикса, факторы неоангиогенеза и апоптоза.
Обнаружена повышенная экспрессия ММР-9 в ткани опухоли больных
раком толстой кишки у 48,7% пациентов. При этом, частота выявления высо-
кой экспрессии белка достоверно повышалась до 80% у больных при мета-
стазах в печени, при низкой степени дифференцировки опухоли (80%) и при
наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах (82,4%).
У 57,2% больных раком толстой кишки выявлена низкая экспрессия
коллагена IV типа в опухоли, причем частота выявления низкой экспрессии
белка достоверно повышалась у пациентов с метастазами в печени (85%),
при низкой степени дифференцировки опухоли (76%), при выраженной глу-
бине инвазии в стенку кишки (75%), а также при наличии инвазии клеток ра-
ка в кровеносные сосуды (86,3%).
Обнаружено что уровень ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки был достоверно выше по сравнению с контролем. Причем, достоверно более высокое содержание VEGF выявлено в сыворотке крови больных при местнораспространенной и IV стадии колоректального рака, тогда как концентрация VEGF у больных раком толстой кишки при I и Па стадиях опухоли не отличалась от содержания маркера у практически здоровых людей.
Содержание маркера достоверно повышалось при увеличении глубины инвазии опухоли в стенку кишки и при наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах. Содержание VEGF при низкой степени дифференцировки колоректального рака было достоверно выше, чем при высокой. Одновременно с увеличением концентрации VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки обнаружено достоверное повышение в опухоли уровня неблагоприятно высокой экспрессии ММР-9 и одновременно низкая экспрессия коллагена IV типа.
Впервые обнаружено, что sFas выявлялся в 2 раза чаще у больных ко-
оректальным раком по сравнению с контролем, а его содержание в сыво-
ротке крови практически здоровых людей было ниже, чем у больных. При
этом, уровни sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки зависели
от стадии заболевания, хотя при I стадии не отличались от содержания мар-
кера у практически здоровых людей. Достоверно выше было содержание sFas
при значительной глубине инвазии, при наличии инвазии в кровеносные со-
суды, при неблагоприятных уровнях экспрессии белков ММР-9 и коллагена
IV типа.
Обнаружено, что содержание uРА и tPA в ткани опухоли больных ра-
ком толстой кишки было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой.
При этом, уровни uРА и tPA в ткани первичной опухоли зависели от ряда
клинико-морфологических характеристик опухоли.
Полученные данные свидетельствуют о том, что новый подход к про-
гнозированию клинического течения колоректального рака основан на ис-
пользовании комплексного анализа согласованных изменений экспрессии изученных молекулярно-биологических маркеров в опухоли и сыворотке крови больных с целью определения связи данных показателей с инвазивным и метастатическим потенциалом опухоли, а стало быть, и выживаемостью пациентов. На основании исследования молекулярно-биологических характеристик колоректального рака разработаны критерии, позволяющие идентифицировать случаи с повышенным риском развития отдаленных метастазов.
Впервые при раке толстой кишки изучена корреляция между экспрессией белков базальных мембран, факторов неоангиогенеза, апоптоза, активностью матриксных металлопротеиназ и компонентов системы активации плазминогена. Изучение особенностей экспрессии белковых маркеров в опухоли и сыворотке крови больных колоректальным раком позволило уточнить некоторые патогенетические механизмы прогрессирования опухоли.
Практическая значимость.
На основе анализа некоторых молекулярно-биологических характери-
стик опухоли определены критерии для выявления наиболее прогностически
неблагоприятных случаев и предрасположенности, больных колоректальным
раком к развитию метастазов. Так, показатели общей выживаемости больных
колоректальным раком при высоком уровне экспрессии ММР-9 в первичной
опухоли в 3 раза достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка, а 5-
етняя безрецидивная выживаемость пациентов ниже в 1,5 раза. Показатели
общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки зависели от
уровня исходной концентрации ключевого активатора неоангиогенеза VEGF
в сыворотке крови и при высоких его значениях (от 800 пг/мл и более), они
были достоверно ниже, чем при значении VEGF менее 400 пг/мл. При этом,
высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли больных колорек-
тальным раком был связан с повышенными исходными уровнями VEGF в
сыворотке крови. Общая 5-летняя выживаемость больных колоректальным
раком при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была досто-
верно ниже. Кроме того, обнаружено, что безрецидивная выживаемость
больных раком толстой кишки достоверно различалась между больными по пороговому уровню 3 нг/мг белка для иРА, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг
белка для PAI-1. Многофакторный анализ выявил наиболее неблагоприятные
сочетания маркеров при оценке общего прогноза рака толстой кишки: ММР-
9-коллаген IV типа, MMP-9-uPA, MMP-9-PAI-1, коллаген IV типа-PAI-l и
при прогнозе отдаленных метастазов MMP-9-sFas.
Таким образом, настоящее исследование представляет практический
интерес для оценки послеоперационного прогноза больных раком толстой
кишки и выделения групп повышенного риска развития метастазов и реци-
дивов, требующих дополнительного лечения или более тщательного динами-
ческого наблюдения.
Апробация работы.
Апробация диссертации проведена на совместной научной конферен-
ции с участием сотрудников кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики Московского государственного медико-стоматологического
университета, лаборатории клинической биохимии, хирургического отделе-
ния проктологии, отдела патологической анатомии опухолей человека НИИ
клинической онкологии ГУ Российского онкологического научного центра
им. Н.Н.Блохина РАМН 12 июня 2008г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 научных
работ, в том числе в изданиях, рекомендуемых ВАК - 7 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 177 стра-
ницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и ме-
тодов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, обсуж-
дения полученных результатов, выводов и практических рекомендаций.
Текст иллюстрирован 58 таблицами и 23 рисунками. Указатель литературы
содержит 74 работ отечественных и 186 зарубежных авторов.
Положения, выносимые на защиту;
- Наиболее высокие уровни экспрессии ММР-9 выявлены в опухоли у пре-
обладающего большинства больных раком толстой кишки при поздних
стадиях заболевания, при низкой степени дифференцировки опухоли, а также при наличии инвазии карциномы в кровеносных сосудах. При этом, общая 5-летняя выживаемость больных раком толстой кишки при высоком уровне экспрессии ММР-9 достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка. - Низкий уровень экспрессии коллагена IV типа достоверно чаще выявляли
в опухолях у больных колоректальным раком при распространенном
процессе, при низкой степени дифференцировки опухоли, при выражен-
ной глубине инвазии опухоли в стенку кишки, а также при наличии инва-
зии опухоли в кровеносных сосудах. Показатели общей 5-летней выжи-
ваемости больных с низкой экспрессией коллагена IV типа в опухоли бы-
и достоверно ниже, чем при высокой экспрессии маркера. - Исходная концентрация ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в
сыворотке крови больных раком толстой кишки была достоверно выше по сравнению с практически здоровыми людьми. При этом, уровень маркера
достоверно повышался в сыворотке крови больных с увеличением глуби-
ны инвазии опухоли в стенку кишки, при прорастании опухоли в крове-
носные сосуды, при низкой степени дифференцировки опухоли.
- Самые низкие показатели общей 5-летней выживаемости отмечены среди
больных раком толстой кишки с высокими уровнями VEGF (от 800 пг/мл
и более). При этом, высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опу-
холи был связан с повышенными исходными показателями VEGF в сыво-
ротке крови, тогда как при низких исходных значениях VEGF чаще выяв-
яли высокую экспрессию коллагена IV типа в первичной опухоли. - Почти в 2 раза чаще sFas выявляли в сыворотке крови больных колорек-
тальным раком, а его уровни были достоверно выше по сравнению с прак-
тически здоровыми людьми, при этом общая 5-летняя выживаемость
больных раком толстой кишки при уровнях sFas в сыворотке крови от 10
нг/мл и более была достоверно ниже. - Содержание uРА и tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки
было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой и зависело от ос-
новных клинико-морфологических характеристик заболевания, а именно, распространенности опухолевого процесса, степени дифференцировки опухоли, глубины прорастания в стенку кишки и кровеносные сосуды. - Безрецидивная выживаемость больных колоректальным раком достовер-
но различалась по порогу уровню 3 нг/мг белка для uРА, 2 нг/мг белка для
tPA и 2 нг/мг белка для PAI-1. - Выявлены наиболее неблагоприятные сочетания маркеров при оценке об-
щего прогноза у больных раком толстой кишки: ММР-9/коллаген IV типа,
MMP-9/uPA, MMP-9/PAI-1, коллаген IV типа/PAI-l и при прогнозе отда-
енных метастазов - MMP-9/sFas.
Содержание диссертации
Материал и методы исследования
Общая характеристика больных раком толстой кишки. В исследо-
вание включено 187 больных раком толстой кишки в возрасте от 34 по 79
ет, проходивших обследование и лечение в ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина
РАМН в период с 1986 по 2006 гг. и наблюдавшихся после окончания лечения не менее двух лет. Количество больных мужского и женского пола составило 86 (46%) и 101 (54%), соответственно, средний возраст пациентов - 60,50,8 лет, медиана - 62 года. Средний возраст больных мужчин и женщин не различался и составил 60,81,0 и 60,21,1 лет, соответственно.
Распределение больных раком толстой кишки с учетом стадии заболевания представлено в таблице 1. Как видно из данных, приведенных в таблице 1, в группе больных в IVb стадии количество пациентов мужского и женского пола было примерно равным (55 мужчин и 50 женщин), тогда как в группах пациентов с более ранними стадиями - преобладали женщины. Минимальный средний возраст был характерен для больных раком толстой кишки IV стадии.
Таблица 1.
Распределение больных раком толстой кишки
с учетом стадии заболевания
Стадия | Кол-во | Частота (%) | Пол (абс.) | Возраст, годы |
больных | м/ж | (Мт) | ||
I | 3 | 1,6 | 0/3 | 63,33,0 |
Па | 9 | 4,8 | 3/6 | 64,41,6 |
IIb | 29 | 15,5 | 13/16 | 65,81,5 |
IIIa | 11 | 5,9 | 4/7 | 64,23,0 |
IIIb | 21 | 11,2 | 8/13 | 59,32,4 |
IVa | 9 | 4,8 | 3/6 | 58,83,2 |
IVb | 20 | 10,7 | 6/14 | 59,92,0 |
IVb с резекцией | 85 | 45,5 | 49/36 | 58,31,2 |
печени | ||||
Всего: | 187 | 100 | 86/101 | 60,50,8 |
Все больные раком толстой кишки подвергнуты хирургическому лече-
нию различного объема: право/левосторонняя гемиколэктомии, резекции
сигмовидной, поперечно-ободочной, прямой кишки.
Отметим, что у 141 (75,4%) больного раком толстой кишки выявлены
единичные и множественные регионарные метастазы в лимфатических узлах.
У 98 (52,4%) пациентов были обнаружены метастазы в печени. При этом, 85
пациентам выполнена резекция печени по поводу метастазов, эти пациенты
выделены нами в отдельную группу с целью анализа прогноза заболевания.
