Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству  

На правах рукописи

ПАНИНА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА

ФармакоЦтоксикологическая  оценка и клиническая эффективность эритроксида при лечении колибактериоза и сальмонеллеза  поросят

 

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

 

Воронеж - 2012

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии

Научный руководитель:	доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАСХН Шабунин Сергей Викторович
Официальные оппоненты:	Слободяник Виктор Иванович
	доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО Воронежский аграрный университет им. императора Петра I, зав. кафедрой терапии и фармакологии факультета ветеринарной медицины и технологии животноводства
	Климов Николай Тимофеевич
	доктор ветеринарных наук, ГНУ Всероссий-ский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии, заведующий лабораторией патологии молочной железы
Ведущая организация:	ФГБОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотех-нологии им.  К.И. Скрябина, г. Москва.

Защита состоится л29 мая 2012 г. в 1000 часов на заседании дис-сертационного совета ДМ 006.004.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (ВНИВИПФиТ) по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-б.

  С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии

Автореферат  разослан л28 апреля 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к.б.н., доцент Ермакова Т.И.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Заболевания, поражающие пищеварительный тракт у поросят, являются одними из самых распространённых в настоящее время. Часто эти болезни приобретают характер смешанных инфекций, отличающихся от классических форм проявления той или иной болезни, с осложнённым течением (В.П. Иноземцев с соавт., 2000; А.Г. Шахов, 2006; G. Merialdi et al, 2008).

Экономический ущерб от этих заболеваний складывается из падежа животных и затрат, связанных с проведением лечебно-профилактических мероприятий (Н.Т. Климов с соавт., 2000; Е.А. Лаковников, 2005).

В комплексе мероприятий по борьбе с желудочно-кишечными болезнями у молодняка сельскохозяйственных животных бактериальной этиологии широкое применение нашли такие химиотерапевтические средства, как сульфаниламиды, антибиотики, нитрофураны и др. (В.Ф. Ковалёв с соавт., 1988; М.А. Амирбеков с соавт., 1995;  С.В. Шабунин, 1999; Л.И. Ефанова, 2004; Э.А. Светоч, 2005; В.И.Терехов, 2008). Однако длительное и бессистемное применение их в животноводстве привело к появлению резистентных к ним штаммов микроорганизмов (А.Г. Шахов с соавт., 2004; М. Noa, 2004; М. Ruzauskas, I. Klimiene, D. Zienius, 2006; M. Truszczenski, 2006). В связи с этим важнейшим направлением современной химиотерапии бактериальных инфекций является изыскание новых комбинированных препаратов, повышающих эффективность лечения животных и уменьшающих экономические затраты.

При разработке новых комплексных антимикробных препаратов, помимо влияния на резистентность, ставится задача повышения их терапевтической эффективности, путём подбора антимикробных веществ в таком сочетании, которое обладает синергидным или аддитивным действием в отношении большинства штаммов микроорганизмов возбудителей заболеваний (Ю.Б. Шпонько, 2007; И.А. Болоцкий с соавт., 2008; В.И. Раицкая, 2008). Кроме того, входящие в состав комплексного препарата ингредиенты не должны оказывать отрицательного влияния на фармакологическое действие друг друга, взаимодействовать друг с другом в разработанной лекарственной форме для сохранения стабильности в течение срока хранения препарата.

В этом плане большой научный и практический интерес представляет эритроксид, содержащий в качестве действующих веществ эритромицин, окситетрациклина гидрохлорид, а также пролонгаторы - полиэтиленоксид 400 и 1,2 пропиленгликоль.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы являлось обоснование состава, разработка и изучение нового комплексного антибактериального препарата на основе эритромицина и окситетрациклина для лечения желудочно-кишечных заболеваний поросят.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать новый комплексный препарат эритроксид;

2. Экспериментально обосновать оптимальное соотношение компонентов в эритроксиде и изучить его антимикробную активность;

3. Изучить фармакотоксикологические свойства препарата эритроксид;

4. Изучить фармакокинетические параметры и остаточные количества препарата в организме поросят;

5. Изучить эффективность препарата при колибактериозе и сальмонеллезе поросят.

6. Разработать показания для применения эритроксида при лечении  желудочно-кишечных заболеваний поросят.

Научная новизна. Впервые на основе изучения антимикробной активности в опытах in vitro и in vivo экспериментально обоснован состав и разработан новый комплексный  пролонгированный антибактериальный препарат эритроксид, содержащий эритромицин и окситетрациклин. Изучены его фармакотоксикологические свойства, а так же установлено отсутствие возможных отдаленных последствий после его применения. Изучена эффективность применения эритроксида при терапии колибактериоза и сальмонеллеза поросят. Научная новизна подтверждена патентом РФ Способ определения чувствительности микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью к сочетаниям антибактериальных препаратов №2388827 от 10 мая 2010 года.

Практическая значимость.  Результаты проведенных исследований послужили основанием для разработки нового комплексного антибактериального препарата для лечения желудочно-кишечных заболеваний поросят, технологии его промышленного производства и методов контроля качества, которые вошли в утвержденную нормативно-техническую документацию на препарат эритроксид (технические условия и временное наставление, утвержденное заместителем руководителя Департамента ветеринарии за №00 1053-ОП).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 4-ой Международной научно-практической конференции Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции (Москва, 2002), Международной научно-производственной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. Спирюхова И.А. (Пенза, 2007), межрегиональной научно- практической конференции молодых ученых Достижения молодых ученых - будущее в развитии АПК (Воронеж 2007), 1-м съезде ветеринарных фармакологов России (Воронеж, 2007),  Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. В.А. Акатова Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных (Воронеж, 2009),  Международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию со дня рождения чл.-корр. М.М. Джамбулатова Современные проблемы, перспективы и инновационные тенденции развития аграрной науки (Махачкала, 2010).

