Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по разное
Работа выполнена в государственном образовательном учреждении выс
На правах рукописи
шего профессионального образования Казанский государственный технологический университет
Научный консультант: доктор химических наук
, профессор Гамаюрова Валентна Семёновна СЫСОЕВА МАРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА
Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор Гарабаджиу Александр Васильевич доктор химических наук, профессор Мельникова Нина Борисовна ВЫСОКОАКТИВНЫЕ АНТИОКСИДАНТЫ НА ОСНОВЕ ГРИБА доктор химических наук, Inonotus obliquus профессор Гармонов Сергей Юрьевич
Ведущая организация: ИОФХ им. А.Е. Арбузова КН - РАН 15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия
Защита состоится 3 апреля 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 212.080.07 в Казанском государственном технологическом университете по адресу: г.Казань, ул.К.Маркса, 68, зал заседаний Ученого совета.
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского госудоктора химических наук дарственного технологического университета.
Автореферат разослан 3 марта 2009 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук Захаров В.М.
Казань - 20
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
на основе чаги проявляют широкий спектр биологической активности.
Установлено, что они обладают высокими антитоксическими, радио
Актуальность работы. В настоящее время одним из наиболее протекторными, генопротекторными, адаптогенными, иммуномодулиперспективных и актуальных направлений исследований является изу- рующими, антивирусными, антиоксидантными свойствами, регулируют чение природных объектов, имеющих применение в медицине и спо- активность ферментов крови, а также деятельность сердечной, нервной собных обеспечить биологическую безопасность организма человека. и дыхательной систем живого организма.
Существует большая потребность в адаптогенах, иммуномодуляторах, Традиционно используемые формы препаратов на основе чаги, такие антиоксидантах и антитоксикантах на основе сырья природного проис- как: бефунгин, водный экстракт чаги, - имеют ряд недостатков: препахождения. В отличие от синтезированных лекарственных средств, та- раты производятся с высоким содержанием зольных элементов; станкие препараты и биологически активные добавки обладают комплекс- дартизация препаратов осуществляется только по содержанию в них ным действием и редко приводят к осложнениям после применения. ПФК; отсутствует количественная и качественная характеристика био Перспективным объектом для разработки на его основе лекарствен- логически активных соединений входящих в их состав, а также ряд друных препаратов, биологически активных и пищевых добавок, косме- гих недостатков.
цевтических средств различной направленности действия является гриб Согласно литературным данным, культивирование чаги с привлечеInonotus obliquus (Fr.) Pil. (чага). Водное извлечение чаги представляет нием биотехнологических приёмов не приводит к формированию ПФК, собой гидрофильную полидисперсную коллоидную систему. Её дис- аналогичного природному. Возобновление сырья в природных условиях персной фазой и основным действующим компонентом водных извле- является достаточно длительным процессом. Поэтому поиск повышечений чаги, обеспечивающих их терапевтическую активность, счита- ния эффективности препаратов на основе водных извлечений чаги ются хромогены или полифенолы, называемые полифенолоксикарбо- очень перспективен.
новым комплексом (ПФК). В последнее время ПФК чаги отнесён к Традиционные подходы к исследованию водного извлечения чаги не меланинам. Согласно современным воззрениям, меланины представ- позволяют определить структуру золя и его дисперсной фазы - ПФК, а ляют собой глобулы, состоящие из аморфных микрочастиц, которые также состав биологически активных веществ, обеспечивающих тераорганизованы из агрегатов и субагрегатов различной формы и разме- певтический эффект от применения водных извлечений. Эту задачу ров. Такая структура этой биомолекулы определяет биохимические и можно решить, только расширив представления о коллоидной системе биологические свойства меланинов. ПФК/меланин является сложно ор- водного извлечения чаги и структуре её дисперсной фазы - ганизованными природным объектом с не выясненной структурой. В ПФК/меланина. Поэтому разработка новых методов изучения струкего состав входят полимерные (полифенолы, белки, полисахариды) и турной организации золя водного извлечения чаги позволит определить низкомолекулярные (простые фенолы, фенолкарбоновые кислоты, физиологически активные компоненты золя, создать на его основе вывысшие жирные кислоты) соединения и неорганическая компонента. сокодисперсные коллоидные системы, что представляет значительный С давних времён водные извлечения этого гриба и лекарственные научный и практический интерес.
препараты на их основе находят широкое применение в народной и Работа проведена в соответствии с: Пр- 843 от 21.05.06 Приориафицинальной медицине для профилактики и терапии желудочно-ки- тетные направления развития науки, технологий и техники в РФ, по шечных, а также онкологических заболеваний. Поскольку онкологиче- направлениям Живые системы и Индустрия наносистем и наномаские заболевания, лучевая болезнь, атеросклероз и ряд других отно- териалов, с созданием критической технологии по теме Биомедицинсятся к патологиям, вызванным воздействием свободных радикалов, то ские и ветеринарные технологии жизненеобеспечения и защиты челоразработка более эффективных антиоксидантов на основе водных из- века и животных; в рамках научного направления по номенклатуре влечений чаги для профилактики и лечения этих заболеваний является специальностей научных работников Технология биологически активперспективной задачей. ных веществ (код 051818), по научному направлению - Пр-245-0 от В настоящее время в мировом сообществе интерес к этому сырью и 02.12.05 по КГТУ Биологически активные вещества различной этиолопрепаратам на его основе очень велик. Это связано с тем, что препараты 3 гии для производства функциональных БАД к пище, лекарственных ные методики определения физико-химических характеристик полусредств и кормовых добавок. чаемых извлечений, экстрактов и выделяемых соединений.
Цель работы. Разработать теоретические основы и методологиче- Результаты измерений и исследований обрабатывались с применеские подходы получения экстрактов, высокодисперсных коллоидных нием методов математической статистики с использованием пакета систем и ПФК/меланинов из чаги, обладающих высокой антиоксидант- программ STATISTICA 6.0.
ной активностью для создания на их основе новых высокоэффективных Научная новизна работы. Разработан комплексный подход к исслелекарственных и космецевтических препаратов различной направлендованию водного извлечения чаги как сложно организованной коллоности действия.
идной системы.
Достижение поставленной цели требует решения следующих задач:
С помощью химических, физических и биотехнологических методов Х Изучить состав и образование дисперсной фазы (ПФК) золя водполучены и исследованы коллоидные системы водного извлечения ного извлечения чаги, используя химические, физические и биотехночаги, отличающиеся от природных составом, физико-химическими логические методы, и на основании полученных результатов обосносвойствами и антиоксидантной активностью.
вать структурную организацию мицелл ПФК/меланина чаги.
Х Представить теоретическое обоснование процесса реструктурироваПолученные высокодисперсные коллоидные системы и ния сложного гидрофильного золя водного извлечения чаги при примеПФК/меланин отличаются от коллоидной системы водного извлечения нении химических, физических воздействий, а также ферментативного чаги более высокой антиоксидантной активностью.
гидролиза.
Установлены закономерности связи антиоксидантных свойств Х Определить связь антиоксидантной активности и состава ПФК/меланина с его структурой и размером частиц.
биологически активных веществ различных классов соединений, нахоВпервые установлено, что фильтрат, полученный после выделения дящихся в золе в свободном или слабосвязанном с дисперсной фазой ПФК с помощью хлористоводородной кислоты, является высокодиссостоянии, с размерами частиц дисперсной фазы и их структурой.
персной коллоидной системой, что позволяет получить ПФК с антиокХ Изучить состав веществ фильтрата, получаемого после выделения сидантной активностью в четыре раза выше, чем ранее выделенный ПФК из водного извлечения чаги.
ПФК.
Х Разработать способы получения высокодисперсных коллоидных Показано, что в золе водного извлечения чаги и фильтрате (после систем на основе водного извлечения чаги, способных обеспечить биоудаления из него ПФК), в свободном и слабосвязанном состоянии с их логическую безопасность организма человека.
дисперсными фазами находятся биологически активные соединения Х Разработать комплексный подход к извлечению из сырья белковой, углеводной, липидной и фенольной природы, отличающиеся ПФК/меланина и других биологически активных соединений, заклюпо составу и количеству.
чающийся в получении нескольких высокоэффективных препаратов на Впервые установлено, что разделение хромогенов водного извлечеоснове водного извлечения чаги, а также спиртовых экстрактов из ния чаги для получения отрицательно и положительно заряженных шрота, остающегося после получения водных извлечений.
фракций, подвижных в электрическом поле, происходит при применеМетоды исследований. Для изучения компонентов золя водного изнии электрофореза.
влечения чаги и полученных на его основе объектов исследования ис Впервые доказано, что на основе сырья чаги можно получить ряд выпользован широкий спектр современных методов, который соответстсокоэффективных антиоксидантов и экстрактов с максимальным извлевует современному состоянию науки и действующей нормативно-техчением биологически активных веществ и ПФК из сырья.