Клинико-морфологическую характеристику больных раком толстой
кишки, вошедших в исследование, проводили в соответствии с Международ-
ной гистологической классификацией опухолей кишечника ВОЗ (1989). Для
определения гистологического типа и варианта строения опухоли, степени ее
дифференцировки, глубины инвазии в кишечную стенку, наличия сосудистой
инвазии изучали парафиновые срезы, окрашенные гематоксилином и эози-
ном. Слизеобразование оценивали с помощью окраски альциановым синим
по Крейбергу. Исследовали также наличие участков некроза, лимфоидной и
воспалительной инфильтрации в опухоли.
При гистологическом исследовании материала у всех больных были
диагностированы аденокарциномы, которые были представлены различными вариантами строения: железистым, папиллярным, трабекулярным и солидноалвеолярным. Из 187 больных раком толстой кишки у 124 (66,3%) пациентов наблюдали железистый вариант строения опухоли, у 43 (23,0%) - преобладали папиллярные структуры, у 7 (3,7%) - выявлен трабекулярный вариант строения аденокарциномы, у 13 (7%) - опухоль была представлена солидными или солидно-альвеолярными структурами.
Высоко дифференцированные аденокарциномы выявлены у 24 (12,8%)
пациентов, умереннодифференцированные - у 138 (73,8%) больных, низко-
дифференцированные - у 25 (13,4%) пациентов.
Опухоли больных раком толстой кишки имели различную глубину ин-
вазии в кишечную стенку: прорастание слизистого и подслизистого слоев наблюдали у 6 (3,2%) больных, врастание опухоли в мышечную оболоч-
ку - у 21 (11,2%) пациента, прорастание всех слоев стенки кишки - у
61 (32,6%) больного, опухоль прорастала все слои и врастала в жировую
клетчатку - 87 (46,5%) пациентов. Глубина инвазии была достоверно свя-
зана со стадией заболевания (р=0,0001). Прорастание опухоли в соседние ор-
ганы и ткани обнаружили у 12 (6,6%) больных раком толстой кишки.
Важной клинико-морфологической характеристикой рака толстой
кишки является наличие у больного инвазии опухоли в кровеносные и лим-
фатические сосуды. У 51 из 187 (27,3%) больных раком толстой кишки обна-
ружена сосудистая инвазия в первичной опухоли. Существенное повышение
частоты выявления сосудистой инвазии (более чем у половины больных) об-
наружено у больных раком толстой кишки при 1ПЬ и IV стадиях по сравне-
нию с более ранними стадиями заболевания.
Слизеобразование в той или иной степени выраженности выявлено в
опухолях 61 из 107 пациентов (57%), страдающих раком толстой кишки, при
этом частота его обнаружения не была связана со стадией заболевания.
Методы определения иммуногистохимических маркеров. Опреде-
ение иммуногистохимических показателей содержания белковых маркеров в опухоли больных раком толстой кишки проведено в лаборатории гистохимии и электронной микроскопии НИИ клинической онкологии ГУ Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН.
Таблица 2.
Характеристика антител
Антиген | Антитело, | Фирма | Рабочее | Функция белка |
клон | разведение | |||
ММР-9 | Mouse mAb | Novocastra | 1 :80 | Фермент внеклеточно- |
15W2 | го матрикса | |||
Коллаген | Mouse mAb | Novocastra | 1 :200 | Компонент базальных |
IV типа | РИМ- 12 | мембран |
Иммуногистохимическое исследование белковых маркеров в опухолях
больных раком толстой кишки выполняли на серийных парафиновых срезах
с помощью биотин-стрептавидинового иммунопероксидазного метода с при-
менением антител к ММР-9 и коллагену IV типа (фирма Novocastra, Вели-
кобритания). Характеристика использованных в исследовании антител дана в
таблице 2.
Для иммуногистохимического окрашивания образцы тканей рака тол-
стой кишки и пограничных с опухолью участков слизистой оболочки толстой
кишки фиксировали в 10% забуференном формалине (рН 7.2), проводили по
спиртам и ксилолам, заливали в парафин и готовили серийные срезы толщи-
ной 3-5 мкм, которые наносили на стекла с адгезивным покрытием (Polysine
Menzel-Glaser). Срезы депарафинировали и регидратировали по стандартной
схеме. Для демаскировки антигенов проводили предварительную обработку
парафиновых срезов в микроволновом режиме при мощности 650W 2 раза по
5' с использованием восстанавливающего раствора рН 6,0 (фирма Dako,
Дания) с перерывом 2' между процедурами для охлаждения. Для выявления
коллагена IV типа дополнительно проводилась обработка трипсином (фирма
Dako, Дания) в течение 30". Срезы инкубировали с первичными антитела-
ми на протяжении 18 часов при +4С. В качестве вторичных антител и пероксидазного комплекса использовали стандартный набор реагентов LSAB + Kit(фирма Dako, Дания). Для визуализации реакции применяли раствор диаминобензидина DAB+ (фирма Dako, Дания). Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера. Контрольный срез оставляли без первой инкубации.
Оценка реакции проводилась полуколичественным методом с учетом
интенсивности окрашивания и количества антиген-позитивных клеток, кото-
рые в совокупности определяли уровень экспрессии белковых маркеров (вы-
сокий или низкий). Иммуногистохимическая реакция оценивалась как нега-
тивная (л- - нет реакции), слабопозитивная (л+ - <10% окрашенных кле-
ток), умереннопозитивная (л++ - >10% клеток средней интенсивности окра-
ски) и сильнопозитивная или сверхэкспрессия (л+++ - >10% клеток высокой интенсивности окраски). Для дальнейшего сравнительного иммуногистохи-
мического исследования опухолей выделяли два основных уровня иммуноре-
активности: низкий уровень, включающий опухоли с отсутствием реакции и
слабопозитивной экспрессией (-/+) и высокий уровень, включающий опухо-
и с умеренной реакцией и сверхэкспрессией маркеров (++/+++).
Для каждого антигена оценивали тип специфического окрашивания,
который зависел от локализации продукта реакции в клетках или строме
опухоли. Специфическую реакцию маркеров в волокнах и клетках стромы
опухолей расценивали как позитивную или негативную. Иммунореактив-
ность коллагена IV типа выявляли по модели экспрессии белка в базальных
мембранах опухолей.
Методы определения биохимических маркеров. Определение био-
химических показателей активности белковых маркеров в опухоли и сыво-
ротке крови больных раком толстой кишки проведено в лаборатории клини-
ческой биохимии НИИ клинической онкологии ГУ Российского онкологиче-
ского научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН.
Для биохимического исследования VEGF и sFas использовали образцы
сыворотки крови больных раком толстой кишки, включенных в исследова-
ние, и в качестве контроля - образцы сыворотки крови 60 практически здоро-
вых людей (30 мужчин и 30 женщин) в возрасте 19-70 лет (средний возраст - 61,38,6года).
Кровь для определения концентрации VEGF и sFas у больных РТК до
начала лечения и у практически здоровых лиц брали натощак из локтевой ве-
ны с 8 до 9 часов утра. После свертывания крови пробирки центрифугиро-
вали при 2500xg в течение 10', сыворотку отбирали и хранили при -20С до
проведения исследования.
sFas в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом, раз-
работанным в Институте биоорганической химии им. М.М.Шемякина и
Ю.А.Овчинникова РАН и лаборатории клинической биохимии ГУ РОНЦ им.
Н.Н.Блохина РАМН (С.Г.Аббасова и соавт., 1999, 2007).
Концентрацию sFas определяли с использованием моноклональных ан-
тител против Fas SA-8 (IgGl-k); (8.80.6)xl07, которые сорбировали на
планшетах (Linbro) в 0.05М карбонатном буфере (рН 9.6) в концентрации 5.0
мкг/мл в течение ночи при 4С. Для инактивации свободных центров связы-
вания планшеты инкубировали с 1% раствором бычьего сывороточного аль-
бумина (БСА) в фосфатно-солевом буфере (PBS) (рН7.2) 1ч при 37С. Затем в
планшеты вносили сыворотки. В качестве положительного контроля в каж-
дый планшет вносили последовательные двукратные разведения полнораз-
мерного рекомбинантного Fas от 40.0 до 0.15 нг/мл. Планшеты инкубирова-
и 1.5 ч при 37С. После инкубации планшеты 6 раз интенсивно промывали
раствором PBS, содержащим 0.1% Tween 20 (лSigma, США) (буфер для от-
мывки). Процедуру отмывки далее повторяли после каждой стадии теста.
После отмывки в планшеты вносили биотинилированные моноклональные
антитела против Fas SA-7 (IgGl-k); (9.521.4)хЮ8 в концентрации 12 мкг/мл
в буфере для отмывки, содержащем 0.1% БСА. Планшеты с биотинилиро-
ванными антителами инкубировали 2 ч при 37С или ночь при 4С. Затем в
планшеты вносили раствор стрептавидин-пероксидазы (лAmersham) в рабо-
чем разведении в буфере для отмывки. Планшеты инкубировали 1ч при 37С.
Далее в планшеты вносили свежеприготовленный раствор 0.04% ортофени-
ендиамина в 50мМ цитрат-фосфатном буфере (рН 5.0), содержащем 0.03%
перекиси водорода. Планшеты инкубировали 15-20' при комнатной темпера-
туре до развития окраски. Реакцию останавливали добавлением в каждую
унку 50 мкл 10% серной кислоты, оптическую плотность измеряли по длине
волны 492нм на спектрофотометре MR 700 Microplate Reader (лDynatech
Labs). Концентрацию sFas определяли по калибровочной кривой, соответст-
вующей каждому планшету.
Концентрацию VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки
определяли иммуноферментным методом с использованием реактивов фир-
мы DRG (США).
Определение uPA, tPA, PAI-1 в опухоли проводили иммунофермент-
ным методом с использованием наборов реактивов, разработанных в лабора-
тории проф. T.Benraad'a (г. Ниймеген, Нидерланды).
Кусочки опухолевой ткани доставляли на льду и сразу же подвергали
гомогенизации в лаборатории клинической биохимии НИИ клинической он-
кологии ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. Перед гомогенизацией ткань
тщательно очищали от участков некроза и жира, взвешивали, а затем измель-
чали и растирали в жидком азоте. Полученный порошок переносили в цен-
трифужные пробирки, помещенные в ледянную баню и добавляли TED-
буфер (10 мМ Трис-НС1, 1,5 мМ ЭДТА, 0,5 мМ дитиотреитол; рН 7,4), со-
держащий 10% глицерина (по объему), из расчета 1 мл буфера на 100мг тка-
ни. Гомогенат центрифугировали 30' (центрифуга Optima TM-TLC,
Beckman, США). Надосадочную жидкость (цитозоль) использовали для
определения концентрации белка, а аликвоты по 0,5 мл замораживали в по-
иэтиленовых пробирках и хранили при -70С до определения концентрации
соответствующих маркеров (не более 1 месяца). Порядок проведения анализа
был одинаков для всех наборов: по 0,1мл растворов стандартов (лунки А].2-
Gi-2) и разведенных цитозолей инкубировали при +4С в течение ночи. Про-
мывали 4 раза и добавляли в лунки по 0,1мл рабочих растворов соответст-
вующих "фиксирующих" антител. Инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. Промывали и добавляли в каждую лунку по 0,1мл рабочего раствора детекторных антител. Инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. Промывали и добавляли в лунки по 0,1мл раствора субстрата. Инкубировали в течение 30' в темноте при комнатной температуре. Останавливали реакцию, добавляя в каждую лунку по 0,1 мл 1М H2SO4. Измеряли оптическую плотность растворов в лунках при 492/620нм. Измерения проводили на автоматическом универсальном ридере для микроплашек ELx-SOO фирмы Bio-Tek Instruments Inc. (США). В соответствии с инструкциями производителя, обработку результатов измерений проводили по формуле Y^a+bX+cX , где X - концентрация анализируемого белка (нг/мл), a Y - оптическая плотность при 492нм. При окончательных расчетах учитывали десятикратное разведение цитозолей и выражали концентрации анализируемых белков в нг/мг цитозольного белка.