Публикации материалов исследований. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 13 печатных работах, в том числе 3 статьи в журналах Ветеринария и кормление Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана и  Достижения науки и техники АПК, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 128 страницах и  включает: введение, обзор литературы, материал, объем и методы иснследований, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Диссертационная работа проиллюстрирована 30 таблицами и 14 рисунками. Список литературы включает 219 источников, в том числе 53 на иностранных языках.

Основные положения, выносимые на защиту:

- научное обоснование состава нового комплексного антибактериального препарата на основе эритромицина и окситетрациклина;

- фармако-токсикологические свойства препарата эритроксид в опытах на лабораторных животных и поросятах;

- результаты изучения фармакокинетики и определения сроков выведения остаточных количеств эритроксида из организма поросят после применения препарата;

- терапевтическая эффективность эритроксида при колибактериозе и сальмонеллезе поросят.

2. Материл, объем и методы исследования

Работа выполнена в 2003-2011 г.г. в отделе фармакологии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН в соответствии с планом научно-исследовательских работ по заданиям 08.04.01. Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых незаразных и вызываемых условно-патогенными микроорганизмами заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных (№ гос. рег. 15070.3666026906.06.8.001.2). Программ фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации Россельхозакадемии на 2001-2005 и 2006-2010 г.г. 

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов (И.Т. Фролов, 1965). Перед экспериментом животные выдерживались в течение 2 недель в карантинных условиях на стандартном пищевом рационе (И.П. Западнюк с соавт., 1983). Для опыта животных брали в эксперимент после внутригрупповой адаптации. Доступ к воде и корму был свободным, световой режим естественным.

При выполнении работы проводили токсикологические, физико-химические, гематологические, биохимические, иммунологические исследования с применением современных методов.

В опытах было использовано: 258 беспородных белых мышей обоего пола массой 18-22 г, 260 беспородных белых крыс обоего пола массой 160-220 г, 28 морских свинок обоего пола массой 270-310 г белого цвета или имеющих крупные белые пятна на боках туловища, 28 кроликов массой 2,2-3,1 кг, 57 поросят. Клинические испытания препарата в производственных условиях проведены на 952 поросятах.

Изучение антимикробной активности и оптимального соотношения компонентов в препарате эритроксид проводились in vitro методом серийных разведений (В.И. Антонов с соавт., 1986, В.Ф. Ковалев с соавт., 1988, М.А. Сидоров с соавт., 1995). В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов - возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам.

Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ); минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА), не содержащие препарат.

Острую, хроническую и субхроническую токсичность оценивали в соответствии с Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве, утвержденными ГУВ СССР (1991), аллергенную активность в соответствии с Методическими рекомендациями по оценке аллергенных свойств фармакологических средств (1988), эмбриотоксическую и тератогенную активность в соответствии с Методическими рекомендациями по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств (1997).

Изучение острой токсичности. Острую токсичность эритроксида изучали  на белых беспородных мышах (174гол.) и белых беспородных крысах (144 гол.) (М.П. Беленький, 1963; И.В. Саноцкий, 1970). Препарат применяли внутрижелудочно и подкожно. При пероральном способе введения препарат вводили однократно внутрижелудочно в дозах от 4500,0 до 25500,0 мг/кг массы тела в объеме 0,6 мл на мышь и 6,0 мл на крысу (дозы являются предельно допустимыми по объему для перорального введения). Объем раствора препарата, вводимого животным, доводили до необходимого объема, добавлением к препарату воды для инъекций. При подкожном введении препарат испытывали в интервале доз: 1500,0 - 9500,0 мг/кг массы тела.  Препарат вводили подкожно в объеме для белых мышей - 0,5 мл, для белых крыс - 2,0 мл.  Объем раствора препарата, вводимого животным, доводили до необходимого объема, добавлением к препарату воды для инъекций.

После введения препарата за опытными животными вели постоянное наблюдение на протяжении первого дня. В последующем состояние животных отмечали дважды в сутки в течение 14 дней. Регистрировали общий статус и поведение животных, состояние нервно-мышечных и вегетативных функций, шерстного покрова, поедание корма, потребление воды и времени наступления токсикоза и гибели. Среднелетальную дозу - LD50 - определяли аналитическим способом Спирмена-Кербера (Г.Ф. Лакин, 1990) и с помощью пробит-анализа с использованием прикладной программы Статистика +2003. Величины LD16 и LD84 эритроксида для белых мышей и белых крыс определяли графически на основании соответствующих пробитов и доз в мг/кг массы тела, показатель ошибки средней дозы эффекта - SLD50 - аналитически и графически.

Изучение подострой токсичности. Подострую токсичность эритроксида изучали на белых крысах (80 гол.) в дозах 1/50, 1/20 и 1/10 от LD50. Препарат вводили ежедневно внутримышечно в течение 21 дня. Наблюдение за клиническим состоянием животных вели на протяжении 35 дней от начала опыта. Определение массы тела у всех животных проводили до начала введения препарата, далее раз в семь дней. На 10-е, 21-е и 35-е сутки от начала введения препаратов определяли относительную массу внутренних органов крыс - печени, почек, легких, сердца, селезенки, тимуса, надпочечников и семенников (В.М. Гацура, 1974).

Субхроническую токсичность изучали на 24 поросятах, которые были разделены на 4 группы по принципу аналогов. Препарат вводили ежедневно внутримышечно в течение 14 дней: 1-я группа - контроль, препарат не вводили; 2-я группа - терапевтическая доза 0,3 мл/кг; 3-я группа - 0,9 мл/кг (в три раза превышающая терапевтическую дозу) и 4-я группа - 1,5 мл/кг (в пять раз  превышающая терапевтическую дозу). Общетоксическое действие препарата оценивали по динамике массы тела животных, гематологическим показателям и состоянию системы гемостаза.

