Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству  

На правах рукописи

ПЕТРОВА Ирина Владимировна

ДИАГНОСТИКА И МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗА У НОРОК

Специальность 06.02.01 - Диагностика болезней и терапия

  животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Москва, 2012

Работа выполнена на кафедре Незаразные болезни ФГБОУ ВПО Московский государственный университет пищевых производств Министерства образования и науки РФ.

Научный руководитель: Уша Борис Вениаминович,

  доктор ветеринарных наук, профессор,

  академик РАСХН

  (ФГБОУ ВПО МГУПП)

 

Официальные оппоненты:  Брагин Геннадий Иванович,

доктор ветеринарных наук, профессор

(ФГБОУ ВПО МГУПП)

Геллер Вера Иосифовна,

кандидат ветеринарных наук,

ведущий научный сотрудник

ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Российский университет

  дружбы народов 

Защита диссертации состоится л____________ 2012 г. в ___ часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.148.09 при ФГБОУ ВПО Московский государственный университет пищевых производств по адресу: 109316, г. Москва, ул.Талалихина, д.33, в конференц-зале.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ФГБОУ ВПО МГУПП.

Автореферат разослан л___ ________ 2012 г.

Автореферат размещен на сайте Министерства образования и науки РФ л___________2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук, профессор Андрианова Т.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Пушное звероводство - одна из ведущих отраслей сельского хозяйства. В настоящее время существует сложная ситуация с кормовой базой. Пушное звероводство является биологическим утилизатором отходов сельскохозяйственного производства, в корм зверям нередко поступают низкокачественные продукты, а рационы зачастую плохо сбалансированы, что приводит к значительному снижению иммунного статуса у зверей (Рютова В.П., 1970; Сергеев Н.С., 1980; Милованов Л.В., 1997; Нюхалов А.П., 2005).

После присуждения в 2005 году Б. Маршаллу и Р.Уоррену Нобелевской премии в области физиологии и медицины за открытие влияния бактерии H.pylori на возникновение гастрита и язвы желудка у человека повысилось внимание к изучению роли бактерий в возникновении патологии желудка. Одной из актуальных проблем является широкое распространение хеликобактериоза как среди животных, так и среди людей. Современную эпизоотическую ситуацию по хеликобактериозу нельзя считать благополучной (Семикрасова А.Н., Литвинов О.Б., 2007). Ущерб от этого заболевания значителен. Хеликобактериоз поражает как взрослых норок основного стада, так и молодняк после отсадки.

На настоящий момент диагностика хеликобактериоза в звероводческих хозяйствах не проводится. В большинстве случаев хеликобактериоз остается неустановленным, а больные звери и падеж регистрируются под диагнозом других заболеваний. Не разработаны также методы профилактики и лечения хеликобактериоза норок. Решение этих проблем актуально для звероводства и поможет в значительной степени снизить смертность среди молодняка норок, а, следовательно, существенно уменьшить экономический ущерб.

Изучение эпизоотической обстановки, разработка средств профилактики и лечения хеликобактериоза норок невозможно без надежного и применимого в различных условиях способа диагностики. Таковым, согласно данным литературы, является гистологический способ диагностики хеликобактериоза у человека. В доступной нам литературе сведений о методах диагностики, разработанных для выявления хеликобактериоза у норок, мы не обнаружили. Исследования в данном направлении являются актуальными.

Цель и задачи исследований. Целью работы является: разработка патолого-морфологического способа диагностики хеликобактериоза у норок, изучение морфо-функциональных изменений в органах и тканях норок при хеликобактериозе.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- разработать патолого-морфологический метод диагностики хеликобактериоза норок;

- изучить клинико-функциональные и морфологические изменения у норок при хеликобактериозе;

- изучить взаимосвязь морфо-функциональных изменений в желудке у норок  с обсемененностью слизистой оболочки желудка хеликобактерами;

- установить характерные патолого-морфологических изменения при хеликобактериозе норок;

- разработать дифференциальную диагностику хеликобактериоза норок с основными инфекционными заболеваниями и токсикозами норок.

Научная новизна. Впервые изучены патолого-морфологические изменения при хеликобактериозе норок. Установлен и изучен комплекс взаимосвязанных между собой гистологических изменений в организме норок при хеликобактериозе. Установлена взаимосвязь патолого-морфологических изменений при хеликобактериозе у норок и обсемененность слизистой оболочки желудка бактериями рода Helicobacter.

Изучены патолого-морфологические изменения при хеликобактериозе норок. Предложена схема дифференциальной диагностики хеликобактериоза от сходных заболеваний норок.

Практическая значимость работы. Предложен способ диагностики хеликобактериоза норок.

Апробация. Основные положения диссертации доложены на  конференции молодых ученых Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины (Покров, 2009), Международной научно-практической конференции Повышение интенсивности и конкурентоспособности отраслей животноводства (Респ. Беларусь, Жодино, 2011); Всероссийской научно-практической конференции Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства (Новочеркасск, 2011); Международной научно-практической конференции Актуальные проблемы клеточного пушного звероводства и кролиководства России (ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии, Москва, 2012), курсах повышения квалификации специалистов-звероводов (ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии, Москва, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 2 статьи в журналах, входящих в список работ, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Научное обоснование патолого-морфологического способа диагностики хеликобактериоза норок.

- Результаты исследований клинико-функциональных и морфологических изменений в органах и тканях норок при хеликобактериозе.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 136 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка цитируемой литературы, включающего 213 источников, из них 110 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 11 таблицами и 56 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследования

Научно-практические эксперименты проводились в период с ноября 2009 по апрель 2012 гг. на кафедре Незаразные болезни ФГБОУ ВПО МГУПП, в отделе ветеринарной медицины и на экспериментальной ферме Наука ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии, а также в звероводческих хозяйствах ОАО Племзавод Пушкинский и ЗАО Малоярославецкое зверохозяйство.

Объектами исследования послужили самки и самцы норок, спонтанно заболевшие хеликобактериозом, подобранные по принципу аналогов. У подопытных норок были исключены сходные заболевания, протекающие с признаками поражения ЖКТ. По результатам проведенных исследований норки  были разделены на 3 группы: 1-я группа - контроль, здоровые норки, без видимых клинических признаков отклонений в состоянии здоровья, убитые в возрасте 6-7 месяцев (10 голов); 2-я группа - норки, больные хеликобактериозом, убитые в возрасте 6-7 месяцев (100 голов); 3-я группа - норки, павшие от хеликобактериоза (50 голов). Всего для исследования использовали 160 голов норок.

Подопытных животных содержали в отдельных клетках, согласно принятым в хозяйстве технологиям и нормам.

С целью изучения клинических проявлений хеликобактериоза определяли клинико-физиологические показатели у норок: состояние шерстного и кожного покрова, адекватность поведенческих реакций, двигательную активность, сохранность аппетита, проводили пальпацию области желудка, определяли наличие характерных клинических признаков (рвота, нарушение акта дефекации).

Кровь для лабораторного исследования брали из кончика пальца с соблюдением правил асептики по общепринятой методике (Берестов В.А., 1981).

В цельной крови определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в сетке камеры Горяева, уровень гемоглобина унифицированным колориметрическим методом, СОЭ - по методу Панченкова.

Биохимическими исследованиями сыворотки крови определяли содержание общего белка, глюкозы, билирубина, АсАТ, ААТ по стандартным методикам на биохимическом анализаторе Торус 1200.

Для изучения патологоанатомических изменений при хеликобактериозе у норок производили вскрытие и описание изменений в органах.

Для оценки местной уреазной активности желудка был проведен быстрый уреазный тест. Сразу же после убоя и вскрытия трупов норки брался биопсийный материал из желудка, из мест с максимально выраженной гиперемией и отеком, который помещали в пробирку типа эппендорф, в ту же пробирку добавляли 2 капли 6%-й мочевины по Кристенсену с феноловым красным. Пробирку плотно закрывали и через 15 мин. производили учет результата. Положительный результат - изменение окраски раствора мочевины с ярко-желтой на малиновую, отрицательный результат - цвет оставался ярко-желтым.

Для гистологического исследования отбирали материал из различных отделов желудка, двенадцатиперстной кишки, печени и поджелудочной железы. Патологический материал фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине в течение 10-30 дней при комнатной температуре. Из одной части материала готовили гистосрезы на замораживающем микротоме, другую часть подвергали целлоидиновой и парафиновой проводке, по общепринятой методике (Меркулов Г.А., 1969; Жаров А.В., Белоусов В.И., Барабанов И.И. и др., 2005). Гистологические срезы готовили на системе для микротомирования микротом KD-3358.

Замороженные, целлоидиновые, депарафинированные срезы проводили по стандартным методикам, окрашивали гематоксилином и эозином, 0,1%-м метиленовым голубым на 0,1%-м растворе натрия тетрабората, Суданом III. Препараты заключали под покровные стекла в полистирол. Морфологическое исследование гистологических срезов проводили на световом микроскопе Nicon eclipse E200 с фотокамерой с помощью объектива х10, детализацию и уточнение морфологии структур х40, х100 (последнее с использованием иммерсионной системы).

Для определения степени обсемененности слизистой оболочки желудка хеликобактериями готовили мазки-отпечатки со слизистой антрального отдела желудка в первые 10 мин. после убоя путем прокатывания кусочка по стеклу с соблюдением общепринятых правил. Мазок фиксировали спирт-эфиром, затем окрашивали метиленовым синим по общепринятой методике (Меркулов Г.А., 1969).

Хеликобактерии детализировали в слизи при увеличении х1000 с применением иммерсионной системы (Аруин Л.И., Исаков В.А., 1995).

Для проведения дифференциальной диагностики хеликобактериоза от других заболеваний норок, протекающих с признаками поражения желудочно-кишечного тракта, были использованы рекомендации по диагностике чумы плотоядных, пастереллеза, вирусного энтерита норок, сальмонеллеза, алеутской болезни норок и токсикозов различного происхождения.

Результаты экспериментов подвергали статистической обработке с использованием методов биометрического анализа в программе Microsoft Office Exel. По всем количественным данным определяли критерий достоверности по Стьюденту.

2.2 Результаты собственных исследований

Клиническое проявление хеликобактериоза у норок

Во звероводческих хозяйствах ОАО Племзавод Пушкинский и ЗАО Малоярославецкое зверохозяйство наблюдается заболевание норок, проявляющееся отказом от корма, рвотой, метеоризмом кишечника, поносом и сопровождающееся хроническим гастритом, язвами желудка и перитонитом.

Болезнь поражает, в основном, щенков и проявляется при отъеме от самок, т.е. при переводе на самостоятельный тип кормления. По нашим наблюдениям наивысший отход у щенков происходит в июле-августе. Он может быть очень значительным, достигая 200-300 голов в день при поголовье около 60000 молодняка (15000 основного стада). Начиная с сентября, количество летальных случаев снижается и к моменту убоя зверей, отход составлял единицы.

При хеликобактериозе у норок снижается аппетит, появляется отрыжка, язык несколько увеличен, с отпечатками зубов, обложен белесым налетом. В дальнейшем происходит нарастание симптомов: в течение часа после приема пищи наблюдается рвота, рвотные массы слизистые, нередко с примесью крови. Рвота является одним из патогномичных, а иногда и единственным симптомом язвенного процесса. При пальпации в области желудка выявляется боль, которая может вызвать рвоту. Нередко у норок возникает метеоризм, понос. Увеличивается жажда. Шерстный покров становится тусклым и сухим. Больной зверь взлохмачен, сгорблен. Отмечается слабость, зверь лежит, забившись в угол.

У норок, перенесших острую форму хеликобактериоза, заболевание переходит в хроническую форму, протекающую с обострениями.

Гематологическое и биохимическое исследование крови у норок при хеликобактериозе

Гематологические и биохимические показатели у 10-ти контрольных норок находились в пределах физиологической нормы для данного вида животных (табл. 1, 2).

У больных хеликобактериозом норок показатели изменились в пропорциональной зависимости от тяжести хеликобактер-ассоциированного гастрита, хронического гепатита и панкреатита. Показатели крови определяли у 100 голов убойного молодняка норок 2-й группы. У 23 норок показатели оставались близкими к показателям контрольной группы. При гистологическом исследовании желудка и печени морфологическая картина у этих зверей соответствовала неактивному и малоактивному гастриту и, соответственно, начальной форме гепатита. У 53-х норок гематологические показатели значительно изменились по сравнению с контролем: количество гемоглобина понизилось в среднем на 16,3 %, эритроцитов - на 7,5 %, количество лейкоцитов повысилось на 20 %, СОЭ увеличилось на 7,4 %. Результаты биохимического анализа крови показывают, что содержание общего белка понизилось на 18,1 %, глюкозы на 7,9 %, содержание билирубина в крови повысилось на 10,4 %, коэффициент Де-Ритиса понизился до 1,68 (табл. 1, 2). У этих норок, соответственно, при гистологическом исследовании были установлены умеренно-активный гастрит и хронический перипортальный, портальный и паренхиматозный гепатит средней тяжести.

Таблица 1 - Морфологические показатели крови норок (М + m)

Показателиа	Контрольа	Опыт (группа 2)а
	а10 голов	23 головы	53 головы	24 головыа
Гемоглобин, г/л	153,0 +4,0	151,0+2,0*	128,0+5,0***	118,1+2,5***
Эритроциты, 1012 г/л	8,02+0,09	8,00+0,07*	7,42+0,05*	6,72+0,34***
ейкоциты, 109 г/л	7,90+0,08	8,01+0,06**	9,48+0,03***	10,15+0,07***
СОЭ, мм/ч	2,50+0,12	2,70+0,10**	2,70+0,11***	2,90+0,10***

Примечание: * р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001 по отношению к контрольной группе

У 24 норок установлено снижение уровня гемоглобина на 22,8 %, количество эритроцитов на 16,2 %, повышение количества лейкоцитов на 28,5 %, СОЭ на 16 %. Биохимические показатели крови изменились следующим образом: уровень общего белка в сыворотке крови понизился на 25,8 %, глюкозы на 32,7 %, содержание билирубина повысилось на 55,4 %, повысилась активность АсАТ на 50 %, ААТ на 9 %, коэффициент Де-Ритиса составил 1,2. При гистологическом исследовании материала от этих норок был установлен выраженный активный хеликобактер-ассоциированный гастрит, который сопровождался выраженным хроническим перипортальным, портальным и паренхиматозным гепатитом.

Таблица 2 - Биохимические показатели крови норок 1 и 2-ой группы (М + m) 

Показателиа	Контрольа	Опыт (группа 2)а
	а10 голов	23 головыа	53 головыа	24 головыа
Общий белок, г/л	49,68 + 0,89	49,00 + 0,75*	40,69 + 0,35***	36,86 + 0,24***
Глюкоза, ммоль/л	6,30 + 0,90	6,25 + 0,80*	5,80 + 0,75*	4,24 + 0,65**
Билирубин, мкмоль/л	26,20 + 1,39	26,5 + 1,7*	28,92 + 1,25***	40,71+ 1,12***
АсАТ, мккат/л	0,98 + 0,01	0,95 + 0,05*	0,69 + 0,02***	0,49 + 0,05***
ААТ, мккат/л	0,38 + 0,01	0,40+ 0,02*	0,41 + 0,03*	0,41 + 0,02*
Коэффициент Де-Ритиса	2,60+0,03	2,39+0,02***	1,68+0,01***	1,2+0,02***

Примечание: * р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001 по отношению к контрольной группе

Таким образом, в опытной группе животных при клиническом анализе крови наблюдались нормохромная анемия, лейкоцитоз, увеличение скорости оседания эритроцитов. При биохимическом анализе сыворотки крови были выявлены повышенная активность аланинаминотрансферазы, понижение активности аспартатаминотрансферазы, понижение коэффициента Де-Ритиса на 54 %, понижение количества общего белка на 25,8 %, глюкозы - на 32,7 % и повышение общего билирубина на 55,4 %, по сравнению с показателями контрольной группы.

 

Исследование местной уреазной активности слизистой желудка

При вскрытии трупов норок через 10 мин после убоя была проведена оценка местной уреазной активности слизистой оболочки желудка. Уреазный тест является предварительным, указывающим на наличие уреазопродуцирующих бактерий в желудке. У норок контрольной группы уреазный тест показал отрицательный результат. У норок 2-й группы 75 % дали положительный результат, 25 %  - сомнительный результат.

Патологоанатомическое проявление хеликобактериоза у норок

При патологоанатомическом вскрытии норок 2-й группы, больных хеликобактериозом,  установлено: поверхность слизистой оболочки желудка при вскрытии визуально выглядела извилистой (так называемый мозговой желудок) (рис. 1). Наблюдались признаки атрофии, проявлявшиеся тусклостью слизистой оболочки, сглаженностью ее складок, иногда их утолщенность. Наблюдавшиеся у них патологоанатомические изменения характеризуются как хронический гастрит: отек, умеренная гиперемия, разрыхление слизистой оболочки, эрозии в антральном, а иногда в фундальном отделе желудка.

В двенадцатиперстной кишке наблюдали признаки хронического катарального энтерита. Имело место уплотнение, складчатость слизистой оболочки и ее складок, серовато-бурого цвета. В кишечном содержимом много густой, мутноватой слизи.

Рис. 1. Макропрепарат: язва в пилорической части желудка, мозговой желудок

При патологоанатомическом вскрытии у 60 % павших щенков 3-й группы отмечали перитонит, что привело их к быстрой гибели. Перитонит возникал вследствие прободения (перфорации) язвы. При перитоните в брюшной полости содержалась дегтеобразная масса. На слизистой оболочке обнаруживались эрозии и язвы размером от очень маленьких до 5-15 мм в диаметре (рис. 2).

Рис. 2. Макропрепарат: язва в пилорической  части желудка 

У 22 норок 2-й группы в двенадцатиперстной кишке на границе с желудком наблюдали признаки хронического дуоденита и язвы. Слизистая оболочка утолщена, складчатая, уплотненная, окрашена в серо-бурый цвет. В кишечном содержимом и на поверхности слизистой оболочки много густой, вязкой слизи.

У норок с признаками хронического гастрита и хронической язвы желудка отмечались значительные патологоанатомические изменения в печени и поджелудочной железе.

Печень была увеличена в размере, дряблой консистенции, желто-коричневого цвета, дольчатость рисунка сглажена, края закруглены, серозная оболочка тусклая, на разрезе малокровна, на ноже остается обильный сальный налет. В 10 случаях у норок 3-й группы в печени патологоанатомическая картина соответствовала циррозу: она была уменьшена в размере, дольчатость рисунка резко выражена, серозная оболочка тусклая, поверхность не ровная, консистенция органа плотная, на разрезе малокровна, желчный пузырь увеличен в размере, содержимое густое однородное, слизистая оболочка без видимых изменений.

Поджелудочная железа у норок 2-й группы увеличена в размерах, бледноватого цвета с сероватым оттенком, поверхность гладкая, кровенаполнена. У 5-ти норок 2-й группы поджелудочная железа уменьшена в размерах, плотной консистенции, серовато-белой окраски. Поверхность разреза суховатая. Иногда под капсулой поджелудочной железы обнаруживали мелкие точечные кровоизлияния.

Гистологическая характеристика хронического хеликобактер-ассоциированного гастрита у норок

Слизистая оболочка желудка и двенадцатиперстной кишки норок контрольной группы не изменена. Однослойный призматический эпителий эпителиального покрова во всех отделах желудка сохранен, в собственном и мышечном слоях слизистой оболочки не выявляется признаков гиперемии, воспалительной инфильтрации. Железы отделов желудка, а также ворсинки и крипты двенадцатиперстной кишки без видимых изменений.

Исследование материала от норок 2-й группы.

Изменения в желудке норок можно разделить по степени активности гастрита: неактивный, малоактивный, умеренный и высокоактивный хронический гастрит.

Во 2-й группе у 5-ти норок в гистологических срезах желудка имела место слабая лимфоплазмоцитарная инфильтрация собственной пластинки при отсутствии гранулоцитов, что соответствует неактивному хроническому гастриту. У 18-ти норок в гистопрепаратах со слизистой оболочки желудка была установлена незначительная гранулоцитарная инфильтрация собственной пластинки. В поле зрения наблюдали немногочисленные рассеянные нейтрофильные лейкоциты (1-2 при увеличении х400). Нейтрофильные лейкоциты не были связаны с эпителием, а располагались среди лимфоцитов также немногочисленно, что соответствует слабовыраженному хроническому гастриту. У 55 норок 2-й группы установлена умеренная гранулоцитарная инфильтрация собственной пластинки. Кроме того, воспалительные изменения наблюдали в эпителиальном пласте: появление лимфоцитарной инфильтрации среди эпителиоцитов, что соответствует умеренно выраженному хроническому гастриту (рис. 3).

Рис. 3. Гистопрепарат. Хронический поверхностный гастрит. Гиперемия желез и инфильтрация слизистого слоя нейтрофильными лейкоцитами, лимфоидными и плазмотическими клетками. Окраска гематоксилином и  эозином, ок. х10, об. х40 

 

В 3-й группе наблюдали высокую активность хронического гастрита. Имело место увеличение количества межэпителиальных лейкоцитов, увеличение количества тучных клеток, увеличение эозинофильных лейкоцитов.

Под воздействием хеликобактера в желудке норок образуется несвойственная ему лимфоидная ткань, внедренная в слизистую оболочку. Согласно литературным данным, интенсивность лимфоидной инфильтрации собственной пластинки, выраженность воспалительной инфильтрации слизистой оболочки и наличие гиперплазированных лимфоидных фолликулов слизистой оболочки желудка четко коррелируют со степенью колонизации хеликобактеров, что может быть отнесено и к Helicobacter колонизации желудка норок.

Степень выраженности воспалительной мононуклеарной реакции также подразделяется на 3 группы. Воспалению слабой степени выраженности, умеренно выраженному воспалению, выраженной воспалительной инфильтрации соответствовали небольшое количество лимфоцитов и плазматических клеток (5-6 в поле зрения при увеличении х400), умеренная лимфоплазматическая инфильтрация собственной пластинки слизистой и плотный мононуклеарный инфильтрат в собственной пластинке и в эпителиальном пласте (рис. 4).

Рис. 4. Гистопрепарат. Продольный срез в рыхлой соединительной ткани основы слизистой оболочки. Воспалительный инфильтрат. Окраска гематоксилином и эозином, ок. х10, об. х40

Таким образом, определены гистологические признаки, характеризующие различные степени выраженности хронического воспаления слизистой оболочки желудка при хеликобактериозе.

Гистологическая характеристика состояния эпителия желудка при хроническом гастрите

У норок 2-й группы при хроническом гастрите в 40 случаях из 100 (40 %) была установлена поверхностная форма гастрита, а в 60 % случаев - атрофическая. Атрофическая форма гастрита наблюдается как в антральном, так и в фундальном отделах желудка. Признаки атрофии слизистой оболочки диагностируются при снижении плотности желез (менее 3-4 желез в срезе при увеличении х400) и утолщении мышечной пластинки. На гистопрепаратах преобладает эпителий призматического кишечного типа, а также уплощенного дистрофически измененного покровно-ямочного эпителия с признаками атрофических изменений в слизистой оболочке желудка. Отмечались также признаки дистрофии эпителиальных структур - уплощение формы клеток, вакуолизация цитоплазмы, десквамация эпителия (рис. 5).

Рис.  5. Гистопрепарат. Вакуольная дистрофия покровного  эпителия. Окраска гематоксилином  и эозином, ок. х10, об. х40

Кроме того, была выявлена полная и неполная кишечная метаплазия эпителия слизистой оболочки желудка у 60 норок (60 % случаев), которая носила очаговый и диффузный характер.

В некоторых случаях выявлялась гиперплазия эпителия слизистой оболочки желудка, иногда она сочеталась с неполной кишечной метаплазией или со слабой дисплазией эпителия.

При гиперплазии эпителия слизистой оболочки желудка выявляли удлинение желудочных ямок и желез, утолщение валиков, встречались группы пролиферирующих железистых клеток.

Диспластические изменения эпителия слизистой оболочки желудка проявлялись снижением высоты клеток в отдельных железах - они приобретали кубическую форму, а также признаками увеличения ядерно-цитоплазматического соотношения по сравнению со зрелыми эпителиоцитами.

У 20 норок, павших с клиническими признаками хеликобактериоза (3-я группа) и у 8-ми норок 2-й группы при гистологическом исследовании устанавливали эрозии. При этом выявляли некробиотические изменения эпителия (рис. 6). Наблюдался периваскулярный отек и гемостаз, кровоизлияния. На дне эрозии наложения фибрина, инфильтрация гранулоцитами. Чаще всего эрозии сочетались с воспалением в высокой или умеренной степени. У 30-ти норок 3-й группы были повреждены все слои, включая серозную оболочку, имелись  язвы, наблюдалась также обсемененность хеликобактериями. При наличии эрозий обычно имеет место кишечная метаплазия желудочного эпителия. Эпителий в области эрозии в состоянии дистрофии: слизистое перерождение, пролиферация и дисплазия (слабая).

Рис. 6. Гистопрепарат. Горизонтальный срез фундального отдела желудка. Очаг вакуольной дистрофии в слое собственных фундальных желез желудка. Лизис отдельных собственных фундальных желез желудка. Окраска гематоксилином и эозином, ок. х10, об. х40

Таким образом, мы наблюдали основные признаки хронического гастрита - воспаление, атрофия, метаплазия и дисплазия эпителия слизистой оболочки желудка.

Гистологическое определение обсемененности слизистой оболочки желудка хеликобактериями

С целью выявления хеликобактерий исследовали гистологические препараты и мазки-отпечатки. На препаратах, окрашенных метиленовым синим, хеликобактерии определялись в виде изогнутых палочек.

Степень обсемененности слизистой оболочки желудка хеликобактериями определялась как слабая (до 20 м.т. в поле зрения), умеренная (от 20 до 50 м.т. в поле зрения) и выраженная (более 50 м.т. в поле зрения). В материале от 2 группы, полученном в течение 10 мин после убоя норок, регистрировалась только слабая и умеренная обсемененность слизистой оболочки желудка хеликобактериями (табл. 3) (рис. 7). Наблюдалась корреляционная взаимосвязь выраженности мононуклеарной инфильтрации собственной пластинки слизистой с хеликобактерной обсемененностью и наличием эрозий.

Рис. 7. Мазок-отпечаток с СОЖ. Единичные хеликобактерии. Окраска по Романовскому-Гимза. Ок х 10, об. х 100.

Таблица 3 - Выраженность обсемененности хеликобактериями СОЖ в зависимости от степени активности гастрита 

Обсемененность	Неактивный гастрит	Малоактивный гастрит	Умеренный гастрит	Выраженный гастрит	Всего
-	0	0	0	0	0
+	5	15	25	4	49
++	0	3	30	18	51
+++	0	0	0	0	0
итого	5	18	55	22	100

Примечание: -  отсутствие хеликобактерий; + слабая обсемененность; ++ умеренная обсемененность; +++ выраженная обсемененность.

Гистологические изменения в печени норок при хроническом хеликобактер-ассоциированном гастрите

При гистологическом исследовании норок 1-ой контрольной группы патологические изменения не установлены.

При исследовании печени 2-й группы у 15-ти норок по триадам печени отмечали незначительный отек. Вокруг некоторых триад и поддольковых вен печени наблюдались умеренная воспалительная инфильтрация, отек и гиперемия, слабая очаговая жировая дистрофия гепатоцитов. У 6-ти норок 2-й группы имели место единичные очаги воспалительной инфильтрации лимфоцитами. Количество двухъядерных гепатоцитов было увеличено, синусоидальные пространства расширены. Балочное строение печеночных долек было сохранено. У 22 норок 2-й группы в триадах печени отмечалась выраженная застойная гиперемия и отек соединительной ткани (рис. 8). Междольковые и центральные вены резко расширены, прилежащие синусоиды кровенаполнены.

Вокруг некоторых печеночных вен имелась воспалительная инфильтрация лимфоцитами и гистиоцитами. По периферии долек наблюдалась мелкокапельная жировая дистрофия гепатоцитов. Ядра гепатоцитов оттеснены к синусоидальному полюсу.

У 28 норок 2-й группы застойная гиперемия вен по триадам печени, вокруг триад имелась небольшая воспалительная инфильтрация, центральные вены полнокровны, вокруг некоторых центральных вен также наблюдалась инфильтрация лимфоцитами (в инфильтратах выявлялись фибробласты и фиброциты, плазмоциты и нейтрофилы), увеличение количества двухъядерных клеток. Имела место жировая дистрофия значительного количества гепатоцитов, как крупнокапельная, так и мелкокапельная (рис. 9). Встречались мелкие очаги лимфоидной инфильтрации в паренхиме с разрушением гепатоцитов. У 22 норок 2-й и 15 норок 3-й группы  вокруг триад наблюдались резкий отек, воспалительная инфильтрация, склероз. Центральные вены печени расширены, кровенаполнены, вокруг них отек и лимфоидная инфильтрация, где выявляются нейтрофилы, плазмоциты, фибробласты. Междольковые вены также кровенаполнены, расширены, с периваскулярной лимфоидной инфильтрацией. Синусоиды вокруг долек расширены. Балочное строение печеночных долек нарушено. Имеет место воспалительная инфильтрация в паренхиме печени, в центре инфильтратов разрушенные гепатоциты.

Рис. 8.  Гистопрепарат печени.  Рис. 9. Гистопрепарат печени.

Выражена застойная гиперемия и отек Выраженная жировая дистрофия

в триаде. Воспалительная инфильтрация Окраска Суданом III, ок. х10, об. х40

вокруг вены. Жировая дистрофия.

Окраска гематоксилином и эозином,

ок. х10, об. х40

Гистологические изменения в поджелудочной железе норок при хроническом хеликобактер-ассоциированном гастрите

При гистологическом исследовании поджелудочной железы у норок 1-й контрольной группы патологических изменений не установлено.

В поджелудочной железе 6-ти норок 2-й группы отмечается гиперемия кровеносных сосудов, изменений в ацинарной ткани и островковом строении не выявлено. Изменения в поджелудочной железе норок сочетаются со слабой воспалительной инфильтрацией в печени и слабовыраженным хроническим воспалением слизистой оболочки желудка.

У 21 норки 2-й группы отмечаются кровенаполненность кровеносных сосудов и незначительные нарушения строения концевых отделов. Ядра некоторых клеток концевых отделов плохо прокрашиваются, в клетках выявляется накопление гранул в апикальной части гранулоцитов. Эти изменения в поджелудочной железе также сопровождают слабовыраженный хронический гастрит и начальная форма воспалительной инфильтрации в печени.

У 24 норок 2-й и 5-ти норок 3-й группы при наличии умеренного хронического воспаления слизистой оболочки желудка, значительной мелкокапельной и крупнокапельной жировой дистрофии и мелких очагов периваскулярной воспалительной инфильтрации по триадам печени в поджелудочной железе выявлены значительные изменения концевых отделов. Отмечаются дистрофические изменения ацинусов - вакуолизация цитоплазмы, разделение ацинусов на гранулоциты, отек стромы.

У 22 норок 2-й и у 17 норок 3-й группы при наличии выраженной крупнокапельной жировой и вакуольной дистрофии и воспалительной инфильтрации в печени и выраженного хронического воспаления слизистой оболочки желудка в поджелудочной железе отмечали резкое кровенаполнение сосудов. Встречались очаги воспалительной инфильтрации, кровоизлияния и участки некроза в ацинарной ткани. Имело место четкое разделение ацинусов на гранулоциты с усилением секреторной активности, в некоторых ацинарных клетках выявлялись вакуоли различной величины. Эндокринные узелки были уменьшены в размерах, ядра плохо прокрашены. В междольковых протоках просматривался слущеный эпителий и повышенное количество секрета.

У 4 норок 2-й и 15 норок 3-й группы резко выражены поражения печени и слизистой оболочки желудка и одновременно выявляются грубые нарушения строения (дискомплексация) концевых отделов, дистрофические изменения клеток - нарушение секреторной активности, мелкокапельная и крупнокапельная жировая дистрофия и отек стромы поджелудочной железы.

Патологоморфологические изменения в желудке, печени и поджелудочной железе взаимосвязаны между собой, развиваются одновременно и коррелируют по степени тяжести.

Дифференциальная диагностика хеликобактериоза норок

При постановке диагноза на хеликобактериоз была проведена дифференциальная диагностика, в целях исключения других инфекционных заболеваний норок. С признаками поражения ЖКТ протекают вирусный энтерит норок, кишечная форма чумы плотоядных, пастереллез, сальмонеллез, алеутская болезнь норок, кормовые отравления.

ВЫВОДЫ

1. В звероводческих хозяйствах ОАО Племзавод Пушкинский и ЗАО Малоярославецкое зверохозяйство установлен хеликобактериоз норок, ведущими клиническими признаками которого является рвота, диарея, отказ от корма.
2. Гематологически и биохимически хеликобактериоз у норок характеризуется выраженной нормохромной анемией, гемоглобинемией, гликемией, протеинемией, лейкоцитозом, увеличением активности ААТ, понижением активности АсАТ, повышением уровня билирубина.
3. Патоморфологическая картина при хеликобактериозе норок характеризуется хроническим гастритом, хроническим гепатитом и хроническим панкреатитом.
4. Хронический хеликобактерЦассоциированный гастрит у норок в зависимости от тяжести течения процесса проявляется как неактивный, малоактивный, умеренный, выраженный активный хронический гастрит и язвенный активный хронический гастродуоденит.
5. При хеликобактериозе в печени в зависимости от тяжести процесса имеет место различной степени выраженности хронический перипортальный, портальный и паренхиматозный гепатит.
6. В поджелудочной железе при хеликобактериозе, в зависимости от тяжести процесса, устанавливают воспалительные изменения различной степени - от кровенаполнения кровеносных сосудов до кровоизлияний в паренхиму железы, разрастания соединительной ткани, дискомплексации концевых отделов железы, нарушения секреторной функции железы и мелкокапельной жировой дистрофии.
7. Изменения в желудке, печени и поджелудочной железе при хеликобактериозе взаимосвязаны и четко коррелируют между собой по степени тяжести.
8. При хеликобактер-ассоциированном гастрите в слизистой желудка норок выявляются колонии Helicobacter. Степень обсемененности слизистой оболочки находится в тесной взаимосвязи со степенью активности хронического гастрита.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Клинические, патологоанатомические и гистологические исследования используются для постановки диагноза на хеликобактериоз у норок.
2. На основании результатов исследований разработаны Методические рекомендации по применению гистологического способа диагностики хеликобактериоза норок.
3. Результаты исследований используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных и практических занятий по курсам патологической анатомии в МГУПП.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Васина И.В. Хеликобактериоз - малоизученное опасное заболевание норок / И.В. Васина, О.И. Тихомирова // Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины: материалы конф. молодых ученых. - Покров, 2009. - С. 49-55.
2. Васина И.В.  Хеликобактериоз Ц актуальная проблема для норководства / И.В. Васина, О.И. Тихомирова // Ветеринарная патология. Ц 2010. Ц  №2. Ц  С. 51-53.
3. Васина И.В. Патологоморфологическая картина при хеликобактериозе норок / И.В. Васина, А.Н. Семикрасова, В.И. Геллер  // Повышение интенсивности и конкурентоспособности отраслей животноводства: международная научно-практич. Конф. - Минск, 2011. - С.195-197.
4. Васина И.В. Патологоморфологический способ диагностики хеликобактериоза норок / И.В. Васина // Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства: Всероссийская научно-практич. конф. 16-17 июня 2011 г. - г. Новочеркасск: ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии - С. 103-105.
5. Васина И.В. Патологоморфологический способ диагностики и дифференциальная диагностика хеликобактериоза норок/ И.В. Васина, А.Н. Семикрасова, В.И. Геллер // Достижения науки и техники АПК. Ц  2012. Ц №4. Ц С. 69-70.
6. Васина И.В. Патологоморфологический способ диагностики и дифференциальная диагностика хеликобактериоза норок / И.В. Васина, А.Н. Семикрасова, В.И. Геллер // Актуальные проблемы клеточного пушного звероводства и кролиководства России: Межд. научно-практич. конф., посвященная 80-летию ГНУ НИИПЗК. - М., 2012. - С. 216-221.

   Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по сельскому хозяйству