Статистический анализ результатов исследования. Математический
анализ полученных результатов проводили с использованием пакета стати-
стических программ SPSS 7.0 for Windows и Microsoftо Office Excel 2003.
Рассчитывали среднее значение показателей, стандартную ошибку среднего,
а также их медианы. Определение достоверности различий частот признаков
в изучаемых группах проводили с использованием критерия %. Различия ме-
жду показателями считались статистически значимыми при < 0,05.
Анализ прогностической значимости содержания маркеров и построе-
ние кривых выживаемости проводили методом Каплан-Майера [Kaplan E.L.,
Meier P. // J. Am. Stat. Assn. - 1958. - Vol.53. - p.457-481]. Достоверность различий в выживаемости оценивали с помощью "Лог-ранк теста" ("Log-rank test"). Многофакторный анализ проводили методом регрессионного анализа по Сох Proportional hazard (Cox) regression model). На основе данных однофакторного анализа проведен многофакторный анализ прогностической значимости комплекса клинико-морфологических признаков с учетом показателей экспрессии биохимических и иммуногистохимических маркеров.
Результаты исследования и их обсуждение
Иммуногистохимические и биохимические маркеры в опухоли
и сыворотке крови больных раком толстой кишки
Содержание ММР-9 в опухоли больных раком толстой кишки.
Экспрессия ММР-9 определена в первичной опухоли у 187 больных раком
толстой кишки. Больные раком толстой кишки по уровню экспрессии ММР-9
разделились примерно поровну. Так 51,3% пациентов были с низкой экс-
прессией ММР-9 в опухоли и 48,7% пациентов - с высокой экспрессией этого
белка. Накопление фермента в опухоли больных раком толстой кишки про-
исходило в цитоплазме раковых клеток и компонентах стромы вокруг опухолевых комплексов (фибробластах, макрофагах, стенках сосудов, лейкоцитарных элементах). Цитоплазматическая реакция высокой интенсивности часто наблюдалась в низко- и умереннодифференцированных аденокарциномах толстой кишки, а редуцированная или очаговая экспрессия маркера - в структурах высокодифференцированных аденокарцином. Как правило, выявлялось гомогенное окрашивание цитоплазмы раковых клеток (рис. 1).
Интенсивность окрашивания компонентов внеклеточного матрикса не
была связана со степенью дифференцировки опухоли и зависела от характера
стромы и выраженности десмопластической реакции.
Экспрессия протеазы в нормальных тканях толстой кишки была слабо-
позитивной.
Рис. 1. Экспрессия ММР-9 в структурах умеренннодифференцированной
аденокарциномы толстой кишки (х150). Стрептавидин-биотиновый им-
мунопероксидазный метод. Ядра клеток докрашены гематоксилином
Майера.
Экспрессия фермента в опухолях больных раком толстой кишки зави-
села от ряда клинико-морфологических характеристик заболевания. В табли-
це 3 представлены данные об экспрессии ММР-9 в опухоли больных раком
толстой кишки с учетом основных клинико-морфологических признаков бо-
езни.
Отметим, что высокая экспрессия ММР-9 выявлена достоверно чаще в
опухоли пациентов при IVb стадии рака толстой кишки (в 2 раза), при солид-
ном и солидно-альвеолярном гистологическом варианте строении опухоли (в
2 раза), при низкой степени дифференцировки опухоли (в 4 раза), при про-
растании опухолью всех слоев стенки кишки и врастании в жировую клет-
чатку (в 1,7 раза чаще), при наличии инвазии опухоли в сосуды (в 4 раза).
Таблица 3.
Экспрессия ММР-9 в опухоли больных раком толстой кишки
с учетом основных клинических признаков
Признак | Градация | Число больных | Экспрессия ММР-9 | Р | |
+++/++ Высокая | +/-Низкая | ||||
Пол | мужской | 86 | 46 (53,5) | 40 (46,5) | 0,5 |
женский | 101 | 50 (49,5) | 51 (50,5) | ||
Возраст | <60 | 82 | 37 (45,1) | 45 (54,9) | 0,1 |
≥60 | 105 | 59 (56,2) | 46 (43,8) | ||
Стадия | I | 3 | - | 3 (100) | 0,001 |
IIa | 9 | 3 (33,3) | 6 (66,7) | ||
IIb | 29 | 11 (37,9) | 18 (62,1) | ||
IIIa | 11 | 4 (36,4) | 7 (63,6) | ||
IIIb | 21 | 6 (28,6) | 15 (71,4) | ||
IVa | 9 | 3 (33,3) | 6 (66,7) | ||
IVb | 20 | 16 (80) | 4 (20,0) | ||
IVb с р. п. | 85 | 53 (62,4) | 32 (37,7) | ||
Гистологический вариант строения опухоли | железистый | 124 | 60 (48,4) | 64 (51,6) | 0,1 |
папиллярный | 43 | 21 (48,8) | 22 (51,2) | ||
трабек-ный | 7 | 6 (85,7) | 1 (14,3) | ||
солидный | 13 | 9 (69,2) | 4 (30,8) | ||
Степень дифференцировки опухоли | высокая | 24 | 7 (29,2) | 17 (70,8) | 0,001 |
умеренная | 138 | 69 (50,0) | 69 (50,0) | ||
низкая | 25 | 20 (80,0) | 5 (20,0) | ||
Глубина инвазии опухоли | Р1 | 6 | 1 (16,7) | 5 (83,3) | 0,03 |
Р2 | 21 | 11 (52,4) | 10 (47,6) | ||
Р3 | 61 | 24 (39,3) | 37 (60,7) | ||
Р4 | 87 | 54 (62,1) | 33 (37,9) | ||
Наличие инвазии опухоли в сосуды | Да | 51 | 42 (82,4) | 9 (17,7) | 0,0001 |
Нет | 136 | 54 (39,7) | 82 (60,3) | ||
Всего: | 96 (51,3) | 91 (48,7) | |||
Таким образом, экспрессия белка ММР-9 в опухоли достоверно отра-
жала наиболее важные клинические признаки рака толстой кишки (табл. 3).
Содержание коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки. Экспрессия коллагена IV типа определена в опухоли у 187 больных раком толстой кишки. У 42,8% больных раком толстой кишки выявлена высокая экспрессия коллагена IV типа, у 57,2% пациентов - низкая экспрессия белка.
Рис. 2. Экспрессия коллагена IV типа в базальных мембранах вокруг железистых структур и сосудов высокодифференцированной аденокарциномы толстой кишки (х150). Стрептавидин-биотиновый иммунопероксидазный метод. Ядра клеток докрашены гематоксилином Майера. |
В опухолях больных раком толстой кишки коллаген IV типа был выявлен в базальных мембранах вокруг железистых раковых комплексов, а также кровеносных сосудов (рис. 2). Эпителий нормальной слизистой оболочки толстой кишки не был окрашен маркером. Экспрессия белка в части высоко- и умереннодифференцированных аденокарцином толстой кишки была представлена непрерывными линиями или отдельными фрагментами коллаген IV-содержащих базальных мембран.
Эпителий нормальной слизистой оболочки толстой кишки не был ок-
рашен маркером. Экспрессия белка в части высоко- и умереннодифференцированных аденокарцином толстой кишки была представлена непрерывными линиями или отдельными фрагментами коллаген IV-содержащих базальных мембран. В низкодифференцированных опухолях в большинстве случаев контуры базальных мембран не выявлялись, а структуры коллагена IV типа в
большом количестве присутствовали в тонких волокнах внеклеточного мат-
рикса опухоли.
Таблица. 4.
Экспрессия коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки с учетом основных клинических признаков
Признак | Градация | Кол-во больных | Экспрессия Coll IV | Р | |
+++ Высокая | ++ Низкая | ||||
Пол | мужской | 86 | 34 (39,5) | 52 (60,5) | 0,4 |
женский | 101 | 46 (45,5) | 55 (54,5) | ||
Возраст | <60 | 82 | 40 (48,8) | 42 (51,2) | 0,1 |
≥60 | 105 | 40 (38,1) | 65 (61,9) | ||
Стадия | I | 3 | 3 (100) | - | 0,005 |
IIa | 9 | 6 (66,7) | 3 (33,3) | ||
IIb | 29 | 17 (58,6) | 12 (41,4) | ||
IIIa | 11 | 6 (54,6) | 5 (45,5) | ||
IIIb | 21 | 12 (57,1) | 9 (42,9) | ||
IVa | 9 | 3 (33,3) | 6 (66,7) | ||
IVb | 20 | 3 (15) | 17 (85) | ||
IVb с р. п. | 85 | 30 (35,3) | 32 (64,7) | ||
Гистологический вариант строения опухоли | железистый | 124 | 62 (50) | 62 (50) | 0,04 |
папиллярный | 43 | 12 (27,9) | 31 (72,1) | ||
трабек-ный | 7 | 2 (28,6) | 5 (71,4) | ||
солидный | 13 | 4 (30,8) | 9 (69,2) | ||
Степень дифференцировки опухоли | высокая | 24 | 14 (58,3) | 10 (41,7) | 0,049 |
умеренная | 138 | 60 (43,5) | 78 (56,5) | ||
низкая | 25 | 6 (24) | 19 (76) | ||
Глубина инвазии опухоли | 1 | 6 | 5 (83,3) | 1 (16,7) | 0,1 |
2 | 21 | 11 (52,4) | 10 (47,6) | ||
3 | 61 | 28 (45,9) | 33 (54,1) | ||
4 | 87 | 33 (37,9) | 54 (62,1) | ||
5 | 12 | 3 (25) | 9 (75) | ||
Наличие инвазии опухоли в сосуды | да | 51 | 7 (13,7) | 44 (86,3) | 0,0001 |
нет | 136 | 73 (53,7) | 63 (46,3) | ||
Всего: | 96 (51,3) | 91 (48,7) | |||
В таблице 4 представлены данные об экспрессии коллагена IV типа в
опухоли больных раком толстой кишки с учетом основных клинико-
морфологических признаков заболевания. Отметим, что низкая экспрессия
коллагена IV типа выявлялась достоверно чаще в опухоли пациентов при IVa
и IVb стадиях заболевания (примерно в 2-5 раз), при солидном варианте гис-
тологического строения (в 2-3 раза чаще), при низкой степени дифференци-
ровки опухоли (в 3 раза чаще), при прорастании опухолью всех слоев стенки
кишки и жировой клетчатки (в 2-2,5 раза чаще), при наличии инвазии опухо-
и в сосуды (в 6 раз).