Раздражающее действие эритроксида на кожу изучали в опытах на кроликах, при нанесении препарата в виде 1,0-10,0%-ного раствора. Площадь нанесения составляла для кроликов 80-82 мм2 (5% от общей поверхности тела животных). За два дня до эксперимента тщательно выстригали шерсть на спине, избегая механических повреждений кожных покровов. Экспозиция препарата составляла 4 часа, после чего кожу аккуратно протирали ватным тампоном, смоченным дистиллированной водой. Реакцию кожи на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения.

Учитывали функциональные нарушения кожи, характеризующиеся появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры.

В экспериментах степень эритемы учитывалась визуально и оценивалась в баллах по шкале и величина отека определялась путем измерения толщины кожной складки и оценивалась в баллах.

Для изучения влияния эритроксида на глаз кролика в конъюнктивальный мешок левого глаза закапывали пипеткой по 2 капли подогретого до 400 С препарата. Правый глаз у кроликов служил контролем, на него препарат не наносили.

Через 0,5; 1; 2; 3; 4; 5 и 6 часов после инстилляции препарата учитывали клиническое состояние организма животных (температуру тела, частоту пульса, количество дыхательных движений), а также изменение кровенаполнения конъюнктивы, наличие лакримации и выделений, состояние роговицы и век, оценивая согласно схеме, приведенной в таблице 1.

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия проведено по методике А.П. Шицковой с соавт. (1977) на самках белых крыс (36 гол.) массой 220,0±20,0 г. 

Таблица 1

Балльная система оценки раздражающего действия препарата

на конъюнктиву глаза кроликов

Интенсивность реакции	Оценка в баллах	Раздражающий эффект
Нет реакции	0	Отсутствует
Слабая реакция	2	Слабый
Выраженная реакция	4	Умеренный
акримация	6	Слабо выраженный
Наличие выделений	8	Выраженный
Отек век	10	Сильно выраженный

Фазу полового цикла устанавливали путем исследования вагинального содержимого. Первым днем беременности считали день обнаружения спермиев после подсадки самцов к самкам. Животные были разделены на три группы: контрольную и две опытные (по 12 животных в каждой). Крысам первой опытной группы на пятый день беременности (период имплантации) и второй опытной группы на 15 день беременности (период органогенеза) вводили эритроксид в дозе 0,3 мл/кг масcы тела внутримышечно. Для выявления повреждающего действия препарата на плод половину самок убивали на 19-20 день беременности. Проводили осмотр матки, плацент и плодов, подсчитывали количество желтых тел беременности, оценивали равномерность расположения плодов в рогах матки.

Раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость подсчитывали по формулам, предложенным А.М. Малашенко и И.Е. Егоровым.

В целях выявления патологии внутренних органов эмбрионов материал фиксировали в жидкости Боуэна и 700 спирте. Аномалии скелета выявляли по методу Доусона в модификации А.П. Дыбана с соавторами.

Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия препарата служили показатели гибели зародышей на пред- и постимплантационных стадиях развития (эмбриональный эффект), наличие аномалий развития внутренних органов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости, масса зародышей.

Постнатальное развитие потомства оценивали в течение одного месяца жизни по числу живых и мертвых новорожденных, динамике зоометрических показателей (массы тела и краниокаудального размера), общему физическому развитию (срокам отлипания ушных раковин, появления первичного волосяного покрова, прорезывания резцов, открытия глаз, опускания семенников, открытия влагалища). Также определяли среднюю величину помета, соотношение самцов и самок.

Исследования выполнены в соответствии с требованиями, изложенными в методических указаниях, а также с учетом рекомендаций международных организаций.

Аллергизирующие свойства эритроксида изучали согласно Методическим рекомендациям, разработанным в НИИ медицины труда АМН РФ по единой схеме постановки токсикоаллергических экспериментов.

Исследование аллергенных свойств препарата проведено на морских свинках-аналогах (28 гол.) массой тела 270-310 г, обоего пола белого цвета или имеющих крупные белые пятна на боках туловища, с использованием реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) и реакции специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ). РСАЛ учитывается по величине отношения процента агломерации лейкоцитов в опытном мазке (АО) к проценту агломерации лейкоцитов в контрольном мазке (АК), при этом реакция считается положительной, если процент агломерированных лейкоцитов в опыте выше или ниже показателя агломерации в контроле в 1,5 раза.

Показатель РСЛЛ рассчитывали по формуле:

РСЛЛ % = × 100, где

- количество лейкоцитов

Влияние препарата на качество мясопродуктов проведено на кроликах (12 гол.) с использованием слепого метода по 9-ти бальной шкале для органолептической оценки качества вареного мяса и бульона разработанного ВНИИМП (1985).

С целью характеристики общего состояния животных при проведении модельных опытов общепринятыми методами, описанными в соответствующих руководствах (В.Г. Колб, В.С. Камышников, 1982; И.П. Кондрахин с соавт., 2004) в крови определяли количество эритроцитов (1012/л); гемоглобина (г/л); СОЭ (мм/ч); лейкоцитов (109/л); тромбоцитов (109/л). Фракции белка определяли электрофоретически в агарозном геле, концентрацию общего белка, липидов и билирубина с использованием наборов фирмы Vital Diagnostics, концентрацию мочевины, фосфора, холестерина, глюкозы, креатинина, кальция, активность аспартат - и аланинаминотрасфераз (АсАТ и ААТ), щелочной фосфатазы и -глутамилтрансферазы - на биохимическом анализаторе Hitachi-902.

При изучении фармакокинетических параметров эритроксида в опыт было подобрано 22 поросенка массой тела 9-11 кг,  которым вводили эритроксида внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг массы тела однократно. Через 1, 3, 6, 9, 12, 24 и 48 часов после введения препарата убивали по 3 подопытных животных и одного контрольного поросенка в конце опыта.

Содержание эритромицина и окситетрациклина определяли в крови, моче, печени, почках, бедренной мышце, легких и содержимом толстого кишечника.