нической документации. Применены современные методы исследоваТеоретическая значимость работы. На основании полученных ния - различные виды хроматографии, электрофорез, потенциометрия, данных и современных теоретических воззрений скорректированы и ИК-спектроскопия, ЭПР, ЯМР релаксации, РСА, электронная спектроразвиты научные представления о структурной организации высокоскопия, кондуктометрия, фотон-корреляционная спектроскопия (ФКС), дисперсной природной коллоидной системы. Разработаны и обоснометоды химического и физико-химического анализа, а также стандартваны методологические основы по реструктурированию коллоидной 5 системы водного извлечения чаги для изменения её дисперсной фазы и - экспериментальные данные по выделению ПФК с применением увеличения антиоксидантных свойств ПФК. хлористоводородной кислоты и спиртового раствора щелочи;
Практическая ценность работы. Получены физико-химические - закономерности изменения антиоксидантных свойств, а также характеристики водных извлечений чаги, ПФК/меланина, позволяющие количественного и качественного состава биологически активных вевыявить особенности их структурной организации. ществ различных классов соединений, находящихся в золе водного из Разработаны способы экстракции чаги с применением комплексонов влечения чаги или фильтрате (после удаления ПФК) в свободном или и гидроокиси натрия, которые позволяют получить ПФК, превышаю- слабосвязанном с их дисперсной фазой состоянии, в зависимости от щие по антиоксидантной активности ПФК, полученных по традицион- способа получения золя или его обработки органическими растворитеным технологиям. лями;
Показана возможность стандартизации лекарственных препаратов на - результаты разделения хромогенов водного извлечения чаги с основе чаги по антиоксидантной ёмкости извлечений из чаги и ПФК. применением зонального электрофореза;
Определён качественный состав и количество белка, углеводов, ли- - теоретические представления о структурной организации золя водного пидов и фенольных соединений, находящихся в золе водного извлече- извлечения и его дисперсной фазы.
ния чаги и фильтрате (после удаления из него ПФК) в свободном и сла- ичный вклад автора состоит в постановке цели и задач исслебосвязанном с дисперсными фазами состоянии, способных обеспечить дований, выборе объектов и методов исследований, непосредственном их терапевтическую эффективность. участии в проведении основных экспериментов, систематизации и ин Разработаны способы обработки водного извлечения чаги органиче- терпретации полученных результатов, формулировании научных полоскими растворителями, позволившие получить высокодисперсные кол- жений и выводов. Вклад автора является решающим во всех разделах лоидные системы и ПФК/меланин с антиоксидантными свойствами, работы.
превышающими указанные свойства у водных извлечений чаги и ПФК. Автор выражает благодарность профессорам В.С. Гамаюровой, Ф.Г.
Разработаны способы комплексной переработки сырья с получением Халитову, Г.К. Будникову и доценту КГУ Г.К Зиятдиновой за помощь в высокоактивных антиоксидантов и повышенным выходом биологиче- выполнении работы.
ски активных веществ и ПФК/меланина. Апробация работы и публикации. Результаты работы доклаРеализация результатов. Полученные результаты могут быть дывались и обсуждались на: II Всероссийской конференции Химия и реализованы на предприятиях фармацевтической, пищевой и космети- технология растительных веществ (Казань 2002 г.); 7-ой и 8- ой Пуческой промышленности, что позволит значительно расширить ассор- щинских школах - конференциях молодых ученых БИОЛОГИЯтимент высокоэффективных препаратов для медицины, продуктов НАУКА ХХI (Пущино 2003 г. и 2004 г); XVII и на XVIII Менделеевфункционального назначения, космецевтических средств и обеспечит ских съездах по общей и прикладной химии (Казань 2003 г., Москва биологическую безопасность населения. 2007 г.); Международной научной конференции Химия, технология и На защиту выносятся: медицинские аспекты природных соединений ( Алматы 2003 г.); III - результаты исследования сырья, водных извлечений чаги и ПФК с Всероссийской конференции Химия и технология растительных веприменением различных методов; ществ (Саратов 2004 г.); III Всероссийской школе-конференции Хи- разработка способов экстракции чаги, в том числе с применением мия и биохимия углеводов (Саратов 2004 г.); II и III Всероссийских гидроокиси натрия, комплексонов, ферментов класса гидролаз, а также конференциях Новые достижения в химии и химической технологии способы экстракции шрота, остающегося после проведения экстракции растительного сырья (Барнаул 2005 и 2007 г.г.); IV Всероссийской начаги водой; учной конференции Химия и технология растительных веществ - экспериментальные данные исследований протеолиза водного (Сыктывкар, 2006 г.); конференциях молодых ученых Пищевые техизвлечения чаги in vitro ферментами желудочно-кишечного тракта; нологии (Казань 2002 - 2008 г.г.). Основные результаты работы из- разработка способов и полученные результаты по обработке золя ложены в 17 статьях, в том числе в 15 рекомендованных ВАК, 46 пубводного извлечения чаги органическими растворителями; ликациях по материалам конференций, 4 патентах на изобретение.
7 Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 8 расположить в следующий ряд: МП< РЕП < РЕМ. Водное извлечение, глав, выводов, библиографического списка и приложения. В тексте полученное РЕМ, характеризуется относительной гидрофильностью и, приведены ссылки на 369 литературных источника. Работа изложена на одновременно, максимально плотной и/или однородной упаковкой ин293 страницах машинописного текста, содержит 63 рисунка, 53 таб- дивидуальных полимерных цепей в ПФК.
ицы. Для подтверждения различия структурной организации ПФК разра Содержание работы ботан простой способ щелочного гидролиза, позволяющий разрушить В первой главе представлен литературный обзор. Рассмотрены его наиболее полно и при этом проанализировать ход гидролиза. Общее особенности биологического вида гриба Inonotus obliquus (Fr.) Pil содержание углеводов в гидролизате ПФК, выделенного из извлечения (чаги). Приведён спектр физиологической активности препаратов на полученного РЕМ, максимально и составляет - 21,62% (РЕП-16,38% и основе чаги. Сделан обзор и анализ существующих и перспективных МП-10,05%). Эти данные, в том числе и ИК спектры анализируемых методов получения водных извлечений чаги, способов исследования ПФК, подтверждают различие их макромолекулярной структуры.
этой коллоидной системы и её дисперсной фазы - ПФК. Показана глу- Согласно полученным результатам, оптимальным способом проведебина исследования биологически активных веществ в чаге, водном из- ния экстракции чаги является ремацерация, при которой водное извлевлечении чаги и в ПФК. чение чаги имеет высокое содержание углеводов и ПФК, низкую зольВо второй главе представлена характеристика сырья чаги (партии ность и высокую антиоксидантную активность. Это извлечение также I-XV, закупленные в аптечной сети), используемого для получения вод- имеет наилучшую оценку среди исследованных коллоидных систем по ных извлечений. Описаны методы и методики получения и исследова- параметру однородности и молекулярной подвижности дисперсной ния водных извлечений чаги и объектов, выделенных в результате при- фазы.
менения химических, физических и биотехнологических способов возС помощью метода ЯМР релаксации проведен анализ сырья, водных действия на коллоидную систему водного извлечения чаги.
извлечений, полученных РЕМ, и ПФК. Показано, что исследованное Третья глава посвящена выбору способов получения водных сырьё по молекулярной подвижности имеет двухкомпонентную струкизвлечений чаги; исследованию физико-химических и антиоксиданттуру. Обе компоненты соответствуют жесткоцепным полимерным форных свойств водных извлечений и ПФК.
мам. В сырье более жесткая компонента составляет около двух третей Показано, что при смене способа экстракции в ряду - ремацерация (в среднем 66%) от общего количества протонсодержащего вещества, а (РЕМ), реперколяция (РЕП), экстракция с механическим перемешиваменее жесткая компонента с более развитым молекулярным движением нием среды (МП) - снижается сухой остаток, содержание углеводов и - приблизительно одну треть общего объема (в среднем 34 %). В ПФК выход ПФК (11,80 9,8 6,8 % соответственно). В водном извлечезаметно возрастает средняя доля полимеров с менее упорядоченной нии, полученном (РЕМ), наблюдается наименьшая зольность (24,1 %), протонсодержащей структурой. На основании полученных результатов что повышает его биологическую значимость. Максимальное значение трудно приписать короткую и длинную компоненты к конкретному антиоксидантной активности (АОА) имеет водное извлечение, полутипу структурных фрагментов полимера в сырье и ПФК, поскольку эти ченное при механическом перемешивании (МП - 39,68; РЕМ - 28,08;
полимеры по-разному организованы в сырье, водной вытяжке и ПФК.
РЕП - 24,22 в кКл/на 100гПФК), что, вероятно, обусловлено содержаИК спектры ПФК, выделенных из водных извлечений, полученных нием в нём низкомолекулярных соединений (фенолов, флаваноидов и РЕМ из разных партий сырья, отличаются соотношением входящих в др.), не связанных с ПФК. Согласно полученным с помощью ЯМР-реих состав карбоксильных групп по сравнению со связанным карбоксилаксации результатам, каждый из применённых способов экстракции, лом. Это подтверждается содержанием зольных элементов в соответстприводит к формированию индивидуальной коллоидной системы с совующем водном извлечении, способствующих формированию золя и ответствующими значениями параметров релаксации. По эффективновлияющих на состав и компоновку структуры ПФК.
сти процесса набухания полимерной компоненты (по объему и энерге Определена АОА водных извлечений чаги, полученных РЕМ из пяттическим затратам), по параметру однородности и молекулярной поднадцати партий сырья (от 10,74 до 39,98 кКл/100г ПФК) и ПФК (от вижности дисперсной фазы, исследуемые коллоидные системы можно 19,27 до 37,24 кКл/100г ПФК). В целом, увеличение содержания ПФК 9 в водном извлечении приводит к снижению его АОА. АОА ПФК в АОА= 27,50,7 кКл/100г ПФК). Частицы с радиусом около 30нм, 15нм водном растворе имеет тенденцию к увеличению по сравнению с АОА и более мелкие отнесены нами к субмицеллам.
соответствующего водного извлечения. Это связано с иной стабилиза- Полученные результаты могут быть использованы для характерицией ПФК и изменением его пространственной структуры в воде по стики поступающего на переработку сырья и его стандартизации, а сравнению с золем водного извлечения чаги. Отличия, обнаруженные в также являются базовыми для перехода к решению задач по повышеспектральных характеристиках ПФК, не влияют на проявление АОА. нию АОА извлечений и ПФК на основе водного извлечения чаги.
Определён размер мицелл ПФК водных извлечений, имеющих близ- В четвёртой главе изложены способы изменения дисперсионной кое содержание сухих остатков, зольности и отличающихся по содер- среды золя в процессе экстракции с использованием растворов комжанию ПФК (10,05 и 13,20%). плексонов, гидроокиси натрия, а также ферментных препаратов.
1Содержание Разработаны два способа проведения экстракции чаги: (1) предваричастиц, % тельное замачивание сырья в растворе комплексона или гидроокиси 100 68 1натрия, (2) применение раствора комплексона в качестве экстрагента.
100 180 Использованы комплексоны - гидроксиэтилендифосфоновая кислота 11(ОДЭФ) и натриевая соль этилендиамин-N,N,N1,N1-тетрауксусной ки194 140 слоты (трилон Б). Экстракция проводилась методами РЕМ и РЕП.
Варьируя время замачивания от 30 минут до тринадцати часов и кон116 центрацию комплексонов от 0.5х10-3 до 0.5 г/л, оценивали извлечения 4 по содержанию в них ПФК. Определены оптимальные условия: время 0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5 Содержание ПФК Содержание ПФК замачивания сырья в растворах комплексонов составило один час, конА Б центрация комплексонов 0.3 г/л.
Содержание ПФК (по оси абсцисс): Содержание ПФК (по оси абсцисс):
Таблица 1 - 0,0017 мг/мл; 2 - 0,0068 мг/мл; 1 - 0,0028 мг/мл; 2 - 0,0053 мг/мл;
Физико-химические показатели водных извлечений чаги, получен3 - 0,11 мг/мл; 4 - 0,43 мг/мл; 3 - 0,03 мг/мл; 4 - 1,08 мг/мл;
ных по способам (1) и (2) с применением комплексонов 5 - 7,00 мг/мл 5 - 8,7 мг/мл Содержание в водной вытяжке Рисунок 1 Эффективный радиус (нм) частиц дисперсных фаз коллоидУсловия Комплек- Сухой Золь- Выход Концентраных систем водных извлечений чаги из сырья партий XI(А) и XII (Б) остаток ность ПФК ция углево экстракции сон дов Критические концентрации мицеллообразования (ККМ) в анализиг г % % руемых коллоидных системах определены по изменению электропроКонтроль*- 1.54 0.79 8.9 2.водности в анализируемых образцах в зависимости от содержания в них РЕП (1) Трилон Б 1.42 0.37 12.6 2.ПФК. Отличие значений ККМ в коллоидных системах водных извлечеРЕП (1) ОДФК 1.22 0.27 12.4 0.ний, полученных из разных партий сырья чаги, свидетельствует об их Контроль** - 1.74 0.41 13.00 2.РЕМ (1) Трилон Б 1.77 0.38 13.60 2.различной организации. В водных извлечениях (рис. 1 А и Б) при конРЕМ (1) ОДЭФ 1.85 0.39 13.20 1.центрации ПФК до и после ККМ происходит изменение размеров часКонтроль** - 1.78 0.46 12.90 2.тиц дисперсной фазы и их содержания в образце. Коллоидная система с РЕМ (2) Трилон Б 1.97 0.55 16.30 3.меньшим размером мицелл ПФК (рис.1А) имеет большее значение РЕМ (2) ОДЭФ 1.61 0.44 14.80 2.АОА (29.37 кКл/100г ПФК) по сравнению с другой коллоидной систеПримечание: * - проведение РЕП водой с предварительным замачиванием сырья в воде;
мой (рис.1Б - 10.74 кКл/100г ПФК). Аналогичная закономерность на- ** - проведение РЕМ водой с предварительным замачиванием сырья в воде блюдается для ПФК (рис.1А, АОА=32.00 кКл/100г ПФК, а рис.1Б, 11 Содержание частиц, % При проведении экстракции РЕП и РЕМ с применением способа (1) лученных по способу (1), в 1,4-2 раза выше (табл.2), чем у ПФК, выдеприрода используемого комплексона мало влияет на изменения анали- ленного из контрольного извлечения.
зируемых компонентов золя (табл. 1). В целом, применение комплексо- С точки зрения практического применения важно, что растворинов по способу (1) приводит к изменению дисперсионной среды: уве- мость в воде высушенных ПФК, полученных экстракцией с применеличивается содержание дисперсной фазы (ПФК) в золях по сравнению нием комплексонов и гидроокиси натрия, выше, чем ПФК полученных с контролем, снижается зольность полученных извлечений. Более ярко РЕМ, и тем более, чем РЕП.
проявляются особенности действия комплексонов при использовании Таблица способа (2). Применение трилона Б увеличивает выход ПФК на 26%, а Физико-химические показатели водных извлечений чаги, полученных ОДФК только на 15% по сравнению с контролем. ОДФК как комплек- по способу (1), с использованием гидроокиси натрия Содержание в водной вытяжке сон, способный образовывать прочные комплексы с щелочноземель- ными металлами в кислой среде (рН водной вытяжки около 5), не- сколько дестабилизирует золь водной вытяжки. Это приводит к сниже- Реагент нию содержания сухого остатка при сохранении показателей зольности и количества углеводов на уровне с контролем.
При применении трилона Б происходит увеличение всех анализируемых параметров водной вытяжки. Известно, что комплексообразование контроль * 1.52 0.65 9.75 1.84 29.40 38.при рН 5 трилоном Б затруднено, так как наиболее прочные комплексы NaOH 1.43 0.54 9.25 1.96 29.16 52.IV им образуются при рН среды 8-9 с двухвалентными ионами. Высокая контроль * 1.60 0.44 11.39 1.86 28.35 27.зольность водной вытяжки может быть обусловлена либо связыванием NaOH 1.42 0.55 8.67 2.16 29.90 51.VIII трилона Б с сырьем и облегчением выхода из него зольных элементов, контроль * 0.97 0.58 9.25 2.30 29.61 37.либо связыванием их в водной вытяжке в комплексные соединения, что NaOH 1.48 0.81 9.25 2.08 29.21 52.IX облегчает их диффузию по градиенту концентраций. ИК спектры ПФК, Примечание: * - проведение РЕМ водой полученных по способам (1) и (2), отличаются от ИК спектра ПФК, выделенного из водного извлечения, преобладанием в них свободных Для изменения дисперсионной среды золя при получении извлечекарбоксильных группы над участвующими в соле и/или комплексооб- ний чаги, на основании содержания в них в качестве субстратов целлюразовании. Это может быть объяснено связыванием зольных элементов лозы - 2.09% и гемицеллюлоз - 12.50%, выбраны микробиологические комплексонами в дисперсионной среде золя. ферментные препараты: Целлюкласт, обладающий выраженной цел Применение комплексонов по способу (2) приводит к увеличе- люлазной активностью (400 ед/г), и Шеарзим, обладающий выранию АОА ПФК, полученных с применением трилона Б, почти в полтора женной пентозаназной активностью (500 ед/г). При применении ферраза (28.80 кКл/100г ПФК), а с применением ОДЭФ(62,03 кКл/100г ментных препаратов в интервале концентраций 0.01-0.1%, найдена их ПФК) - более чем в три раза выше контроля (19,72 кКл/100г ПФК). С оптимальная концентрация (0.01%), позволяющая увеличить выход экспомощью метода ЯМР релаксации показано, что при использовании трактивных веществ по сравнению с контролем. Использование ферОДЭФ в экстракции формируется ПФК, имеющий значительно боль- ментных препаратов позволяет увеличить выход ПФК : на 24.3% (Шешие размеры и высокие энергетические характеристики рабочей по- арзим), на 23.3% (Целлюкласт); увеличить содержание углеводов:
верхности. Такой структурной организацией этого ПФК объясняется на 32.7% (Целлюкласт), на 25.5% (Шеарзим); увеличить зольность:
максимальное значение его антиоксидантной емкости. на 35% (Шеарзим), на 18.1% (Целлюкласт) по сравнению с контроВодные извлечения, полученные по способу (1) с использова- лем. Применение в экстракции чаги указанных ферментных препаратов нием гидроокиси натрия из сырья разных партий, по выходу ПФК не- приводит к существенному снижению АОА как получаемых извлечезначительно отличаются от контроля (табл. 2). Вне зависимости от сы- ний (Шеарзим - 18.63 кКл/100 г ПФК и Целлюкласт - 17.рья взятого на экстракцию, АОА ПФК, выделенных из извлечений, по- кКл/100 г ПФК, контроль - 29,37 кКл/100 г ПФК), так и выделенных из 13, Партия сырья Сухой остаток, г Зольность, г Выход ПФК, % Концентрация углеводов % АЕ водных вытяжек, кКл/100г ПФК АЕ водных растворов ПФК, кКл/100г ПФК них ПФК (25.00 кКл/100 г ПФК и 25.00 кКл/100 г ПФК, контроль - связано с преобладанием процессов ассоциации, чему может способст32.00кКл/100 г ПФК). вовать высокое содержание аминокислот, накапливающихся в процессе гидролиза. При более низких концентрациях ПФК (0,2 мг/мл, 0,0Исследование размеров дисперсных фаз (рис. 2 А и Б) показало, что мг/мл) повышается устойчивость частиц дисперсной фазы с радиусом в этих извлечениях мицеллы имеют больший размер, чем в водном изоколо 50 нм. На основе смоделированного нами процесса, происходявлечении (рис. 1А), и во всех исследованных концентрациях ПФК дисщего в желудочно-кишечном тракте человека с водным извлечением персная фаза содержит мицеллы и субмицеллы.
чаги, показано, что формируемый в гидролизате ПФК относится к наСодержание Содержание норазмерным частицам, что обеспечивает высокую терапевтическую частиц, % частиц, % 11эффективность водных извлечений чаги.
11110 11123 Использование комплексонов и гидроокиси натрия при экстракции 95 180 125 чаги позволяет получить, ПФК с высокими АОА свойствами, что явля1ется перспективным для разработки эффективных антиоксидантов на основе чаги.
117 12 16 1 0 0,Пятая глава посвящена обработке водного извлечения чаги 0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 Содержание ПФК Содержание ПФК органическими растворителями.
При обработке коллоидного раствора водного извлечения чаги А Б этилацетатом, хлороформом, хлороформ-этанольной смесью образуПо оси абсцисс, содержание ПФК : По оси абсцисс, содержание ПФК :
ются три слоя: водный - коллоидные системы (1); эмульсионный - кол1 - 0,0043 мг/мл; 2 - 0,0175 мг/мл; 1 - 0,0162 мг/мл; 2 - 0,1300 мг/мл;
оидные системы (2) и слой органического растворителя - экстракт.
3 - 0,14 мг/мл; 3 - 0,55 мг/мл; 4 - 8,85 мг/мл Коллоидные системы (3) - получены на основе коллоидных систем (2) 4 - 0,55 мг/мл; 5 - 8,92 мг/мл путём отгонки из них органических растворителей. Обработка водного Рисунок 2 - Эффективный радиус (нм) частиц дисперсной фазы коллоизвлечения чаги петролейным эфиром приводит к образованию коллоидных систем извлечений чаги (сырьё XI), полученных с применением идной системы (1) и экстракта.
ферментных препаратов: А - Целлюкласт; Б - Шеарзим Состав липидов и фенольных веществ экстрактов и коллоидных систем (2), полученных на основе водного извлечения чаги Выделяемые продукты гидролиза целлюлозы, гемицеллюлоз и поМаксимальной экстрагирующей способностью обладает петролейлисахаридов чаги, а также высокая зольность в получаемых извлеченый эфир, которым можно извлечь 21,3% веществ от сухого остатка ниях приводят к увеличению размеров дисперсной фазы золя и снижеводного извлечения чаги. Содержание экстрактивных веществ в полунию АОА.
ченных экстрактах составляет: в хлороформном - 1,51%, в хлороформэтанольном - 8,34%, в этилацетном - 1,67%. Качественный состав нейДля определения изменений, происходящих в коллоидной системе тральных и полярных липидов в них определён с помощью тонкослойводного извлечения чаги под действием ферментов желудочно-кишечной хроматографии (ТСХ). Впервые показано присутствие в водном изного тракта, разработана методика проведения эксперимента in vitro.
влечении чаги большого спектра нейтральных липидов - моно-, ди- и При последовательном гидролизе водного извлечения чаги ферментами триацилглицеридов, высших жирных кислот и алифатических спиртов, желудочно-кишечного тракта - в условиях, близких к физиологическим, стеринов и их эфиров, углеводородов. Впервые обнаружены биологиче- в гидролизате происходит убывание белка (в 5,4 раза по сравнению с ски активные липиды: ненасыщенные жирные кислоты, витамины Е и его содержанием в водном извлечении) и накопление аминокислот (в К, кофермент Q. Очень высоко содержание стеринов - до 0,14% (от су2,4 раза выше, чем в водном извлечении). Мицеллы в гидролизате с хих веществ водного извлечения чаги). Содержание высших жирных киконцентрацией ПФК 6,52 мг/мл имеют радиус 178нм, превышающий слот в свободном или слабосвязанном состоянии составляет 0,15% от сурадиус частиц дисперсной фазы водного извлечения чаги (158нм). Это 15 хого остатка водного извлечения чаги, из них 0,004% мононенасыщенных зорциловые, 3-метокси-4-оксикоричная, 3-оксиантраниловая, ксантурежирных кислот. С помощью ГЖХ определен их качественный состав. новая, протокатеховая и галловая, простые фенолы - пирокатехин и реОбнаружено 12 высших жирных кислот, среди которых преобладают зорцин. Флавоноиды представлены мирицетином, робинетином, гипелауриновая и тридекановая кислоты. Впервые обнаружены мононенасы- рином, нортангеретином, кверцетином, диоксифлавонолом, рамнетищенные пальмитиновая, олеиновая и эйкозеновая кислоты, содержание ном, кемпферолом, апигенином, морином и нарингенином. В остатке которых составляет 30% от суммы обнаруженных кислот, а также поли- этилацетатного экстракта с помощью ТСХ обнаружены вещества, отноненасыщенные жирные кислоты - линолевая и линоленовая. Применён- сящиеся к классу циклопентаноидных монотерпенов - иридоидам, а ный подход впервые позволил определить в водном извлечении чаги также азулены. Эти соединения, обладающие выраженной биологичеполярные липиды (0,02%): фосфатидилглицерин, фосфатидилэтанола- ской активностью, определены и в петролейных экстрактах, полученмин, фосфатидилсерин, лизолецитин и цереброзиды. Состав полярных ных при обработке водного извлечения чаги.
ипидов и жирных кислот отличается в экстрактах полученных из раз- Коллоидные системы, полученные на основе водного извлечения чаги ных партий сырья, что связано с метаболизмом чаги. Показаны незначи- Формирование образующихся при обработке водного извлечения тельные отличия в составе нейтральных липидов и существенные отли- чаги коллоидных систем сопровождается неравномерным распределечия в составе полярных липидов. нием веществ между коллоидными системами (1) и (2) в случае исС помощью ТСХ было показано, что в коллоидной системе (2), пользования всех органических растворителей. Большая часть сухих полученной при обработке водного извлечения чаги этилацетатом, ли- веществ водного извлечения чаги переходит в коллоидные системы (2).
пиды находятся в связанном с дисперсной фазой (ПФК) состоянии. Для При использовании хлороформа и хлороформ-этанольной смеси изучения их состава был применён щелочной гидролиз исследуемого большее количество зольных элементов остаётся в коллоидных систеобъекта. Состав нейтральных липидов коллоидных систем (2) аналоги- мах (1). При применении этилацетата водный слой имеет наименьшую чен соответствующему составу липидов этилацетатных экстрактов. По- зольность по сравнению со всеми объектами исследования, что перлярные липиды при проведении гидролиза разрушаются. С помощью спективно использовать для разработки на его основе препаратов, ГЖХ в исследуемых объектах (два вида сырья) идентифицированы ми- предназначенных для профилактики и лечения предраковых заболеваристиновая (С14:0), пальмитиновая (С16:0), олеиновая (С18:1) и линолевая ний. В коллоидных системах (1) и (3), полученных при применении (С18:2) кислоты. В коллоидной системе (2) (сырьё XI) обнаружены также хлороформа и хлороформ-этанольной смеси, устойчивость дисперскаприловая (С8:0), каприновая (С10:0), лауриновая (С12:0), линоленовая ных фаз (ПФК) по отношению к хлористоводородной кислоте имеют (С18:3) и эйкозеновая (С20:1), а в коллоидной системе (2) (сырьё XII) три- коллоидные системы (3), а при использовании этилацетата - коллоиддекановая (С13:0), пентадекановая (С15:0), гептадекановая (С17:0) и стеа- ная система (1). Кроме того, ККМ золей (1) и (3) лежат в разных диапариновая (С18:0) кислоты. зонах концентраций ПФК и существенно различаются между собой и Для определения состава фенольных и терпеновых соединений вод- отличаются от коллоидной системы водного извлечения чаги, что ного извлечения чаги использован этилацетатный экстракт, который свидетельствует о различной организации исследуемых объектов.
последовательно обрабатывали NaHCO3 и NaOH, а затем органиче- Эффективный радиус мицелл в системах, сформировавшихся при скими растворителями. Применённая схема разделения позволяет из- обработке водного извлечения чаги хлороформом, этилацетатом и петвлечь до 97,3% содержащихся в этом экстракте веществ от его сухого ролейным эфиром, меньше чем при обработке хлороформ-этанольной остатка. Половина проэкстрагированных веществ представлена фенол- смесью (рис. 3 А и Б). Размер мицелл в полученных коллоидных систекарбоновыми кислотами и сопутствующими им соединениями. Коли- мах зависит не только от количества и природы удаляемых органичечество фенолкарбоновых кислот составляет 1,82%, а простых фенолов скими растворителями из водного извлечения чаги компонентов, но и 0,96% от сухих веществ водного извлечения чаги. Разделение содер- от дисперсионной среды, в которой происходит их формирование. Разжащихся в экстрактах веществ проведено с помощью бумажной и тон- мер мицелл во всех коллоидных системах (1) и (3) не выходит из диапакослойной хроматографии. Определены фенолкарбоновые кислоты - зона высокодисперсных частиц.