Таким образом, экспрессия коллагена IV типа в опухоли достоверно
отражала наиболее важные клинические признаки рака толстой кишки. При
этом, слабая реактивность или отсутствие коллаген IV-содержащих базаль-
ных мембран часто сочетались с повышенной экспрессией ММР-9 в цито-
плазме клеток рака толстой кишки.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой
кишки. VEGF определен в сыворотке крови 187 больных раком толстой
кишки. Содержание маркера колебалось от 100 до 1800 пг/мл, в среднем со-
ставляя 752,226,2 пг/мл, медиана показателя равнялась 700 пг/мл.
В группе практически здоровых людей содержание VEGF в сыворотке
крови в среднем составило 311,418,9 пг/мл, медиана 301 пг/мл и было дос-
товерно ниже, чем в сыворотке крови больных раком толстой кишки
(р=0,0001).
Следует отметить, что содержание VEGF в' сыворотке крови больных
раком толстой кишки по половому признаку не различалось и составило
735,838,0 пг/мл в группе мужчин и 766,136,3 пг/мл в группе женщин.
Анализ содержания VEGF в сыворотке крови больных раком толстой
кишки с учетом стадии заболевания показал, что концентрация маркера от-
ражает стадию опухолевого процесса (рЮ,0001) (табл. 5). При этом концен-
трация VEGF у больных раком толстой кишки I и Па стадии не отличалась от
содержания маркера у здоровых людей и, таким образом, показатель не об-
адал диагностической способностью при ранних стадиях заболевания.
Таблица 5.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки с учетом стадии заболевания
Стадия | Кол-во больных | VEGF, пг/мл (M±m) | Пределы колебания | Медиана, пг/мл |
I | 3 | 220,0±60,0 | 100,0-280,0 | 280 |
IIa | 9 | 375,9±39,2 | 240,0-610,0 | 380 |
IIb | 29 | 509,1±24,0 | 290,0-760,0 | 520 |
IIIa | 11 | 610,5±49,0 | 400,0-910,0 | 600 |
IIIb | 21 | 839,3±66,6 | 420,0-1610,0 | 810 |
IVb | 20 | 957,5±102,9 | 390,0-1780,0 | 930 |
IVa | 9 | 961,1±144,3 | 500,0-1690,0 | 800 |
IVb с резекцией печени | 85 | 820,1±37,0 | 280,0-1800,0 | 780 |
Всего: | 187 | 752,2±26,2 | 100-1800 | 700 |
Медиана содержания маркера достоверно повышалась при увеличении
показателя местной распространенности Т (система TNM) (табл. 6).
Таблица 6.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой
кишки с учетом показателя Т системы TNM
Стадия | Кол-во | VEGF, пг/мл | Пределы ко- | Медиана, |
Т (TNM) | больных | (M±m) | коебания | пг/мл |
1 | 3 | 220,060,0 | 100,0-280,0 | 280 |
2 | 38 | 477,622,3 | 240,0-760,0 | 495 |
3 | 126 | 810,231,5 | 280,0-1800,0 | 770 |
4 | 20 | 988,576,7 | 500,0-1690,0 | 910 |
Всего: | 187 | 752,226,2 | 100-1800 | 700 |
Концентрация маркера в сыворотке крови больных раком толстой
кишки повышалась по мере увеличения количества регионарных метастазов -
показателя N (система TNM), однако все выявленные различия не были ста-
тистически достоверными (р>0,05) (табл. 7).
При наличии у больного раком толстой кишки отдаленных метастазов
в печени содержание VEGF в сыворотке крови было достоверно выше. Отме-
тим, что у больных раком толстой кишки с отсутствием отдаленных метаста-
зов содержание маркера могло быть высоким при значительной распростра-
ненности заболевания (показатель Т3-Т4).
Таблица 7.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой
кишки с учетом показателя N системы TNM
Стадия | Кол-во | VEGF, пг/мл | Пределы | Медиана, |
N (TNM) | больных | (M±m) | Колебания | пг/мл |
0 | 46 | 672,159,3 | 100,0-1690,0 | 540 |
1 | 118 | 740,3131,5 | 280,0-1800,0 | 632,5 |
2 | 14 | 939,374,6 | 700,0-1710,0 | 880 |
3 | 9 | 1026,7174,4 | 780,0-1520,0 | 970 |
Всего: | 187 | 752,2126,2 | 100-1800 | 700 |
Выявлено достоверно более высокое содержание VEGF в сыворотке
крови больных раком толстой кишки в возрасте до 60 лет по сравнению с па-
циентами старше 60 лет (901,9144,0 и 635,3126,6 пг/мл, соответственно)
(р=0,001), что косвенно может свидетельствовать о более агрессивном тече-
нии заболевания у пациентов моложе 60 лет.
Дисперсионный анализ содержания VEGF в сыворотке крови больных
раком толстой кишки показал достоверно более высокие его значения в
группе пациентов с тубулярным вариантом гистологического строения опу-
холи по сравнению с группой больных с солидным гистологическим вариан-
том (р=0,02) (табл. 8). Однако эти гистологические варианты относятся к
редким, в то же время наиболее частые варианты гистологического строения
опухоли не отличались достоверно по содержанию VEGF в сыворотке крови.
Достоверно выше был уровень VEGF у больных раком толстой кишки
с низкой степенью дифференцировки опухоли по сравнению с группой паци-
ентов с высокой степенью дифференцировки опухоли (табл. 9).
Содержание VEGF достоверно повышалось по мере увеличения глуби-
ны инвазии опухоли в кишечную стенку и при наличии инвазии опухоли в
кровеносные сосуды (p=0,001).
Таблица 8.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки
с учетом варианта гистологического строения опухоли
Вариант гистоло- | Количество | VEGF, пг/мл | Пределы | Медиана |
1 | 124 | 751,531,5 | 100,0-1800,0 | 700 |
2 | 43 | 765,156,8 | 290,0-1710,0 | 680 |
3* | 7 | 1067,1178,8 | 500,0-1780,0 | 910 |
4* | 13 | 546,247,3 | 260,0-800,0 | 560 |
Всего: | 187 | 752,226,2 | 100-1800 | 700 |
Примечание: *р=0,02.
Таблица 9.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки
с учетом степени дифференцировки опухоли
Степень диффе- | Кол-во | VEGF, пг/мл | Пределы | Медиана |
Высокая * | 24 | 660,044,8 | 250,0-1000,0 | 690 |
Умеренная | 138 | 747,730,1 | 100,0-17100,0 | 670 |
Низкая** | 25 | 865,692,6 | 350-1800 | 700 |
Всего: | 187 | 752,226,2 | 100-1800 | 700 |
Примечание: *р =0,045.
Таким образом, содержание VEGF в сыворотке крови больных раком
толстой кишки достоверно было связано с определяющими клиническими
признаками - стадией заболевания, глубиной инвазии опухоли, наличием ин-
вазии опухоли в кровеносные сосуды, возрастом больных, степенью диффе-
ренцировки опухоли.
Кроме того, наряду с увеличением концентрации VEGF в сыворотке
крови больных раком толстой кишки обнаружено достоверное повышение в
опухоли уровня неблагоприятно высокой экспрессии ММР-9 и одновременно
низкая экспрессия коллагена IV типа.
В группе из 58 больных раком толстой кишки с одновременно благо-
приятными уровнями ММР-9 и коллагена IV типа содержание VEGF в сыво-
ротке крови было минимальным и составило 658,045,5 пг/мл, напротив, при
одновременно неблагоприятных уровнях этих маркеров (74 пациента) Ч мак-
симальным (823,642,6 пг/мл), различия достоверны (р=0,008). В то же вре-
мя, если уровни экспрессии белков были противоположны, то содержание
VEGF практически не различалось (762,667,5 пг/мл и 750,5163,3 пг/мл)
(р=0,9). Таким образом, у большей части больных раком толстой кишки - 132
(70,6%), изменение VEGF происходит синхронно с такими маркерами как
ММР-9 и коллаген IV типа, что указывает на неблагоприятное течение забо-
евания.
Содержание sFas в сыворотке крови больных раком толстой киш-
ки. sFas определен в сыворотке крови 187 больных раком толстой кишки.
sFas обнаружен у 108 больных (57,8%), его содержание колебалось от 0,8 до
28,9 нг/мл, в среднем составляя 10,10,5 нг/мл, медиана показателя равнялась
9,1 нг/мл.
Таблица 10.
Содержание sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки
с учетом стадии процесса
Стадия | Кол-во | sFas, нг/мл | Пределы | Медиана, |
больных | (M±m) | колебания | пг/мл | |
I | 3(100%) | 1,0+0,1 | 0,8-1,2 | 0,9 |
Па | 5 (55,6%) | 2,80,8 | 1,3-5,6 | 2,1 |
IIb | 14 (48,3%) | 8,70,9 | 4,6-14,0 | 9,1 |
IIIa | 4 (36,4%) | 7,01,0 | 4,7-9,0 | 7Д |
IIIb | 15(71,4%) | 10,61,2 | 5,1-19,4 | 8,0 |
IVb | 13 (65,0%) | 12,31,1 | 6,8-20,4 | 10,6 |
IVa | 4 (44,4%) | 12,94,2 | 7,4-25,4 | 9,3 |
IVb с резекцией | 50 (58,8%) | 11,10,8 | 4,0-28,9 | 9,8 |
печени | ||||
Всего: | 108(57,8%) | 10,10,5 | 0,8-28,9 | 9,1 |
В группе практически здоровых людей содержание sFas в сыворотке
крови выявлено с частотой 28,6%, средний уровень составил 1,20,9 нг/мл,
медиана - 0,9 нг/мл и был достоверно ниже, чем в сыворотке крови больных
раком толстой кишки (р=0,0001).
Анализ содержания sFas в сыворотке крови больных раком толстой
кишки с учетом стадии заболевания показал, что концентрация маркера от-
ражает стадию опухолевого процесса (р=0,0001) (табл. 10).
Однако, частота выявления sFas в сыворотке крови больных раком тол-
стой кишки не была связана со стадией заболевания. При этом концентрация sFas у больных раком толстой кишки I стадии
не отличалась от содержания маркера у практически здоровых людей.
Медиана содержания маркера sFas достоверно повышалась при увели-
чении показателя распространенности Т (система TNM) с 1,0 нг/мл в группе
больных с распространением Т до значения 12,9 нг/мл в группе больных с
распространением Т4 (р=0,001).