Опыт по изучению остаточных количеств активнодействующих веществ эритроксида был проведен на клинически здоровых поросятах месячного возраста (n=11), из которых один был контрольным, ему препарат не применялся. Поросятам опытной группы (n=10) в течение 5-ти дней один раз в сутки внутримышечно вводили эритроксид в дозе 0,3 мл/кг массы тела.

Для проведения исследований убивали по 2 опытных поросенка через 1, 3, 5, 7, и 10 суток после последнего введения эритроксида. Контрольное животное забили в конце опыта. Содержание эритромицина и окситетрациклина определяли в крови, печени, почках, легких и бедренной мышце.

Определение остаточных количеств эритроксида проведено по изучению содержания эритромицина и окситетрациклина гидрохлорида.

Определение содержания эритромицина и окситетрациклина гидрохлорида проводили микробиологическим методом диффузии в агар. При проведении исследований руководствовались "Методическими указаниями по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства" № 3049-84 от 29.06.84. Приготовление тест-культур, приготовление микробной взвеси, агаризованных сред и буферных растворов, приготовление основного и промежуточных растворов стандарта антибиотика и построение стандартной кривой проводили по методикам, описанным в справочнике Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии (Ковалев В.Ф. с соавт.,1988).

Тест-микробы M.luteus АТСС 9341 и  Bacillus subtilis вариант Л2 были получены в Государственном научно-исследовательском институте стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л.А.Тарасевича.

Стандартный образец эритромицина по РСО 9347-82-00494185 с активностью 928 мкг/мг был получен в ВГНКИ. Для построения стандартной кривой использовали этанол, а для приготовления промежуточного раствора - фосфатный буфер № 3 (рН 7,8-8,0). Концентрация контрольного раствора 0,2 мкг/мл.

Стандарт окситетрациклина гидрохлорида по РСО 9344-199-00494185-99 с активностью 931 мкг/мг был получен в ВГНКИ. Для построения стандартной кривой применяли цитратно-солянокислый буфер № 1 (рН 5,0-5,2). Концентрация контрольного раствора 0,5 мкг/мл.

Клинические опыты по изучению терапевтической эффективности эритроксида при колибактериозе проводили на поросятах 2-6 дневного возраста (316 гол.) и при сальмонеллезе на поросятах 30-40 дневного возраста (636 гол.) в условиях СХА Свобода Россошанского района Воронежской области и СПК Новая жизнь Алексеевского района Белгородской Области.

Диагноз на заболевание колибактериозом и сальмонеллезом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, бактериологического исследования, патологоанатомического вскрытия, с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

Поросят контрольной группы лечили  внутримышечным введением тетрациклина в дозе 10  тыс. ЕД/кг массы тела два раза в день до и в течение 2-3 дней после исчезновения клинических признаков заболевания.

Животным опытной группы для лечения применяли эритроксид внутримышечно в дозе 0,3-0,4 мл/кг живой массы один раз в сутки с интервалом 48 часов. При тяжелом течении болезни препарат вводили трехкратно с интервалом между введениями 24 часа.

За  животными опытной и контрольной групп вели ежедневное клиническое наблюдение, при этом учитывали общее состояние, аппетит, поведение, течение болезни, сроки выздоровления.

Статистическая обработка результатов проведена с пользованием пакетов прикладных программ Microsoft Excel, Statistica 5,0 на PC Pentium III. Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стъюдента (Г.Ф. Лакин, 1990).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Антимикробная активность эритроксида и обоснование состава препарата

Изучение антимикробной активности препарата эритроксид и составляющих его компонентов (окситетрациклин и эритромицин) проводили методом серийных разведений. В качестве тест культур использовали референтные штаммы Е. coli 866 и Salmonella cholerae suis. Микробная загруженность составляла 250 тыс. м.к. в 1 мл среды.

Для выявления оптимального соотношения компонентов в препарате минимальную бактериостатическую концентрацию различных комбинаций (в мас.%: К1 - 5,0:5,0; К2 - 4,5:5,5; К3 - 5,5:4,5; К4 - 4,0:6,0; К5 - 6,0:4,0) сравнивали с активностью исходных действующих веществ - окситетрациклином и эритромицином.

В результате исследования антимикробной активности препарата эритроксид и составляющих его компонентов установлено, что как эритромицин, так и окситетрациклин, имеют высокую антимикробную активность по отношению к E. coli 866 и S. cholerae suis.

Бактериостатическая концентрация эритромицина по отношеннию к S. cholerae suis составляет 50,0 мкг/мл, а окситетрациклина - 25,0 мкг/мл. Из 5 изученных композиций наиболее активными оказались композиции 1, 2 и 4. Совместное применение эритромицина и окситетрациклина позволило повысить антимикробную активность эритромицина в этих композициях в отношении сальмонелл соответственно в 8,0-4,4-5,0 раз, а окситетрациклина - в 4,0Ц1,8Ц1,7 раза.

Бактериостатическая концентрация эритромицина по отношеннию к E. coli 866  составляет 50,0 мкг/мл, а окситетрациклина - 25,0 мкг/кг. Из 5 изученных композиций наиболее активными оказались композиции 1, 3 и 4. Совместное применение эритромицина и окситетрациклина позволило повысить антимикробную активность эритромицина в этих композициях в отношении эшерихий соответственно в 16,0-7,3-10,0 раз, а окситетрациклина - в 8,0-4,4-3,3 раза.

Таким образом, совместное применение эритромицина и окситетрациклина в различных соотношениях позволило снизить минимальную бактериостатическую концентрацию препарата в отношении изученных культур, что свидетельствует о синергическом действии составляющих компонентов. Но наиболее эффект синергизма проявился в композиции 1. Так антимикробная активность эритромицина в отношении сальмонелл возросла в 8 раз, а в отношении эшерихий - 16,0 раз. Антимикробная активность окситетрациклина в отношении сальмонелл возросла в 4,4 раза, а в отношении эшерихий - 8 раз.

В опыте по изучению терапевтической эффективности эритроксида при экспериментальных инфекциях белых мышей было установлено, что в контрольных группах животных отмечали некоторые отличия, характерные для изучаемых инфекций. При эшерихиозе отмечали внезапную гибель животных в течение первых 2-3 дней, без видимых клинических признаков заболевания. Для сальмонеллезной инфекции, несмотря на высокую вирулентность полевого штамма возбудителя, характерным было более затяжное течение, постепенно развивающееся глубокое угнетение со значительным ослаблением дыхательной функции, иногда с проявлением диареи. Чаще животные погибали на 3Ц5 день. В контрольных группах, не подвергавшихся обработке эритроксидом, зафиксировали гибель 100% мышей. Из крови сердца, лёгких, печени, почек и селезёнки реизолировали исходные культуры.

Наибольшую активность эритроксид проявил при эшерихиозной инфекции. Однократное введение препарата через 3 и 6 часов после заражения сдерживало развитие инфекции (при полном отсутствии клинических признаков) и обеспечивало 100%-й индекс защиты. При использовании эритроксида через 12 часов после заражения мышей индекс защиты составил 62,5%.

При сальмонеллёзной инфекции наибольший эффект достигли при введении эритроксида через 6 часов после инокуляции возбудителя (индекс защиты был равен 87,5%). При использовании препарата спустя 3 часа после заражения данный показатель снижался до 75,0%. Самый низкий индекс защиты был при введении эритроксида через 12 часов после заражения (50,0%).

Проведенные исследования показали (рис. 1), что наиболее выраженное антимикробное действие эритроксид оказывает при эшерихиозной инфекции (индекс защиты достигает 62,5Ц100%), при сальмонеллёзной инфекции его эффективность была несколько ниже (50,0- 87,5%).

Рис. 1. Индекс защиты эритроксида при эшерихиозной и сальмонеллезной инфекции мышей

Следует отметить, что гибель мышей в опытных группах по сравнению с контролем отмечали в более отдалённые сроки.

При бактериологическом исследовании патматериала от павших жи-вотных опытных групп из крови сердца, печени, почек и селезёнки были также выделены исходные культуры. Изучение антимикробной активности препарата и отдельных компонентов показало наличие синергидного действия в отношении изученных патогенных культур.  Установлено, что наиболее активной композицией можно считать композицию 1.

При изучении антимикробной активности композиции 1, которая в дальнейшем получила название эритроксид, было установлено, что эритроксид обладает выраженными антимикробными свойствами (табл. 2).

Активность препарата в отношении музейных штаммов эшерихий была достаточно высокой - 3,9-7,8 мкг/мл, однако в отношении полевых снижалась до 62,5 мкг/мл. Минимальное подавляющее действие эритроксида в отношении музейных штаммов сальмонелл установлено в концентрации 3,9 - 15,6 мкг/мл, а в отношении полевых - 15,6-62,5 мкг/мл. Бактериостатическая концентрация для музейной кокковой микрофлоры составила 3,9 мкг/мл. Бактерицидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бактериостатическое соответственно в 2 раза.

Таблица 2

Антимикробная активность эритроксида

Культура микроорганизмов	МБсК, мкг/мл	МБцК, мкг/мл
Escherichia coli 57/583	7,8	15,6
Escherichia coli 26	15,6	31,2
Escherichia coli 113-3	3,9	7,8
Escherichia coli III(049) п	31,2	62,5
Escherichia coli 04	62,5	125,0
Escherichia coli А 20 (п)	62,5	125,0
S. cholerae suis	3,9	7,8
S. cholerae suis (п)	15,6	31,2
S.thyphimurium 383/144	15,6	31,2
S.thiphi suis	3,9	7,8
S.thiphi suis (п)	62,5	125,0
S.enteritidis (п)	7,8	15,6
Strept. faecalis 5957 гр.Д	3,9	7,8

3.2. Фармако-токсикологическая характеристика эритроксида

3.2.1. Острая токсичность препарата

Определение параметров токсичности препарата в остром опыте проведенные при однократном пероральном и подкожном введении эритроксида, показало (табл. 3), что он относится к IV классу опасности - вещества малоопасные (ГОСТ 12.1.007-76).

Таблица 3

Параметры острой токсичности эритроксида для лабораторных животных при однократном внутрижелудочном и подкожном введении (мг/кг)

Вид животных	Параметры токсичности					SLD50
	МПД	LD16	LD50	LD84	LD100
внутрижелудочное введение
Белые мыши	4500,0	7944,8	16053,9 (13400-18700)	24540,3	28689,2	1303,7
Белые крысы	4500,0	7252,0	15239,3 (12700-17800)	23491,8	27551,8	1267,3
подкожное введение
Белые мыши	2500,0	3725,0	6003,5 (4960-7030)	8282,0	9421,3	510,4
Белые крысы	2500,0	3961,4	6410,4 (5260-7420)	8859,5	10084,1	531,0

3.2.2.  Подострая токсичность эритроксида

В подостром опыте при многократном подкожном введении эритроксида в дозах: 1-я группа - контроль; 2-я группа (20 гол.) - 1/50 LD50  - 0,12 мл/кг; 3-я группа (20 гол.) - 1/20 LD50 - 0,30 мл/кг; 4-я группа - 1/10 LD50 - 0,60 мл/кг установлено, что препарат не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, груминг, частота дыхания у всех животных опытных групп, как в период применения препарата, так и в течение двух недель после окончания применения эритроксида оставались в пределах физиологической нормы. Также не было отмечено случаев гибели животных.

За период наблюдения у животных опытных групп не было отмечено нарушений функций пищеварения и мочеотделения. Крысы опытных групп оставались подвижными, у них не отмечалось нарушение аппетита, были сохранены рефлексы.

Эритроксид в дозах 0,12 и 0,30 мл/кг не оказывает негативного влияния на интенсивность роста животных. У крыс, которым препарат вводили подкожно в дозе 0,60 мл/кг массы тела, на протяжении всего опыта отмечали снижение прироста массы тела по отношению к контролю (через 7 дней - на 5,3%, через 14 дней - на 20,8%, через 21 день - на 19,2%), что свидетельствует о токсическом действии препарата.