ванилиновая, сиреневая, п- и м- оксибензойные, п-кумаровая, - и - ре 17 Все ПФК, выделенные с помощью хлористоводородной кислоты, АОА ПФК связано с качественным составом удаляемых из водного изимеют близкие ИК спектральные характеристики. От них отличаются влечения соединений. Происходит иная компоновка мицеллы с образоспектры ПФК, выделенные этанолом из коллоидной системы (2). В этих ванием дополнительных центров, способных проявлять антиоксидантПФК количество карбоксилат-ионов превалирует над количеством ную активность.
свободных карбоксильных групп, что связано с большим количеством Для объяснения существенной разницы в проявлении антиоксизольных элементов в коллоидных системах (2), а также со специфично- дантных свойств ПФК, полученных с применением этилацетата: коллостью действия этанола как осаждающего агента. идная система (2) (ПФК2) - 18,2 кКл/100гПФК, коллоидная система (1) (ПФК1) - 46,0 кКл/100гПФК, и ПФК водного извлечения - 27,кКл/100гПФК, - исследованы их парамагнитные характеристики.
Идентичным для всех ЭПР спектров ПФК является наличие сигнала с g=2.00, отвечающего за органическую компоненту этих объектов, сигнала с g=2.10, который, характеризует парамагнитные свойства как органической, так и неорганической компоненты объектов. В ЭПР спектрах ПФК2 (при 143К) и ПФК1(при 290К) появляются сигналы с g факторами, равными 3.90 и 3.85, характеризующие парамагнитные свойства ионов железа. Отличие g факторов и форма линий данных сигналов в спектре свидетельствует о том, что в ПФК1 ионы Fe3+ имеют большее координационное число, чем в ПФК2, то есть ионы Fe3+ в них А Б По оси абсцисс, содержание ПФК: По оси абсцисс, содержание имеют различное окружение. Во всех исследуемых образцах после озо1 - 0,37мг/мл - обработка смесью ПФК:
ения с помощью бумажной хроматографии показано присутствие ио хлороформ-этанол; 1 - 1,08 мг/мл - контроль;
нов Fe3+. Несмотря на возрастание парамагнитных свойств органиче2 - 0,03 мг/мл - контроль; 2 - 1,99 мг/мл - обработка ской компоненты сигнала с g=2.00 в ПФК ПФК1 ПФК3 - 0,06 мг/мл - обработка хлороформом; этилацетатом;
4 - 0,04 мг/мл Цобработка этилацетатом; 3 - 1,38 мг/мл - обработка (11.11.4), высокое значение АОА ПФК1 связано с появлением 5 - 0,05 мг/мл - обработка петролейным эфиром смесью хлороформ-этанол только в его спектре дополнительного ПМ - (g=3.85), с более равномерным, возможно, радиальным распределением ПМ - и, соответственно, Рисунок 3 Эффективный радиус (нм) частиц дисперсной фазы А - с максимально плотной упаковкой компонентов в ПФК/меланине. Исколлоидных систем (1) и Б - коллоидных систем (3) после обработки следуемые ПФК/меланины различаются по подвижности входящих в водного извлечения чаги органическими растворителями в сравнении с них компонентов: ПФК1ПФКПФК2. В этой последовательности частицами дисперсной фазы водного извлечения чаги (контроль) убывают их антиоксидантные свойства. Проявлению высоких антиоксидантных свойств ПФК1 также способствует его меньший размер (Rэфф Антиоксидантные свойства полученных коллоидных систем (1) и = 80 нм) по сравнению с ПФК (Rэфф = 148 нм). Согласно данным РСА, (3) возрастают по сравнению с коллоидной системой водного извлечевсе исследуемые образцы (ПФК, ПФК1, ПФК2 и ПФК3) имеют аморфния чаги. Максимальное увеличение АОА в пять-шесть раз по сравненую структуру. В двух из них - ПФК и ПФК1 - обнаружен хлорид канию с водным извлечением чаги (10,74 кКл/100гПФК) наблюдается для лия, находящийся в ассоциатах в кристаллическом виде.
коллоидных систем (1) и (3), полученных с применением хлороформа Обработка водного извлечения чаги органическими растворителями (67,54и 56,42кКл/100гПФК соответственно).
позволила определить липиды и фенольные соединения, находящиеся в Выделенные из коллоидных систем (1) ПФК обладают АОА, в 1,5 - свободном и слабосвязанном с его дисперсной фазой состоянии. Мно2 раза превышающей АОА ПФК, полученного из водного извлечения гие из них относятся к биологически активным, что позволяет объясчаги. Максимальное увеличение антиоксидантной активности наблюданить терапевтическую эффективность водных извлечений чаги. Примеется для ПФК, выделенного из коллоидной системы (1), полученной с нённый подход позволил получить несколько коллоидных систем на применением петролейного эфира (64,0 кКл/100гПФК). Увеличение 19 основе водного извлечения чаги, различающихся составом и антиокси- Электрофорез водного извлечения чаги в ацетатном буфере позводантной активностью, что перспективно для разработки на их основе лил обнаружить как отрицательно, так и положительно заряженные БАД и лекарственных препаратов. фракции, подвижные в электрическом поле.
Яркость,1В шестой главе изложены результаты исследований по разделе- 32 Электрофорез водного извлечеед нию хромогенов водного извлечения чаги с помощью электрофореза на ния чаги в боратном буфере даёт бумажном носителе и в тонком слое сорбента. яркие зоны на электрофоретограм Электрофорез водного извлечения чаги на бумажном носителе мах. На них преобладают хромоВ каждой буферной системе разделение водного извлечения чаги гены, движущиеся в сторону анода.
проводили в следующих режимах: фиксировали силу тока 5, 10, 15 или Как показано на денситограммах 20 мА, меняя напряжение от 100 до 400 В с шагом в 50 В. (рис. 4), оптимально подобранные Использование муравьиного буфера с рН среды, близкой к седи- -1 -0,8 -0,6 -0,4 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 режимы проведения электрофореза Rf 1(150В) 2(200В) ментации ПФК (рН 2,4), приводит к низкой подвижности хромогенов позволяют разделить хромогены на электрофоретограмме. В УФ-свете отделившиеся подвижные хро Рисунок 4 - Электрофорез вод- водного извлечения чаги на две могены флуоресцируют, приобретая зеленоватую окраску. Обработка ного извлечения чаги при 20 мА фракции, подвижные в сторону электрофоретограмм парами аммиака усиливает цвет подвижного (боратный буфер): денситоно- анода, и одну - в сторону катода.
фронта. Следовательно, продвигающиеся по электрофоретограмме сограммы при 150 и 200В Впервые показано, что в отличие единения относятся к классу фенолов, которые могут быть сложно орот гуминовых кислот, хромогены ганизованы.
водного извлечения чаги в боратном буфере подвижны как в сторону Проведен электрофорез фильтрата (после удаления ПФК из водного анода, так и в сторону катода.
извлечения чаги осаждением хлористоводородной кислотой). В режиме Электрофорез водного извлечения чаги в слое сорбента на пластинке 5мА и 350В движение хромогенов не наблюдается. Электрофорез Silufol при использовании боратного буфера.
фильтрата при режиме 20мА и 400В обеспечивает движение частиц золя На пластинах силикагеля (в режимах: сила тока 5, 10, 15 и 20мА и фильтрата: в большей степени к аноду и в меньшей - к катоду. В поднапряжении 250 В) хромогены водного извлечения чаги перемещавижных фракциях фильтрата кроме хромогенов подтверждено присутются к катоду и разделяются на пять зон (рис. 5). Большая сорбционная ствие аминокислот и соединений, обладающих восстанавливающими ёмкость силикагеля способствует образованию положительно заряженсвойствами (при проявлении электрофоретограмм нингидрином и расных частиц, что позволяет проанализировать вещества, подвижные в твором азотнокислого серебра).
электрическом поле.
Проведение электрофореза в среде муравьиного буфера, эффективно Рисунок 5 Зоны электрофоиспользовать для изучения веществ, находящихся в свободном и слаборетограммы, полученной при связанном состоянии с их дисперсными фазами состоянии.
проведении электрофореза в При использовании ацетатного буфера (рН 5,6) сохраняется нативрежиме 10мА, 250В, в теченый рН среды водного извлечения. При всех применённых режимах ние 60 минут.
электрофоретического разделения хромогенов водного извлечения чаги на стартовой линии остаётся больше хромогенов. Оптимальный режим (ток 5мА напряжение 350В) позволяет выделить две фракции хромогенов, подвижных в сторону катода. Этому может способствовать высокое содержание зольных элементов в водном извлечении чаги (25 до Электронные спектры эльюатов, полученных с каждой из зон электро50%). Повышение силы тока до 15 мА (напряжение 400В) позволяет форетограммы, схожи со спектром ПФК водного извлечения чаги. Слеполучить как фракции несущие положительный заряд, так и подвижные довательно, во всех зонах присутствуют вторичные мицеллы, образуюполианионные фракции.
щиеся из мицелл золя водного извлечения чаги на стартовой линии.
21 Анализ эльюатов каждой зоны с помощью ТСХ показал присутствие в жено в бутанольном экстракте (20,39%), содержащем вещества, относяних полярных липидов. Кроме ранее обнаруженных в водном извлече- щиеся к полигликозидным формам фенольных соединений. Этим обънии чаги цереброзидов было показано наличие в них кардиолипинов. ясняется высокая АОА ПФКщ2. Исследование экстрактов с помощью Эльюаты силикагеля 95% этанолом проанализированы с помощью ТСХ позволило выявить в них липиды: моно- и триглицериды, стерины ТСХ. В них, со второй по пятую зону включительно, обнаружены п-ок- и их эфиры, галактозилглицериды, лизофосфатидилэтаноламин и фоссибензойная, сиреневая, ванилиновая и вератровая кислоты. Для прове- фатидилсерин. Содержание стеринов и их эфиров составляет 0,29% от дения идентификации соединений во фракциях, подвижных под дейст- сухих веществ фильтрата. В фильтрате содержится 0,1% гликолипидов вием электрического тока, более эффективно применять в качестве и 0,19% липидов, содержащих аминогруппу, 0,09% из которых прихоносителя пластины сорбента. дится на фосфолипиды. С помощью ГЖХ определён состав высших Электрофорез эффективно применять для разделения коллоидной жирных кислот: тридекановая (С13:0), миристиновая (С14:0), миристолеисистемы водного извлечения чаги, как в аналитических целях, так и для новая (С14:1), пентадекановая (С15:0), пальмитиновая (С16:0), гептадеканоразработки лекарственных препаратов при обнаружении электрофоре- вая (С17:0), олеиновая (С18:1). Количество простых фенолов составляет тических зон, проявляющих высокую биологическую активность. 0,18% от сухих веществ водного извлечения чаги. Показано содержание В седьмой главе показана возможность комплексной перера- в фильтрате вератровой, ванилиновой, сиреневой, п-оксибензойной, пботки чаги. кумаровой, -резорциловой, м-оксибензойной, протокатеховой и галлоПрактическое применение имеет осаждение ПФК хлористово- вой кислот. С помощью бумажной хроматографии определены флаводородной кислотой. Именно с его количественным содержанием в вод- ноиды: нарингенин, апигенин, мирицетин, гиперин, госсипетин, кемпном извлечении чаги связывают терапевтическую эффективность фар- ферол, 3-метокси-4,5-диоксифлаванон-7-О-неогесперидозид, робинетин макологических препаратов, получаемых на основе водных извлечений и наренгин.
чаги. После отделения ПФКК1 (13,58% от сухого веса чаги) фильтрат Разработаны способы извлечения биологически активных веществ имеет коричнево-желтую окраску. Диаметр мицелл в нём составляет и ПФК из шрота - отхода, полученного после проведения водной экс188 нм. Добавление к фильтрату в отдельности хлористоводородной тракции чаги. В качестве экстрагента использован этиловый спирт с кислоты, этанола или водного раствора гидроокиси калия не приводит к концентрацией 30%, 50% и 70%. Спиртовые экстракты из шрота полуосаждению ПФК. Применение спиртового раствора щёлочи позволяет чены по двум способам. По первому способу шрот проэкстрагирован осадить ПФКщ2 (4,79%). Осаждение водного извлечения сначала спир- РЕМ. По второму способу процесс проведён при кипячении шрота.
товым раствором щёлочи приводит к получению ПФКщ1 (17,24%). В Первый способ позволяет получить спиртовый экстракт (50% спирт) с результате осаждения дисперсной фазы фильтрата хлористоводород- самой низкой зольностью и высоким содержанием ПФК - до 6%, что в ной кислотой получено 2,01% ПФКк2. Выделенные ПФК отличаются 3,5 - 6 раз выше, чем по второму способу. Использование второго спопо АОА: ПФКк1 -27,5 кКл/100 г, ПФКщ2 - 108,0 кКл/100 г; ПФКщ1 - соба (70% спирт) позволяет получить экстракт, содержащий в 3-5 раз 17,0 кКл/100 г, ПФКк2 - 6,8 кКл/100 г. Различие их структурной орга- больше углеводов и в 1,5 - 2,5 раза больше фенольных соединений, низации показано с помощью ИК и электронных спектров, а также по чем в экстракте, полученном по первому способу. 70% спиртом из содержанию белка, углеводов и веществ фенольной природы, ассими- шрота можно извлечь в 6,6 раз больше фенольных соединений и в 1,лируемых ПФК при осаждении. раз больше углеводов по сравнению с их содержанием в настойках Для определения состава липидов и веществ фенольной при- чаги, выпускаемых промышленностью на основе сырья чаги.
роды, находящихся в фильтрате в свободном или слабосвязанном с его Такая переработка сырья позволяет извлечь из сырья в 6-7 раз дисперсной фазой состоянии, проведена последовательная исчерпы- больше ПФК по сравнению с его содержанием в промышленно полувающая экстракция фильтрата органическими растворителями (петро- ченных настойках чаги, производимых из сырья чаги без проведения лейный эфир, смесь хлороформ-этанол (2:1), диэтиловый эфир, этил- предварительной экстракции чаги водой. Идентичность ПФК, выдеацетат и бутанол). В них перешло 69,2% веществ от сухого остатка ленных из спиртовых экстрактов и полученных из водных извлечений фильтрата. Максимальное количество экстрактивных веществ обнару- чаги, показаны с помощью ИК и электронной спектроскопии. Их АОА 23 находится на уровне с этими показателями настоек, выпускаемых фар- его с помощью органических растворителей или проведении электромацевтической промышленностью. фореза.
Разработана комплексная переработка сырья чаги, заключаю- 3. Установлено, что изменение антиоксидантной активности как коллощаяся в получении ряда продуктов на основе водного извлечения и идной системы водного извлечения чаги, так и её дисперсной фазы шрота. Из водного извлечения можно получить два ПФК, обладающих (ПФК) связано: с содержанием в водном извлечении ПФК, размером высокими АОА, либо использовать фильтрат (после выделения ПФК) в мицелл ПФК/меланина (при изменении четвертичной структуры), прикачестве самостоятельного объекта для разработки БАД и лекарствен- родой соединений, входящих в его состав, а также количеством и приных препаратов. Экстракция шрота позволяет получить спиртовые экс- родой ПМ - в ПФК/меланине (при изменении вторичной структуры).
тракты чаги с высоким содержанием углеводов, фенольных соединений 4. Показано, что изменение дисперсионной среды водного извлечения и ПФК. чаги при применении в экстракции комплексонов ОДФК, трилона Б, а В восьмой главе проведено обобщение полученных результатов, также гидроокиси натрия позволяет повысить антиоксидантную активсформированы теоретические представления о структуре золя водного ность получаемых ПФК в 3, 1,5 и 1,4 раза по сравнению с антиоксиизвлечения чаги и раскрыты практические аспекты применения объек- дантной активностью ПФК, выделенного из водного извлечения чаги.
тов, полученных при его модификации. 5. Применение в экстракции чаги микробиологических ферментных На основании сопоставления структуры наноразмерных биологиче- препаратов, содержащих гидролазы некрахмалистых полисахаридов, ских объектов с мицеллами ПФК/меланина показано, что при компо- изменяет дисперсионную среду образуемых золей, способствуя форминовке глобулы его структурной единицей являются частицы с диамет- рованию более крупных мицелл ПФК (Rэфф около 100-125нм) и больром 8-20 нм (и более мелкие). Это позволяет объяснить лабильность шего количества субмицелл по сравнению с водным извлечением дисперсной фазы (изменение четвертичной структуры ПФК/меланина) чаги(Rэфф около 60 - 100нм). ПФК, выделенные из этих коллоидных как коллоидной системы водного извлечения чаги, так и золей форми- систем, обладают низкой антиоксидантной активностью (18,63 и 17,руемых на её основе при химическом, физическом и биотехнологиче- кКл/100 г ПФК) в сравнении с ПФК, полученным из водного извлеческом воздействии. Использование химического воздействия на колло- ния чаги (29,61кКл/100 г ПФК).
идную систему водного извлечения чаги при обработке его этилацета- 6. Применение разработанной методики для изучения протеолиза в том приводит к изменению вторичной структуры дисперсных фаз кол- коллоидной системе водного извлечения чаги (in vitro) показало, что лоидных систем (1) и (2) - ПФК1 и ПФК2 - по отношению к ПФК вод- под действием ферментов желудочно-кишечного тракта происходит деного извлечения чаги, что показано с помощью ЭПР и РСА. градация белка. Это приводит к формированию наноразмерных мицелл Приведены схемы по комплексной переработке сырья чаги, в кото- ПФК(Rэфф=50 нм) и мелких субмицелл (8нм), что обеспечивает высорых использованы разработанные перспективные методы повышения кую терапевтическую эффективность водных извлечений чаги.
АОА извлечений и ПФК, получаемых на основе чаги. Показана воз7. Установлено, что коллоидные системы с наноразмерными мицеллами можность использования их в практических целях.
ПФК (Rэфф = 58 нм - 96 нм), полученные на основе водного извлечения чаги после его обработки органическими растворителями (петролейный ВЫВОДЫ эфир и этилацетат) имеют более высокую антиоксидантную активность по сравнению с водным извлечением чаги (в два - пять раз), а также 1. Установлено, что водные извлечения чаги относятся к высокодисболее низкую токсичность. Антиоксидантная активность ПФК, выдеперсным коллоидным системам. Диаметр частиц дисперсной фазы соленных из этих коллоидных систем, в среднем в два раза превышает эту ставляет: для крупных мицелл - 120-320нм (с колебаниями от 100 до характеристику для ПФК водного извлечения чаги.
400нм), для мелких, субмицелл - 60нм (и более мелкие).
8.Установлено, что фильтрат (после осаждения ПФК хлористоводо2. Показано, что коллоидная система водного извлечения чаги имеет родной кислотой) является высокодисперсной коллоидной системой, легко перестраивающуюся дисперсную фазу (ПФК/меланин): при раздисперсную фазу которой можно выделить с помощью спиртового расбавлении водного извлечения, смене способа его получения, обработке твора щёлочи, а полученный из него ПФК имеет антиоксидантную ак 25 бибрахманова, В. С. Гамаюрова, Д. В. Муллина, О.Ю. Кузнецова, Г. К. Зиятдитивность в четыре раза выше, чем ПФК, выделенный из водного извленова, Г. К. Будников // Бутлеровские сообщения. - 2005. - т. 7. - 4. - С. 33- 35.
чения с помощью хлористоводородной кислоты.
7. Сысоева, М.А. Исследование липидного состава водных извлечений чаги. I.
9. Определён состав веществ, находящихся в золе водного извлечения Липиды извлекаемые этилацетатом / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, О. Ю.
чаги и фильтрате в свободном и слабосвязанном с дисперсной фазой Кузнецова, В. С. Гамаюрова // Новые лекарственные средства: Успехи и перспекзоля состоянии. Показано присутствие биологически активных липитивы. - Уфа: Гилем, 2005 - С. 133-1дов (стерины и их эфиры, моно- и полиненасыщенные высшие жирные 8. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги V. Электрофорез в кислоты, витамины К и Е, кофермент Q, глико- и фосфолипиды), терпекислых средах. Использование муравьиного буфера / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибнов (азулены и иридоиды), и фенольных соединений (фенолкарбоновые рахманова, В. С. Гамаюрова, Г.И. Халиуллина, А.С. Опарина // Вестник Казанкислоты, фенолы и флавоноиды). Состав этих веществ в водном извлеского технологического университета. - 2006. - 4. - С. 143-147.
чении чаги и фильтрате различен. 9. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги VI. Электрофорез в кислых средах. Использование ацетатного буфера / М.А. Сысоева, В.Р. Хабиб10. Разработаны способы получения спиртовых экстрактов из шрота, рахманова, В.С. Гамаюрова, Г.И. Халиуллина, О.Ю. Кузнецова // Вестник Каобеспечивающие дополнительный выход ПФК (6%), а также углеводов занского технологического университета. - 2006. - 4. - С. 153-156.
и фенольных соединений. Антиоксидантная активность экстрактов не 10. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги VII. Электрофоуступает этой характеристике спиртовых экстрактов из чаги, выпускаерез в щелочной среде. Использование боратного буфера / М.А. Сысоева, В.Р.
мых фармацевтической промышленностью.
Хабибрахманова, В. С. Гамаюрова, Г.И. Халиуллина // Вестник Казанского тех11. Разработан комплексный подход к переработке сырья чаги с полунологического университета. - 2006. - 4. - С. 164-168.
чением нескольких продуктов, обладающих высокой антиоксидантной 11. Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилактивностью.
ацетата I. Антиоксидантная активность / М.А. Сысоева, В. Р. Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова, Г.К. Зиятдинова, Г.К. Будников // Химия растительного сырья. - Основное содержание работы
изложено в следующих публикациях: 2007. - 4. - С.101 -104.
1. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. I. Изменение изу- 12. Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилчаемой системы при введении комплексонов/ М.А.Сысоева, О. Ю. Кузнецова, ацетата. II. Парамагнитные свойства хромогенов чаги / М.А. Сысоева, В. Р.
В.С. Гамаюрова, Ф.Г. Халитов // Башкирский химический журнал. 2004. - т.11. - Хабибрахманова, В.С. Минкин, В.С. Гамаюрова, В.Е. Петрашень // Химия рас2. - С. 62-65. тительного сырья. - 2007. - 4. - С. 105-109.
2. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. II. Изменение 13. Сысоева, М.А. Исследование золя вводных извлечений чаги. IX. Определеизучаемой системы при проведении экстракции различными способами / М.А. ние размеров частиц дисперсной фазы золя извлечений из чаги / М.А. Сысоева, Сысоева, О.Ю. Кузнецова, В.С. Гамаюрова, Ф.Г. Халитов, П.П. Суханов// Вест- В.Р. Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова, Л.А. Кудрявцева // Химия растительного ник Казанского технологического университета. - 2003. - 2. - С.172-176. сырья. - 2008 - 2. - С.75 - 80.
3. Сысоева, М.А. Исследование золя вводных извлечений чаги III. Влияние со- 14. Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилстава сырья на выход экстрактивных веществ водных извлечений чаги/ М.А. Сы- ацетата. III. Состав липидов, отделяемых из водного извлечения чаги этилацесоева, О.Ю. Кузнецова, В.С. Гамаюрова, П.П. Суханов, Г.К. Зиятдинова, Г.К. татом. / М.А. Сысоева, В. Р. Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова, Э.Ф. ЗайнетдиБудников // Химия растительного сырья. - 2004. - 4. - С.15-21. нова // Химия растительного сырья. - 2008. - 1. - С.111 - 114.
4. Сысоева, М.А. Исследование золя вводных извлечений чаги IV. Антиокси- 15. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. X. Протеолиз дантная активность. Влияние способа извлечения и применение комплексонов, водного извлечения чаги ферментами желудочно-кишечного тракта / М.А. Сыгидроокиси натрия. / М.А. Сысоева, О.Ю. Кузнецова, В.С. Гамаюрова, П.П. Су- соева, Е.В. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова, Л.А. Кудрявцева // ханов, Г.К. Зиятдинова, Г.К. Будников // Химия растительного сырья. - 2005. - 1. Химия растительного сырья. - 2008 - 2. - С.81 - 86.
- С.41-47. 16. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. XI. Липиды вод 5. Сысоева, М.А. Структурная организация и свойства полифенолов чаги / М.А. ного извлечения чаги/ М.А. Сысоева, В.Р.Хабибрахманова, В.С.Гамаюрова, А.Х.
Сысоева, О.Ю. Кузнецова, В.С. Гамаюрова, П.П. Суханов, Г.К. Зиятдинова, Г.К. Тазеева // Химия растительного сырья. - 2008 - 3. - С.119 - 122.
Будников // Вестник Казанского технологического университета. - 2005. - 1. - С. 17.Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги.VIII Размеры час244-250. тиц дисперсных фаз, образующихся при экстракции водных извлечений чаги ор 6. Сысоева, М.А. Использование гидролаз некрахмалистых полисахаридов. I ганическими растворителями / М.А. Сысоева, В. Р. Хабибрахманова, В.С. ГаАнтиоксидантная активность полученных извлечений / М.А. Сысоева, В.Р. Ха 27 маюрова, Л.А. Кудрявцева // Химия растительного сырья. - 2008 - 4. - С. 129 - О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова, Ф.Г.Халитов, Г.К.Будников, Г.К. Зиятдинова// 132. Межрегиональная конференция молодых ученых Пищевые технологии, Ка 18. Пат (19)RU(11) 2 231786 (13) C1. Способ определения углеводного состава по- зань, 2004, часть II, С.3-5.
ифенольного комплекса чаги / Сысоева М.А., Кузнецова О. Ю., Гамаюрова 30. Сысоева М.А. Антиоксидантная активность водных извлечений и полифеВ.С.: заявитель и патентообладатель КГТУ. - № 2231786; заявл. № 2002132770, нолов чаги/ М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова, Г.К.Будников, Г.К.
27.11.2002; опубл. 27.06.2004 Бюл. №18. Зиятдинова // III Всероссийская конференция Химия и технология раститель(19) (13) 19. Патент RU(11) 2 336 085 C2. Способ получения полифенолов из чаги / ных веществ, Саратов, 2004, с.149-151.
Сысоева М.А., Хабибрахманова В.Р., Гамаюрова В.С., Юмаева Л.Р.: заявитель и 31. Сысоева М.А. Ферментативный гидролиз чаги/ М.А.Сысоева, В.С. Гамаюпатентообладатель КГТУ. - №2336085; заявл.2006134108/15, 13.09.2006 ; опубл. рова, М.А.Бурмасова// III Всероссийская конференция Химия и технология рас20.10.2008 Бюл.№29. тительных веществ, Саратов, 2004, С.229-231.
(19) (13) 20. Патент RU(11) 2 336 888 C1. Способ получения спиртового экстракта 32. Сысоева М.А. Сравнительный анализ содержания углеводной компоненты чаги / Сысоева М.А., Хабибрахманова В.Р., Юмаева Л.Р., Гамаюрова В.С.: заяви- водных извлечений трутового гриба Inonotus obliquus/ М.А.Сысоева, тель и патентообладатель КГТУ. - №2336888; заявл.2007115936/15, 20.04.2007 ; О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // III Всероссийская школа-конференция Хиопубл. 27.10.2008 Бюл.№30. мия и биохимия углеводов, Саратов, 2004, С.41.
21. Патент (19)RU(11) 2 339 390 (13) C1. Способ получения водных извлечений и по- 33. Сысоева М.А. Использование слабых растворов гидроокиси натрия при экстлифенолов чаги, обладающих антиоксидантной активностью/ Сысоева М.А., Ха- рагировании чаги/ М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова, Ф.Г.Халитов, бибрахманова В.Р., Гамаюрова В.С., Будников Г.К., Зиятдинова Г.К.: заявитель и Г.К.Будников, Г.К. Зиятдинова // Межрегиональная конференция молодых учепатентообладатель КГТУ. - №2339390; заявл.2007109396/15, 06.03.2007 ; опубл. ных Пищевые технологии, Казань, 2005, С.102-103.
27.11.2008 Бюл.№33. 34. Сысоева М.А. Очистка водных извлечений чаги от пигментных веществ с 22. Сысоева М.А. Углеводы растительного сырья - чаги/ М.А.Сысоева, целью идентификации флавоноидов/ В.Р.Хабибрахманова, Муллина Д.П., Ю.А.
О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // Межрегиональная конференция молодых Скрылева, В.С. Гамаюрова // Межрегиональная конференция молодых ученых ученых Пищевые технологии, Казань, 2002, С.63. Пищевые технологии, Казань, 2005, С.104-105.
23. Сысоева М.А. Способы получения водных вытяжек чаги/ М.А.Сысоева, 35. Сысоева М.А. Гипотетическая схема строения полифенолоксикарбонового О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // II Всероссийская конференция Химия и тех- комплекса чаги/ М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова, Ф.Г.Халитов, нология растительных веществ, Казань, 2002, С.131. П.П.Суханов, Г.К.Будников, Г.К. Зиятдинова, // II Всероссийская конференция 24. Сысоева М.А. Получение водных вытяжек чаги с применением комплексо- Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья, нов/ М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // БИОЛОГИЯ-НАУКА ХХI: Барнаул, 2005,книга II, С.461-465.
7-ая Пущинская школа - конференция молодых ученых, Пущино, 2003, С.111- 36. Сысоева М.А. Фотон-корреляционная спектроскопия водных извлечений 112. чаги/ М.А.Сысоева, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова, Л.З.Ризванова, Куд 25. Сысоева М.А. Коллоидная система водных вытяжек чаги/ М.А.Сысоева, рявцева Л.А. // IV Всероссийская научная конференция Химия и технология О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // Межрегиональная конференция молодых растительных веществ, Сыктывкар, 2006, С.205.
ученых Пищевые технологии, Казань, 2003, С.90-91. 37. Сысоева М.А. Электрофоретическое разделение компонентов водных извле 26. Сысоева М.А. Роль зольных элементов в формировании коллоидных раство- чений чаги/ М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // IV Всероссийская ров водных вытяжек Inonotus obliquus/ М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Га- научная конференция Химия и технология растительных веществ, Сыктывкар, маюрова, Ф.Г.Халитов// XVII Менделеевский съезд по общей и прикладной хи- 2006, С.399.
мии, секция Биомолекулярная химия и биотехнология, Казань, 2003, С.257. 38. Сысоева М.А. Применение электрофореза для исследования водной вы 27. Сысоева М.А. Исследование физико-химических свойств полифенолов чаги/ тяжки чаги/М.А.Сысоева, Г.И.Халиуллина, О.Ю.Кузнецова, В.Р.ХабибМ.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова, Ф.Г.Халитов, П.П.Суханов// рахманова, В.С. Гамаюрова // Общероссийская конференция молодых ученых с XVII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии, секция Биомолеку- международным участием Пищевые технологии, Казань, 2006, С.113-115.
ярная химия и биотехнология, Казань, 2003, С.303. 39. Сысоева М.А. Применение фотон-корреляционной спектроскопии в исследо 28. Сысоева М.А. Биологические и биохимические аспекты изучения трутового вании водной вытяжки чаги / М.А.Сысоева, Л.З.Ризванова, О.Ю.Кузнецова, В.С.
гриба чаги/ М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // БИОЛОГИЯ- Гамаюрова, Л.А.Кудрявцева// Общероссийская конференция молодых ученых с НАУКА ХХI: 8-ая Пущинская школа - конференция молодых ученых, Пущино, международным участием Пищевые технологии, Казань, 2006, С.115-116.
2004, С.267. 40. Сысоева М.А. Нейтральные липиды извлекаемые из водной вытяжки этил 29. Сысоева М.А. Анализ растительного сырья - чаги/ М.А.Сысоева, ацетатом / М.А.Сысоева, Э.Ф.Зайнетдинова, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаю 29 рова// Общероссийская конференция молодых ученых с международным уча- 51. Сысоева М.А. Изучение терпенового состава водных извлечений чаги/ стием Пищевые технологии, Казань, 2006, с.116-117. М.А.Сысоева, Г.И.Кыямова, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова // VIII Все 41. Сысоева М.А. Терпеновые соединения водных извлечений чаги/ российская конференция молодых учёных с международным участием ПищеМ.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // Общероссийская конференция вые технологии, Казань, 2007, С.200.
молодых ученых с международным участием Пищевые технологии, Казань, 52. Сысоева М.А. Разработка биологически активных добавок на основе поли2006, с.117-118. фенолов Inonotus obliquus/ М.А.Сысоева, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова 42. Сысоева М.А. Извлечение липидов из водной вытяжки чаги/ М.А.Сысоева, // XVIII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии, Москва, 2007, т.4, Л.Р.Юмаева, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова // Общероссийская конфе- С.590.
ренция молодых ученых с международным участием Пищевые технологии, 53. Сысоева М.А. Определение размеров дисперсной фазы золя водного извлеКазань, 2006, с.118-119. чения Inonotus obliquus / М.А.Сысоева, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова, 43. Сысоева М.А. Выделение флавоноидов из водного извлечения чаги с помо- Л.А.Кудрявцева // XVIII Менделеевский съезд по общей и прикладной химии, щью колоночной хроматографии/ М.А.Сысоева, Ю.Г.Скрылёва, Москва, 2007, т.4, С.591.
В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова // Общероссийская конференция молодых 54. Сысоева М.А. Оптимизация процесса экстракции шрота чаги/М.А.Сысоева, ученых с международным участием Пищевые технологии, Казань, 2006, Л.Р.Юмаева, В.С. Гамаюрова// IXМеждународная конференция молодых учёных с.119-120. Пищевые технологии и биотехнологии, Казань, 2008. - С.166-1 44. Сысоева М.А. Исследование биологически активных компонентов водных 55. Сысоева М.А. Изучение липидного состава водных извлечений извлечений чаги с помощью горизонтального электрофореза / М.А.Сысоева, чаги/М.А.Сысоева, Е.А.Ларионова, Г.А.Иванова, В.С. Гамаюрова// IX МеждуО.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова // Общероссийская конференция молодых уче- народная конференция молодых учёных Пищевые технологии и биотехнолоных с международным участием Пищевые технологии, Казань, 2006, с.121- гии, Казань, 2008. - С.1122. 56. Сысоева М.А. Состав липидов водного извлечения чаги/М.А.Сысоева, 45. Сысоева М.А. Электрофоретическая подвижность хромогенов водного из- Н.В.Куракина, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова//IX Международная конвлечения чаги/ М.А.Сысоева, В.Р.Хабибрахманова, О.Ю.Кузнецова, В.С. Га- ференция молодых учёных Пищевые технологии и биотехнологии, Казань, маюрова, А.С.Опарина // III Всероссийская конференция Новые достижения в 2008. - С.1химии и химической технологии растительного сырья, Барнаул, 2007, кн.2, 57. Сысоева М.А. Изучение биологически активных соединений полифенолокс.210-214. сикарбонового комплекса чаги/М.А.Сысоева, С.А.Никитина, В.Р.Хабибрах 46. Сысоева М.А. Протеолиз белков водных извлечений Inonotus obliquus/ манова, В.С. Гамаюрова// IX Международная конференция молодых учёных М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова, Е.В. Сы- Пищевые технологии и биотехнологии, Казань, 2008. - С.199-2соева // III Всероссийская конференция Новые достижения в химии и химиче- 58. Сысоева М.А. Изменение дисперсионной среды водного извлечения чаги/ ской технологии растительного сырья, Барнаул, 2007, кн.2, с.214-215. М.А.Сысоева, А.В.Григорьева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова, Г.К.Будников, 47. Сысоева М.А. Определение веществ флавоноидной природы в водных из- Г.К. Зиятдинова// IX Международная конференция молодых учёных Пищевые влечениях чаги/ М.А.Сысоева, А.В.Порфирьева, М.А.Бурмасова, О.Ю.Кузнецова, технологии и биотехнологии, Казань, 2008. - С.2В.С. Гамаюрова//VIII Всероссийская конференция молодых учёных с 59. Сысоева М.А. Особенности формирования полифенолоксикарбонового коммеждународным участием Пищевые технологии, Казань, 2007, с.188.
плекса препарата Бефунгин / М.А.Сысоева, О.Ю.Кузнецова, В.С. Гамаюрова// 48. Сысоева М.А. Отнесение фенольных соединений, полученных при гидролизе IX Международная конференция молодых учёных Пищевые технологии и биохромогенов водного извлечения чаги/М.А.Сысоева, Г.И.Зарипова, В.Р.Хатехнологии, Казань, 2008. - С.2бибрахманова, В.С. Гамаюрова // VIII Всероссийская конференция молодых 60. Сысоева М.А. Сравнение состава биологически активных соединений дисучёных с международным участием Пищевые технологии, Казань, 2007, с.190.
персионной среды водных извлечений чаги из различного сырья/М.А.Сысоева, 49. Сысоева М.А. Анализ углеводов водной вытяжки чаги/ М.А.Сысоева, Л.А.Ефремова, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова// IX Международная конН.К.Шаехова, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова // VIII Всероссийская конференция молодых учёных Пищевые технологии и биотехнологии, Казань, ференция молодых учёных с международным участием Пищевые технологии, 2008. - С.203-204.
Казань, 2007, с.191-192.
50. Сысоева М.А. Нейтральные липиды водной вытяжки чаги/ М.А.Сысоева, Н.А.Маякова, В.Р.Хабибрахманова, В.С. Гамаюрова // VIII Всероссийская конференция молодых учёных с международным участием Пищевые технологии, Казань, 2007,С.199.