Обнаружена выраженная тенденция к повышению концентрации sFas в
сыворотке крови больных раком толстой кишки по мере увеличения количе-
ства регионарных метастазов - показатель N (система TNM) (р=0,06). Отме-
тим, что в группе больных раком толстой кишки с отсутствием регионарных
метастазов в лимфатических узлах могли выявляться высокие значения sFas
(максимальное значение - 25,4 нг/мл) при значительной местной распростра-
ненности заболевания (показатель Т3-Т4).
Таблица 11.
Содержание sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки
с учетом глубины инвазии опухоли
Глубина инва- | Кол-во | sFas, нг/мл | Пределы ко- | Медиана |
зии опухоли | больных | (M±m) | ебания sFas | sFas |
1 | 4 | 1,60,6 | 0,8-3,4 | 1Д |
2 | 9 | 6,41,1 | 2,1-12,1 | 5,0 |
3 | 38 | 9,70,7 | 1,6-19,4 | 9,0 |
4 | 50 | 11,60,8 | 1,3-28,9 | 10,2 |
5 | 7 | 11,12,4 | 7-25,4 | 9,5 |
Всего: | 108 | 10,1+0,5 | 0,8-28,9 | 9,1 |
При наличии у больного раком толстой кишки отдаленных метастазов
в печени содержание sFas в сыворотке крови было достоверно выше (медиа-
на 10,1 нг/мл), чем без таковых (медиана 7,4 нг/мл) (р=0,003).
Cодержание sFas достоверно повышалось по мере увеличения глубины
инвазии опухоли в окружающие ткани (р=0,0001) (табл. 11).
Достоверно выше было содержание sFas в сыворотке крови больных
раком толстой кишки при наличии инвазии опухоли в кровеносные сосуды
(р=0,0008).
Таким образом, содержание sFas в сыворотке крови больных раком
толстой кишки достоверно было связано с основными клиническими призна-
ками - стадией заболевания, глубиной инвазии опухоли, наличием инвазии
опухоли в кровеносные сосуды, возрастом пациентов.
В то же время содержание sFas не было связано со степенью диффе-
ренцировки опухоли, а также с наличием и отсутствием слизеобразования, с
наличием лимфоидной инфильтрации.
Кроме того, обнаружено, что при неблагоприятной (высокой) экспрес-
сии ММР-9 содержание sFas в сыворотке крови больных раком толстой киш-
ки было достоверно выше (р=0,01). При значениях sFas выше 10 нг/мл, почти
у % больных раком толстой кишки обнаружена высокая экспрессия ММР-9.
При неблагоприятной низкой экспрессии белка коллагена IV типа со-
держание sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки достоверно
выше (р=0,02).
В группе из 30 больных раком толстой кишки с одновременно благо-
приятными уровнями ММР-9 и коллагена IV типа содержание sFas в сыво-
ротке крови было минимальным и составило 8,00,9 нг/мл, напротив, при
одновременно неблагоприятных уровнях белков (49 пациентов) - макси-
мальным (11,50,8 нг/мл), различия достоверны (р=0,005). В то же время, ес-
и уровни экспрессии белков были противоположны, то содержание sFas
практически не различалось (10,21,3 нг/мл и 10,01,3 нг/мл) (р=0,9).
Таким образом, у большинства больных раком толстой кишки (73,1%)
изменение sFas в сыворотке крови происходило синхронно с изменением
уровня экспрессии ММР-9 и коллагена IV типа в опухоли.
Содержание uPA, tPA и PAI-1 в ткани опухоли и неизмененной
слизистой оболочке толстой кишки. Иммуноферментное определение со-
держания uPA проведено в ткани опухоли 187 больных раком толстой киш-
ки. Уровни маркера в опухоли колебались от 0,17 до 8,9 нг/мг белка, соста-
вив в среднем 3,50,2 нг/мг белка, медиана была равна 4,0 нг/мг белка. Рас-
пределение маркера отличалось от распределения Гаусса, поэтому в качестве
центральной характеристики использовали медиану.
Содержание uPA в неизмененной ткани (пограничной с опухолью сли-
зистой оболочке толстой кишки) 35 больных раком толстой кишки составило
0,71 0,14 нг/мг белка, медиана - 0,6 нг/мг белка. Различие содержания uPA в
неизмененной и опухолевой ткани больных раком толстой кишки статисти-
чески достоверны (р=0,001). При иммуноферментном определении tPA со-
держание белка в ткани опухоли 187 больных раком толстой кишки досто-
верно отличалось от распределения Гаусса, для анализа различий применяли
непараметрические критерии, в качестве центральной характеристики пока-
зателя применяли медиану. У 89 (47,6%) больных раком толстой кишки со-
держание tPA в ткани опухоли не превышало 2 нг/мг белка, среднее содер-
жание составило 4,3+0,4 нг/мг белка, медиана - 2,3 нг/мг белка. Содержание
tPA в неизмененной ткани 187 больных раком толстой кишки составило 4,980,79 нг/мг белка, медиана - 2,68 нг/мг белка. Различия содержания tPA в
неизмененной и опухолевой ткани больных раком толстой кишки были ста-
тистически недостоверными (р=Ю,18). При иммуноферментном определении
PAI-1 у 9 из 187 (4,8%) больных раком толстой кишки маркер не был выяв-
ен, у 54 (28,9%) его содержание не превышало 0,5 нг/мг белка. Таким обра-
зом, у трети обследованных пациентов содержание маркера было невысоким,
ибо белок полностью отсутствовал в ткани опухоли. Среднее содержание
PAI-1 у 178 больных раком толстой кишки составило 1,60,1 нг/мг белка, ме-
диана - 1,9 нг/мг белка. Содержание PAI-1 в неизмененной ткани 35 больных
раком толстой кишки составило 0,990,1 нг/мг белка, медиана 0,61 нг/мг
белка. Различия содержания PAI-1 в неизмененной и опухолевой ткани боль-
ных раком толстой кишки были статистически достоверными (р=0,001).
Выявлена корреляционная зависимость высокой степени тесноты свя-
занности между содержанием uPA, tPA и PAI-1 в ткани опухоли больных ра-
ком толстой кишки (г=0,76; рЮ,001).
Содержание компонентов системы активации плазминогена в опу-
холи больных раком толстой кишки с учетом клинико-морфологических
признаков заболевания. Оценили содержание основных компонентов сис-
темы плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки с учетом кли-
нико-морфологических признаков заболевания.
При изучении содержания компонентов системы активации плазмино-
гена с учетом возраста больных раком толстой кишки выявлено достоверно
более высокое их содержание в опухоли больных в возрасте до 60 лет по
сравнению с группой пациентов от 60 лет и старшее, что косвенно может
указывать на более агрессивное течение заболевания у пациентов моложе 60
ет.
Наибольший интерес для практикующих врачей представляет изучение
связи показателей системы активации плазминогена в опухолевой ткани
больных раком толстой кишки со стадией заболевания. Выявлено достоверное повышение uPA при увеличении местной распространенности заболевания (Т) - более чем в 10 раз, при наличии отдаленных метастазов (М) - более чем в 4 раза. Обнаружено повышение tPA при увеличении местной распространенности опухолевого процесса (показатель Т), при наличии отдаленных метастазов (М). Выявлено достоверное повышение PAI-1 в первичной опухоли больных раком толстой кишки при увеличении местной распространенности процесса (Т) - более чем в 3 раза, при наличии регионарных метастазов (N) - примерно в 2 раза и отдаленных метастазов (М) - более чем в 3 раза.
Степень дифференцировки опухоли была достоверно связана с содер-
жанием активатора плазминогена uPA в ткани опухоли больных раком тол-
стой кишки. При низкой степени дифференцировки опухоли содержание uPA
и PAI-1 в опухоли было наибольшим, однако достоверные различия обнару-
жены только для uPA.
Гистологический вариант строения опухоли не был достоверно связан
с содержанием компонентов системы активации плазминогена в ткани опу-
холи больных раком толстой кишки. Содержание uPA и PAI- было наиболь-
шим в опухолях с преобладанием железистого варианта строения.
Все показатели системы активации плазминогена в опухоли больных
раком толстой кишки были высокодостоверно связаны с одним наиболее
важным клинико-морфологических фактором заболевания - глубиной инва-
зии опухоли в кишечную стенку (р<0,001).
Обнаружено, что при наличии инвазии опухоли в кровеносные сосуды
содержание uPA и PAI-1 также достоверно повышается.
Наличие слизеобразования, участков некроза, лимфоидной и воспали-
тельной инфильтрации в опухоли не изменяло достоверно показатели содер-
жания компонентов системы активации плазминогена в опухоли больных ра-
ком толстой кишки.
Связь содержания компонентов системы активации плазминогена
с экспрессией ММР-9 и коллагена IV типа в опухоли больных раком
толстой кишки. При неблагоприятных (высоких) уровнях экспрессии ММР-9 содержание uPA в ткани опухоли было достоверно выше, чем при благоприятных (табл. 12).
Таблица 12.
Содержание компонентов системы активации плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки с учетом уровня экспрессии ММР-9
Показатель | Уровень экспрессии ММР-9 | |||||
Высокий +++/++ | Низкий +/- | |||||
N | M±m (медиана) | Пределы колебания | N | M±m (медиана) | Пределы колебания | |
uPA * | 96 | 4,1±0,2 (4,3) | 0,17-8,9 | 91 | 2,9±0,3 (1,6) | 0,17-8,6 |
tPA * | 96 | 5,3±0,5 (4,9) | 0,14-22,1 | 91 | 3,3±0,5 (0,2) | 0,14-19,4 |
PAI-1 * | 49 | 1,9±0,1 (2,1) | 0,05-3,6 | 129 | 1,3±0,1 (1,3) | 0,05-3,5 |
Примечание: *p=0,01.
Таблица 13.
Содержание компонентов системы активации плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки с учетом экспрессии коллагена IV типа
Показатель | Уровень экспрессии коллагена IV типа | |||||
Высокий +++/++ | Низкий +/- | |||||
N | M±m (медиана) | Пределы колебания | N | M±m (медиана) | Пределы колебания | |
uPA * | 96 | 2,9±0,3 (1,5) | 0,17-8,2 | 91 | 3,9±0,2 (4,1) | 0,17-8,9 |
tPA * | 96 | 3,5±0,5 (0,2) | 0,14-19,4 | 91 | 4,9±0,5 (4,0) | 0,14-22,1 |
PAI-1 * | 49 | 1,3±0,1 (1,2) | 0,05-3,5 | 129 | 1,8±0,1 (2,0) | 0,05-3,6 |
Примечание: *p=0,01.
При неблагоприятных (низких) уровнях экспрессии коллагена IV типа содержание компонентов системы активации плазминогена также было достоверно выше (табл. 13).
Связь содержания компонентов системы активации плазминогена в опухоли уровнями белков VEGF и sFas в сыворотке крови больных
раком толстой кишки. Обнаружены корреляционные зависимости средней степени тесноты связанности между содержанием VEGF в сыворотке крови и
иРА в опухоли (г=0,51; р=0,001), а также между VEGF и PAI-1 (г=0,42;
р=001). Важно отметить, что данная корреляционная зависимость выявлена
только в группе больных раком толстой кишки III-IV стадий заболевания.
Содержание sFas в сыворотке крови не было связано с показателями
содержания компонентов системы активации плазминогена в ткани опухоли
больных раком толстой кишки.
Подводя итоги настоящему разделу исследования, следует отметить,
что показатели компонентов системы активации плазминогена, определен-
ные в ткани опухоли больных раком толстой кишки, тесно взаимосвязаны
между собой, отражают основные клинико-морфологические характеристики
рака толстой кишки, но не обладают достаточной информативностью при на-
чальных стадиях заболевания. При этом при поздних (III-IV) стадиях заболе-
вания выявлена корреляционная зависимость между компонентами системы
активации плазминогена и белковыми маркерами: ММР-9, коллаген IV типа
и VEGF.
Отдаленные результаты лечения с учетом содержания иммуногистохи-
мических и биохимических маркеров
Отдаленные результаты лечения проанализированы у 187 больных ра-
ком толстой кишки. Обследованные пациенты прослежены от 2 до 6 лет от
начала проводимого лечения. Из 187 пациентов в течение 1-го года наблюде-
ния после лечения умерло 20 (10,7%) больных, на 2-м году жизни - 29
(15,5%) больных.
Медиана общей выживаемости больных раком толстой кишки состави-
а 76,711,3 мес., то есть примерно 6 лет. 5-летняя общая выживаемость со-
ставила 57,6+4,1%. Анализ функции риска смерти у больных раком толстой
кишки показал, что наибольший риск обнаружен в первый год после прове-
денного лечения, в последующие 5 лет риск смерти неуклонно снижался.
Общая выживаемость больных раком толстой кишки достаточно хоро-
шо изучена. В таблице 14 приведены краткие данные по общей выживаемо-
сти больных раком толстой кишки, включенных в настоящее исследование (в
общей группе и с учетом наиболее важных клинико-морфологических при-
знаков, достоверно связанных с отдаленными результатами лечения).
Так, стадия заболевания была достоверно связана с отдаленными ре-
зультатами лечения больных раком толстой кишки (р=0,0001). У пациентов в
I-IIb стадиях 5-летняя общая выживаемость была 84,5% и выше, а медиана не
была достигнута на 5-летнем сроке наблюдения.
Существенно снижались показатели общей выживаемости у больных
при IIIa стадии (около половины больных умерло в течение 5-лет после про-
веденного лечения). Медиана длительности жизни после проведенного лече-
ния в данной группе больных составила 34,7 мес. (около 3-х лет), а у пациен-
тов в IVb стадии - всего 14,4 мес., то есть чуть более одного года.
Отметим, что при выполнении резекции печени больным раком тол-
стой кишки в IVb стадии медиана выживаемости увеличивалась примерно в 4
раза и приближалась к 5 годам, а 5-летняя общая выживаемость была сопос-
тавима с выживаемостью больных при 1ПЬ стадии.
Вариант гистологического строения опухоли не был достоверно связан
с отдаленными результатами лечения больных раком толстой кишки (р=0,1),
а степень дифференцировки опухоли была достоверно связана с отдаленны-
ми результатами лечения больных раком толстой кишки (р=0,0002). Так, в
группе больных с низкой степенью дифференцировки опухоли медиана вы-
живаемости составила 20,1 мес., а 5-летняя общая выживаемость - 11,29,2%.
Отдаленные результаты лечения больных раком толстой кишки досто-
верно ухудшались при увеличении глубины инйазии опухоли в кишечную
стенку (р=0,0001). Так, при наибольшей глубине инвазии, при прорастании
опухолью всех слоев стенки кишки и врастании в жировую клетчатку медиа-
на общей выживаемости составила всего 33,3 мес., а 3-х летняя выживае-
мость - 38,114,7%.
Высокодостоверно различалась общая выживаемость больных раком
толстой кишки при наличии и отсутствии инвазии опухоли в кровеносные и
имфатические сосуды (р=0,0001). Медианы выживаемости и 5-летняя вы-
живаемость различались в этих группах более чем в 5 раз.
Таблица 14.
Общая выживаемость больных раком толстой кишки
Клинический признак | Градация признака | N | Медиана выживаемости, мес. | Общая выживаемость, % | ||
1-летняя | 3-летняя | 5-летняя | ||||
Вся группа | 187 | 76,7±11,3 | 89,3±2,3 | 70,2±3,4 | 57,6±4,1 | |
Стадия р=0,0001 | I+IIa | 3 | Не достигнута | 100 | 100 | - |
IIb | 29 | Не достигнута | 100 | 92,1±5,3 | 84,5±8,8 | |
IIIa | 11 | Не достигнута | 100 | 90,0±9,5 | 53,3±17,6 | |
IIIb | 21 | Не достигнута | 100 | 80,4±8,8 | - | |
IVa | 9 | 34,7 | 77,8±13,9 | 40±13,4 | - | |
IVb | 20 | 14,4 | 60±11 | 20±8,9 | - | |
IVb с рез.печени | 85 | 54,9 | 88,2±3,5 | 62,7±5,3 | 47,1±6,2 | |
Вариант гистологического строения опухоли | 1 | 124 | 82,4 | 91,9±2,4 | 71,4±4,1 | 60,8±4,8 |
2 | 43 | Не достигнута | 83,7±5,6 | 63,5±7,6 | 52,3±9,4 | |
3 | 7 | 22,8 | 57,1±18,7 | 28,6±17,1 | 0 | |
4 | 13 | Не достигнута | 76,9±11,9 | 57,7±18,8 | 55,4±19,1 | |
Степень дифференцировки опухоли | Высокая | 24 | Не достигнута | 95,8±4,1 | 87,1±7,0 | 64,8±11,0 |
Умеренная | 138 | 83,0 | 89,9±2,6 | 72,0±3,9 | 61,5±4,8 | |
Низкая | 25 | 20,1 | 68,0±9,3 | 30,6±9,8 | 11,2±9,2 | |
Глубина инвазии опухоли в кишечную стенку | Слиз./подслизистый | 6 | Не достигнута | 100 | 100 | - |
Мышечн. | 21 | Не достигнута | 95,2±4,6 | 90,2±6,6 | 78,9±12,1 | |
Все слои | 61 | Не достигнута | 95,1±2,8 | 81,4±5,1 | 65,9±7,3 | |
Жировая клетчатка | 87 | 50,6 | 81,6±4,2 | 55,9±5,4 | 45,8±5,8 | |
Инвазия в сосуды | Есть | 51 | 18,9 | 68,6±6,5 | 24,5±6,4 | 14,4±6,1 |
Нет | 136 | 96,0 | 95,6±1,8 | 85,0±3,1 | 71,9±4,6 | |
Пол и возраст больных раком толстой кишки, наличие слизеобразова-
ния, участков некроза, лимфоидной и воспалительной инфильтрации в опу-холи не были достоверно связаны с отдаленными результатами лечения
больных раком толстой кишки.
Обнаружено, что медиана общей выживаемости при неблагоприятной
высокой экспрессии ММР-9 была в 3 раза меньше, а 5-летняя общая выжи-ваемость в 3,1 раза меньше, чем при благоприятной низкой его экспрессии.
Таким образом, данный белок при иммуногистохимическом определении в
опухоли больных раком толстой кишки обладает выраженной прогностиче-
ской способностью.
Выявлено, что медиана и 5-летняя общая выживаемость при неблаго-
приятной низкой экспрессии коллагена IV типа в опухоли была почти в 3
раза меньше, чем при благоприятной высокой его экспрессии. Таким обра-
зом, данный белок при иммуногистохимическом определении в ткани опухо-
и больных раком толстой кишки также обладает выраженной прогностиче-
ской способностью.
Проанализировали отдаленные результаты лечения больных раком
толстой кишки с учетом содержания VEGF в сыворотке крови. Больные раз-
делены на 3 группы: 1) группа - уровень VEGF в сыворотке крови менее 400
пг/мл; 2) группа - уровень VEGF от 400 до 800 пг/мл; 3) группа - уровень
VEGF 800 и более пг/мл. Отметим, что у пациентов со значениями VEGF,
равными 400-600 пг/мл и 600-800 пг/мл, отдаленные результаты лечения бы-
и сходны и эти пациенты были объединены в одну группу.
Убедительно доказано, что исходные уровни VEGF в сыворотке крови
достоверно связаны с отдаленными результатами лечения больных раком
толстой кишки (р=0,019). Так, неблагоприятными следует считать уровни
VEGF в сыворотке крови выше 400 пг/мл (5-летняя общая выживаемость
снижается в 1,3 раза) и, особенно, выше 800 пг/мл (5-летняя общая выживае-
мость снижается почти в 2 раза). Таким образом, содержание VEGF в сыво-
ротке крови, определенное до начала лечения, может являться фактором про-
гноза и учитываться при выборе объема и методов лечения больных раком
толстой кишки.
Кроме того, показано, что исходный уровень sFas в сыворотке крови
больных раком толстой кишки выше 10 нг/мл также является высокоинфор-
мативным неблагоприятным фактором прогноза заболевания.
Рис. 3. Общая выживаемость больных раком толстой кишки с учетом содержания tPA в ткани опухоли.
Обнаружено, что низкие (менее 0,85 нг/мг белка) уровни uРА в ткани
опухоли больных раком толстой кишки, соответствующие его содержанию в
неизмененной ткани, можно считать прогностически благоприятными. Отме-
тим, что наиболее часто такие уровни выявляли в опухоли больных при 1-ПЬ
стадиях (31 пациент из 36, 86,1%) и реже у больных с III стадией (10 из 32,
31,3%), у больных IV стадии низкие значения uРА в опухоли не были выяв-
ены.
Показано, что высокие (более 2 нг/мг белка) уровни tPA в ткани опухо-
и больных раком толстой кишки можно считать прогностически благопри-
ятными (рис. 3).
Обнаружено, что медиана общей выживаемости больных раком тол-
стой кишки при неблагоприятных значениях PAI-l (>0,5нг/мг белка) соста-
вила немного более 3-х лет, а количество пациентов, проживших 5 лет, со-
кратилось в 1,7 раза по сравнению с больными с благоприятными низкими
значениями PAI-1 (<0,5 нг/мг белка) в ткани опухоли, соответствующими
значениям маркера в неизмененной слизистой.
Многофакторным анализом обнаружено, что из 7 изучаемых показате-
ей независимыми факторами прогноза можно считать ММР-9, коллаген IV
типа и uРА.
Следует также отметить, что только у 6 (3,2%) больных раком толстой
кишки все исследованные биохимические маркеры были неблагоприятными, при этом медиана выживаемости в данной группе пациентов составила 37,9
месяцев. У 6 (3,2%) больных все исследованные маркеры были благоприят-
ными.
