Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии  

ФГОУ ВПО РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ

УНИВЕРСИТЕТ - МСХА имени К.А. Тимирязева

На правах рукописи

ИПУНОВА Елена Андреевна

ЭРИТРОЦИТАРНЫЙ ГОМЕОСТАЗ

У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ  ПТИЦЫ

ПРИ  АДАПТАЦИИ К СТРЕССОРАМ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

доктора биологических наук

03.00.13 Ц Физиология

Москва - 2009

Работа выполнена на кафедре физиологии и биохимии животных

ФГОУ ВПО Российский государственный аграрный университет -

МСХА имени К.А. Тимирязева

               Научный консультант:  доктор биологических наук,  профессор

                                               Иванов Алексей Алексеевич

               Официальные оппоненты:

                                               доктор биологических наук, профессор

                                               Маннапов Альфир Габдуллович

                                               Заслуженный деятель науки РФ,

                                               доктор ветеринарных наук, профессор

                                               Белкин Борис Леонидович

                                       

                                               доктор биологических наук

                                               Галочкина Валентина Петровна

                                               

                                               

               Ведущая организация:

              ФГОУ ВПО Московская государственная

                                      академия ветеринарной медицины и

                              биотехнологии имени К.И. Скрябина        

                                     

                               

                       

Защита диссертации состоится  л л  2009 года

               в  часов на заседании диссертационного совета Д.220.043.09

               при Российском государственном аграрном университете - МСХА

               имени К.А. Тимирязева по адресу: 127550, Москва, ул. Тимирязев-

ская, 49, учёный совет РГАУ - МСХА  имени К.А. Тимирязева,

тел. (факс): (495) 976-24-92.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Автореферат разослан л    л 2009 года и раз-

               мещен на сайте ВАК www.vak.ed.gov.ru

      Учёный секретарь

        диссертационного совета       А.А. Ксенофонтова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Современный подход к раскрытию механизмов адаптации к изменённой среде жизнедеятельности организма требует знания физиологических функций на молекулярно-генетическом и клеточном уровнях (Меерсон Ф.З., 1981; Репин В.С., Сухих Г.Т.,1998; Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., 2002; Озернюк Н.Д., Нечаев С.К., 2002; Шахламов В.А., 2002; Агаджанян Н.А., Губин Д.Г., 2004; Lee E. et al., 2001).

Для комплексной оценки уровней и напряжённости  протекания процессов адаптации и компенсации  в качестве естественной и доступной модели перспективно использовать эритроциты (Сыроешкин А.В. и соавт., 2002;  Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г., 2005; Погорелов В.М.,  Козинец Г.И., 2005), их мембраны адекватно отражают состояние и свойства цитомембран других тканей (Черницкий Е.А., Воробей А.В., 1981; Кагава Я., 1985; Постнов Ю.В., Орлов С.Н., 1987; Kamani G. et al., 1998). Известна  ключевая роль эритроцитов в регуляторных  процессах, направленных на интеграцию функций и обеспечение гомеостаза на уровне всего организма (Горизонтов П.Д. и соавт., 1983; 1984; Кассиль Г.Н., 1981, 1987; Фок М.В. и соавт., 1999; Судаков К.В., Захаров Ю.М., 2002; Рязанцева Н.В. и соавт., 2005; Игнатьев В.В. и соавт., 2006; Sprandel V., 1985). Эритроциты крови нашли применение в доклинических испытаниях лекарственных препаратов (Соминский В.Н и соавт., 1989; Ройтман Е.В., 2005; Муравьев А.В и соавт., 2007),  в качестве  носителей  для органоспецифической и контролируемой адресной доставки лекарственных средств в очаг поражения (Генинг Т.П. и соавт., 1988), при оценке действия эндо- и экзотоксинов на живые системы (Леонтьева О.А., Семенов Д.В., 1997; Манских В.Н., 2007).

C возросшим антропогенным прессингом для профилактики нарушений обмена веществ у сельскохозяйственной птицы, предупреждения токсикозов, элиминации токсичных веществ, повышения продуктивности, комплексной регуляции минерального обмена  широко внедряются природные минералы (Фисинин В.И., 1986, 1990, 2004; Кузнецов С.Г., 1993, 2001; Шапошников А.А., 1998; Тугемский Л.И., 1999; Воронков М.Г., Барышок В.П., 2005),  благодаря присущим им свойствам - селективный ионообмен и энтеродоноросорбция (Брек Д., 1976; Энтеросорбция, 1991). Поскольку  эритроцитарная система функционирует в соответствии с текущим состоянием организма (Горожанин Л.С., 1979), в  качестве индикатора безопасности  и эффективности применения природных минералов и препаратов на их основе в птицеводстве может быть применён эритроцит - в динамике его структурно-функциональных и кинетических преобразований в процессе выращивания птицы.

Исследования крови птиц, судя по результатам анализа научной литературы, имеют преимущественно прикладной характер, при этом слабо учитывается своеобразие крови у этой группы животных. Существующие знания по функциональной морфологии эритроцитов недостаточны, слабо систематизированы, что не позволяет эффективно использовать их при разработке методов экспресс-анализа физиологического благополучия птицы. Морфологический метод исследования крови не нашел должного практического применения. До настоящего времени отсутствовали комплексные работы, отражающие физиологические особенности эритроцитарного гомеостаза у сельскохозяйственной птицы в естественных условиях жизнедеятельности и при адаптации к стрессорам. Исследование их позволит решать широкий круг перспективных  прогностических задач.

       Цель и задачи исследования. Цель  работы - установить закономер-ности адаптации системы красной крови в динамике развития измененных состояний организма, вызванных стрессорами различной природы, а также возможность стабилизации ее параметров без ущерба физиологическому состоянию птицы путем применения природной сорбционно-активной полиминеральной кормовой добавки Экос, полученной из гидроалюмосиликатов месторождений Белгородской области. 

       Для достижения цели в исследовании решаются  следующие задачи:

         Цааобобщить известные методы морфометрии и идентификации субпопуляций эритроцитарной системы на случай исследования эритроцитов крови птицы;

- разработать способы оценки кинетики,  активности эритропоэза, позволяющие характеризовать эритроцитарный гомеостаз в физиологических условиях и при адаптации к стрессорам, а также способы ранней диагностики функционального состояния организма птицы;

- установить гематологический статус, морфометрический профиль, физиологические свойства эритроцитов периферического звена эритрона, выявить зависимость динамики и направленности их перестроек и восстановления под влиянием десинхронизирующих факторов;

- изучить возрастной состав циркулирующего эритроцитарного пула и его стрессорную динамику;

- определить кинетику эритропоэза и его резервную мощность в генезе изменённых состояний организма птицы;

          - исследовать возможность стабилизации параметров красной крови на оптимальном для поддержания кислородного гомеостаза уровне без ущерба физиологическому состоянию птицы путём применения в рационе природной сорбционно-активной полиминеральной добавки.

       Научная новизна и теоретическая значимость. Впервые на основе интегрированного подхода проведено комплексное исследование эритроцитарного гомеостаза птицы, включающего оценку стандартных гематологических характеристик, геометрического профиля, состояния мембранного аппарата и физиологических свойств эритроцитов периферического звена эритрона, а также кинетики эритропоэза в естественных условиях и в динамике изменённых состояний организма,  вызванных факторами различной природы.

       Впервые дана количественная оценка кинетики и резервной мощности эритропоэза. Установлено, что интегральным показателем напряжения костно-мозгового кроветворения и активности эритропоэза у птиц, как и у млекопитающих, служат число ретикулоцитов и степень их созревания. Разработана модель для достаточно обоснованного прогноза развития адаптационных процессов в организме, базирующаяся на статистической идентификации субпопуляций эритроцитарной системы.

       Впервые на основе определения реактивности эритроцитов крови по степени структурно-функциональной дестабилизации мембран показана возможность осуществления адекватной оценки состояния эритроцитов, включая ситуации их визуальной морфологической целостности. Экспериментально подтверждена для клеток красной крови, в том числе и  птицы, высокая чувствительность к флуктуации уровня гликемии.

       Показана возможность стабилизации параметров эритроцитарного гомеостаза без ущерба физиологическому состоянию птицы при применении природной сорбционно-активной полиминеральной  кормовой добавки Экос.

Научная новизна проведенного исследования подтверждена шестью патентами Российской Федерации на изобретения: № 2227280 от 20.04.2004 г.;
№ 224235 от 20.02.2004 г.; № 2234701 от 20.08.2004 г.; № 2268463
от 20.01.2006 г.;  № 2336046 от 20.04.2008 г.; № 2350952 от 27.03.2009 г.

Практическая значимость исследования. Материалы диссертации расширяют представления о структурно-функциональных свойствах эритроцитов и их роли в регуляторных процессах, направленных на интеграцию функций и поддержание гомеостаза организма. Новые данные по кинетике эритропоэза у птиц с коротким жизненным циклом эритроцитов дают возможность на клеточном уровне в свёрнутом виде оценить поведение биологической системы при чрезмерно высоком напряжении физиологических функций в организме.

       Разработанные способы изучения клеток крови легли в основу новой технологии, базирующейся на комплексном оперативном исследовании функциональной морфологии клеток красной крови, которую можно рекомендовать в качестве интегрального теста оценки адаптивного резерва птицы в ветеринарной практике. Работоспособность предложенных способов изучения системы эритрона проверена в лаборатории Болезни птиц Белгородской межобластной ветеринарной лаборатории и ветлаборатории птицекомплекса Яснозоринский Белгородского района Белгородской области.

Установлено, что для стабилизации параметров эритроцитарного гомеостаза, повышения общей резистентности и физиологического статуса организма, сохранности поголовья, улучшения качества и экологической чистоты мяса и яиц целесообразно к сбалансированным рационам молодняка птицы, выращиваемого на мясо, и курам-несушкам добавлять полиминеральную добавку Экос в дозировке 100-150 и 250 мгкг-1 массы тела соответственно.

Результаты диссертационного исследования реализованы в учебном процессе Белгородского государственного университета на кафедрах анатомии и физиологии человека и животных, биохимии и фармакологии в курсах медико-биологических дисциплин, медико-биологических основ физической культуры и спорта, а также могут быть использованы в ходе изучения  соответствующих разделов физиологии в других вузах. Отдельные материалы диссертационной работы по разрабатываемой проблеме были положены  в основу 5 кандидатских и одной магистерской диссертаций, выполненных под руководством соискателя.

       Защищённые патентами РФ способы изучения крови рекомендованы научным работникам и ветеринарным службам для внедрения в практику оценки системы крови птиц.

Положения, выносимые на защиту:

       1. Многопиковые эритрограммы статистического распределения по размерам диаметров эритроцитов, отражающие гетерогенные популяции (группы) клеток, участвующих в формировании циркулирующего эритроцитарного пула, являются специфической особенностью эритрона птицы.

       2. Типовая неспецифическая и независимая от первичного стрессогенного фактора реакция, проявляющаяся в первые сутки как дисбаланс эритроцитарного гомеостаза, обусловлена поступлением в кровоток эритроцитов депонированных старых, деструктивных и стрессорных de novo, готовых к гемолизу.

       3. Качественные изменения в системе красной крови отражают деструктивные процессы в эритроидном ростке костного мозга и мембранах, влияющих на функциональную активность эритроцитов и проявляющихся в виде фазовых изменений проницаемости эритроцитарных мембран, их сорбционной ёмкости и устойчивости к гемолитикам.

       4. Кинетика эритропоэза зависит от вида, интенсивности и длительности воздействия на организм стрессирующего фактора. Интегральным показателем развития репаративных процессов в эритроне птицы служат число  ретикулоцитов и степень их зрелости.

       5.ааЭритроциты птиц высоко реактивны к флуктуации гликемии независимо от вида стрессорного воздействия.

       6. Полиминеральная природная добавка Экос в рационе утят, цыплят-бройлеров и кур-несушек способствует стабилизации параметров красной крови в  пределах верхних значений нормы, положительно влияет на физиологическое состояние, повышает продуктивность и экологическую чистоту мяса и яиц.

Апробация результатов работы. Основные положения, результаты и выводы  диссертации доложены и опубликованы в материалах 47 Международных, всесоюзных, российских съездов, конгрессов, симпозиумов, конференций в период с 1980 по 2009 г., включая:  Всесоюзные съезды физиологического общества им. И.П. Павлова ( XII - Тбилиси, 1975; XIII -Алма-Ата, 1979; XIV -Баку, 1983; XV - Кишинёв, 1987);  VII Научное совещание по эволюционной физиологии (Ленинград, 1978);  III и IV (Сыктывкар, 1993, 1997) Международные симпозиумы по сравнительной электрокардиологии;  Российскую научно-практическую конференцию Экология, здоровье и природопользование (Саратов, 1997); Международную научно-практическую конференцию Актуальные проблемы экологии на пороге третьего тысячелетия и пути их решения (Брянск, 1999);  I и II Международные симпозиумы Миграция тяжёлых металлов и радионуклидов в звене: почва - растение (корм, рацион) - животное - продукт животноводства - человек (Великий Новгород, 2000, 2001);  Всероссийскую конференцию, посвящённую памяти и 95-летию со дня рождения
В.А. Пегеля (Томск, 2001);  V (2004) и VI (2005) Международные научные конференции Успехи современного естествознания (ОК Дагомыс, Сочи);  I, II и III Российские научные конференции с международным участием Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья (Белгород, 2004, 2006, 2008);  XIX (Екатеринбург, 2004) и XX (Москва, 2007) Съезды Всероссийского физиологического общества им. И.П. Павлова; сателлитный симпозиум Экология и здоровье XX Съезда физиологов России (Москва, 2007);  II Российскую научную конференцию с международным участием Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии (Москва, 2005);  I Съезд физиологов СНГ (Сочи - Дагомыс, 2005);  V Сибирский физиологический съезд (Томск, 2005);  Всероссийскую научную конференцию Механизмы индивидуальной адаптации (Томск, 2006);  VI Международную конференцию Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям) (Ярославль, 2007);  V научную конференцию с международным участием Гомеостаз и эндоэкология (Хургада - Египет, 2007);  I Международный конгресс ветеринарных фармакологов Эффективные и безопасные лекарственные средства (Санкт-Петербург, 2008);  II Съезд Российского общества медицинской элементологии (РОСМЭМ) (Тверь, 2008).

       Публикация результатов работы. По теме диссертации опубликовано 60 работ, среди них 2 монографии,  15 работ в изданиях из списка ВАК, методические рекомендации (2), получено 6 патентов РФ на изобретения.

       Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и  методов,  результатов собственных исследований, обсуждения,  выводов, практических рекомендаций,  указателя использованной литературы, содержащего 605 отечественных и зарубежных источни-ков,  и пяти приложений. Диссертация изложена на 340  страницах машинопи-си, включает 52  таблицы и 46  рисунков.

       Связь работы с научными программами (проектами) и темами.

Исследование, составившее основное содержание диссертационной работы, выполнено при финансовой поддержке МО РФ (Программа Государственная поддержка региональной научно-технической политики высшей школы и развитие её научного потенциала, проект № 449-1632, 1999-2002 гг.), Российского фонда фундаментальных исследований (проекты № 01-04-97-406, 2000-2002 гг., № 03-04-96-473, 2003-2005 гг.), хоздоговорных тем: Физиолого-токсикологическая оценка сорбирующей кормовой добавки в птицеводстве; Создание местной минерально-сырьевой базы глин и мергелей для очистки воды и производства кормовых и пищевых добавок и лекарственных препаратов для выведения радиоактивных и тяжёлых элементов из организма сельскохозяйственных животных и человека (1997-1999 гг.).

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

       Организация эксперимента. Характеристика моделей исследования.        

       В ходе работы проведены 4 серии опытов, в трех из них использовали кровь половозрелых петухов кросса ISA. После двухнедельной адаптации к условиям вивария по принципу аналогов формировали группы птиц с учетом их клинического состояния и  массы тела. Интактные служили контролем для птицы подопытных групп в соответствии со стадиями развития стресса или адаптации. Их функциональное состояние оценивалось по тем же показателям, что и у стрессируемой птицы. Животные содержались в индивидуальных проволочных клетках. Птиц в каждой новой серии не использовали повторно. Кормление осуществлялось по зоотехническим нормативам. Рационы, которые были использованы при постановке опытов,  приведены  в диссертации.

В первой серии опытов, выполненных на 30 петухах массой тела
2,900,10 кг, изучали динамику адаптации в системе эритрона к вызванному состоянию острого стресса. Его моделировали инверсией светотемнового цикла (Ведяев П.Ф., Воробьева Т.М., 1983; Хитагурова Л.Г, 2000). После  2-недельной адаптации в стандартной световой среде с режимом цикла 12С:12Т проводилась инверсия чередованием в течение трёх суток с 8 до 20 часов затемнение, с 20 до 8 часов освещение помещения вивария с последующим переводом птицы на естественный режим освещения.

Во второй серии опытов изучено влияние длительно действующего стрессогенного фактора (хронический стресс) на характеристики красной крови и эритропоэз. Опыт поставлен на 30 петухах (масса тела 3,020,31 кг). Использована модель скученного содержания животных, как наиболее неблагоприятная для сохранения гомеостаза и формирования адаптации (Голиков А.Н., 1985). Создавали её пересадкой, перегруппировкой птицы и увеличением плотности посадки до 567 см2/особь. Контролем служила птица, содержавшаяся в одиночных клетках.

В третьей серии опытов, проведённых на 32 петухах массой тела
2,960,11 кг, изучалось состояние эритрона при экспериментальном изменении  гликемического гомеостаза, c применением методики нагрузочных тестов. Для стандартизации условий дозировка вводимой глюкозы рассчитывалась индивидуально для каждой птицы, достигая на пике гипергликемию не менее 12,0 ммольл-1 (Микульская И.А., 1975). Способ введения глюкозы определялся эмпирически, предпочтение отдавалось ее выпаиванию. Глюкозу фармакопейную кристаллическую разводили физиологическим раствором до концентрации 40% и вводили ежедневно в течение 29 суток в желудок зондом из расчета 2 гкг-1 массы тела. Интактная птица получала водопроводную воду. Уровень гликемии определяли до выпаивания глюкозы.

Состояние перенесённого птицей стресса оценивалось по динамике массы тела и потребленного корма, состоянию перьевого покрова,  выраженности стереотипного поведения  (Петров К., 1981;  Никитченко И.Н. и соавт., 1988), концентрации глюкозы в крови. Проведён  дифференцированный подсчёт лейкоцитов и числа эозинофилов. При типировании состояния стресса ориентировались также на косвенные показатели: коэффициент гемоконцентрации (К), как показатель перераспределения крови в организме, гематокрит, число эритроцитов и насыщенность их гемоглобином, средний объём клетки, резистентность и уровень внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ)  (Катюхин Л.Н., Маслова М.Н., 1984; Медведева И.А., Маслова М.Н., 1993).

В четвертой серии опытов изучалось влияние природной полиминеральной добавки Экос на физиологическое состояние, функциональную морфологию эритроцитов и дыхательную функцию крови птицы. Опыты на утятах-бройлерах кросса Медео (апрель - июнь 1997 г.) и курах-несушках кросса ISA (март - май 1999 г.) выполнены в условиях вивария БеГУ. Было сформировано 4 группы кондиционных суточных утят по 20 гол. в каждой. Птица контрольной группы получала основной рацион (ОР), второй, третьей и четвертой подопытных групп - дополнительно ежесуточно Экос в дозировке соответственно 100, 150 и 200 мг⋅кг-1 массы тела. Куры в возрасте 210 суток после двухнедельной адаптации к условиям вивария были поделены на три группы: первая группа - контрольная, вторая и третья - подопытные  -  к  ОР понлучали Экос в дозировке 250 и 1000 мг⋅кг-1 массы тела.  На пике яйцекладки пронведён  обменный опыт (май 1999 г.) по методике ВИЖа (Маслиева О.И., 1967; Томмэ М.Ф., 1969). Научно-производственный опыт на цыплятах-бройлерах кросса ISA
(2 повторности) выполнен на птицекомплексе Яснозоринский Белгородской области. Первый опыт (октябрь - декабрь 1997 г.) проведён на 3-х группах цыпнлят по 33500 гол. в каждой. Использовали Экос в дозировке 100 мг⋅кг-1 массы тела, но цыплята второй группы добавку получали ежесуточно,  а третьей - кратно, с недельными перерывами. Для  второго опыта  (февраль - апрель
1998 г.) было сформировано  2 группы цыплят по 32000 гол. Цыплята подопытной группы получали Экос ежесуточно в  дозировке  100 мг⋅кг-1 массы тела.

Общая схема исследования представлена на рис. 1.

Показатели крови контролировали в 1-, 3-, 7-, 15-, 23- и  29-е сутки в фоновых исследованиях, в адаптивном периоде после отмены инверсии (1-я серия опытов)  и  в процессе глюкозной нагрузки (3-я серия опытов). Формиронвание адаптации в динамике развития хронического стресса (2-я серия опытов) отслеживалось на 2-, 3-, 5-, 9-, 18-,  25- и 32-е сутки. Выбор контрольных точек был определён с учетом жизненного цикла эритроцитов крови птиц, суточной ритмики висцеральных функций и гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы (Колпаков М.Г. и соавт., 1976; Аврутина А.Я., Кислюк С.М., 1978; Филаретов А.А. и соавт, 1994), а также  сдвигов гормонального фона при стрессе у цыплят и кур в ходе адаптации к изменённому световому режиму (Митюшников В.В., 1985) и  длительной иммонбилизации (Fitko R. et al., 1992).

Забор крови проводился утром до кормления из крыловой (плечевой) вены в объёме 3-4 мл или капельно из гребня. В качестве антикоагулянта использовался гепарин (10 ед./мл), в отдельных опытах в соотношении 1:9 - 3,8% цитрат натрия: кровь. У утят, цыплят и кур-несушек (4-я серия опытов) кровь получали по окончании опытов после декапитации. Эритроциты отделяли от плазмы центрифугированием (центрифуга СМ-6, Elmi, Латвия, 2000) и трехкратной отмывкой  0,154 М раствором NaCl.

Рис.1. Общая схема исследования

Методы исследования. В исследовании наряду с традиционными методами гематологического анализа крови (Кудрявцев А.А., Кудрявцева Л.А., 1974; Болотников И.А., Соловьев Ю.В., 1980; Кондрахин И.П. и соавт., 1985; Симонян Г.А., Хисамутдинов Ф.Ф., 1995) применены также оригинальные способы исследования крови птицы, предложенные соискателем.

Морфологию эритроцитов и эритрометрию проводили в окрашенных мазках крови методом оптической микроскопии с последующими видеорегистнрацией и компьютерным анализом,  используя автоматизированную систему - комплекс аппаратно-программной визуализации морфологических препаратов, анализа и регистрации показателей Видео-ТесТ-Мастер (СПб., 1999), в отдельных опытах с помощью окулярмикрометра МВ-16 (микроскоп морфолонгический Микмед 2, вар. 2, Ломо, СПб., 1999). Мазки готовили общепринятым метондом, окрашивали по Лейшману и разработанному способу (патент РФ
№ 2224235, 2004; приоритет от 06.05.2002).

Функциональные свойства эритроцитов. Эритроциты считали в камере Горяева (Болотников И.А.,Соловьев Ю.В., 1980); гематокрит измеряли с использованием гематокритной центрифуги СМ-70 (Elmi, Латвия, 1998; кровь центрифугировали в течение 4,5 мин при скорости 7000 об./мин.); концентрацию гемоглобина  в  плазме (Савельев О.Н. и соавт., 1990) и цельной  крови (Медицинские лабораторные технологии: справочник, 1998) определяли  гемиглобинцианидным методом. По результатам морфометрии и стандартным гематологическим параметрам рассчитывались информативные в плане характеристики клетки показатели: средний объём (MCV), среднее содержание (MCH)  и концентрация (MCHC) гемоглобина в одном эритроците (с поправкой на ядро; M.M. Wintrobe, 1993) способами, традиционно принятыми в гематологии  (п. п. 3.2 и 3.3) (Коржуев П.А., 1964) и разработанными нами (патент РФ  № 2234701, 2004; приоритет от 17.12.2002)  (п. п. 3.4 и 4.3).

Для оценки состояния мембран определялась резистентность эритроцитов по отношению к внешним лизирующим факторам (Борисов Ю.А. и соавт., 2007). Кислотную резистентность измеряли по стандартной методике (Гительзон И.И., Терсков А.И., 1956, 1959) на спектрофотометре КФК-3-01 (Россия), в качестве гемолитика использовали 0,004 н. HCl (4 мл 0,1 н. HCl и
96 мл 0,85% NaCl). Осмотическую (гипоосмолярную) резистентность оцениванли унифицированным методом в модификации Л.И. Идельсона (1970). По результатам построены интегральные и дифференциальные эритрограммы, позволившие разделить циркулирующий эритроцитарный пул на популяции эритроцитов в зависимости от их стойкости и возраста и определить количественное распределение клеток в популяции. В качестве критериев эндогенной интоксикации, степени повреждения  белково-липидной структуры и жёсткости мембраны при стрессе применено определение её проницаемости для гипоосмотических растворов мочевины (ПЭМ) (Михайлович В.А. и соавт., 1993; Маншакова Г.П. и соавт., 2003) и сорбционной ёмкости (СЕЭ) (Тогайбаев А.А., Кургузкин Л.В., 1992; Додхоев Д.С., 1998).

Исследование кинетики эритропоэза. За основу был взят метод опренделения костно-мозговой продукции эритроцитов, разработанный Е.Н. Мосянгиной (1962, 1976) и усовершенствованный А.В. Илюхиным и соавт. (1982). На основе стандартного метода разработан способ выявления ретикулоцитов и их возрастной классификации для функциональной диагностики эритрона у птиц (патент № 2227280, 2004; приоритет от 16.07.2002) (рис. 2).  Репродуктивную способность костного мозга оценивали по общей продукции эритроцитов, а активность эритропоэза - по относительному числу ретикулоцитов в крови. Приняв его за индикатор регенераторной активности эритробластической части костного мозга и эмпирически определив полупериод выведения, рассчитывали длительность жизни, суточную продукцию эритроцитов, возмещённую их потерю. Рассчитывалась также резервная мощность эритропоэза (n) (Гительзон И.И. и соавт., 1969) и ретикулоцитарный индекс (RI) (Погорелов В.М.,
Козинец Г.И., 2005).

Рис. 2. Эритроциты периферической крови петухов:1 - ретикулоцит 1 класса;

2 - ретикулоцит 2  класса; 3 - ретикулоцит 3 класса; 4 - ретикулоцит  4 класса

(увеличение 1600)

       Методы биохимического исследования тканей (4-я глава). Материал отбирали при убое: утят (30 и 60 сут) от 5 особей из каждой группы; цыплят-бройлеров  (49 сут) от 12 особей; кур-несушек (290 сут) от 9 особей. Биохимический анализ крови, мышц и яиц, корма и помёта,  а также напряжённость специфического иммунитета проводили известными унифицированными в ветеринарной лабораторной диагностике методами. Элементный состав (железо, цинк, марганец, медь, кадмий, свинец) во всех объектах определяли методом атомной абсорбции с использованием спектрометра атомно-абсорбционного (Квант-2А, Россия, 1998). Иономером (Metcller-Toledo,  Швейцария,  2000) измеряли рН крови.

Статистическая обработка результатов проведена методами вариационной статистики, включая корреляционный анализ, с использованием известных специальных программ.        

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Эритроцитарный гомеостаз у птиц (фоновое исследование)

Значения фоновых гематологических показателей  у петухов не выходили за пределы физиологической нормы и достоверно не отличались от исследования к исследованию в группах контрольной птицы. Число эритроцитов составило (4,500,13)1012л-1, концентрация гемоглобина - 131,053,62 гл-1, показатель гематокрита - 39,251,02 %, цветовой показатель - 0,950,04 ед. Уровень окислительно-восстановительных процессов во многом обусловлен содержанием в крови эритроцитов и гемоглобина, но в оценке функционального состояния важны не только их концентрации в стандартном объёме крови, но также вся масса эритроцитов и гемоглобина, содержащаяся в суммарном объёме крови в организме (Барбашова З.Н., 1981). Объём крови составил 183,116,30 мл, эритроцитарной массы - 72,993,40 мл, плазмы - 108,24,67 мл; общий гемоглобин крови - 24,340,96 г (8,450,46 гкг-1 массы тела). Кислородная ёмкость крови (КЕК) - 18,900,92 об.%. Эритроциты крови петухов имеют типичную форму эллипса с повторяющим форму клетки ядром. Среднее значение продольного (длинного) диаметра эритроцита составило 10,520,12, поперечного (короткого) - 7,230,09 мкм, средний объём - 83,465,25 фл, площадь поверхности мембраны - 192,227,80 мкм2, удельная поверхность (S/V) - 2,420,23 мкм2/фл.

       Эритрограмма статистического распределения эритроцитов по размерам диаметров  у птиц многопиковая (полимодальная) (рис. 3). Сложный профиль эритрограмм отражает морфологическую и функциональную гетерогенность эритроцитов в пуле. На эритрограмме вычленяются два высоких пика с диаметрами клеток  9,76 мкм (21,0 %) и  10,98 мкм (22,3%); доля макроцитов  (с диаметром эритроцитов больше 12,20 мкм) составила 15,2 и микроцитов (8,54 мкм) - 5,5%. Полагаем, что присутствие нескольких максимумов обусловлено периодически наступающими волнами кроветворения, разделёнными периодами упадка, активными процессами регенерации крови и выбросом в кровоток юных эритроидных форм, а также сохранением у взрослой птицы черт эмбрионального кроветворения, проявляемого  диффузным распределением в организме очагов гемопоэза.

       Рис. 3. Эритрограмма распределенния клеток по размерам диаметров: по оси абсцисс - диаметр (мкм), по оси ординат - частота встречаемости эритроцитов, %

Волновой характер эритрограмм сохранялся при  2-недельном мониторировании морфометрии эритроцитов, менялось лишь соотношение отдельных классов в эритрограмме.  Как показали исследования, дифференциальные кислотные и осмотические эритрограммы петухов в физиологических условиях также  многопиковые. Так,  фоновая эритрограмма распределения эритроидных клеток по резистентности для кислотного гемолитика имеет три пика (см. рис. 6, к), что указывает на неоднородность эритроцитарного пула - присутствие  трех различающихся между собой популяций, формируемых клетками с разной скоростью вовлекаемых в гемолитический процесс. Динамика процесса зависит от свойств, стойкости мембраны и возраста клеток. Медианы клеток по стойкости распределились следующим образом: на 5-й мин. подвергаются лизису 17% повышенностойких клеток популяции, на 4,5-й мин. - 15% среднестойких и на 2,5-й мин. - 14% низкостойких. Поскольку высокой резистентностью обладают молодые, а низкой - старые и деструктивные клетки, полученная закономерность косвенно подтверждает теорию смены возрастных пластов кроветворения, сформулированную С.Б. Назаровым (1995) для млекопитающих.                

       Тесты на осмотическую резистентность, отражающие устойчивость к гипотоннии и проницаемость мембран эритроцитов для веществ различной осмоляльнности,  дополняют показатели кислотных эритрограмм в аспекте оценки физико-химических свойств мембран и разновозрастной структуры эритроцитарного пула в норме и характеризуют среднюю клеточную (осмотическую) хрупкость (СКХ) (Ройтман Е.В. и соавт., 2001; Борисов Ю.А. и соавт., 2007). В них границу минимальной резистентности также составляют старые, а максинмальной - молодые клетки. СКХ свежей крови соответствует осмоляльности 0,39% NaCl, инкубированной - 0,44% NaCl (рис. 4).

       Рис. 4. Интегральные осмотические эритрограммы крови петухов (фон): ск - свежая кровь, ик - инкубированная кровь

Постоянно изменяющееся соотношение отдельных  популяций в эритроцитарном пуле обеспечивает динамическое поведение системы, тем не менее,  эритрон птиц характеризуется достаточно высокой стабильностью, проявляемой в сохранении постоянства качественного и количественного состава отдельных его звеньев.

       Для петухов кросса ISA нами определены следующие показатели кинетики эритропоэза: число ретикулоцитов в периферической крови - 2,540,15%; период полувыведения ретикулоцитов - 2,040,15 часа; период полувыведения эритроцитов из кровотока 34,523,48 суток;  продукция эритроцитов - (105,1216,10)106 мклсут-1, ретикулоцитарный индекс - 1,20,05 ед.

       Эритроцитарный гомеостаз у птицы в естественных условиях жизнедеятельности поддерживается автоматически: увеличение числа эритроцитов в крови реципрокно обусловливает удлинение времени созревания ретикулоцитов (r=-0,78),снижение ретикулоцитарного индекса, угнетение продукции ретикулоцитов (r=-0,68), снижение продолжительности жизни(r=-0,92) и суточной продукции эритроцитов (r=-0,97), которая находится в тесной корреляционной связи с качеством продуцируемых клеток: толщиной (r=-0,77), объёмом (rа=а-0,71), содержанием гемоглобина (r = -0,52). Время элиминации эритроцитов находится в тесной статистической зависимости с содержанием  гемоглобина в крови (r=0,78) и отдельном эритроците  (r = 0,78). Установлена отрицательная зависимость между числом ретикулоцитов и гемоглобином в крови (r = -0,73) и положительная - со среднеклеточным содержанием гемоглобина (r = 0,78).

       

3.2. Влияние инверсии светотемнового
цикла на состояние эритроцитарного гомеостаза

В процессе трёхсуточной инверсии светотемнового цикла и в первые две недели после её отмены у петухов отмечены генерализованная двигательная активность, угнетение пищевого поведения, агрессивность (пугливость), усиление ориентировочно-поисковых и защитно-оборонительных рефлексов, снижение массы тела и ухудшение состояния перьевого покрова; на 29-е сут - линька всей подопытной птицы. В ходе инверсии концентрация глюкозы в крови повышалась до 14,320,92 ммольл-1 (p<0,001). После отмены инверсии динамика уровня гликемии имела фазный характер: на 3-и сут - гипогликемическая фаза (6,880,08 ммольл-1; p<0,001), на 15-е - вторая гипергликемическая фаза (11,270,47 ммольл-1; p<0,001); на 29-е сут Ц  уровень гликемии восстанавливался до базового уровня (8,320,18 ммольл-1). Динамика эозинофильных гранулоцитов также носила фазный характер: снижение в 1-е сут инверсии (на 18,3%), превышение уровня контроля на 7-е сут (на 83,9%), плавное приближение к контролю (23-и сут) и падение ниже уровня контроля (на 10,6%) на 29-е сутки. Таким образом, динамика числа эозинофильных гранулоцитов, концентрации глюкозы в крови, нарушение стереотипного поведения и линька отражают в совокупности вызванное в организме птицы состояние острого стресса. У интактных петухов, постоянно находящихся в условиях естественного освещения, перечисленные показатели не выходили за пределы нормы.

       В первую неделю адаптивного периода отмечено значительное и достоверное увеличение стандартных гематологических показателей: содержания эритроцитов, гемоглобина, гематокрита и КЕК, вызванных стрессорным гипоксическим стимулом  и возросшим кислородным запросом (рис. 5). Снижение насыщенности эритроцитов гемоглобином в первые сутки рассматриваем как маркер стресс-реакции, а продукцию гиперхромных эритроцитов на 7-е сут - со способностью эритроцитов крови птиц к интраваскулярному синтезу гемоглобина.

Рис.5. Морфофизиологические характеристики эритроцитов, отражающие дыхательную функцию крови после отмены инверсии светотемнового цикла, %: а - эритроциты; б - средний объём эритроцита; в - показатель гематокрита;  г - кислородная ёмкость крови; д - содержание, е - концентрация гемоглобина в единичном эритроците (с поправкой на ядро); ж - сферический индекс

Повышение числа эритроцитов достигается мобилизацией резервных структур - выходом в кровоток депонированных клеток. Но депонированию подвергаются старые, заканчивающие жизненный цикл клетки, с изменённым геометрическим профилем, пониженной активностью и высоким содержанием метгемоглобина, не способного к оксигенации, что  согласуется с известными теоретическими данными.

       Увеличение внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ), повышение проницаемости мембран эритроцитов (ПЭМ), сокращение времени кислотного гемолиза и левый сдвиг кислотных эритрограмм характеризуют высокую степень гипоксии и интенсивный эритродиерез (табл. 1, рис. 6, а, б) Ц  обязательный этап в активизации регенераторных процессов в эритроне (Ужанский Я.Г., 1968, 1973; Пухова Я.И., 1980; Горбунова Н.А., 1985).

На 7-е сут в периферическом звене эритрона присутствуют клетки двух популяций. Старые  низкостойкие, вышедшие из депо, с пиком распада эрит-роцитов на 2,5 мин. (первая популяция),  при этом высота пика существенно превосходит контрольное значение (37 и 14% соответственно).  Молодые, среднестойкие стрессорные клетки (вторая популяция), формируют  правое крыло растянутой до 5,5 мин. эритрограммы с пиком лизиса на 4,5 мин. и медианой существенно ниже контроля (см. рис. 6, в), что отражает активацию эритропоэза. Напряжение в организме птицы в 1-, 3-, 7-е сут подтверждают также снижение массы тела, дегидратация (уменьшение коэффициента К до 0,9020,053; 0,9160,040; (0,8180,036)1013л-1  (p<0,01) и уменьшение сорбционной ёмкости эритроцита (СЕЭ). Снижение СЕЭ мы связываем с накоплением эндотоксинов и  блокированием мембранных рецепторов.

1. Проницаемость мембран и сорбционная емкость эритроцитов

в адаптивном периоде после отмены инверсии светотемнового цикла (M m; n = 15)

Период наблюдения, сутки	СПГ, %	СПГ 55/60, %	СЕЭ, %	ВЭГ, гл-1	Глюкоза, ммольл-1
Контроль (фон)	4,061,68	4,102,39	83,234,12	0,6830,131	8,580,22
1-е сут	19,764,27**	21,955,11**	75,433,38	1,9940,347**	7,400,13**
3-и сут	26,332,84***	33,743,98***	74,213,37	1,2630,198*	6,880,08**
7-е сут	21,412,84***	24,133,74***	68,652,69**	1,8290,436*	9,880,28**
15-е сут	20,904,05***	22,565,14**	80,622,35	1,3830,308*	11,270,47***
23-и сут	17,754,58*	17,805,36*	68,382,55**	1,1900,252	9,120,30
29-е сут	13,274,29	13,704,29	67,011,90**	1,5740,629*	8,250,18

Примечание.  СПГ - средний процент гемолиза, СПГ55/60 - средний процент гемолиза в области концентраций мочевины 55:45 и 60:40, СЕЭ - сорбционная ёмкость эритроцитов, ВЭГ - внеэритроцитарный гемоглобин; p - достоверность различий по сравнению с контролем (критерий Стьюдента): * - <0,05; ** - <0,01; *** - <0,001

	Рис. 6. Дифференциальные эритрограммы распределения эритроцитов по резистеннтности для кислотного гемолитика. К - контроль, 1 (а), 3 (б), 7 (в), 15 (г), 23 (д) и 29 (е) сутки после перевода петухов на естественный световой режим

       

       Активные регенераторные процеснсы в эритроне в первую постстрессорную неделю подтверждены активацией эритропоэза: увеличение числа ретикулоцитов, ретикулоцитарного индекса и суточной продукции эритроцитов в 2,98; 2,23; 2,40; в 3,54; 2,65; 2,82 и 4,07; 2,32; 4,17 раза соответственно;  укорочение  жизненного цикла клеток до 11,691,58 (p<0,001); 20,433,74 (p<0,05) и 11,892,71 (p<0,001) суток (в контроле - 34,523,48 суток); ускоренный процесс взросления эритроидной ткани - особенность стрессорной гипоксии.

       На 15-е сут в эритроцитарной системе птицы отмечен интенсивный лизис  депонированных форм при одновременном омоложении популяции, что способствует  равновесному восстановлению (до уровня фона) числа эритроцитов при  изменении их качественного состава - синтезируются короткоживущие макроретикулоциты со сниженными гемоглобинсинтетическими процессами. Явный признак омоложения популяции - формирование на  кислотной эритрограмме правого крыла (см. рис. 6, г). О высокой повреждаемости мембран свидетельствует увеличение СПГ, СПГ55/60 и ВЭГ соответственно в 5,14; 5,50 и 2,02 раза. Одна из причин дестабилизации мембран и сокращения времени кислотного гемолиза - флуктуации уровня гликемии в ходе адаптивного периода (см.  табл. 1). Низкая резистентность продуцируемых эритроцитов подтверждает состояние напряжения в системе кислородообеспечения тканей. Направленность изменения морфометрического профиля эритроцитов - повышение объёма, толщины, сферического индекса, снижение удельной поверхности и прибавка гемоглобина в эритроците свидетельствуют о нарушении в системе микроциркуляции (см. рис. 5).        

       Выявлено, что критическая ситуация в эритроне складывается на 23-и сут: число эритроцитов достоверно снижено, а рост эритроцитарной массы компенсируется продукцией макроцитов-сфероцитов, их геометрический профиль - средний объём, сферический индекс, толщина, поверхность мембраны и удельная поверхность соответственно 133,273,42 фл; 0,2050,005 ед.; 1,850,04 мкм; 186,582,67 мкм2; 1,520,03 мкм2/фл н - выше уровня контроля (p<0,01). Но эритроциты гипохромны, а рисунок эритрограммы отражает преобладание в популяции эритроцитов пониженной стойкости (см. рис. 6, д). Эритропоэз угнетён: ретикулоцитарный индекс ниже единицы (0,8760,078; p<0,01); число ретикулоцитов - 3,830,12%, полупериод их выведения удлинён до 7,420,22 часа (p<0,05), продукция эритроцитов снижена до (23,245,79)106мклсут-1; резервная мощность эритропоэза составляет 53,205,80 % от уровня контроля. При угнетенном эритропоэзе возрастает продолжительность жизненного цикла эритроцитов до 144,3725,40 суток (p<0,05). Понижение ПЭМ и  СЕЭ отражают интоксикацию организма.

       Наконец, на 29-е сутки в эритроне активируются репаративные процессы: содержание  ретикулоцитов, время их созревания и значение ретикулоцитарного индекса приближены к уровню контроля. Резервная мощность эритропоэза превысила контрольный уровень и составила 108,0217,26%. КЕК повышается до 26,161,33 об.% (p<0,001), достоверно низкое число эритроцитов (3,800,11)1012л-1 компенсируется высоким внутриклеточным содержанием гемоглобина (49,042,77 пг; p<0,001) и возросшим объёмом клетки. Анализ кислотных эритрограмм подтверждает нормализацию белкового компонента мембран и омоложение популяции среднестойкими формами (см. рис. 6, е).

Установлено, что в первые сутки адаптивного периода сохраняются корреляционные связи, свойственные фону и  устанавливаются  новые статистические зависимости. Так, увеличение числа эритроцитов в крови сопряжено с сокращением их жизненного цикла (r =-0,92) и снижением насыщенности отдельного эритроцита гемоглобином (r =-0,92). Выявлены также обратные зависимости периода полувыведения ретикулоцитов со значением КЕК (r =-0,78) и содержанием гемоглобина в крови (r =-0,86). Кроме того, обнаружена тесная положительная статистическая связь периода полувыведения эритроцитов из кровотока со снижением концентрации глюкозы в крови (r = 0,91). На 7-е сут после отмены инверсии сохраняются прямые зависимости между длительностью жизненного цикла эритроцитов и концентрацией глюкозы в крови (r = 0,97) и проявляется отрицательная связь между  величиной концентрации глюкозы в крови и скоростью созревания ретикулоцитов  (r = -0,92). На 29-е сут содержание в крови ретикулоцитов оказывается в прямой корреляционной зависимости с КЕК  (r = 0,67) и обратной - со значениями  МСНС  (r = -0,69).

Отметим, что в стратегии адаптации к стрессорному воздействию важны не только ёмкость крови для кислорода, но также свойства плазмы и эритроцитов, ответственных за создание реологических свойств  крови. Увеличение ретикулоцитарного индекса, КЕК, продукция макроцитов (29-е сут) - показатели адап-тации эритрона к стрессорной гипоксии, однако высокий гематокрит, низкая удельная поверхность (мера отношения S/V), насыщенность эритроцитов гемоглобином и повышение внутриклеточной  вязкости, свидетельствуют о существенном ухудшении реологии крови и сохранении гипоксии в организме птицы. Таким образом, 3-суточная инверсия светотемнового цикла вызывает глубокие изменения в центральном и периферическом звеньях эритрона; 29-суточный адаптивный период, равный длительности жизненного цикла  эритроцита птицы, недостаточен для восстановления эритроцитарного дисбаланса.

3.3. Влияние хронического стресса
на эритроцитарный гомеостаз

В первую неделю скученного содержания нарушалось  стереотипное и усиливались индивидуальные формы поведения петухов агрессивного или паснсивного характера до установления в группе иерархических отношений; в течение второй недели сглаживались реакции агрессивного характера и усиливались ориентировочно-поисковые, связанные с приёмом корма, чисткой перьев; с третьей недели  началась активная линька. Снижение  массы тела и повышенное потребление корма сохранялись в течение всего периода наблюдения. В ходе адаптации отмечено фазное изменение эозинонфильных гранулоцитов: снижение на 2-, 3-и сут, увеличение на 18-, 25-е  и принближение к уровню контроля на 32-е сут. В динамике концентрации глюкозы в крови выделены фазы гипогликемии (1-е сут, 7,0 ммольл-1), гипергликемии (5-18-е сут, 11,4 - 9,0 ммольл-1) и восстановления гликемии до уровня коннтрольной птицы (25-, 32-е сут; 8,6 - 8,5 ммольл-1). Поведение, динамика эозиннофильных гранулоцитов и концентрации глюкозы в крови у контрольной птицы были без особенностей.

       Критическая ситуация в эритроне птицы складывалась с первой недели плотной посадки. На 3-и сут концентрация эритроцитов, гемоглобина и КЕК были ниже  контроля на 12,20; 14,16; 14,18% (p<0,05) соответственно.  На 9-е сут концентрация общего гемоглобина возросла на 9,24% (p<0,05), повысились также содержание и концентрация гемоглобина в отдельном эритроците,  прибавка КЕК была в пределах недостоверных различий, тем не менее в условиях гипоксии эту реакцию мы оцениваем как важный адаптивный механизм, способствующий переводу эритрона на минимальный режим функционирования. На 18-, 25-, 32-е сут стандартные гематологические показатели стали нинже, чем у птицы контрольной группы (рис. 7).

Снижение удельной поверхности эритроцитов, достоверное в течение всего опытного периода, означало повыншение их ригидности и неспособность полноценно участвовать в газообмене (Фок М.В. и соавт., 1999), нарушение микроцирнкуляции и углубление гипоксии. Следовательно, скученность, как сильный стрессирующий фактор, инициирует развитие гипоксии, переводящий эритрон в режим  длительного лэкономного функционирования.

       Умеренная анемия  (2-, 3-, 5-е сут) развивалась на фоне увеличения ретикулоцитов до 3,020,22; 2,820,27; 3,930,51% (p<0,05), сокращения времени их созревания до 3,640,30; 3,500,49; 3,600,13 часа и росте ретикулоцитарного индекса до 1,3800,076 (p<0,01); 1,2230,157 (p>0,05);  1,7770,067 отн. ед. (p<0,001) соответственно. Но продуцируемые эритроциты формируют популяцию низкостойких клеток - одновершинные кислотные эритрограммы с пиком распада клеток на 2-й минуте смещены влево и выше контроля на 37,62; 41,80 и 49,42% соответственно. Депонированные эритроциты и стрессорные de novo образуют общую популяцию низкостойких клеток и служат показателем активных гемолитических процессов, что подтверждено увеличением ПЭМ, ВЭГ и сокращением среднего времени  кислотного гемолиза. Деструктивные процессы в мембранах и повышение ионной проницаемости отмечены на осмотических эритрограммах.

Рис. 7. Динамика гематологических показателей у петухов при адаптации к длительно действующему стрессору. RBC - эритроциты, HСT - гематокрит, HGB - гемоглобин, MCHC - концентрация гемоглобина в отдельном эритроците, КЕК - кислородная емкость крови, К - коэффициент гемоконцентрации, MCV - средний объём эритроцита, СИ - сферический индекс. Достоверность различий (критерий Стьюдента): * - p < 0,05, ** - p < 0,01

       Через двое суток от начала стрессирования скорость гемолитического процесса в критической точке резистентности (0,55% NaCl) у подопытной птицы выше, чем у контрольной  (рис. 8, а), включает фазу сферуляции в интервале концентраций NaCl  0,65 - 0,80%,  фиксированную ростом сферического индекса, толщины и удельной поверхности эритроцита, и фазу строматолиза, отражающую углубление распада стром эритроцитов и дополнительный выход гемоглобина из ранее поврежденных клеток.

  а)       б)                

Рис. 8. Дифференциальные осмотические эритрограммы петухов: 2-е (а) и 9-е (б) сутки

Эритрограмму  9-х сут (см. рис. 8, б)  формируют  две субпопуляции клеток циркулирующего эритроцитарного пула, различающихся осморегуляторными свойствами, с медианами, соответствуюнщими 0,55 и 0,45% NaCl. В контроле регистрируется одновершинная кривая с максимальным выходом гемоглобина при 0,40% NaCl. Левое крыло формируют стрессорные эритроциты пониженной резистентности и  с деструктивными мембранами.

       Эритропоэз на 9-, 18-, 25-, 32-е сут угнетён - ретикулоцитарный индекс ниже единицы,  а резервная мощность эритропоэза составляет 84,433,16; 47,548,40; 67,174,17; 82,885,33% от уровня контроля. Кислотные и осмотические эритрограммы одновершинные. Отсутствие на  эритрограммах высокостойких популяций в течение всего времени стрессирования петухов объясняем ускоренным созреванием эритроидных клеток со структурно-метаболическими нарушениями в мембранах и конформационными изменениями молекулы гемоглобина, ведущих к снижению уровня кислородной обеспеченности тканей. Показателем стрессорной  перестройки морфологии красных клеток служит продукция гипохромных макроцитов-сфероцитов (см. рис. 7).  При низкой концентрации эритроцитов и гемоглобина в крови и ингибиции эритропоэза поддержание КЕК на уровне значений контрольной птицы достигается ростом в эритроцитарном пуле  клеток с увеличенным жизненным циклом до 61,464,75; 122,6120,61; 102,3518,92 и 129,8620,01 суток соответственно.

Особенность регуляторных механизмов, складывающихся в эритроне на 9-32-е сут, - их направленность  на удержание в пределах контнрольных величин стандартных гематологических показателей, объёма эритроцитарной массы, снижение микровязкости эритроцитов (понижение MCH и MCHC), включение перераспределительных реакций, повышение коэффициента гемоконцентрации (К) и разжижение крови, поддерживающих её реологические свойства на минимальном для процессов жизнедеятельности уровне. Снижение ПЭМ, СКХ и стабилизацию мембран гормонами стресса (Перцева М.Н., 1989; Resnitzky P. et al., 1972), способствующих увеличению времени циркуляции эритроцитов в кровяном русле, рассматриваем как адаптивную реакцию.

       При моделировании стресса отмечена высокая вариабельность выраженности стресс-реакции. Индивидуальные проявления динамики количественно-качественных параметров эритроцитарного гомеостаза были более выражены у птиц, подвергнутых хроническому стрессу. Например,  у  петуха № 3.3-3  на 3-и сут кислотный гемолиз завершался на 3,5 мин. (рис. 9),  а  на  9-е сут  продуциронвались эритроциты двух популяций, разрушающихся на 2-й (50%) и 2,5-й  (50%) минутах гемолитического процесса. 

Рис. 9.  Дифференциальные кислотные                 эритрограммы петуха № 3.3-3

На 25-е сут максимальная скорость гемолиза наблюдалась на 2-й мин. (80%), а через 2,5 мин. все эритро-циты были разрушены. На 32-е сутки в кровотоке присутствовали исключительно клетки низкой стойкости (до 100%), разрушающиеся на  2-й минуте.

       Следовательно, при затяжном стрессе в течение 2-32-х суток сохраняется дисбаланс эритроцитарного гомеостаза, обусловленный в первые сутки поступлением в кровоток депонированной крови, а затем малогемоглобинизирован-ных макроцитов-сфероцитов  пониженной резистентности. Прибавка ретикулоцитов в периферической крови в первую неделю стрессирования достигается посредством сокращения времени их созревания, а восполнение возросших потребностей  организма в кислороде при низкой резервной мощности эритропоэза - за счёт увеличения длительности циркуляции эритроцитов в кровотоке.

       Для выявления закономерностей динамических перестроек в эритроне птицы при хроническом стрессе применён метод корреляционного анализа.  В первую неделю достоверные статистические связи имели место преимущественно между показателями, отражающими кинетику эритропоэза и  интенсивность гемолиза. В ходе второй недели (9-е сут) были обнаружены статистические  зависимости, связанные с деструктивными процессами в эритроне  и степенью интоксикации организма, например, между значениями  ВЭГ  и  СЕЭ (r = 0,85). На 18-25-е сут выявлялись корреляционные зависимости исключительно между параметрами, отражающими кинетику эритропоэза, и лишь на  32-е сутки был обнаружен эффект преобладания зависимостей между значениями морфологических  параметров клетки и стандартных гематологических, актуализируя значимость изучения функциональной  морфологии эритроцитов в дифференциальной диагностике состояния особи в естественных и измененных условиях жизнедеятельности.

       

3.4. Влияние экспериментально смещенного гликемического
гомеостаза на картину красной крови

       Выпаивание  птице раствора глюкозы вызывало максимальную гипергликемию в первые сутки (11,560,31 против 8,790,16 ммольл-1 в контроле; p<0,01). Гипергликемическая фаза сохранялась в течение двух недель. На 15-, 23- и  29-е сут отмечено снижение уровня глюкозы в крови соответственно на 3,58; 8,41 и 14,93% (p<0,05) по сравнению с контролем. После отмены глюкозной нагрузки восстановление гликемии наблюдалось на 36-е сут (8,710,12 ммольл-1). В первые сутки на фоне гипергликемии отмечено снижение КЕК, общего гемоглобина, содержания и концентрации гемоглобина в единичном эритроците соответственно на 16,044;  3,66;  14,01 и 9,66 %  (рис. 10).

       Установлено что средние габариты эритроцита были несущественно выше контроля, коэффициент гемоконцентрации (К)  в пределах контрольных величин - (1,6400,090)10-13л и (1,6980,15)10-13л соответственно. Все характеристики крови имели высокие коэффициенты вариации. На 3-и сут на фоне гипергликемии при сниженном числе эритроцитов и показателя гематокрита достоверный прирост гемоглобина в крови, содержания и концентрации гемоглобина в отдельном эритроците составил соответственно 8,59; 44,56 и 19,55%. Полагаем, что гипоксия и снижение КЕК инициировали поступление в сосуды депонированной крови. Повышение КЕК (на 8,60%), появление в кровотоке гиперхромных эритроцитов, а также увеличение среднего объёма и поверхности мембраны клеток отражают развитие процесса адаптации в эритроне. На 7-е сут качественные характеристики эритроцитов, КЕК и МСНС были близки к контролю;  выявлены достоверный прирост среднего объёма и площади поверхности эритроцита. Снижение удельной поверхности (на 15,87%; p<0,01), продукция гиперхромных эритроцитов-макроцитов и повышение гематокрита вызваны омоложением популяции, новообразованием клеток со сниженными реологическими свойствами. Повышение коэффициента гемоконцентрации до (2,0200,216)1013л  (в контроле (1,6700,079)10-13л) и разжижение крови  частично компенсируют негативную сторону адаптации. Обнаружено, что через две недели выпаивания глюкозы (15-е сутки) при формальной нормогликемии идет омоложение эритроцитарного пула  гипохромными микроцитами, не способными понизить гипоксию (см. рис. 10), тем не менее установленные особенности важны для повышения текучести крови, достигаемой продукцией большого числа эритроцитов-микроцитов (5,030,471012л-1) с удельной поверхностью, приближающейся к контролю.

       

Рис. 10. Влияние глюкозной нагрузки на состояние эритроцитарного гомеостаза

у петухов. Контроль n = 15, опыт n = 17. Обозначения, как на рис. 7

       В результате  сопоставительного анализа  морфофункциональных показателей красных  клеток  с месячной динамикой отдельных биохимических характеристик  крови было установлено, что изменения в эритроне у петухов подопытных групп сопряжены с фазной динамикой количественного и качественного состава липидов и белков крови. Так, в 1-, 3-, 7-е сут  при  повышении концентрации глюкозы в крови происхондило снижение содержания общих липидов и достоверное повышение  холеснтерола и триацилглицеролов. Направленность динамики активности аспартат- и аланинаминотрансфераз отражала угнетение метаболизма белка и повышение проницаемости клеточных мембран. Инициируемые нарушением гликемического гомеостаза угнетение метаболизма белков и фазные колебания концентранции общих липидов и липидных метаболитов, в сочетании с гипоксией и наруншением кислородного режима в тканях,  ускоряют процессы ПОЛ,  СРО мембран, которые ведут к их деструкции и стрессовым изменениям в мембранно-рецепторном комплексе. Таким образом, флуктуации уровня глюкозы в крови служат толчком к возникновению цепной биохимической реакции, вызывая фазные колебания состава крови и свойств эритроцитов. Это положение находится в согласии с известными теоретическими данными (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972; Галенок В.А. и соавт., 1987; Бондарь Т.П. и соавт., 2003; Baynes W., 1991; Ceriello A., Giugliano D., 1991; Jarret R.J., 1992).

       На 23-и сутки гипогликемии сопутствуют эритроцитоз, повышение концентрации общего (на 19,91%), внутриклеточного (на 47,43%) гемоглобина и КЕК (на 19,86%). Отмечены также существенные структурные изменения клеток - продуцируются микроциты-планоциты; при сниженном объёме эритроцит приобретает значительный запас площади понверхности (S/V = 2,2900,16; p<0,05). На 29-е сутки сохраняется гипогликемия, вновь понижается КЕК - на 18,44% (p<0,01) по сравнению с предыдущими сутками и на 5,25% - в сопоставлении с показателями контрольной группы. В этих условиях реакцию птицы на системном уровне рассматриваем с позиции адаптации к гипоксии: эритроцитоз, снинжение количества общего и внутриклеточного гемоглобина, продукция микронцитов, а также перераспределительные реакции в организме и разжижение крови (повышение коэффициента К до (2,1430,188)10-13л; p<0,05) способнствуют снижению гипоксической нагрузки на организм.

       По результатам фоновых исследований установлено, что стандартные показатели, формирующие реакцию периферического звена эритрона в норме, - число эритроцитов, гемантокрит и уровень глюкозы в крови Ц  образуют множественные корреляционнные связи со структурно-функциональными характеристиками эритроцитов. В первые сутки повышение концентрации глюкозы в крови сопряжено с понижением числа достоверных корреляций и образованием новых тесных положительных связей с объёмом (r = 0,83),  площадью поверхности мембраны
(r = 0,84) и отрицательных - с числом эритроцитов (r = -0,92),  средним диаметнром (r = -0,91), концентрацией общего гемоглобина (r = -0,95) и  КЕК (r = -0,95). На 3-и сут наибольшее число достоверных связей формируют эритронциты: положительные  с индексом сферичности, средним диаметром, удельной поверхностью клетки, КЕК и отрицательные - с уровнем гликемии, средним объёмом, коэффициентом гемоконцентрации. По-прежнему в адаптивном оптимальном поиске системы крови велика роль гликемии (9,860,25 ммольл-1; p<0,01). Показано, что положительный функциональный результат третьих суток адаптивнного периода - увеличение КЕК и снижение гипоксической нагрузки на организм птицы. В 7-15-е сут напряжение в эритроне отражают снижение (до 20-28) числа достоверно коррелирующих связей, преимущественно с качественными характеристиками эритроцитов, способнствующих устранению гипоксии. На 23-и,  29-е сут на фоне затянувшегося смещения гликемического гомеостаза статистические связи  устанавливаются исключительно в зоне структурных параметров эритроцитов, следовательно, в рамках геометрии адаптивного изменения биосистемы.

       Таким образом, глюкоза и гипергликемия в 1-7-е сут - сильные стресcнфакторы, инициирующие в организме птицы  нарушения эритроцинтарного гомеостаза  по типу хронического стресса: снижение числа эритроцитов, гематокрита, концентрации общего и внутриклеточного гемогнлобина и удержание КЕК на уровне значений, близких к контролю. Гипогликемическая фаза (15-, 23-, 32-е сут) обусловливает включение  гомеостатических механизмов, направленных на адаптацию к гипоксии: эритроцитоз, продукция микроцитов, понижение гематокрита и содержания гемоглобина в отдельном эритроците, а также повышение удельной поверхности и разжижение крови (при низких значениях КЕК).

       

3.5. Влияние полиминеральной добавки Экос

на структурно-функциональный статус эритроцитов крови утят,
цыплят-бройлеров и кур-несушек

Установлено, что введение в рацион утят Экос (150 мгкг-1 массы тела) обеспечило увеличение числа эритроцитов и гемоглобина (табл. 2). Объём крови и эритроцитарной массы возрастали соответственно до 184,884,07 и 84,514,24 мл против 161,464,42 и 72,171,30 мл в контроле, а обеспеченность утят гемоглобином - до 10,390,73 гкг-1 (в контроле  8,920,93 гкг-1; p<0,05), что способствовало повышению КЕК и созданию резерва кислорода в организме, необходимого для интенсивного роста и обслуживания напряжённого метаболизма. При значительной ригидности ядерных эритроцитов в поддержании кислородного гомеостаза существенное значение имеет объём плазмы, отражающий состояние гидратации / дегидратации тканей, в том числе эритроцитов. У птицы, получавшей Экос, разжижение крови (повышение количества плазмы до 100,392,10 мл и значения коэффициента гемоконцентрации до (2,500,08)1013л-1; в контроле соответственно 89,252,11 мл и (2,200,05)1013л-1) -

2. Показатели дыхательной функции крови при включении в рацион  Экос

Показатели, ед. измерения	Группа, доза Экос мгкг-1,  режим скармливания
	Утята, 301 и 60 сут.		Цыплята, 49 сут. (1-й опыт)			Куры, 290- сут.
	контроль	опыт (150)	контроль	II опыт (100) ежесуточно	III опыт(100) кратно	контроль	II опыт (250) III опыт(1000)2
RBC,1012л-1	2,510,08 1,820.08	2,810,08* 1,910,09	2,130,06	3,250,22**	2,290,07	2,220,05	2,240,06 2,410,06*
HCT, %	44,700,70 33,302,32	46,721,80 38,012,6	32,200,87	32,500,67	38,942,16*	32,001,80	32,500,32 31,001,26
HGB, г⋅л-1	133,301,70 123,302,50	142,702,10** 144,003,00**	96,332,20	114,382,39**	121,572,82**	93,771,17	102,041,59** 105,261,24
MCHC, гдл-1	31,980,82 36,840,65	36,260,88** 38,870,28	32,400,87	38,661,70**	38,860,57**	33,131,00	34,970,98 30,831,07
KEK, об. %	17,900,51 16,420,71	19,180,42** 19,300,81	12,900,30	15,320,31*	16,290,42**	12,550,67	13,650,82 14,110,73
G, мкм	10,250,08 9,070,12	9,950,11 10,200,13**	9,710,15	9,350,10**	9,640,08	8,950,08	8,720,05* 8,440,06**
MCVэ, фл	453,735,85 356,695,25	398,566,98** 334,655,80*	329,017,56	305,015,06*	333,377,52	268,604,13	252,304,24 233,383,96**
MCVя, фл	22,880,55 12,660,85	15,700,81** 18,570,44**	27,590,27	28,150,16	28,400,35	25,870,44	21,790,39*** 21,090,62***
Sэ, мкм2	291,225,21 251,064,85	269,043,28** 265,754,60*	240,423,38	228,252,71*	242,623,00	209,372,89	200,332,16* 189,442,76**

Примечание: 1 - показатели 30-суточных утят - в  знаменателе; 2 - показатели кур-несушек  при дозировке Экос1000 мгкг-1  - в знаменателе. RBC - эритроциты; HCT - гематокрит;  HGB - гемоглобин;  MCHC - концентрация гемоглобина в единичном эритроците; КЕК - кислородная емкость крови; G - средний диаметр эритроцита; MCVэ - средний объём эритроцита; MCVя  - средний объём ядра; Sэ - средняя площадь поверхности эритроцита. Достоверность различий с контролем (критерий Стьюдента), р: * Ц  <0,05; ** - <0,01

важная адаптивная реакция,  предупреждающая сгущение крови и нарушение микроциркуляции.

Средние габариты клеток у всей обследованной птицы находились в пределах нормы (см. табл. 2), но Экос способствовал снижению среднего объёма, а следовательно, повышению скорости поглощения кислорода гемоглобином, т.е. при прочих равных условиях эритроциты утят, получавших минеральную добавку, имели преимущества в осуществлении дыхательной функции.        

       Функциональная активность поверхности эритроцита обусловлена присутствинем гемоглобина. Применение Экос вызывало снижение площади поверхности клетки, но повышало содержания гемоглобина на единицу ее поверхности до (21,891,95)1014г-1 Ц  против (18,231,82)1014 г-1 в контроле. Коэффициент элонгации эритроцитов выше у молодой птицы, его значения увеличивались под влиянием Экос у всех подопытных утят, делая клетки более эффекнтивными в выполнении дыхательной функции. На процессы оксигенации крови заметное влияние оказывает концентрация гемоглобина в отдельном эритроците: она понижалась с возрастом, но повышалась при скармливании минеральной добавки.

       Кариометрический анализ позволил выявить увеличение средних габаритов и объёма ядер эритроцитов у 30-суточной птицы всех подопытных групп, у 60-суточных - при использовании добавки в дозировке 200 мгкг-1 массы тела. Известно, что ядра претерпевают функциональные изменения (лотеки, набухание, ретракции), обусловленные флуктуациями клеточного метаболизма. Изменение объёма ядер интегрально отражает напряжённость клеточных функций и адаптивный резерв кроветворных органов.

       В рационе цыплят-бройлеров Экос (100 мгкг-1 массы тела) способствовал увеличению в крови числа эритроцитов и гемоглобина (см. табл. 2). Линейные размеры клеток были в пределах нормы, но во II группе отмечено снижение средних габаритов и объёма, выявлены также незначительные изменения гемантокрита.  При кратном включении в рацион минеральной добавки отмечены повышение гематокрита и несущественный прирост числа и объёма клеток. Поверхность мембраны единничного эритроцита недостоверно снижалась у бройлеров II и не изменялась - III группы. Понижение морфометрического профиля клеток при параллельном увеличении их числа в единице объёма крови обеспечивало рост общей дыхательной поверхности соответственно на 38,11 и 40,20% (p<0,01) во II и III группах. При кратном дозировании Экос прослеживалась тенденция к увеличению дыхательной поверхности; содержание гемоглобина в единичном эритроците не изменялось у цыплят II, но повышалось у цыплят III группы.

        Включение в рацион цыплят-бройлеров Экос не вызвало изменений в

величине цветового индекса, но прирост концентрации гемоглобина в отдельном эритроците у цыплят опытных групп (p<0,01) указывает на усиление гемоглобинсинтетических процессов. Снижение коэффициента элонгации на 12,0% (p<0,01) во II и на 4,09% (p>0,05) в III группах и увеличение удельной поверхности эритроцита положительно сказываются на текучести крови у цыплят подопытных групп.

       На основе  анализа осмотических эритрограмм установлено омоложение эритроцитарного пула в группах цыпнлят, получавших с кормом Экос. Эритроциты были также более устойчивы к колебаниям осмоляльности плазмы, а следовательно, и более эффективны в выполнении функций в широком диапазоне изменений осмоляльности среды.

В рационе кур-несушек Экос (250 мгкг-1 массы тела) не вызвал изменения числа эритроцитов при одновременном приросте (на 8,82 %; p<0,01) содержания гемоглобина в крови. Морфометрические показатели были в пределах нормы (см. табл. 2), но для эритроцитов кур подопытных групп характерно снижение средних габаритов: ядра (на 15,77%; p<0,01) и объёма (на 6,07 %; p<0,05). Достоверное повышение числа эритроцитов и концентрации гемоглобина в группе кур с дозировкой Экос 1 гкг-1 массы тела сопровожндалось снижением показателей гематокрита и геометрического профиля клеток. Снижение площади поверхности эритроцита у кур  подопытных групп не отразилось на показателе их общей дыхательной поверхности.

       Среднее содержание и насыщенность клеток гемоглобином были выше в группе кур, получавших Экос. Можно предположить, что в базофильных и полихронматофильных предшественниках эритроцитов кур подопытных групп синтез гемоглобина протекает более интенсивно. Количество гемоглобина, приходянщееся на единицу поверхности эритроцита, у подопытных несушек выше на 17,70% (p<0,01), выше  также значения цветового показателя. Снижение коэффициента элонгации и удельной поверхности эритроцита свидетельствует о том, что в эритроцитарном пуле подопытных кур значинтельна доля старых клеток. При тестировании была  обнаружена низкая устойчивость  эритроцитов несушек подопытных групп к гипотоническим растворам хлорида натрия, особенно в интервале концентраций от 0,60 до 0,15 %; эритроциты подвергались гемолизу также в 0,60 % NaCl. В растворах равной осмоляльности эритроциты кур, которым скармливали  250 мгкг-1 Экос, были менее стойки. Эффективность функционирования эритрона у кур подопытных групп достигается активацией эритропоэза продуктами гемолиза деструктивных форм.

Установлено, что гемопоэтическое действие Экос способствовало поддержанию кислородного гомеостаза и оптимальных условий для жизнедеятельности: активации ростовых процессов, повышения сохранности, продуктивности и качества мяса цыплят и утят; у кур - инициации биосинтетических процессов, повышения яичной продуктивности, массы яйца, кальцификации скорлупы. В подопытных группах птицы повышение КЕК на возросший кислородный запрос в связи с напряженным метаболизмом и высокой продуктивностью осуществляется по единой стратегии: активация эритроидного ростка кроветворения (увеличение числа эритроцитов, концентрации общего гемоглобина, насыщенности им эритроцитов) и снижение габаритов, объёма и площади поверхности мембраны. Изменения в составе красной крови носили адаптивный характер и не превышали пределов индивидуальных колебаний.

4. ВЫВОДЫ

1. Многопиковые (полимодальные) эритрограммы статистического распределения по размерам диаметров эритроцитов отражают структурную, функциональную и кинетическую гетерогенность клеток, формирующих циркулирующий эритроцитарный пул, и являются специфической особенностью эритрона птицы.

2. Трехсуточная инверсия светотемнового цикла (12С-12Т), скученность при клеточном содержании птицы  и экспериментальное смещение гликеми-ческого гомеостаза вызывают у петухов состояние стресса, проявляемого эозинопенией, изменениями в лейкоцитарной формуле, фазовой динамикой концентрации глюкозы в крови, нарушениями естественного поведения, моторики, перьевого покрова, а также снижением массы тела при  росте потребления корма.

3. Типовая неспецифическая реакция системы эритрона птицы в первые сутки не зависит от первичного фактора, инициирующего стресс, проявляется как дисбаланс эритроцитарного гомеостаза, отмеченный количественными сдвигами стандартных гематологических показателей. Структурная дезоргани-зация циркулирующей эритроцитарной популяции имеет гемолитическую природу - пополнение эритроцитарного клона депонированными клетками  и  деструктивными стрессорными формами de novo, подвергающимися гемолизу.

4. Процессы регенерации красной крови включают активацию красного ростка костного мозга и зависят от вида, интенсивности и длительности воздействия стрессогенного фактора. После отмены инверсии светотемнового цикла  - активация эритропоэза (7-е сут), истощение красного ростка костного мозга  и возврат базовых характеристик эритрона  (через фазу избыточного гомеостатирования) к уровню контроля (равновесное состояние, 15-е сут), дизадаптация (23-и сут, состояние внутреннего десинхроноза) и начальная ресинхронизация (29-е сут) функциональной системы крови; в условиях скученности на фоне истощения пластической функции костного мозга - вялая активация эритропоэза (3-, 5-е сут) и монотонное угнетение в последующие 9-32-е сутки.

5. Показатели кинетики эритропоэза: число ретикулоцитов в крови и степень их зрелости,  средняя длительность жизненного цикла эритроцитов, скорость элиминации, суточная продукция эритроцитов  и резервная мощность эритропоэза, отражают уровень активности  эритропоэза и зависят от интенсивности стрессора. Интегральный показатель повышения активности  костного мозга  и развития репаративных процессов в эритроне птицы на стрессорную гипоксическую стимуляцию - увеличение числа  ретикулоцитов и  ретикулоцитарного индекса.

6. Ключевое звено в реализации адаптации системы красной крови к экстремальному воздействию - структурно-функциональная лабильность эритроцитов. При коротком жизненном цикле клеток красной крови постоянно перестраивается структура циркулирующего эритроцитарного пула, её динаминка служит маркёром стрессового состояния птицы.

7. Из маркёров стресса в ходе адаптивного периода близки к восстановленнию число эритроцитов,  концентрация гемоглобина, гематокрит; морфометринческие характеристики  (средний объём, сферический индекс, толщина эритронцита) не восстанавливаются; длительный период восстановления имеют поканзатели, отражающие кинетику эритропоэза (количество, скорость созревания ретикунлоцитов; длительность жизненного цикла эритроцитов и суточная продукция; резервная мощность эритропоэза).

8. Изменения в центральном и периферическом звеньях эритрона, направнленные на устранение гипоксии, реализуются двумя пунтями стрессорной перестройки. При остром стрессе  повышение КЕК достингается прибавкой общей поглотительной поверхности крови для контакта гемоглобина с кислородом  посредством выброса депонированной крови, развития гемоконцентрационного эритроцитоза и последующей активацией краснного ростка  костного мозга. При затяжном стрессе сглаживание гипоксии происходит через включение регуляторных механизмов адаптации к ней (без повышения КЕК) посредством продукции качественно новых эритроцитов,  сохраняющих активность в условиях высокого кислородного запроса на фоне перенраспределительных гомеостатических реакций,  удлинения клеточного цикла и перевода эритрона на лэкономный режим при высоком напряжении функцинональных систем организма. Обязательный этап стрессорной структурной перестройки эритроцита - включение клеточных регуляторных механизмов и изменение объёма.

9. В ходе реабилитационного периода структурно-функциональные свойнства эритроцитов и гематологические профили высоко реактивны к флуктуации уровня гликемии; специфическая сопряженность гипо- и гипергликемических состояний с отдельными характеристиками эритроцитов имеют определенную динамику.

10. Продолжительное введение глюкозы способствует развитию гипер-гликемии в 1-, 3-, 7-е сут и гипогликемии в 15-, 23-, 29-е сут. Гипергликемия  (или глюкоза) в первые две недели как сильные стрессогенные факторы ининциируют нарушения эритроцитарного гомеостаза в организме птицы по типу затяжного стресса: снижение числа эритроцитов, гематокрита, концентрации общего и внутриклеточного гемоглобина и удержание КЕК на уровне значений контрольной птицы. Развитие гипогликемической фазы (15-, 23-, 32-е сут) обусловливают включение регуляторных механизмов, направленных на улучшение микроциркуляции и адаптацию к гипоксии (понижение гематокринта, эритроцитоз, продукция гипохромных эритроцитов-микроцитов, увеличение удельной поверхности и разжижение крови).

11. Количественным и структурным сдвигам со стороны показателей красной крови под влиянием десинхронизирующих факторов предшествуют перестройка физико-химических свойств мембран, изменение функциональнного статуса и развитие эритроцитарных расстройств: в адаптивном периоде после отмены инверсии светотемнового цикла в 1-, 3-, 7-, 15-е сут - понижение устойчивости к кислотному и гипоосмотическому гемолитикам, повышение проницаемости (ПЭМ)  и снижение сорбционной ёмкости (СЕЭ) на фоне прироста ВЭГ, доли разрушенных эритроцитов  и гипергликемии; на 23-, 29-е сут - тенденция к восстановлению измененных мембранных свойств при высоких значениях коэффициента вариации, отражающих хаотичную ситуацию в эритроне.  В условиях затяжного стресса высокая повреждаемость мембран (увеличение ПЭМ, ВЭГ, СКХ, доли гемолизированных клеток и сокращение времени кислотного гемолиза) отмечена на 18-, 25- и 32-е сут адаптивного периода. Динамика  СЕЭ отражает развитие глубокой интоксикации в организме подопытной птицы.

12. Полиминеральная добавка Экос, полученная на основе гидроалюмосиликатов месторождений Белгородской области, в рационе птицы оказывает гемопоэтическое действие: установлены положительная перестройка функциональной морфологии эритроцитов (уменьшаются линейные размеры, объём и площадь поверхности, увеличивается коэффициент элонгации), прирост в крови  числа эритроцитов, гемоглобина и его внутриклеточной концентрации; увеличение объём крови, плазмы, эритроцитарной массы, КЕК. Влияние Экос на систему эритрона отражает компенсаторную смену фонового эритропоэза и стабилизацию параметров красной крови в пределах  верхних значений физиологической нормы.

       13. Оптимальные дозы Экос в рационе откормочных цыплят - 100 мгкг-1, утят - 150 мгкг-1, кур - 250 мгкг-1 массы тела. Применение Экос в рационе утят, цыплят-бройлеров и  кур-несушек положинтельно влияет на метаболизм, активирует рост, повышает  резистентность и  продуктивность. Улучшаются диетическая ценность и экологическая чистота продукции. 

14. Разработанные способы изучения клеток крови  сельскохозяйственной птицы, обобщающие известные подходы, применяемые в клинической гематологии,  позволяют осуществлять комплексное исследование эритронцитарного гомеостаза, а также направление его дезорганизации под влиянием стрессоров разной природы.  Они могут быть применены при тестировании  адаптивного потенциала птицы в  научных исследованиях  и в ветеринарной практике.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

       1. Ветеринарным лабораториям, специализирующимся на диагностике болезней птицы, рекомендованы методики оперативной оценки функциональнного состояния организма и прогнозирования развития адаптационного или патологического процессов, протекающих в организме птицы.

2. Для улучшения физиологического состояния, инициации эритропоэза, повышения физиологического статуса и общей резистентности организма, сохранности поголовья, улучшения качества и экологической чистоты мяса птицы и яиц рекомендовано скармливать Экос в качестве полиминеральной добавки к сбалансированным рационам молодняка птицы, выращиваемой на мясо,  и курам-несушкам. Оптимальные дозы Экос в рационе откормочных цыплят - 100 мгкг-1, утят - 150 мгкг-1, кур - 250 мгкг-1 массы тела.

3. Установленные физиологические особенности эритроцитарного гомео-стаза птицы, и на их основе разработанные способы исследования красной крови, рекомендовано использовать в фундаментальных исследованиях при изучении мембранных механизмов регуляции клеточного гомеостаза, а также в учебном процессе при подготовке студентов по специальностям Биология, Ветеринарная медицина, Зоотехния.

6. Список научных работ, опубликованных

по теме диссертации

1. ипунова Е.А. О механизме действия инсулина на секрецию желудочного сока у кур / Е.А. Липунова // Физиологический журнал СССР. Ц 1972. Ц Т. 58, № 10. Ц С. 1603-1608.
2. ипунова Е.А. Влияние инсулина на желудочную секрецию у кур / Е.А. Липунова // Вопросы физиологии человека и животных. Ц Минск: Изд-во БГУ, 1972. Ц Вып. 3. Ц С. 111-117.
3. ипунова Е.А. Адаптация физиологических процессов у кур к введению инсулина  / Е.А. Липунова // Механизмы адаптации и компенсации физиологических функций в экстремальных условиях. Тр. Западно-Сибирского объединения физиологов, биохимиков и фармакологов. - Томск: Изд-во ТГУ, 1977. - С. 180-181.
4. ипунова Е.А. Изменение картины крови у птиц и млекопитающих под влиянием инсулина / Е.А. Липунова // Вопросы эволюционной физиологии: VII науч. совещание по эволюционной физиологии, посвященное памяти Л.А. Орбели. - Л.: Изд-во АН СССР, 1978. - С. 139.
5. ипунова Е.А. Реактивность системы крови на введение инсулина в ряду позвоночных животных / Е.А. Липунова, П.В. Полетаев // Проблемы общей и возрастной физиологии в педагогических вузах страны: материалы Всесоюзной конф.: 
   в 2 ч. - Ставрополь: Изд-во СГПИ, 1983. - Ч. 2. - С. 153-154.
6. ипунова Е.А. Влияние инсулина на работу сердца у стрессируемых кур / Е.А. Липунова, Е.Г. Яковлева, Т.А. Погребняк // Фармакологические и токсикологические аспекты применения лекарственных веществ в животноводстве: сб. науч. тр. Московской ветеринарной академии им. К.И. Скрябина. Ц М, 1992. Ц С. 43-44.
7. ипунова Е.А. Влияние натрия аскорбината на напряженность вакцинального иммунитета к болезни Ньюкасла у кур / Е.А. Липунова, Е.Г. Яковлева // Фармакологические и токсикологические аспекты применения лекарственных веществ в животноводстве: сб. науч. тр. Московской ветеринарной академии им. К.И. Скрябина. Ц М., 1992. Ц С. 44-45.
8. ипунова Е.А. Влияние натрия аскорбината на содержание общего белка и глобулинов в сыворотке крови цыплят / Е.А. Липунова, Е.Г. Яковлева, Т.И. Соколовская // Болезни сельскохозяйственных животных и меры борьбы с ними: межвуз. сб. науч. тр. - Белгород: Изд-во БГСХИ, 1992. - С. 47-52.
9. ипунова Е.А. Исследование сердечной деятельности у птиц при введении инсулина на фоне стрессовых воздействий / Е.А. Липунова // Материалы IV Междунар. симпозиума по сравнительной электрофизиологии. - Сыктывкар: Изд-во Коми АН СССР, 1977. - С. 201.
10. ипунова Е.А. Влияние многократного введения инсулина на динамику содержания глюкозы в крови и гликогена в тканях кур / Е.А. Липунова //Актуальные проблемы экологии на рубеже третьего тысячелетия и пути их решения: материалы Междунар.  науч.-практ. конф. (Брянск, 15-17 июня 1999 г.). - Ч. 1. - Брянск: Изд-во БГСХА, 1999. - С. 248-253.
11. ипунова Е.А. Влияние гидроалюмосиликатного сорбента на элиминацию тяжёлых металлов и накопление витаминов в организме птицы /Е.А. Липунова, А.А. Беляева // Миграция тяжёлых металлов и радионуклидов в звене: почва - растение (корм, рацион) - животное - продукт животноводства - человек: материалы Первого Междунар. симпозиума (Великий Новгород, 28-30 марта 2000 года). - В. Новгород: Изд-во Виконт, 2000. - С. 99-102.
12. ипунова Е.А. Реакция системы эритрона сельскохозяйственной птицы на введение в рацион гидроалюмосиликатного сорбента / Е.А. Липунова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Экология. - 2000. Ц  № 3 (12). Ц  С. 70-76.
13. ипунова Е.А. Влияние гидроалюмосиликатного сорбента на общую резистентность кур-несушек / Е.А. Липунова, А.А. Беляева // Экологическая безопасность и здоровье людей в XXI веке: материалы VI Всерос. науч.-практ. конф. (г. Белгород, 10-12 октября 2000 г.). - Белгород: Изд-во БеГУ, 2000. - С. 10-12.
14. ипунова Е.А. Эффективность применения гидроалюмосиликатного сорбента для снижения уровня тяжёлых металлов в организме кур-несушек / Е.А. Липунова, А.А. Беляева // Миграция тяжёлых металлов и радионуклидов в звене: почва - растение (корм, рацион) - животное - продукт животноводства - человек: материалы II Междунар. симпозиума (Великий Новгород, 28-30 марта 2001 г.). - В. Новгород: Изд-во Виконт, 2001. Ц  С. 197-201.
15. ипунова Е.А. Цитокинетические показатели эритроцитарного баланса у птиц в физиологических условиях / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Физиология организмов в нормальных и экстремальных состояниях: сб. статей / под ред. В.И. Гридневой. - Томск: Изд-во ТГУ, 2001. - С. 31-33.
16. ипунова Е.А. Динамические сдвиги в системе эритрона у птиц при экстремальных воздействиях / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. - 2002. - № 1 (16). Ц  С. 101-106.
17. ипунова Е.А. Устойчивость эритроцитарных мембран в условиях хронического стресса / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Приспособления организмов к действию экстремальных экологических факторов: материалы VII Междунар. науч.-практ. конф. (г. Белгород, 5-6 ноября 2002 г.). - Белгород: Изд-во БеГУ, 2002. Ц 
    С. 44-47.
18. ипунова Е.А. Регенерация системы красной крови у птиц при стрессировании / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Актуальные проблемы медицины и биологии: сб. науч. работ / под ред. Н.Н. Ильинских. - Томск: Изд-во СГМУ, 2003. -
    Вып. 2. Ц  С. 25-30.
19. Скоркина М.Ю. Эритрокинетика у птиц в условиях хронического стресса / М.Ю. Скоркина, Е.А. Липунова // Науки о человеке: сб. статей по материалам IV Междунар. конгресса молодых ученых и специалистов / под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. - Томск: Изд-во СГМУ, 2003. - С. 175-177.
20. Использование природного гидроалюмосиликата в животноводстве и ветеринарии: метод. рекомендоции. Переработанные и дополненные / А.А. Шапошников, Н.А. Мусиенко, А.И. Везенцев, Г.И. Горшков, Е.А. Липунова и др. - Белгород: Изд-во БГСХА, 2003. - 22 с.
21. ипунова Е.А. Оценка функционального состояния эритроцитарных мембран у птиц в условиях напряженного эритропоэза / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии: сб. науч. работ / под ред. Н.Н. Ильинских. - Томск: Изд-во СГМУ, 2004. - Т. 3, №1. - С. 142-144.
22. ипунова Е.А. Влияние полиминеральной кормовой добавки Экос на обмен кальция и фосфора в организме кур-несушек / Е.А. Липунова, С.Д. Чернявских // Вестник БГТУ им. В.Г. Шухова. - 2004. - № 8, Ч. 2.  - С. 94-96.
23. ипунова Е.А. Биоэлектрическая активность мозга и сердца у птиц при адаптации к стрессу / Е.А. Липунова, Т.А. Погребняк // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. Ц 2004. Ц Т. 90, № 8. Ц С. 208.
24. ипунова Е.А. Влияние гипоосмотической нагрузки на устойчивость эритроцитарных мембран /Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина, А.С. Зеленцова // Современные наукоёмкие технологии. - 2004. - № 1. - С. 94-95.
25. ипунова Е.А. Регуляция эритроцитарного баланса у птиц в условиях острого стресса / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Успехи современного естествознания. - 2004. - № 3. - С. 34-35.
26. ипунова Е.А. Морфофункциональная характеристика эритроцитов утят при использовании в рационе полиминеральной кормовой добавки / Е.А. Липунова // Проблемы природопользования и экологическая ситуация в Европейской России и сопредельных странах: материалы Междунар. науч. конф. (г. Белгород, 13-16 сент. 2004 г.). - М.; Белгород: Изд-во БеГУ, 2004. - С. 31-33.
27. ипунова Е.А. Особенности эритропоэза у птиц при адаптации к хроническому стрессу / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Актуальные проблемы сохранения устойчивости живых систем: материалы VIII Междунар. науч. экол. конф. (г. Белгород, 27-29 сентября 2004 г.). - Белгород: Изд-во БеГУ, 2004. - С. 113-115.
28. ипунова Е.А. Дыхательная функция крови при включении в рацион утят полиминеральной кормовой добавки / Е.А. Липунова // Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья: материалы Всерос. науч. конф. с междунар. участием (г. Белгород, 11-14 октября 2004  г.). Ц  М. ; Белгород: Изд-во БеГУ, 2004. - С. 79-87.
29. ипунова Е.А. Неспецифические реакции эритроцитов птиц в условиях напряженного эритропоэза / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. Ц 2004. Ц Т. 90, № 8. Ц С. 235.
30. ипунова Е.А. Система красной крови. Сравнительная физиология: моногр. / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина. - Белгород: Изд-во БеГУ, 2004. - 216 с.  ISBN 5-9571-0113-3.
31. ипунова Е.А. Способ идентификации субпопуляций эритроцитарной системы / Е.А. Липунова, В.М. Никитин, Н.А. Чеканов, М.Ю. Скоркина // патент на изобретение № 2234701  RU С 1. Белгородский гос. ун-т. - 2002134029; заявл. 17.12.02; опубл. 20.08.2004. - Бюл.  № 23. - 12 с.
32. Скоркина М.Ю.  Способ определения ретикулоцитов в инкубированной крови птиц / М.Ю. Скоркина, Е.А. Липунова // патент на изобретение
    № 2227280  RU С 2. Белгородский гос. ун-т. - 2002119253; заявл. 16.07.2002; опубл. 20.04.2004. - Бюл.  № 11. Ц  14 с.
33. ипунова Е.А. Способ визуализации форменных элементов крови птиц на одном мазке / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // патент на изобретение
    № 2224235  RU С2. Белгородский гос. ун-т. - 2002112129; заявл. 06.05.2002; опубл. 20.02.2004. - Бюл. № 05. - 7 с.
34. ипунова Е.А. Полиминеральная добавка для кур-несушек / Е.А. Липунова, С.Д. Чернявских // Зоотехния. Ц 2004. Ц № 7. Ц С. 20-22.
35. ипунова Е.А. Влияние новой полиминеральной кормовой добавки на морфофункциональное состояние эритроцитов крови утят / Е.А. Липунова // Успехи современного естествознания. - 2004,  № 8. - С. 120.
36. ипунова Е.А. К методике оценки функционального состояния системы эритрона лягушек / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина, А.С. Зеленцова // Бюллетень сибирской медицины. Ц 2005. Ц Т. 4. Ц Приложение 1. Ц С. 37.
37. ипунова Е.А. Функциональная характеристика эритроцитов крови птиц при глюнкозной нагрузке / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Бюллетень сибирской медицины. Ц 2005. Ц Т. 4. Ц Приложение 1. Ц С. 39.
38. ипунова Е.А. Морфометрическая классификация эритроцитарной популяции лягушек / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Бюллетень сибирской медицины. Ц 2005. Ц Т. 4. Ц Приложение 1. Ц С. 38-39.
39. ипунова Е.А. Морфометрический анализ печени при включении в рацион кур-несушек кремнийсодержащей кормовой добавки / Е.А. Липунова, С.Д. Чернявских // Успехи современного естествознания. - 2005. - № 11. - С. 49-50.
40. ипунова Е.А. Способ оценки активности эритропоэза / Е.А. Липунова, В.М. Никитин, М.Ю. Скоркина, А.С. Зеленцова // патент на изобретение № 2268463  RU C 1. Белгородский гос. ун-т. - 2004111098; заявл. 12.04.2004; опубл. 20.01.2006. - Бюл. №  02.-9 с.
41. ипунова Е.А. Особенности азотистого обмена у кур-несушек при введении в рацион полиминеральной кормовой добавки / Е.А. Липунова, С.Д. Чернявских // Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья: материалы II науч. конф. с междунар. участием, посвящённой 130-летию Белгородского гос. ун-та (г. Белгород, 18-23 сентября 2006 г.). - М. ; Белгород: Изд-во БеГУ, 2006. - С. 138-142.
42. ипунова Е.А. Влияние полиминеральной кормовой добавки на дыхательную функцию крови кур-несушек / Е.А. Липунова // Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья: материалы II науч. конф. с междунар. участием, посвящённой 130-летию Белгородского гос. ун-та (г. Белгород, 18-23 сентября 2006 г.). - М. ; Белгород: Изд-во БеГУ, 2006. - С. 142-146.
43. Илющенко В.П. К вопросу о возможности создания селективного энтеросорбента / В.П. Илющенко, Е.А. Липунова // Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья: материалы II науч. конф. с междунар. участием, посвящённой 130-летию Белгородского гос. ун-та (г. Белгород, 18-23 сентября 2006 г.). - М. ; Белгород: Изд-во БеГУ, 2006. - С. 92-95.
44. ипунова Е.А. Проницаемость и сорбционная способность мембран эритроцитов крови птиц при фотодесинхронозе / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Вестник Томского государственного университета.Ц 2006. Ц Приложение  № 21. Ц С. 89-90.
45. Скоркина М.Ю. Показатели костно-мозгового кроветворения у птиц при экстремальных воздействиях / М.Ю. Скоркина, Е.А. Липунова // Вестник Томского государственного университета.Ц 2006. Ц Приложение № 21. Ц С. 137-138.
46. Воронин И.М. Имплантат для биомедицинского применения и способ стимуляции регенеративного процесса в области повреждения кости / В.М. Воронин, В.М. Никитин, Е.А. Липунова, М.В. Воронин / патент на изобретение  № 2336046  RU A. ООО ВМВ Медицина. - Заявка № 2006143972; заявл. 12.11.2006; опубл. 20.06.2008. - Бюл. № 29. - 11 с.
47. ипунова Е.А. К методике определения цитокинетических показателей эритроцитарного баланса крови птиц /Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Естественные науки. - 2007. - № 5 (36), вып. 2. - С. 68-71.
48. Скоркина М.Ю. Структурная лабильность эритроцитарных мембран и регуляторные процессы при адреналиновой нагрузке in vitro / М.Ю. Скоркина, Е.А. Липунова, А.С. Зеленцова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Естественные науки. - 2007. - № 5 (36). - С. 72-74.
49. Lipunova E.A. General adaptation reaction of erythrocytic blood Population of birds at photodesynchronose /E.A. Lipunova // European Journal of Natural History, 2007. - №2. - P. 69-70.
50. Skorkina M.Yu. The method of determining the functional cjndition of erythropoesis in frogs / M.Yu. Skorkina, E.A. Lipunova // European Journal of Natural History, 2007. - №2. - P. 64.
51. ипунова Е.А. Использование природных полиминеральных добавок для получения экологически чистого мяса утят и цыплят-бройлеров /Е.А. Липунова // Экология и здоровье: материалы саттелитного симпозиума XX Съезда физиологов России (9 июня 2007 года). - М.: РУДН, 2007. - С. 95-97.
52. ипунова Е.А. Гематологические профили и морфофизиология крови птиц при глюкозной нагрузке / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям): материалы Междунар. конф. (10-13 июня 2007 г. Ярославль). - Ярославль: Изд-во ЯрГПУ им. К.Д. Ушинского, 2007. - С. 141.
53. ипунова Е.А. Физиология крови: монограф. исслед. / Е.А. Липунова,
    М.Ю. Скоркина. - Белгород: Изд-во БеГУ. - 2007. - 324 с. ISBN 9785-9571-0305-9
54. ипунова Е.А. Способ определения реактивности эритроцитов крови / Е.А. Липунова, В.М. Никитин, М.Ю. Скоркина. Патент на изобретение № 2350952  RU А. Белгородский гос. ун-т. Заявка № 2007124991, приоритет от 03.09.2007, опубл. 27.03.2009. - Бюл. № 9. - 12 с.
55. ипунова Е.А. Использование природных полиминеральных добавок для получения экологически чистой продукции птицеводства // Проблемы региональной экологии. Ц 2007. Ц № 6. Ц С. 154-156.
56. Lipunova E.A. Metabolic disorders in elderly diabetes patients / Lipunova E.A. // European Journal of Natural History, 2008. - №2. - P. 75.
57. ипунова Е.А. Регуляция формы и объёма эритроцитов в условиях гипоосмии при блокаде Ca2+ каналов верапамилом / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Эффективные и безопасные лекарственные средства: материалы Первого Междунар. конгресса ветеринарных фармакологов. - (СПб., 21-23 мая 2008). - СПб., 2008. - С.44.
58. ипунова Е.А. Влияние кальциевой нагрузки на величину -потенциала эритроцитов / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина, Р.В. Деркачёв // Микроэлементы в медицине. - 2008. - Т. 9. - Вып. 12. - С. 21.
59. ипунова Е.А. Влияние природной полиминеральной добавки на структурно-функциональный статус эритроцитов крови утят-бройлеров /  Е.А. Липунова // Проблемы региональной экологии. Ц 2009. Ц № 1. Ц С. 141-146.
60. Скоркина М.Ю. Система крови как скриннинг-тест экологического состояния окружающей среды / М.Ю. Скоркина, Е.А. Липунова // Проблемы региональной экологии. Ц 2009. Ц № 1. Ц С. 147-151.

       Примечание: жирным шрифтом выделены статьи, опубликованные в литературных источниках по списку ВАК.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВЭГ - внеэритроцитарный гемоглобин К - коэффициент гемоконцентрации КЕК - кислородная емкость крови ПЭМ - проницаемость эритроцитарных мембран

СЕЭ - сорбционная емкость эритроцита СКХ - средняя клеточная хрупкость СПС - средний процент гемолиза S/V - удельная поверхность эритроцита

   Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии