Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по сельскому хозяйству
На правах рукописи
Скибин Юрий Валерьевич
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТОВ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ
В СИСТЕМЕ МЕР ПРОФИЛАКТИКИ БАКТЕРИАЛЬНОГО
МАСТИТА У КОРОВ В СУХОСТОЙНЫЙ ПЕРИОД
06.02.02 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Белгород -2012
Работа выполнена в лаборатории Ветеринарная медицина ГНУ Курский НИИ агропромышленного производства Россельхозакадемии.
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор
Евглевский Алексей Алексеевич
Официальные оппоненты: Мельникова Клара Васильевна
доктор ветеринарных наук, профессор,
ФГБОУ ВПО Белгородская
государственная сельскохозяйственная
академия имени В.Я. Горина, профессор
Стебловская Светлана Юрьевна
кандидат ветеринарных наук, доцент,
ФГБОУ ВПО Курская государственная
сельскохозяйственная академия имени
профессора И.И.Иванова, доцент
Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины
Защита состоится л__ __________ 2012 года в л___ часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.02 при ФГБОУ ВПО Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я Горина по адресу: 308503, Белгородская обл., Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова,1
Тел./факс- (4722)39-22-62
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я Горина
Автореферат разослан л____ ____________2012 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета ________ Резниченко Людмила Васильевна
1. Общая характеристика работы
Актуальность темы. Вопросы обеспечения здоровья коров и увеличения периода их производственной эксплуатации являются важнейшими задачами ветеринарной науки и практики.
Среди множества причин, вызывающих преждевременное выбытие коров из стада, определяющее значение имеют глубокие нарушения обменных и иммунных процессов.
Решением проблемы нарушением обменных процессов и иммунодефицитов у коров занимались многие исследователи (Бирюков М.В. с соавт., 2005;Варкалис К., с соавт.,1994; Вишняков С.И., 1967; Денисенко В.Д. с соавт.,1997; Долинин Г.А.,1974; Иванов Б.И., 1995; Конопельцев И.Г., 2005; Масьянов Ю.Н.. 2009; Михалев В.И., Шушлебин В.И., 2005; Мищенко В.А. с соавт, 2006; Нежданов А.Г. с соавт., 1999; Париков В.А. с соавт., 2005; Попов Ю.Г. с соавт., 2005; Рязанский М.П., 1985; Савойский А.Г.с соавт.,1982; Самохин В.Т., с соавт., 1971; 1992, 1999;Слободяник В.И., 1995; 2005; Сисягин П.Н. с соавт., 2005; Топурия Л.Ю., 2005; Федоров Ю.Н., 1999; 2005 , Эрнст Л.К.,1999,Шарабрин И.Г.,1974; Шкуратова И.А. с соавт.,2007 и др.).
Несмотря на достижения в этой области, нарушения обмена веществ и иммунодефициты у коров имеют широкое распространение в молочном скотоводстве. На фоне глубоких нарушений обмена веществ развиваются многие патобиохимические и патофизиологические состояния, снижающие факторы естественной резистентности и повышающие чувствительность организма коров к условно-патогенной инфекции. Массовость гнойно-воспалительных заболеваний, проявляющихся послеродовым эндометритом и маститом является своего рода индикатором иммунодефицитных состояний у коров молочных стад (Александров И.Д., 1993; Андреева Н.Л., 1997; Воронин Е.С., Дервишов Д.А., 1989; Гугушвили Н.Н., 2003; Дранник Г.Н., Гриневич Ю.А., Дизик Г.М., 1994; Новиков О.Г., 2002; Слободяник В.И., Париков В.А., Сапожников Н.А. и др., 1995; Топурия Г.М., 2002; Ostensson K., 1993; Reth M., 1995).
Учитывая широкое распространение нарушений обмена веществ, иммунодефицитов, эндометритов и маститов, вопросы превентивной и оперативной терапии данных заболеваний носят актуальный характер и представляют практическую значимость для современного молочного скотоводства. Именно эти обстоятельства определили выбор темы диссертационного исследования.
Цель и задачи исследований. Изучить эффективность применения препаратов янтарной кислоты для превентивной коррекции обменных и иммунных процессов, профилактики и лечения бактериального мастита коров. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Провести анализ заболеваемости маститом высокопродуктивных сухостойных коров.
2. Изучить влияние препарата на основе янтарной кислоты на обмен веществ, иммунный статус и профилактику заболеваний маститом коров в сухостойный период;
3. Разработать способ получения нового комплексного иммунометаболического препарата с антисептической активностью и изучить эффективность его применения для профилактики мастита коров в сухостойный период;
4. Провести производственное испытание новых подходов коррекции обмена веществ, профилактики мастита коров в сухостойный период.
Научная новизна. Теоретически и экспериментально обосновано применение препарата на основе янтарной кислоты для превентивной коррекции обменных процессов сухостойных коров.
Разработан состав нового комплексного иммунометаболического препарата с антисептической активностью и изучена эффективность его применения для профилактики и лечения бактериального мастита у коров в сухостойный период.
Новизна подтверждена получением двух патентов РФ: - № 2361579 от 20.06.2009 г. и №2396978 от 20.08.2010г.
Практическая значимость работы. Полученные результаты исследований обосновывают целесообразность применения препаратов янтарной кислоты в системе мер коррекции иммунометаболических процессов, профилактики бактериального мастита у коров в сухостойный период. Эффективность разработок подтверждается внедрением их в систему мер обеспечения здоровья коров в хозяйствах Курской области и молочном комплексе л Белгородские молочные фермы.
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
- Анализ заболеваемости маститом коров в сухостойный период в условиях молочного комплекса Белгородские молочные фермы
- Теоретическое обоснование и эффективность применения сукцината натрия для коррекции обменных процессов высокопродуктивных коров;
- Результаты исследований по разработке комплексного иммунометаболического препарата с антисептической активностью и эффективность его применения для профилактики и лечения бактериального мастита у коров в сухостойный период.
- Оценка эффективности новых подходов превентивной коррекции иммунометаболических процессов и профилактики заболевания маститом коров в сухостойный период.
Апробация и публикация результатов исследований. Материалы диссертационного исследования доложены и одобрены на ученом совете ГНУ Курского НИИ агропромышленного производства РАСХН (2008-2011г.); на международной НПК, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области. Курск. 2008; на первом международном конгрессе ветеринарных фармакологов Эффективные и безопасные лекарственные средства. Санкт-Петербург. 2008 г.; на международной НПК, Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства. Новочеркасск, 2010; на международной научно-практической конференции Наука и инновации в сельском хозяйстве Курск-2011; на международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию Курской ГСХА, Курск-2011;
По материалам, представленным к защите диссертации опубликовано 8 научных статей; в том числе 4 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Получено два патента РФ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, изложения результатов исследований с их обсуждением, выводов, списка используемой литературы. Работа изложена на 121 странице компьютерного текста, содержит 19 таблиц. Список использованной литературы включает 197 источников, в том числе 20 зарубежных авторов.
2. Собственные исследования
2.1. Материал и методы исследований
Исследования проводились с 2007 по 2011гг в Курском НИИ агропромышленного производства РАСХН в соответствии с темой НИР лаборатории Ветеринарная медицина.
Основными объектами исследований явились коровы ОАО Белгородские молочные фермы. Научно-производственные опыты проводились на глубокостельных коровах
Иммунный статус подопытных коров изучали на основании показателей клеточной и гуморальной систем иммунитета.
Состояние клеточного иммунитета изучалось путем определения количества Т- и В-лимфоцитов по методике, разработанной Коромысловым Г.Ф. и Солодовниковым В.Л. (1982).
Содержание иммуноглобулинов классов М и G в сыворотке крови определяли методом простой радиальной иммунодиффузии по G. Manchini (1965) с использованием моноспецифических антисывороток ВИЭВа. Бактерицидную активность по методике Смирновой О.В. и Кузьминой Т.А.(1965)
изоцимную активность определяли по методике Каграмановой К.А. и Ермольевой З.В. (1966). Фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ) определяли по Гостеву В.С. (1950).
Количество гемоглобина в крови определяли с помощью гемометра Сали.
Содержание эритроцитов и лейкоцитов на счетчике частиц Культер-Каунтер (Франция).
Общий белок - рефрактометрическим методом, щелочной резерв сыворотки крови, содержание общего кальция, содержание фосфора, каротин определяли согласно методических указаний, изложенных в учебном пособии Шарабрина И.Г (1975).
Экспериментальные опыты проводились на белых мышах и морских свинках.
В соответствующих разделах диссертационной работы мы более подробно детализируем методические подходы проведения экспериментальных и производственных опытов.
Мастит диагностировали по результатам реакции проб секрета молочной железы с мастидином и димасдином.
Статистическую обработку полученных данных проводили согласно методических указаний Баюн Ю.К. (1988).
3. Результаты исследований
3.1. Анализ заболеваемости маститом коров в сухостойный период в условиях молочного комплекса Белгородские молочные фермы
Объектом для проведения исследований служили глубокостельные коровы второго, третьего и четвертого отелов в преддверии запуска.
В задачи исследований входило: экспресс диагностика (проба с 5% мастидином) субклинического мастита; определение уровня соматических клеток (СК) в секрете молочной железы; изучение иммунобиохимического состояния.
Результаты проведенных исследований секрета вымени на мастит представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Уровень заболеваемости субклиническим маститом у коров в сухостойный период в условиях молочного комплекса Белгородские молочные фермы
Коровы | Сроки исследований | ||
В начале сухостойного периода | За 30-35 дней до отела | За 3-4 дня до отела | |
2й отел | 126 32 (25,4 %) | 124 39 (31,4) | 122 42 (33,6) |
3й отел | 139 41 (29,9) | 136 45 (33,0) | 136 47 (34,5) |
4й отел | 94 32 (34,0) | 93 35 (37,6) | 93 39 (42,0) |
Примечание: верхняя строка - количество исследованных коров на мастит; нижняя строка - количество больных маститом абсолютно и в %
Результаты исследований биохимического статуса коров за 30 дней до отела и через 30 дней после родов мы приводим в таблице 2.
Таблица 2 - Биохимические показатели сыворотки крови сухостойных коров
Показатели | Возраст коров | ||
2 отел (n=7) | 3 отел (n=7) | 4 отел (n=7) | |
Общий белок, г/л | 79,512,4 94,69,50 | 89,98,50 103,210,80 | 90,27,80 104,511,80 |
Резервная щелочность ммоль/л | 21,421,44 21,061,39 | 17,731,26* 17,511,22* | 17,061,40* 16,521,26* |
Кетоновые тела, г/л | 0,070,073 0,080,068 | 0,130,108* 0,160,096* | 0,170,127* 0,180,136* |
Глюкоза, ммоль/л | 3,460,27 3,870,17 | 3,130,24 3,340,27 | 2,990,23* 3,290,21* |
Кальций, ммоль/л | 2,360,26 2,310,22 | 2,190,21 1,990,18 | 1,960,16 1,790,18 |
Неорганический фосфор, ммоль/л | 1,800,12 1,990,19 | 2,040,23 2,260,11 | 2,140,11 2,320,14 |
Примечание: верхняя строка - показатели вначале сухостойного периода; нижняя строка - показатели за 5-7 дней до отела; * p < 0,05 по отношению к показателям коров второго отела
Биохимический статус глубокостельных коров второго, третьего и четвертого отелов представлен в таблице 3.
Таблица 3 - Общий биохимический статус глубокостельных коров
Производственный статус у коров | Показатели | |||||||||
Резервная щелочность | Кальций | Фосфор | Каротин мг% | |||||||
Ниже нормы Кол-во / % | В норме Кол-во / % | Ниже нормы Кол-во / % | В норме Кол-во / % | Ниже нормы Кол-во / % | В норме Кол-во / % | Выше нормы Кол-во / % | 1,5 - 1,0 Кол-во / % | 0,2 - 0,3 Кол-во / % | 0,2 - 0,1 Кол-во / % | |
Второй отел (n=20) | 4 (20,0) | 16 (80,0) | 9 (45,0) | 11 (55,0) | 5 (25,0) | 14 (70,0) | 1 (5,0) | 9 (26,5) | 8 (23,5) | 17 (50,0) |
Третий отел (n=20) | 12 (60,0) | 8 (40,0) | 13 (65,0) | 8 (35,0) | 3 (15,0) | 16 (80,0) | 1 (5,0) | 2 (2,6) | 27 (34,6) | 49 (62,8) |
Четвертый отел (n=20) | 15 (75,0) | 4 (25,0) | 16 (80,0) | 4 (20,0) | 2 (10,0) | 17 (85,0) | 1 (5,0) | - | 34 (25,5) | 62 (64,5) |
Результаты исследований факторов резистентности сухостойных коров отражены в таблице 4
Таблица 4 - Состояние факторов резистентности сухостойных коров.
Показатели | коровы | ||
Второй отел( п=7) | Третий отел (п=7) | Четвертый отел(п=7) | |
ФАЛ,% | 42,152,16 | 40,862,14 | 39,842,54 |
39,331,17 | 37,651,85 | 37,251,55 | |
БАСК,% | 52,623,22 | 52,743,07 | 49,582,19 |
49,742,13 | 49,822,64 | 46,542,02 | |
Примечание: верхняя строка - показатели вначале сухостойного периода; нижняя строка - показатели за 5-7 дней до отела.
Таким образом, проведенные исследования позволят обосновать рабочую гипотезу о том, что, развитие мастита у коров в молочных стадах напрямую связано с нарушением обменных процессов и снижением факторов естественной резистентности.
3.2. Видовой состав микрофлоры при субклиническом мастите
Секрет молочной железы отбирали от коров в первые дни сухостойного периода. По результатам димастиновой пробы в одни пробирки отбирали секрет из долей с положительной реакцией, а в другие с отрицательной. Результаты бактериологических исследований отражены в таблице 5.
Таблица 5 - Результаты бактериологических исследований секрета вымени коров в начале сухостойного периода
Состояние долей вымени | Кол-во проб | Виды выделенных микроорганизмов (кол-во / %) | |||||
S.aureus | S.epidermidis | Str.agalactiae | Str.disgalactiae | E.coli | Ps.aeruginosa | ||
Субклинический мастит | 21 | 17 80,9 | 5 23,8 | 5 23,8 | 3 14,3 | 2 9,5 | 1 4,8 |
Здоровые | 63 | Ц | 4 6,3 | Ц | Ц | 3 4,8 | Ц |
Принимая во внимание, что ведущая роль в этиологии субклинического мастита у коров связана с золотистым стафилококком нами были проведены исследования по определению чувствительности к антибиотикам всех 17 культур S.aureus. Результаты исследований представлены в таблице 6.
Таблица 6 - Результаты определения чувствительности культур S.aureus к антибиотикам
| n/n | Антибиотик | Диаметр зон задержки роста у культур вокруг дисков (кол-во / %) | ||
до 15 мм | от 15 до 30 мм | более 30 мм | ||
1 | Бензилпенициллин | 17 (100%) | Ц | Ц |
2 | Цефазолин | 6 (35,3) | 9 (53,0) | 2 (12,0) |
3 | Цефалексин | 11 (64,7) | 6 (35,3) | Ц |
4 | Канамицин | 12 (70,0) | 5 (29,6) | Ц |
5 | Гентамицин | 12 (70,0) | 5 (29,6) | Ц |
6 | инкомицин | 8 (47,0) | 5 (29,6) | 4 (23,5) |
7 | Клиндамицин | 8 (47,0) | 4 (23,5) | 5 (29,6) |
8 | Рифампицин | 7 (41,2) | 6 (35,3) | 4 (23,5) |
9 | Ванкомицин | 8 (47,0) | 5 (29,6) | 4 (23,5) |
Проведенные исследования показали, что все культуры S.aureus демонстрировали весьма низкую чувствительность к пенициллину. Чувствительность к другим антибиотикам, включая последнего поколения, значительно варьировала.
3.3. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения средств метаболической направленности для профилактики
заболевания маститом коров в сухостойный период
В соответствии со схемой проведения опытов коровам первой группы (n=84) трехкратно, с интервалом 14 дней в объеме 10,0 мл был введен 2% сукцинат натрия. Коровам второй группы (n = 54) введение сукцината натрия сочетали с тетравитом. Коровам третьей группы (n = 78) трехкратно с интервалом 14 дней в объеме 5 мл вводился тетравит. Контрольной группе коров (n = 48) препараты не применялись. Результаты проведенных исследований представлены в таблицах 7,8,9.
Таблица 7 - Влияние биопрепаратов на динамику биохимических показателей сыворотки крови коров
Группа | Препарат | Дни исследований | Резервная щелочность ммоль/л | Кальций ммоль/л | Фосфор ммоль/л | Каротин мг % |
1 | Сукцинат натрия | 0 | 11,540,64 | 1,960,13 | 1,570,07 | 0,10,2 |
14 | 20,431,43* | 2,570,17* | 1,820,14 | 0,10,2 | ||
28 | 25,321,38* | 2,580,09* | 1,870,13 | 0,2 0,3 | ||
42 | 22,141,42* | 2,590,07* | 1,790,08 | 0,20,2 | ||
2 | Сукцинат натрия + тетравит | 0 | 12,34 0,95 | 1,75 0,07 | 2,75 0,11 | 0,1-0,2 |
14 | 24,941,23* | 2,660,06* | 1,890,09 | 0,8 0,1 | ||
28 | 25,181,39* | 2,710,09* | 2,010,11 | 1,00,1 | ||
42 | 24,441,29* | 2,690,07* | 1,710,16 | 0,60,1 | ||
3 | тетравит | 0 | 12,720,95 | 2,130,17 | 1,760,11 | 0,10,2 |
14 | 14,941,06 | 2,120,05 | 1,850,10 | 0,40,1 | ||
28 | 14,89 1,03 | 2,080,08 | 1,720,08 | 0,6 0,1 | ||
42 | 14,541,81 | 2,06 0,08 | 1,760,11 | 0,5 0,1 |
Примечание:* p < 0,05 по отношению к фоновым показателям
Таблица 8 - Влияние сукцината натрия на иммунологические показатели коров
Группа | Препарат | Дни после введения | Т - лимфоциты (%) | Т - хелперы (%) | Т Цсупрес-соры (%) | В - лимфоциты (%) | Ig М, (мг/см3) | Ig G, (мг/см3) |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
1 | Сукцинат натрия | 0 | 52,4 1,2 | 28,81,3 | 11,8 0,2 | 21,8 0,5 | 2,58 0,12 | 17,6 0,25 |
14 | 54,2 1,6 | 23,41,4 | 12,1 0,3 | 22,6 0,8 | 2,75 0,16 | 18,3 0,32 | ||
28 | 55,4 2,2 | 25,21,6 | 12,4 0,3 | 23,2 1,6 | 2,82 0,18 | 18,5 0,02* | ||
42 | 56,0 2,1 | 25,31,8* | 12,2 0,8 | 23,8 1,4 | 2,68 0,14* | 18,5 0,48* | ||
10 | 51,2 1,8 | 25,61,2* | 10,6 0,7 | 22,6 0,2 | 2,12 0,12* | 18,0 0,32* |
Продолжение таблицы 8
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
2 | Сукци нат натрия + тетравит | 0 | 51,8 1,6 | 18,7 1,2 | 11,6 0,3 | 21,3 0,4 | 2,52 0,14 | 17,4 1,04 |
14 | 55,3 1,8 | 23,8 2,1 | 12,0 0,2 | 23,0 0,2 | 2,81 0,16 | 18,6 0,24 | ||
28 | 54,6 8,8 | 26,1 1,2 | 12,2 0,2 | 25,1 1,2 | 2,85 0,26 | 18,8 0,16* | ||
42 | 56,2 2,4 | 25,4 1,2* | 12,0 0,4 | 24,3 1,2 | 2,74 0,22* | 18,5 0,34* | ||
10 | 53,1 1,2 | 24,2 1,1* | 11,1 0,3 | 22,6 0,8 | 2,34 0,24* | 18,8 0,26* | ||
3 | тетравит | 0 | 52,3 1,5 | 18,6 1,0 | 11,8 0,2 | 21,6 0,2 | 2,56 0,24 | 17,5 0,22 |
14 | 51,1 1,2 | 19,0 1,3 | 12,2 0,5 | 20,2 0,4 | 2,50 0,12 | 13,2 0,3 | ||
28 | 50,8 2,5 | 19,2 1,0 | 12,4 0,3 | 20,0 0,2 | 2,32 0,16 | 10,0 0,18 | ||
42 | 49,2 1,6 | 17,3 1,6 | 12,8 0,6 | 19,4 1,2 | 1,98 0,12 | 16,0 0,48 | ||
10 | 44,2 1,6 | 16,8 1,2 | 12,0 0,7 | 19,3 0,8 | 1,32 0,16 | 15,6 0,24 |
Примечание:* p < 0,05 по отношению к показателям контрольной группы
Таблица 9 - Влияние сукцината натрия на показатели послеродовой заболеваемости эндометритом и маститом
Группа животных | Кол-во животных | Препарат | Заболело | |||
Эндометритом | Маститом | |||||
кол-во | % | кол-во | % | |||
1 | 84 | Сукцинат натрия | 11 | 13,1 | 12 | 14,3 |
2 | 78 | Тетравит | 19 | 24,3 | 22 | 28,2 |
3 | 54 | Сукцинат натрия + тетравит | 6 | 11,1 | 6 | 11,1 |
4 | 48 | Контроль | 16 | 33,3 | 16 | 33,3 |
Таким образом, результаты проведенного опыта убедительно свидетельствует о том, что применение сукцината натрия позволяет провести выраженную коррекцию метаболических процессов в прогнозируемый период развития патобиохимического состояния. Это благоприятно отразилось на показателях заболеваемости эндометритом и клиническим маститом в ранний послеродовый период.
3.4. Теоретическое и экспериментальное обоснование разработки комплексного иммунометаболического антисептического препарата (КАП)
Вопросы разработки экономически выгодных и эффективных средств лечения гнойно-септических заболеваний являются весьма сложной задачей инфекционной патологии. Сложность задачи состоит в том, что одновременно необходимо добиться решения ряда вопросов, в частности, подавить жизнедеятельность патогенной микрофлоры, нейтрализовать ее токсические продукты жизнедеятельности, восстановить нарушенную трофику тканей патологического очага.
3.4.1. Экспериментальная оценка антисептической активности низких концентраций формалина
Рассматривая возможные аспекты применения формалина в инфекционной патологии, на первом месте стоят гнойно-септические поверхностные и полостные очаговые заболевания. Микроорганизмы, вызывающие эти заболевания, в частности, стафилококки, давно приобрели весьма высокую лекарственную резистентность.
Для тестирования нами были приготовлены растворы 0,3 и 0,5% формалина. По нашему мнению, кроме подавления жизнедеятельности микрофлоры в патологическом очаге важная роль должна отводиться средствам нормализующим трофику пораженных тканей.
При оценке раздражающего действия формалина на депилированные участки тела у морских свинок было установлено, что предварительная аппликация этих участков 1 % раствором сукцината натрия значительно уменьшило тканевую воспалительную реакцию. Практически схожий эффект наблюдался и при включении янтарной кислоты в растворы с формалином. Этот эффект мог быть обусловлен локальным снижением стресс реакции ткани при их травмировании во время выщипывания волосяного покрова и воздействии формалина.
При моделировании кожных очагов гнойно-септической инфекции на морских свинках установлено, что водные растворы формалина (0,2% и 0,5%) оказывают выраженное антисептическое действие. При этом более выраженное уменьшение площади пиодермического очага наблюдалось при применении формалина в комплексе с янтарной кислотой.
Полученные результаты позволили констатировать, что водные растворы формалина 0,3-0,5% концентрации обладают выраженным антисептическим действием. При этом антисептический эффект может быть успешно дополнен метаболическим компонентом, в частности, янтарной кислотой. По нашему мнению, это может существенно расширить область применения низких концентраций формалина в инфекционной патологии животных. Решению этих задач были посвящены наши дальнейшие исследования.
3.5.Теоретические и экспериментальные аспекты разработки
комплексного антисептического иммунометаболического препарата
Рассматривая полость молочной железы при мастите или матки при эндометрите как биореактор, в котором происходит бурное размножение микроорганизмов и выделение их токсических продуктов жизнедеятельности, представляется вполне возможным применение низких концентраций формалина не только в качестве антибактериального средства, но и качестве инактиватора бактериальных токсинов. Последние, утратив токсические свойства, частично диффундируя в ткани пораженного органа, неизбежно будут обеспечивать реализацию процесса быстрого индуцирования локального тканевого иммунитета.
Влияние растворов формалина и сукцината натрия на молочную железу здоровых коров
Задачи данного опыта входило изучение величины раздражающего действия выше указанных растворов на молочную железу клинически здоровых лактирующих коров при внутрицистернальном методе введения. Для проведения тестирования были приготовлены следующие составы растворов:
- 0,3 % формалин;
- 1 % сукцинат натрия;
- 0,6 % формалин, 1 % сукцинат натрия.
Клинико-экспериментальные исследования провели на коровах в преддверии окончания лактации. Для проведения опытов были отобраны коровы, в молоке которых концентрация соматических клеток составляла 250-400 тыс./мл.
Изучаемые средства вводили в объеме 5,0мл после доения. При этом в правые (опытные) доли молочной железы вводились испытуемые растворы, а в левые (контрольные) - физиологический раствор в аналогичном объеме. В дальнейшем, с интервалом в 8 часов от этих коров брались пробы молока. О степени раздражения тканей молочной железы судили по пробе с 2% раствором мастидина и динамике количества соматических клеток (СК). Результаты исследований представлены в таблице 10.
Таблица 10 - Степень раздражающего действия испытуемых растворов на молочную железу здоровых коров.
груп-пы коров | Препарат | Срок исследования | |||||||
до введения | через 8часов | через 24 часа | через 48 часов | ||||||
СК тыс/мл | Реакция | СК тыс/мл | Реакция | СК тыс/мл | Реакция | СК тыс/мл | Реакция | ||
1 | 0,6% формалин | 372,8±15,6 345,6±13,7 | -- -- | 1572,6±143,5* 432,8±15,4 | ± - | 812,5±71,4* 409,3±14,1 | ± _ | 573,6±39,3* 386,5±17,1 | - - |
2 | 1%сукци-нат натрия | 356,7±14,9 368,2±13,4 | _ _ | 308,5±14,3 324,8±17,1 | _ _ | 312,5±6,4 326,3±18,2 | _ _ | 324,5±17,4 342,8±19,3 | _ _ |
3 | 0,6% формалин 1% сукци-нат натрия | 392,8±19,3 389,7±118,6 | _ _ | 1087,5±21,3* 405,7±19,4 | _ _ | 574,5±24,3* 398,6±21,2 | _ _ | 396,5±11,8 342,7±19,4 | _ _ |
Примечание: числитель - показатели опытных групп; знаменатель - показатели контрольных групп * p < 0,05 по отношению к показателям контрольной группы
Следующий компонент, который мы решили использовать в качестве иммуностимулятора был АСД-второй фракции.
Бактерицидную активность определили в опыте in vitro, стандартным методом, по тесту задержки роста микроорганизмов вокруг бумажных дисков, пропитанных выше указанными растворами комплексного препаратов. В качестве тест объекта использовали культуру золотистого стафилококка засеянного в бактериологические чашки на мясопептонный агар. После 24-часовой выдержки в термостате при 37оС диаметр зон задержки роста микроорганизмов составили: вокруг дисков, пропитанных комплексным препаратом, содержащим формалина 0,2% - 5-7 мм; 0,3% - 10-12 мм; 0,4% - 15-17 мм; 0,5% - 20-22 мм. Диаметр зон задержки 15 мм и более свидетельствовало о высокой бактерицидной активности.
Испытание безвредности провели на белых мышах. Ежедневное, на протяжении 5 дней внутрибрюшинное введение в объеме 0,5 мл испытуемых образцов препарата, содержащего 0,2%, 0,3% и 0,4% формалина не сопровождалось угнетением общего состояния подопытных животных. Введение препарата содержащего 0,5% формалина на 5 суток привело к снижению активности животных, тем не менее, гибели их не наблюдалось.
Способ получения комплексного препарата осуществляется следующим образом:
Для приготовления комплексного препарата 10 г янтарной кислоты, 2,5 г новокаина растворили в 35 мл дистиллированной воды. Добавлением 40 мл АСД № 2 обеспечивается получение нейтрального раствора (рН= 6,9 - 7,0). В нейтральный раствор добавили 10 мл формалина, что обеспечивало его концентрацию равную 0,4% (из расчета 40% формальдегида). Довели объем до 1000 мл добавлением воды. Полученный препарат расфасовали по флаконам емкостью 100 мл, и для обеспечения стерильности подвергли автоклавированию в режиме 1 атм. в течение 20 минут.
Полученный комплексный препарат, был испытан для лечения и профилактики мастита у коров.
3.5.1.Эффективность комплексного антисептического препарата в лечении клинических маститов у коров
Опыт провели на коровах с клиническими признаками мастита по окончании лактационного периода. Подопытные животные были разделены по принципу аналогов на две группы. Коровам первой группы (n=3) с 7-ю больными долями молочной железы внутрицистернально в объеме 5 мл ввели комплексный антисептический препарат ( КАП), содержащий 0,6% формалина. Животным второй группы (n=3) с 5 больными долями, внутрицистернально был введен в аналогичном объеме препарат без формалина. Антиинфекционная активность и лечебная эффективность оценивалась на 5 и 10 сутки после применения препаратов. Результаты проведенного опыта представлены в таблице 11.
Результаты исследований свидетельствует о том, что включение в состав препарата формалина обусловило более ускоренный процесс обезвреживания микрофлоры в больных маститом долях молочной железы.
Таблица 11 - Антиинфекционная эффективность КАП при лечении клинического мастита у коров.
Коровы | Препарат | Видовой состав микрофлоры до и после введения препаратов | ||
До введения | На 5 день | На 10 день | ||
1. 2. 3. | КАП | E. coli Str. agalactiae S. aureus Str. agalactiae S. aureus Str. agalactiae | S. aureus | Ц Ц Ц |
1. 2. 3. | Препарат без формалина | E. coli Str. agalactiae S. aureus Str. agalactiae S. aureus E. coli | Str. agalactiae S. aureus Str. agalactiae S. aureus | Ц Ц Ц |
3.6.Эффективность применения комплексного антисептического препарата при субклиническом мастите коров в сухостойный период
Оценку лечебно-профилактической эффективности комплексного антисептического препарата ( КАП) провели при интрацистернальном методе введения в сравнении с мастисаном-А. Придерживаясь принципа аналогов, по мере прекращения доения глубокостельных коров, были сформированы подопытные группы, включающие больных субклиническим маститом. Одним коровам препараты вводили разово в начале сухостойного периода (таблица 11), с последующим трехкратным диагностическим исследованием на мастит через каждые 3-4 дня, а другим (таблица 11) за 14-15 дней до предполагаемого отела. Окончательно диагностировали воспалительный процесс в долях вымени в первые дни после родов клинически и с помощью димастиновой пробы. Лечебная и профилактическая эффективность по данным двух опытов отражена в таблицах 12, 13.
Таблица 12 - Эффективность КАП и мастисана-А при субклиническом мастите в сухостойный период в начале запуска
Группы больных и кол-во коров | препараты | положительная проба секрета на димастин (доли вымени) | Заболело клиническим маститом после родов | ||||
до введения | после введения на | ||||||
3 день | 7 день | 14день | коров | % | |||
1(n=36) | КАП | 86 | 36 | 26 | 7 | 4 | 11,1 |
2(n=32) | Мастисан | 83 | 54 | 32 | 28 | 9 | 28,1 |
3(n=30) | контроль | 52 | 48 | 47 | 48 | 12 | 40,0 |
Таблица 13 - Эффективность КАП и мастисана-А при субклиническом мастите за 15 дней до родов
Группы больных и кол-во коров | препараты | Положительная проба секрета на димастин после родов | Заболело клиническим маститом | ||
коров | долей вымени | коров | % | ||
1(n=24) | КАП | 5 | 8 | Ц | Ц |
2(n=26) | Мастисан | 7 | 14 | 3 | 11,5 |
3(n=24) | контроль | 12 | 19 | 8 | 30,0 |
3.7. Эффективность производственного испытания новых подходов управления инфекционным и эпизоотическим процессами при мастите коров в сухостойный период
Исходя из обозначенной концепции стимулирования обменных процессов в системе профилактики мастита, порядок проведения научно-производственного опыта включал, на одних группах, внутрицистеральное введение формол-янтарного биостимулятора ( ФЯБ), мастисана, а на других - параллельное парентеральное введение сукцината натрия.
Объектом для проведения научно- производственного опыта являлись глубокостельные коровы второго, третьего и четвертого отелов с первых дней сухостойного периода.
Итогом проведения опыта являлись показатели заболеваемости коров маститом в преддверии отела и в первые дни после родов.
Диагностические исследования на мастит провели до введения препаратов, затем на 10 сутки, за 5-7 дней до и в первые дни после отела. Результаты исследований отражены в таблицах 14,15,16.
Таблица 14 - Эффективность комплексного подхода профилактики мастита у сухостойных коров второго отела.
Группы коров | Препарат для в/цистернального введения | Парентеральное введение сукцината натрия | Выявлено больных маститом коров/Поражено долей | Заболело клиническим маститом после отела | ||||
До введения | Спустя 10 дней | За 5-7 дней до отела | Профилактическая эффективность | Количество больных/поражено долей | % | |||
1(n=38) | ФЯБ | + | 10/16 | 4/7 | 4/4 | 11,5 | 2/3 | 5,2 |
2(n=38) | мастисан | + | 9/17 | 4/9 | 6/9 | 16,6 | 3/4 | 7,1 |
3(n=36) | ФЯБ | - | 9/14 | 4/6 | 5/8 | 13,8 | 2/5 | 5,5 |
4(n=36) | мастисан | - | 8/15 | 6/10 | 6/9 | 16,6 | 3/6 | 8,4 |
5(n=38) | - | - | 9/13 | 14/19 | 14/17 | 36,8 | 5,8 | 13,2 |
Таким образом, по результатам диссертационного исследования нами были раскрыты характер и глубина изменений в иммунометеболических процессов у коров высокопродуктивного молочного стада. С положительным результатом апробированы в производстве экономически выгодные,
Таблица 15 - Эффективность комплексного подхода профилактики мастита у сухостойных коров третьего отела.
Группы коров | Препарат для в/цистернального введения | Парентеральное введение сукцината натрия | Выявлено больных маститом коров/Поражено долей | Заболело клиническим маститом после отела | ||||
До введения | Спустя 10 дней | За 5-7 дней до отела | Профилактическая эффективность | Количество больных/поражено долей | % | |||
1(n=42) | ФЯБ | + | 15/21 | 5/9 | 5/8 | 11,9 | 3/5 | 7,1 |
2(n=42) | мастисан | + | 16/19 | 7/12 | 6/12 | 14,3 | 5/9 | 11,9 |
3(n=30) | ФЯБ | 16/22 | 6/11 | 6/14 | 20,0 | 4/6 | 13,3 | |
4(n=30) | мастисан | 15/19 | 5/12 | 7/15 | 23,3 | 4/8 | 13,3 | |
5(n=30) | - | - | 13/22 | 16/23 | 12/28 | 40,0 | 6/9 | 20,0 |
Таблица 16 - Эффективность комплексного подхода профилактики мастита у сухостойных коров четвертого отела.
Группы коров | Препарат для в/цистерналь-ного введения | парентеральное введение сукцината натрия | Выявлено больных маститом коров/Поражено долей | Заболело клиническим маститом после отела | ||||
До введения | Спустя 10 дней | За 5-7 дней до отела | Профилактическая эффективность | Количество больных/пора-жено долей | % | |||
1(n=28) | ФЯБ | + | 10/12 | 3/5 | 3/5 | 10,7 | 2/3 | 7,1 |
2(n=28) | мастисан | + | 11/13 | 4/7 | 4/8 | 14,6 | 2/4 | 7,1 |
3(n=26) | ФЯБ | 11/14 | 5/7 | 4/7 | 15,4 | 2/4 | 11,1 | |
4(n=26) | мастисан | 9/12 | 5/7 | 5/9 | 19,2 | 3/5 | 11,5 | |
5(n=25) | - | - | 9/12 | 10/19 | 10/12 | 40,0 | 4/7 | 16,0 |
простые и эффективные методы коррекции иммунометаболических процессов у высокопродуктивных коров. Разработан эффективный безантибиотиковый способ профилактики и лечения мастита у коров исключающий селекцию резистентных штаммов микроорганизмов. Результаты проведенных исследований позволили нам сделать следующие выводы и практические предложения.
4. Выводы
1. Неадекватный потребностям организма тип кормления высокопродуктивных коров на комплексах по производству молока приводит к быстрому развитию патобиохимического состояния. Этот фон является благоприятным для активации жизнедеятельности эндогенной, в частности гноеродной инфекции, вызывающей заболевания послеродовым эндометритом и маститом.
2. Превентивное применение сукцината натрия на глубокостельных коровах позволяет эффективно проводить коррекцию основных обменных процессов, что подтверждается устранением алиментарного ацидоза, нормализацией кальций-фосфорного соотношения, улучшением иммунного состояния.
3. Целенаправленное применение сукцината натрия коровам в сухостойный период снижает показатели заболеваемости послеродовым эндометритом на 28,9 %, клиническим маститом на 19,0 %.
4. Высокая лекарственная устойчивость основных возбудителей мастита, в частности золотистого стафилококка, обусловливает необходимость постоянного поиска новых средств химио-антибиотикотерапии к которым затруднен эффект быстрого привыкания микроорганизмов.
5. Внутрицистернальное применение сукцината натрия обеспечивает выраженное снижение количества соматических клеток, что может иметь важное значение в разработке противомаститных средств с улучшенной фармакологической характеристикой.
6. Теоретически обоснован и разработан комплексный антисептический иммунометаболический препарат на основе янтарной кислоты, АСД Ф №2 и формалина. Внутрицистернальное применение препарата при клиническом мастите обеспечивает быстрое обезвреживание микрофлоры, перевод ее токсичных продуктов жизнедеятельности в антитоксические, что имеет определяющее значение в ускорении процесса формирования специфического локального иммунитета.
7. Современная система профилактики заболевания маститом у сухостойных коров должна основываться на превентивной стимуляции общих обменных и иммунных процессов, и эффективности обезвреживания условно-патогенной микрофлоры в молочной железе.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
- Для превентивной терапии нарушенных обменных процессов у глубокостельных коров рекомендуем применение 2% сукцината натрия, обеспечивающего выраженную коррекцию метаболических и иммунных процессов.
- Для лечения субклинического мастита у сухостойных коров рекомендуется комплексный препарат, на основе янтарной кислоты, АСД фракции №- 2, формалина обеспечивающего быстрое обезвреживание условно-патогенной и патогенной микрофлоры, инактивацию их токсичных продуктов жизнедеятельности и локальную стимуляцию обменных процессов в тканях патологического очага.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
Публикации в ведущих рецензируемых изданиях,
рекомендованных в действующем перечне ВАК
1. Скибин Ю.В.. Новые подходы к лечению острого эндометрита и мастита у коров / Е.П.Евглевская, Е.А.Скребнева, А.А.Евглевский, Швец О.М., Кудряшова Ж.А., Скибин Ю.В. // Ж.Вет. патология.- №1.- 2009. С. 76-78.
2. Скибин Ю.В.Теоретическое и практическое обоснование нового подхода преодоления лекарственной резистентности микроорганизмов / С.Н. Кретова, А.А. Евглевский, В.Ю. Тарасов, И.В. Ермилов, Ю.В. Скибин, Н.В. Ванина, С.М. Коломийцев, О.М. Швец, Е.П. Евглевская // Вестник Курской ГСХА. Курск, 2011. № 1. С. 67-68
3. Скибин Ю.В. Эффективность применения сукцината натрия при алиментарном ацидозе и кетозе высокопродуктивных коров/ А.А. Евглевский, О.М.Швец, Е.П.Евглевская, Ю.В.Скибин, Н.В.Воробьева// Вестник Курской ГСХА. Курск, 2011. № - 5. С.70-71
4. Скибин Ю.В. Теоретическое и практическое обоснование применения инъекционного препарата на основе янтарной кислоты при алиментарном ацидозе и кетозе высокопродуктивных коров / А.А. Евглевский, Ю.В. Скибин, Н.В.Воробьева, О.М.Швец, Е.П.Евглевская// Ветеринарная патология.№3-С.65-68.
Прочие публикации, содержащие основные научные результаты диссертации
1. Скибин Ю.В. Теоретическое и практическое обоснование новых подходов терапии острого послеродового эндометрита и мастита у коров / Е.П. Евглевская, М.Г. Лебедева, Е.А. Скребнева, Н.В. Воробьева, Ж.А. Кудряшова, Ю.В. Скибин, А.А. Евглевский // Мат. междунар. НПК посвященной 125-летию ветеринарии Курской области.- Курск, 2008.- С. 98-104.
2. Скибин Ю.В.. Новый препарат янтарный биостимулятор и эффективность его применения в ветеринарии / Швец О.М., Лебедев А.Ф., Евглевская Е.П., Кудряшова Ж.А., Скибин Ю.В., Евглевский А.А., Арутюнова И.П. // Мат. Первого межд. конгресса вет.фармакологов. Санкт-Петербург, 2008 С. 74.
3. Скибин Ю.В. Иммунометаболическая активность янтарного биостимулятора и эффективность его применения для профилактики маститов и эндометритов у коров в ранний лактационный период / Ю.В.Скибин, А.А. Евглевский // Мат. Всероссийской НПК л Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства.- Новочеркасск, 2010-С. 151-154.
4.Скибин Ю.В. Эффективность применения инъекционного препарата на основе янтарной кислоты при алиментарном ацидозе высокопродуктивных коров / Ю.В. Скибин// Мат. междунар. НПК л Наука и инновации в сельском хозяйстве.- Курск; 2011-С. 161-164.
5. Скибин Ю.В.Эффективность сукцината натрия для стимуляции метаболических процессов при элементарном ацидозе и кетозе высокопродуктивных коров/ А.А.Евглевский, Ю.В.Скибин, О.М.Щвец, Е.П.Евглевская, Н.В.Воробьева// // Мат. междунар. НПК посвященной 140-летию И.И.Иванова. - Курск, 2011.
Изобретения:
1 Способ получения комплексного иммунотропного антисептического препарата для лечения и профилактики инфекционных заболеваний животных / С.Н. Кретова, А.А.Евглевский, В.С. Попов, Е.П. Евглевская, И.В.Ермилов, В.Ю.Тарасов, И.В. Зайцев, С.Ю. Щепихин, Н.В. Ванина, С.Н.Кретова, И.М.Умеренков, Ю.В.Скибин // Патент РФ № 2361579 от 20 июля 2009 года - Бюл. №20.
2. Способ профилактики и лечения мастита у коров/ Воробьева Н.В., Евглевская Е.П., Скребнева Е.Н., Скибин Ю.В.// Патент РФ № 2401657 от 20 октября 2010г - Бюл.№29
ъ
Формат 60х84 1/16. Бумага для множительных аппаратов.
Печать на копировальном аппарате КГСХА.
Усл. печ. л. 1,0. Уч.-изд.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 90.
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по сельскому хозяйству