Среди наиболее неблагоприятных сочетаний следует выделить:
- высокие значения ММР-9 с низким значением коллагена IV типа
(74 пациента, 39,6%; медиана 23,5 мес., 5-летняя выживаемость 15,75,5%); - высокие значения ММР-9 с высоким значением иРА (80 пациен-
тов, 42,8%; медиана 22,0 мес., 5-летняя выживаемость 20,15,9%); - высокие значения ММР-9 с высоким значением PAI-1 (75 паци-
ентов, 40,1%, медиана 22,0 мес., 5-летняя выживаемость 17,35,7%); - высокие значения коллагена IV типа с высоким значением PAI-1
(82 пациентов, 43,9%, медиана 26,4 мес., 5-летняя выживаемость 25,85,9%).
Эти сочетания можно рекомендовать для применения в клинической
практике с целью определения индивидуального прогноза клинического те-
чения рака толстой кишки.
Тканевые и сывороточные маркеры у больных раком толстой кишки и риск развития метастазов в печени.
Наиболее частой причиной смерти больных раком толстой кишки яв-
яется прогрессирование заболевания в виде метастазов в печени. Развитие
метастазов в печени оценено у 187 больных раком,толстой кишки. Из 187 па-
циентов в течение 1-го года наблюдения после лечения метастазы в печени
развились у 24 (12,8%) больных, на 2-м году жизни - у 19 (10,2%) пациентов.
Медиана безрецидивной выживаемости больных раком толстой кишки
составила 84,73,1 мес. 5-летняя общая выживаемость составила 63,84,8%.
Анализ функции риска развития метастазов в печени у больных раком
толстой кишки показал, что наибольший риск обнаружен в первые два года
после проведенного лечения, в последующие 3 года риск развития метастазов
был существенно ниже и вновь возрастал только на 7 году наблюдения.
В таблице 15 приведены данные по выживаемости без метастазов
больных раком толстой кишки, включенных в настоящее исследование (в
общей группе и с учетом наиболее важных клинических признаков, досто-
верно связанных с отдаленными результатами лечения).
Так, стадия заболевания была достоверно связана с безрецидивной вы-
живаемостью больных раком толстой кишки (р=0,01). При этом у больных при I-IIIa стадиях 3-летняя безрецидивная выживаемость составила 100%.
Существенно снижались показатели безрецидивной выживаемости у боль-
ных при 1ПЬ стадии (5-летняя безрецидивная выживаемость снижалась до
69,714,6%).
В группе больных раком толстой кишки в IVb стадии с резекцией пе-
чени по поводу единичных метастазов опухоли медиана безрецидивной вы-
живаемости была минимальной (33,7 мес.), а 5-летняя безрецидивная выжи-
ваемость составила 29,99,5%.
Таблица 15.
Безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки с учетом основных клинико-морфологических признаков опухолевого процесса
Клинический признак | Градация признака | N | Медиана выживаемости, мес. | Безрецидивная выживаемость, % | ||
1-летняя | 3-летняя | 5-летняя | ||||
Вся группа | 187 | 84,7±3,1 | 86,0±2,6 | 70,3±3,7 | 63,8±4,8 | |
Стадия р=0,01 | I+IIa | 12 | Не достигнута | 100 | 100 | - |
IIb | 29 | Не достигнута | 100 | 100 | 100 | |
IIIa | 11 | Не достигнута | 100 | 100 | - | |
IIIb | 21 | Не достигнута | 89,2±7,2 | 75,4±11,8 | 69,7±14,6 | |
IVa | 9 | Не достигнута | 82,6±10,5 | 74,1±16,1 | - | |
IVb | 20 | Не достигнута | 82,1±9,4 | 70,1±12,7 | - | |
IVb с рез.печени | 85 | 33,7 | 77,0±4,6 | 46,4±6,1 | 29,9±9,5 | |
Степень дифференцировки опухоли | высокая | 24 | Не достигнута | 91,7±5,6 | 77,9±8,8 | 64,9±8,8 |
умеренная | 138 | 84,6 | 87,1±2,9 | 71,9±4,2 | 60,5±10,9 | |
низкая | 25 | 46,1 | 71,3±10,0 | 50,5±12,6 | - | |
Глубина инвазии | слизист. | 6 | Не достигнута | 100 | 100 | - |
мышечн. | 21 | Не достигнута | 95,0±4,9 | 94,2±5,0 | 94,0±5,1 | |
все слои | 61 | Не достигнута | 86,4±4,5 | 81,4±5,1 | 65,9±7,3 | |
жир.клет. | 87 | 62,1 | 80,2±4,4 | 62,0±6,0 | 48,8±7,9 | |
Инвазия в сосуды | есть | 51 | 34,0 | 74,6±6,5 | 43,5±11,4 | 30,4±16,7 |
нет | 136 | 86,4 | 88,8±2,7 | 74,6±3,9 | 68,9±5,1 | |
Вариант гистологического строения опухоли не был достоверно связан
с показателем безрецидивной выживаемости больных раком толстой кишки
(р=0,7). Так, 3-летняя безрецидивная выживаемость составила в группах
больных с опухолями железистого, папиллярного, тубулярного и солидно-
альвеолярного строения рака толстой кишки 69,914,6%, 69,97,7%,
66,719,2% и 72,412,% соответственно.
Выявлена сильная тенденция к различию в показателях безрецидивной
выживаемости больных раком толстой кишки в группах с различной степе-
нью дифференцировки опухоли (р=0,08). Так, в группе больных раком тол-
стой кишки с низкой степенью дифференцировки опухоли медиана безреци-
дивной выживаемости составила 20,1 мес., а 5-летняя безрецидивная выжи-
ваемость составила 11,29,2%.
Большая глубина инвазии опухоли в кишечную стенку достоверно
ухудшала безрецидивную выживаемость больных раком толстой кишки
(р=0,02). Так, при наибольшей глубине инвазии, при прорастании всех слоев
стенки кишки и врастании опухоли в жировую клетчатку, 5-летняя безреци-
дивная выживаемость составила 48,817,9%.
Достоверно различалась безрецидивная выживаемость у больных ра-
ком толстой кишки при наличии и отсутствии инвазии опухоли в кровенос-
ные и лимфатические сосуды (р=0,01). Так, медиана безрецидивной выжи-
ваемости в группе больных с наличием сосудистой инвазии не достигала 3-х лет, а показатель 5 -летняя безрецидивной выживаемости составил
30,416,7%.
Рис. 4. Безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки с учетом уровня экспрессии ММР-9 в опухоли.
Пол, возраст больных раком толстой кишки, наличие слизеобразова-
ния, участков некроза, лимфоидной и воспалительной инфильтрации в опу-
холи не были достоверно связаны с безрецидивной выживаемостью больных
раком толстой кишки.
На рисунке 4 представлены данные безрецидивной выживаемости
больных раком толстой кишки с учетом экспрессии ММР-9 в ткани опухоли
(р=0,001). Так, медиана безрецидивной выживаемости при неблагоприятной
(высокой) экспрессии ММР-9 в опухоли была в 1,5 раза, а 5-летняя - в 1,7
раза меньше, чем при благоприятной (низкой) экспрессии маркера. Таким
образом, данный белок при иммуногистохимическом определении в опухоли
больных раком толстой кишки обладает способностью прогнозировать раз-
витие метастазов в печени.
Показатели безрецидивной выживаемости при неблагоприятно низкой
экспрессии коллагена IV типа в ткани опухоли были почти в 3 раза ниже, чем
при благоприятно высоком уровне его экспрессии. Однако, данный белок
при иммуногистохимическом определении в опухоли больных раком толстой кишки обладает недостаточно выраженной прогностической способностью
относительно раненного развития метастазов в печени.
Показано, что исходные уровни VEGF в сыворотке крови высокодос-
товерно связаны с безрецидивной выживаемостью больных раком толстой
кишки (р=0,0001). Неблагоприятными следует считать уровни VEGF в сыво-
ротке крови более 800 пг/мл, когда показатель 5-летней выживаемости сни-
жается в 2,7 раза, а медиана времени выявления метастазов в печени соста-
вила чуть более 2-х лет. Таким образом, содержание VEGF в сыворотке кро-
ви, определенное до начала лечения, может служить фактором прогноза без-
рецидивной выживаемости и учитываться при выборе объема и методов ле-
чения у больных раком толстой кишки.
Получены высокодостоверные различия в показателях безрецидивной
выживаемости больных раком толстой кишки с учетом исходных уровней
sFas в сыворотке крови (р=0,0001). Показано, что содержание sFas более 10
нг/мл в сыворотке крови больных раком толстой кишки также является вы-
сокоинформативным неблагоприятным фактором прогноза у этой категории
пациентов относительно развития метастазов в печени.
Также выявлено, что уровни uРА в ткани опухоли больных раком тол-
стой кишки менее 3,0 нг/мг белка можно считать благоприятными в оценке
прогнозе риска развития отдаленных метастазов. Высокие (более 2 нг/мг
белка) уровни tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки следует
считать прогностически благоприятными относительно развития метастазов
в печени. Анализ связи содержания PAI-1 в ткани опухоли больных раком
толстой кишки с развитием отдаленных метастазов показал высокодостовер-
ные различия по пороговому уровню маркера равному 2,0 нг/мг белка
(р=0,0001). Медиана безрецидивной выживаемости больных раком толстой
кишки при неблагоприятных значениях PAI-1 (<2,0 нг/мг белка) составила
немного более 2-х лет. Следовательно, высокие значения PAI-1 (более 2,0
нг/мг белка) в ткани опухоли следует считать благоприятным прогностиче-ским фактором относительно развития метастазов в печени у больных раком
толстой кишки.
Многофакторным анализом обнаружено, что из 7 изученных нами по-
казателей независимыми факторами прогноза следует считать ММР-9, sFas и
иРА. Среди наиболее неблагоприятных сочетаний маркеров у больных раком
толстой кишки необходимо выделить: высокие значения экспрессии ММР-9
в первичной опухоли с высокими исходными уровнями sFas в сыворотке
крови (71 пациента, 39,6%, медиана 24,9 мес., 5-летняя безрецидивная выжи-
ваемость 21,215,4%). Сочетание выше указанных маркеров следует реко-
мендовать в клинической практике для определения индивидуального про-
гноза течения рака толстой кишки.
Выводы
- При иммуногистохимическом исследовании в 48,7% опухолей толстой кишки выявили высокий (неблагоприятный) уровень экспрессии ММР-9, при этом частота выявления высокой экспрессии маркера в опухоли достоверно повышалась: при IVb стадии заболевания (80,0%), при низкой степени дифференцировки опухоли (80,0%), при наличии инвазии опухоли в кровеносные сосуды (82,4% больных).
- Выявлено достоверное снижение показателей выживаемости среди больных раком толстой кишки с высокими уровнями экспрессии ММР-9 в опухоли по сравнению с низким содержанием фермента: общая 5-летняя выживаемость примерно в 3 раза, а безрецидивная выживаемость - в 1,5 раза.
- Обнаружили низкий (неблагоприятный) уровень экспрессии коллагена IV
типа в опухоли 57,2% больных раком толстой кишки, при этом частота выяв-
ения низкой экспрессии белка достоверно повышалась: при IVb стадии за-
болевания (85,0%), при низкой степени дифференцировки опухоли (76,0%),
при большой глубине инвазии опухоли в кишечную стенку с прорастанием
всех слоев и врастанием в жировую клетчатку (75,0%), при наличии инвазии
опухоли в сосуды (86,3% больных). - Показатель общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки был достоверно ниже (примерно в 3 раза) при низкой экспрессии коллагена IV типа в опухоли, по сравнению с пациентами с высокой экспрессией маркера, а безрецидивная 5-летняя выживаемости достоверно не различалась между этими группами больных.
- Обнаружен, достоверно высокий исходный уровень ключевого актива-
тора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки
(медиана 700 пг/мл) относительно группы контроля (медиана 301 пг/мл), при
этом концентрация маркера достоверно повышалась: при IV стадии заболе-
вания по сравнению с I и Па стадиями (показатели не отличались от группы
контроля), при низкой степени дифференцировки опухоли по сравнению с
высокой, при увеличении глубины инвазии опухоли в кишечную стенку, дос-
тигая максимальных значений при врастании в жировую клетчатку и при на-
ичии инвазии опухоли в сосуды. - Показатели выживаемости больных раком толстой кишки достоверно
снижались при высоких исходных уровнях VEGF в сыворотке крови (800
пг/мл и более) по сравнению с низкими его значениями (менее 400 пг/мл), а
общая 5-летняя выживаемость составила 46,26,2% и 80,19,1%, соответст-
венно, при этом 5-летняя безрецидивная выживаемость снизилась в 2,5 раза. - Наряду с увеличением концентрации VEGF в сыворотке крови больных
раком толстой кишки обнаружено достоверное повышение в опухоли уровня
неблагоприятно высокой экспрессии ММР-9 и одновременно низкая экспрес-
сия коллагена IV типа. - Обнаружено более частое выявление sFas в сыворотке крови больных раком
толстой кишки (57,8%) по сравнению с практически здоровыми людьми
(28,6%), а содержание маркера было достоверно выше у больных (медиана -
9,1 нг/мл), чем в контроле (медиана - 0,9 нг/мл). При этом показатели sFas
были тесно связаны с основными клинико-морфологическими характеристи-
ками болезни и достоверно повышались при неблагоприятной высокой экс-прессии белков ММР-9 и низкой экспрессии коллагена IV типа в опухоли
(медианы - 10,4 и 10,0 нг/мл, соответственно). - При высоком исходном уровне sFas в сыворотке крови больных раком тол-
стой кишки (10 нг/мл и более) выявлены достоверно низкие показатели вы-
живаемости: общая 5-летняя выживаемость составила 37,67,1% (медиана
25,4 мес.), а безрецидивная - (медиана 18,0 мес.). - Содержание активатора плазминогена урокиназного типа (uРА) и его инги-
битора (PAI-1) в ткани опухоли больных раком толстой кишки было досто-
верно выше, чем в неизмененной слизистой оболочке толстой кишки. Их
уровни достоверно повышались: при IV стадии болезни, при низкой степени
дифференцировки опухоли и ее прорастании всех слоев стенки кишки, при
наличии инвазии опухоли в сосуды, а также при неблагоприятно высоких
уровнях экспрессии ММР-9 и низком содержании коллагена IV типа. - Общая 5-летняя выживаемость больных раком толстой кишки достоверно
уменьшалась: при значениях uРА в ткани опухоли более 0,85 нг/мг белка
(47,84,7%, медиана - 58,9 мес.); при значениях PAI-1 более 0,5 нг/мг белка
(44,35,0%, медиана - 39,1 мес.), при значениях tPA менее 2 нг/мл
(44,15,4%, медиана - 38,8 мес.). Безрецидивная выживаемость больных ра-
ком толстой кишки достоверно различалась при пороговых значениях марке-
ров, которые составляли: для uРА - 3 нг/мг белка; для tPA - 2 нг/мг белка; для
PAI-1-2 нг/мг белка. - Установлены наиболее значимые комбинации маркеров, сочетания которых
указывают на: неблагоприятный прогноз общей выживаемости Ч ММР-
9/коллаген IV типа, MMP-9/uPA, MMP-9/PAI-1, коллаген IV типа/PAI-l; вы-
сокий риск развития отдаленных метастазов - MMP-9/sFas.
Практические рекомендации
На основе анализа некоторых молекулярно-биологических характери-
стик опухоли определены критерии для выявления наиболее прогностически
неблагоприятных случаев и предрасположенности больных колоректальным раком к развитию метастазов. Так, показатели общей выживаемости больных
колоректальным раком при высоком уровне экспрессии ММР-9 в первичной
опухоли в 3 раза достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка, а 5-
етняя безрецидивная выживаемость пациентов ниже в 1,5 раза. Показатели
общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки зависели от
уровня исходной концентрации ключевого активатора неоангиогенеза VEGF
в сыворотке крови и при высоких его значениях (от 800 пг/мл и более) они
были достоверно ниже, чем при значении VEGF менее 400 пг/мл. При этом,
высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли больных колорек-
тальным раком был связан с повышенными исходными уровнями VEGF в
сыворотке крови. Общая 5-летняя выживаемость больных колоректальным
раком при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была досто-
верно ниже. Кроме того, обнаружено, что безрецидивная выживаемость
больных раком толстой кишки достоверно различалась между больными по
пороговому уровню 3 нг/мг белка для uРА, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг
белка для PAI-1. Многофакторный анализ выявил наиболее неблагоприятные
сочетания маркеров при оценке общего прогноза рака толстой кишки: ММР-
9-коллаген IV типа, MMP-9-uPA, MMP-9-PAI-1, коллаген IV типа-PAI-l и
при прогнозе отдаленных метастазов MMP-9-sFas.
Работы, опубликованные по теме диссертации
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Иммуногистохимическое исследование экспрессии Е-кадгерина, -катенина и CD44v6 в клетках первичного рака толстой кишки и его метастазов // Архив патологии. - 2005. - том 67, №6 - c.34-38.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Экспрессия молекул клеточной адгезии Е-кадхерина, β-катенина и CD-44v6 в первичных опухолях и метастазах аденокарциномы толстой кишки // БЭБМ. - 2005. - том 139, №6. - с.675-679.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Экспрессия молекул клеточной адгезии в первичных опухолях и метастазах рака толстой кишки // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием Новые технологии в онкологии (Барнаул, 7-8 июня 2005 г.). - Барнаул. - 2005. - с.219-220.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Экспрессия молекул клеточной адгезии в метастазах аденокарциномы толстой кишки // В материалах VI Всероссийского съезда онкологов (Ростов-на-Дону, 9-14 октября 2005г.). Ростов-на-Дону - 2005. - с.303.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Экспрессия молекулярно-биологических факторов прогноза и метастазирования при раке толстой кишки // В материалах II Международной конференции Молекулярная медицина и биобезопасность (Москва, 20-21 октября 2005г.). - М. - 2005. - с.115.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Прогностическая значимость молекул межклеточной адгезии при раке толстой кишки // В материалах XIII Российского национального конгресса Человек и лекарство (Москва, 3-7 апреля 2006г.). - М. - 2006. - с.116.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Гольдберг В.Е., Кушлинский Н.Е. Иммуногистохимическое исследование межклеточных и клеточно-матриксных взаимодействий в аденокарциномах толстой кишки // Сибирский онкологический журнал. - 2006. - № 3(19). - с.99.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Прогностическая значимость молекул межклеточной адгезии при раке толстой кишки // В тезисах международной научно-практической конференции Ведущий многопрофильный госпиталь страны: основные функции, достижения и направления развития (Москва, 1-2 июня 2006г.) // Вопросы клинической онкологии и онкогематологии. - М. - 2006. том 1-2, №6. - с.169.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Значение системы межклеточной и клеточно-матриксной адгезии в метастазирующих аденокарциномах толстой кишки // В материалах Российской научно-практической конференции с международным участием: Современные методы лечения онкологических больных: достижения и неудачи (Барнаул, 4-5 июля 2006г.). - Барнаул. -2006. - с.182-183.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Молекулярные маркеры инвазии и метастазирования при раке толстой кишки // В материалах IV съезда онкологов и радиологов СНГ (Баку, 28 сентября - 1 октября 2006г.). - Баку. - 2006. - с.41.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Особенности экспрессии матриксных металлопротеиназ в аденокарциномах толстой кишки и их метастазах // В материалах Х Российского онкологического конгресса (Москва, 21-23 ноября 2006г.). - М. - 2006. - с.217.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Молекулы межклеточной адгезии как факторы инвазии и метастазирования при раке толстой кишки // Молекулярная медицина. - 2007. - №1 - с.50-54.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Прогностическая значимость экспрессии матриксных металлопротеиназ в аденокарциномах толстой кишки и их метастазах // БЭБМ. - 2007. - том 143, №4. - с.434-438.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Роль компонентов базальных мембран в процессе метастазирования аденокарцином толстой кишки // В материалах XIV Российского национального конгресса Человек и лекарство (Москва, 16-20 апреля 2007г.). - М. - 2007. - с.85.
- Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Влияние матриксных металлопротеиназ на инвазивно-метастатический потенциал клеток рака толстой кишки // В материалах XIV Российского национального конгресса Человек и лекарство (Москва, 16-20 апреля 2007г.). - М. - 2007. - с.85-86.
- Герштейн Е.С., Короткова Е.А., Щербаков А.М., Пророков В.В., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Матриксные металлопротеиназы 7 и 9 и их тканевые ингибиторы 1 и 4 типа в опухолях и плазме крови больных раком толстой кишки // БЭБМ. - 2007. - том 143, №4. - с.438-442.
- Делекторская В.В., Кушлинский Н.Е., Головков Д.А. Молекулярные маркеры инвазии и особенности прогноза рака толстой кишки // Тезисы докладов в материалах XV Российского национального конгресса Человек и лекарство (Москва, 14-18 апреля 2008г.). - М. - 2008. - с.395.
- Делекторская В.В., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Прогностическая значимость содержания белка nm23 в опухолях больных раком толстой кишки // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.-2008.-№5.-с.35-41.
- Делекторская В.В., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Иммуногистохимические, биохимические и ультраструктурные особенности метастазирующих аденокарцином толстой кишки // Клиническая лабораторная диагностика.-2008.-№9.-с.19-20.
Список условных сокращений
ИЛ - интерлейкин
ИФА - иммуноферментный анализ
ИГХ - иммуногистохимическое исследование
КРР - колоректальный рак
НК - натуральные киллеры
МА - моноклональные агонистические антитела
ПКГ - программированная клеточная гибель
РТК - рак толстой кишки
ЦТЛ - цитотоксические лимфоциты
VEGF - фактор роста эндотелия сосудов
FasL - Fas-лиганд
sFas - растворимый Fas
uPA - активатор плазминогена урокиназного типа
tPA - активатор плазминогена тканевого типа
PAI-1 - ингибитор активатора плазминогена 1 типа
MMP-9 - матриксная металлопротеиназа 9
TIMP - тканевой ингибитор металлопротеиназ
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по медицине