При исследовании крови животных, которым вводили эритроксид в дозах 0,12, 0,30 и 0,60 мл/кг массы тела, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови, и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы. Однако на фоне применения препарата в дозе 0,6 мл/кг, наблюдается изменение ряда биохимических показателей крови, характеризующих в основном состояние почек и печени.

Через 21 день от начала опыта, у крыс данной группы повысился по сравнению с контролем уровень креатинина - на 26,0%, мочевины - на 40,1%, возросла активность цитолитических ферментов: АсАТ - на 35,9%, ААТ - на 64,5%,  активность ЩФ повысилась на 55,3%, уровень общего билирубина возрос в 1,6 раза.

Все изменения в организме лабораторных животных, вызванные двадцатиоднодневным введением комплексного антибактериального препарата в высоких дозах, носили обратимый характер, о чем свидетельствовало восстановление функций организма животных до нормы через 2 недели после отмены препарата.

3.2.3. Субхроническая токсичность эритроксида в опытах на поросятах

В опыте по изучению субхронической токсичности на поросятах установлено, что применение эритроксида в изученных дозах не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит животных. В период всего опыта поросята контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не было установлено. Эритроксид в различных дозах не снижал скорости роста поросят.

При многократном (14 дней) применении эритроксида в дозах  0,3 и 0,9 мл/кг (терапевтическая доза и в 3 раза ее превышающая) большинство морфологических и биохимических показателей крови существенно не отличались от показателей у поросят контрольной группы.

При применении эритроксида в дозе 1,5 мл/кг массы тела (в 5 раз превышающая терапевтическую дозу) также большинство морфологических и биохимических показателей крови существенно не отличались от таковых у поросят контрольной группы. Исключение составляли показатели, характеризующие функциональное состояние печени и почек. У животных третьей опытной группы достоверно возрастало содержание в сыворотке крови креатинина - на 26,4%, мочевины - на 26,0%, активность ААТ, АсАТ - на 64,3 и 31,0 % соответственно и уровень билирубина - на 10,9%. Однако среднее значение этих показателей  у поросят опытной группы не выходило за верхние границы нормы для данного вида животных.

3.2.4. Местнораздражающее действие

При изучении местнораздражающего действия эритроксида установлено, что при однократной аппликации на кожные покровы кроликам при плотности нанесения от 0,020 до 0,10 мл/см2 препарат не вызывает повреждение кожи в виде эритемы или ее отеков.

При внесении препарата в конъюнктивальный мешок кроликов и при внутрикожном введении отмечено слабораздражающее действие эритроксида.

3.2.5. Аллергенные свойства

Опыты по изучению аллергенных свойств эритроксида проведены на белых беспородных крысах и морских свинках при наружном, конъюнктивальном и внутрикожном способах применения препарата.

Результаты оценки сенсибилизирующего действия эритроксида показали отсутствие выраженной реакции иммунной системы подопытных животных на введение препарата. Препарат не вызывал контактного дерматита после многократных накожных аппликаций, при этом реакции специфического лизиса и специфической агломерации лейкоцитов были отрицательны. Полученные данные позволяют сделать вывод об отсутствии аллергенного действия у изучаемого препарата.

3.2.6. Влияние эритроксида на качество мясопродуктов

Гигиеническую оценку влияния эритроксида на качество мясопродуктов проводили на кроликах со средней массой 2,7-3,0. Животным опытной группы внутримышечно вводили эритроксид в дозе 0,3 мл/кг массы тела один раз в сутки в течение 14 дней.

В результате проведенных органолептических исследований не установлено существенных различий между качеством проб бульона и мяса кроликов контрольной и опытной групп. Пробы мяса имели хороший, свойственный продукту цвет и вид на разрезе, ароматный запах, приятный вкус, нежную консистенцию и достаточную сочность. Бульоны были прозрачные, слегка золотистого цвета с капельками жира, приятные на вкус и достаточно ароматные. Общая органолептическая оценка проб мяса и бульона - хорошая.

3.3. Фармакокинетические параметры эритроксида и остаточные количества в организме поросят

После введения эритроксида фармакокинетический профиль эритромицина и окситетрациклина имел присущую пролонгированным препаратам форму - вслед за размытым максимумом следовало медленное снижение концентрации активнодействующих веществ лекарственного средства.

Как видно из фармакокинетических профилей (рис. 2), максимальной концентрации 5,600,15 мкг/мл в крови эритромицин при внутримышечном введении достигает через 4,7 часа после введения, а максимальная концентрация окситетрациклина 9,86±0,23 мкг/мл - через 3,95 мин., тогда как уровень минимальной подавляющей концентрации составляет 3,12-6,25 мкг/мл. Период полуабсорбции  эритромицина и окситетрациклина составил в среднем 119 и 42,6 минуты соответственно. Таким образом, оба компонента характеризуются достаточно длительной фазой всасывания, которая сменялась также достаточно длительной фазой элиминации.

Анализ параметров кинетики позволяет заключить, что эритромицин и окситетрациклин достаточно медленно выводится из организма животных, на что указывают величины фармакокинетических параметров: среднее время удерживания препарата в организме (MRT) - 37,6 ч (эритромицин) и 31,4 ч (окситетрациклин), и период полувыведения антибиотиков из организма (T1/2) - 43,4 ч и 30,8 ч соответственно.

Снижение концентрации препарата носит ярко выраженный двухфазный характер (рис. 2). Высокий уровень концентрации антибиотиков в крови и длительное время его циркуляции предопределяют относительно высокие показатели интегральных параметров - AUC (283,1 и 431,7 мкгч /мл) и MRT (37,6 и 31,4 ч соответственно).

Высокое значение кажу-щеегося объема распределе-ния антибиотиков в цент-ральной камере (28,4 и 30,9 л) свидетельствуют о достаточно высокой степени связывания с белками сыворотки крови окситетрациклина и особенно эритромицина.

Показателем хорошего проникновения антибиотиков в органы и ткани является объем стационарного распределения препарата, который в данном случае соответствовал 69,3 л (эритромицин) и 30,2 л (окситетрациклин). Таким образом, одно-кратное  введение эритроксида в дозе 0,3 мл/кг обеспечивает терапевтическую концентра-цию активнодействующих ве-ществ в организме поросят в течение 36-48 часов. Определение остаточных количеств эритроксида в

Рис. 2. Динамика содержания эритромицина и окситетрациклина в крови поросят при  внутримышечном введении эритроксида

органах, тканях и биологических жидкостях поросят через 14 суток после последнего применения препарата показало, что эритромицин и окситетрациклин отсутствовали во всех объектах исследования.

3.4. Терапевтическая эффективность эритроксида

в производственных условиях

Результаты опыта по изучению эффективности применения эритроксида при лечении колибактериоза у поросят представлены в таблице 4.

Проведенные исследования показали, что эритроксид обладает более высокой терапевтической эффективностью по сравнению с тетрахлоридом. При его применении клиническое улучшение (прекращение поноса) и улучшение аппетита наступало чаще всего через 3-4 дня лечения. В контрольной группе клинические признаки заболевания исчезали обычно на 5-6 день лечения. При применении эритроксида значительно снижался падеж поросят (на 7,2%). Во втором опыте (табл. 4) при  применении эритроксида количество выздоровевших животных повышается на 6,8%, на 2,8% снижается вынужденный убой и почти в 1,9 раза - падеж.

Как показали проведенные исследования, терапевтическая эффективность эритроксида составила 94,9%, что на 6,4% выше, чем при применении тетрахлорида (88,5%). При этом выздоровление основной массы опытных поросят происходило уже после двукратного применения эритроксида. У них улучшался аппетит, фекалии становились оформленными, нормализовалась дефекация. Каких либо побочных явлений, свидетельствующих о токсическом влиянии эритроксида на поросят, не отмечалось.

Применение эритроксида, сокращая сроки заболевания, способствовало лучшему росту и развитию опытных поросят. Их среднесуточный привес за период опыта был на 17,2 % выше, чем у поросят, которых лечили тетрахлоридом.

Таблица 4

Эффективность применения эритроксида для лечения колибактериоза поросят

Показатели	Группа животных
	СХА Свобода			СПК Новая жизнь
	тетрахло-рид	эритроксид	тетрахло-рид		эритроксид
Количество животных, гол.	56	87	83		90
Выздоровело, гол.  %	50 89,2	83 95,4	70 84,3		82 91,1
Пало, гол.   %	6 11,8	4 4,6	7 8,4		4 4,4
Вынужденно убито, голов   %	- -	- -	5 7,2		4 4,4
Сроки выздоровления, дн.	5,60,5	3,20,4	5,30,4		3,20,5
Среднесуточный прирост массы тела одного животного, кг   % к контролю	0,100 -	0,112 112,0	- -		- -
Терапевтическая эффективность, %	89,2	95,4	84,3		91,1

Результаты опыта по изучению эффективности применения эритроксида для лечения сальмонеллеза у поросят представлены в таблице 5.

Таблица 5

Эффективность применения эритроксида для лечения сальмонеллеза поросят

Показатели	Группа животных
	СХА Свобода		СПК Новая жизнь
	тетрахлорид	эритроксид	тетрахло-рид	эритроксид
Количество животных, гол.	148	159	162	167
Выздоровело, гол.  %	131 88,5	154 94,9	126 77,8	145 86,8
Пало, гол.   %	3 2,0	3 1,9	14 8,6	10 6,0
Осталось больными, голов   %	14 9,5	5 3,1	22 13,6	12 7,2
Сроки выздоровления, дн.	5,90,7	3,60,5	6,00,2	3,20,4
Среднесуточный прирост массы тела одного животного, кг % к контролю	0,290 100,0	0,340 117,2	- -	- -
Терапевтическая эффективность, %	88,5	94,9	77,8	86,8

Результаты проведенных нами исследований по разработке лекарственной формы, изучению антибактериальных, фармако-токсикологических свойств и терапевтической эффективности комплексного антибактериального лекарственного средства на основе эритромицина и окситетрациклина были использованы при разработке технических условий и инструкции по применению лекарственного средства в ветеринарии.

4. ВЫВОДЫ

1. Комплексный антибактериальный препарат на пролонгирующей основе, действующими веществами которого являются эритромицин и окситетрациклин в % соотношении 5:5, обладает широким спектром антимикробной активности. Минимальная бактериостатическая концентрация для эшерихий и сальмонелл составила 3,9 - 62,5  мкг/мл, для кокков - 3,9 мкг/мл. Минимальная бактерицидная концентрация в отношении изученных культур превышала минимальную бактериостатическую концентрацию в 2 раза.

2. Компоненты эритроксида - эритромицин и окситетрациклин обладают взаимоусиливающим антимикробным действием в отношении эшерихий и сальмонелл. Минимальная бактериостатическая концентрация эритроксида в отношении эшерихий характеризуется снижением по сравнению с эритромицином в 8 раз и окситетрациклином - в 4 раза, а в отношении сальмонелл соответственно - в 4 и 2 раза. 

3. Эритроксид является малотоксичным препаратом (4 класс опасности). ЛД50 эритроксида при внутрижелудочном введении для белых мышей составляет 16053,9 мг/кг, для белых крыс - 15239,3 мг/кг; при подкожном введении для белых мышей - 6003,5 мг/кг, для белых крыс - 6410,4 мг/кг.

4. При многократном (21 день) внутримышечном введении эритроксида белым крысам в дозах 1/50 от ЛД50 (0,12 мл/кг) и 1/20 от ЛД50 (0,3 мл/кг) не выявлено функциональных изменений в организме животных. Применение препарата в дозе 1/10 от ЛД50 (0,6 мл/кг) повышает нагрузку на печень и почки (повышение активности АсАТ на 35,9%, ААТ - на 64,5%, ЩФ - на 55,3%, билирубина - в 1,6 раза, креатинина на 26,0%, мочевины - на 40,1%) при отсутствии клинических признаков интоксикации, и которые восстанавливаются через 7 суток после отмены препарата.

5. Эритроксид обладает слабо раздражающим  действием. У препарата отсутствуют кумулятивные и аллергенные, эмбриотоксические и тератогенные свойства.

6. При внутримышечном введении в дозе 0,3 мл/кг (терапевтическая доза) в течение 14 дней поросятам эритроксид не оказывает существенного влияния на их клинический статус, скорость роста, поведение и аппетит. Многократное применение препарата в терапевтической дозе существенно не влияет на морфологические и биохимические показатели крови поросят.

7. При внутримышечном введении эритроксида в дозе 0,3 мл/кг концентрация окситетрациклина в крови поросят, превышающая МБсК наблюдается через 1 час, достигая максимума к 4 часам, эритромицина - через 3 и  4,5-5 часов. Окситетрациклин и эритромицин удерживаются в крови до 24-48 часов, что позволяет на всем протяжении интервала дозирования поддерживать их концентрацию на уровне минимальной бактериостатической концентрации для возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза поросят. 

8. Терапевтическая эффективность препарата эритроксид в дозе 0,3 мл/кг при лечении колибактериоза поросят составляет 91,1-95,4 %, сальмонеллеза - 86,8-94,9%.

9. Препарат при длительном применении не оказывает отрицательного влияния на качество мяса и бульона, срок возможного использования продуктов убоя составляет - 14 дней после окончания применения препарата.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ предложения

1. Для лечения поросят больных колибактериозом и сальмонеллезом рекомендуется применять эритроксид в дозе 0,3 мл/кг массы тела двукратно с интервалом 48 часов. При тяжелом течении болезни - трехкратно с интервалом между введениями 24 часа.

2. Основные научные положения работы и ее практические результаты рекомендуется использовать в производственных условиях ветеринарными специалистами, а также в учебном процессе студентами, аспирантами и научными работниками ветеринарного профиля.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Шабунин С.В. Изучение токсических свойств препарата эритроксид / С.В. Шабунин, Т.А. Панина // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции: Матер 4-ой Междунар. науч.- практ. конф. - Москва, 2002. - С. 212-213.

2. Востроилова Г.А. Изучение фармакокинетики антибактериального препарата эритроксид / Г.А. Востроилова, Т.А. Панина, П.А. Паршин // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции: Матер. 4-ой Межд. науч.- практич. конф. - М., 2002. - С. 214.

3. Панина Т.А. Антимикробная активность эритроксида / Т.А. Панина, Г.А. Востроилова, С.В. Шабунин // Матер. международной науч.-произв. конференции, посвящ. 100-летию со дня рождения проф. Спирюхова И.А. - Пенза, 2007. - С. 70-73.

4. Панина Т.А. Влияние препарата Эритроксид на качество мяса и мясопродуктов / Т.А. Панина //Достижения молодых ученых - будущее в развитии АПК: Матер. межрегионал. науч.-практ. конф. молодых ученых. - Воронеж, 2007. - С. 228-230.

5. Ефанова Л.И. Чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам при смешанных инфекциях животных / Л.И. Ефанова, А.С. Транькова, В.В. Давыдова, Ю.В. Иванова, Т.А. Панина // Материалы 1-го съезда ветеринарных фармакологов России. - Воронеж, 2007. - С. 280-285.

6. Панина Т.А. Терапевтическая эффективность эритроксида при колибактериозе и сальмонеллезе поросят / Т.А. Панина Т.А., С.В. Шабунин // Материалы 1-го съезда ветеринарных фармакологов России. - Воронеж, 2007. - С. 486-488.

7. Панина Т.А. Антимикробная активность эритроксида / Т.А. Панина, Г.А. Востроилова, С.В. Шабунин // Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных: Матер. междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 100-летию со дня рожд. проф. В.А. Акатова. - Воронеж, 2009. - С. 331- 333. 

*8. Панина Т.А. Параметры токсичности эритроксида / Т.А. Панина, Г.А. Востроилова, Г.Н. Близнецова // Ветеринария и кормление. Ц 2009. - № 3. -  С.23-24.

9. Панина Т.А. Биохимические показатели крови поросят при применении препарата эритроксид / Т.А. Панина // Современные проблемы, перспективы и инновационные тенденции развития аграрной науки: Матер. междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 85-летию со дня рожд. Чл.-корр. М.М. Джамбулатова. - Махачкала, 2010. - Ч. 1. - С. 268- 270. 

*10. Панина Т.А. Безопасность и эффективность эритроксида для свиней / Т.А. Панина, Т.Е. Рогачева, А.В. Топольницкая // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. Ц 2011. Ц Т. 205. Ц С. 159-164.

11. Панина Т.А. Фармакокинетика и остаточные количества препарата Эритроксид / Т.А. Панина // Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер. III съезда фармакологов и токсикологов России. - Санкт-Петербург, 2011. - С. 354-356.

*12. Панина Т.А. Влияние препарата эритроксид на репродуктивные функции белых крыс / Т.А. Панина, И.Ю. Кашапова, Е.И. Пономарева // Достижения науки и техники АПК. Ц 2012. - №1. Ц С. 59-60.

13. Патент № 2388827 Россия, C1, C12Q 1/04; C1, C12N 1/00. Способ определения чувствительности микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью к сочетаниям антибактериальных препаратов / Л.И. Ефанова, Т.А. Панина, В.В. Давыдова; ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии (RU). - 2008140222/13; Заявл. 09.10.2008; Опубл. 10.05.2010; Бюлл. №13 // ИСМ. - 2010.

* - Публикации в научных изданиях, рекомендованных перечнем ВАК РФ

   Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству