Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии  

На правах рукописи

ЯРОВАН НАТАЛЬЯ ИВАНОВНА

БИОХИМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ОЦЕНКИ, ДИАГНОСТИКИ И ПРОФИЛАКТИКИ ТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО СТРЕССА У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ  ЖИВОТНЫХ.

Специальность 03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Москва - 2008

Работа выполнена в ФГОУ ВПО Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.

Научный консультант:	доктор биологических наук, профессор
	Кармолиев Рафик Хакимович
Официальные оппоненты:	доктор ветеринарных наук, профессор Байматов  Валерий Нурмухаметович
	доктор биологических наук, профессор Кебец Нинель Мансуровна
	доктор биологических наук Талызина Татьяна Леонидовна
Ведущая организация:	ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных

Защита состоится л26 марта 2008 года на заседании диссертационного совета  Д 220.042.04 при ФГОУ  ВПО Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. (109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23; тел.: 377-93-83). В 12.30 ч.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии им.аК.И.аСкрябина.

Автореферат разослан л___________2008г.

Ученый секретарь

диссертационного совета В.Д. Фомина

1 Общая характеристика работы

Актуальность исследований. Наряду с укреплением кормовой базы и улучшением породных качеств скота, необходимо совершенствовать систему ветеринарно - профилактических, диагностических и лечебных мероприятий, направленных на оздоровление животных от болезней и получение продукции высокого санитарного качества.

Сопротивляемость организма животного влиянию неблагоприятных для здоровья факторов и вероятность возникновения болезни во многом определяются состоянием биохимических систем неспецифической резистентности, надежностью (запасом прочности) механизмов адаптации.

Изучение механизма неспецифической реакции организма на неблагоприятное воздействие среды имеет большое значение для профилактики и лечения ряда патологий.

Одним из приоритетных направлений ветеринарно-биологических исследований является создание или изыскание препаратов с выраженным антиоксидантным действием с целью их использования в составе комплексной терапии.

Широкие перспективы для практического использования в качестве препаратов адаптагенного действия представляют Хотынецкие природные цеолиты. Однако клиническое применение их затруднено в связи с недостаточно изученным воздействием их на организм, а так же отсутствие недорогих и эффективных способов оценки состояния антиоксидантной системы.

Предположить положительные изменения в биохимическом гомеостазе организма животного под влиянием цеолитов можно, учитывая считающийся доказанным многими учеными факт, что цеолиты при попадании в животный организм сорбируют не только тяжелые металлы, но и свободные радикалы, продукты распада и токсины из внутренней среды, тем самым беря на себя значительную часть функции антитоксической системы организма. Кроме того, при попадании внутрь цеолиты нормализуют соотношение микро- и макроэлементов и тем самым способны стимулировать процессы авторегуляции.

Вовлечение микроэлементов в компенсаторные и адаптационные процессы возможно разными путями. Одним из них является участие в работе ферментов, катализирующих компенсаторные и адаптационные процессы. Показана зависимость активности третьей части ферментов от микроэлементов.

Анализ и оценка таких взаимоотношений даны в работах Я.В. Пейве, А.О. Войнара, Г.А. Бабенко, М.Я. Школьника и др..

Исходя из того, что микроэлементы являются активаторами ряда ферментов, можно предположить изменение концентрации металлов в процессе адаптации.

Цели и задачи исследований. Произвести физиолого-биохимическую оценку состояния сельскохозяйственных животных при технологическом стрессе, получить экспериментальное обоснование способа оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма в условиях развития окислительного стресса и изыскать не дорогое, доступное и эффективное средство адаптогенного действия при свободно-радикальных патологиях. Обосновать и подтвердить возможность использования Хотынецких цеолитов в качестве средства антиоксидантного действия при состояниях, сопровождающихся усилением свободно-радикальных реакций.

Для реализации цели поставлены следующие задачи:

- получить экспериментальное обоснование определения церулоплазмина сыворотки крови и других биологических жидкостей (молока и мочи) для оценки функционального состояния антиоксидантной системы организма в условиях технологического стресса и эффективности его коррекции с помощью экзогенных антиоксидантов.

- исследовать динамику активности церулоплазмина при некоторых патологических состояниях, вызываемых технологическим стрессом (эндометрит, мастит, зимне-стойловый период у коров, отъем у поросят) и использовании антиоксидантов.

- экспериментально доказать возможность использования Хотынецких природных цеолитов в качестве адаптогенного средства у коров в зимне-стойловый период и у поросят после отъема, средства свободно-радикальной терапии в комплексном лечении мастита и эндометрита, а также в качестве комплексной минеральной добавки при микроэлементозах различного происхождения.

Научная новизна. Впервые на основе исследования активности церулоплазмина в разных биологических жидкостях (кровь, молоко) предложено использование этого показателя для диагностики отдельных заболеваний и состояний (способ диагностики мастита, патент № 2277246, способ диагностики беременности у коров, патент № 2306701).

Впервые изучена динамика активности церулоплазмина при технологическом стрессе у коров.

Впервые предложены методы диагностики заболеваний по показателям свободно-радикального окисления Способ диагностики мастита, патент № 2182461. Способ диагностики эндометрита, патент № 2306142.

Впервые предложено использование и проведена оценка эффективности использования Хотынецких природных цеолитов как антиоксидантного средства в комплексном лечении мастита и эндометрита.

Применение Хотынецких цеолитов в сочетании с традиционными способами лечения позволяет существенно повысить эффективность лечения за счет регуляции механизмов адаптации (Способ лечения мастита, патент №2292893. Способ лечения эндометрита, патент № 2306142).

Впервые научно обосновано применение Хотынецких природных цеолитов в качестве кормовой и лечебно-профилактической добавки в рационах поросят в послеотъемный период для нормализации свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты.

Практическая значимость. Предложен способ определения состояния оксидантно - антиоксидантной системы по активности церулоплазмина. Разработаны способы диагностики беременности у коров, субклинического эндометрита и способ диагностики мастита у коров. Разработаны способы повышения эффективности традиционных методов лечения при эндометрите и мастите с использованием Хотынецких природных цеолитов в качестве средства свободно-радикальной терапии. Предложен способ адаптации поросят после отъема Хотынецкими природными цеолитами в чистом виде и с добавлением прополиса.

Теоретический материал используется в учебном процессе на кафедре химии Орел ГАУ по курсу Биохимия сельскохозяйственных животных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Зависимость антиоксидантной защиты в организме клинически здоровых животных от времени года, факторов кормления и питьевого режима, а также при заболеваниях.

2. Повышение уровня свободно-радикального окисления и ослабление антиоксидантной защиты у коров при мастите и эндометрите.

3. Снижение антиоксидантного статуса у коров больных маститом и эндометритом зависит от стадии и форм заболевания.

4. Усиление мощности антиоксидантной защиты организма животных со свободно-радикальной патологией при воздействии на организм Хотынецких цеолитов Орловской области.

5. Состояние свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты - критерий в диагностике заболеваний и патологических состояний.

6. Активность церулоплазмина (феррооксидазы) - тест (показатель) уровня антиоксидантной защиты организма.

7. Заключение о возможности использования Хотынецких цеолитов в качестве адаптогенного средства в послеотъемный период у поросят и в зимне-стойловый период у коров.

8. Заключение об эффективности использования Хотынецких цеолитов в качестве терапевтического средства свободно-радикальной патологии у коров, больных маститом и эндометритом.

9. Доказательство возможности использования Хотынецких цеолитов в качестве комплексной минеральной добавки при гипомикроэлементозах различного происхождения.

10. Активность церулоплазмина - тест для выявления изменения антиоксидантного статуса животного организма в норме и при развитии патологического процесса.

11. Способ клинико-биохимической оценки атиоксидантного состояния  и окислительного стресса у коров в зимне-стойловый период, при эндометрите и мастите, а также у поросят после отъема.

Апробация работы. Результаты исследований и основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на всероссийской научно-практической конференции Достижения физиологии - животноводству XXI века (г. Орел, 1999г.), международной научно-практической конференции Использование научного потенциала вузов в решении проблем научного обеспечения АПК в России (г. Орел, 30-31 мая 2000г.); всероссийской научно-производственной конференции Гигиена содержания и кормления животных - основа сохранения здоровья и получения экологически чистой продукции (г. Орел, 2000г.); областной экологической конференции РИО+10: охрана окружающей среды, природопользование, образование (г. Великие Луки, 2002г.); международной научной экологической конференции Актуальные проблемы сохранения устойчивости живых систем (г. Белгород, 27-29 сентября 2004г.); всероссийской научной конференции с международным участием Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья (г. Белгород, 11-14 сентября 2004г.); международной научно-практической конференции Состояние и проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве (г. Чебоксары, 2004г.); третьем международном симпозиуме Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии (г. Санкт-Петербург, 11-13 мая 2005г.); всероссийской научно-практической конференции Генетика, молекулярная биология и биохимия сельскохозяйственных животных (г. Гагра, 26 сентября - 2 октября 2005г.); международной научной конференции профессорско - преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПБ ГАВМ (г. Санкт-Петербург, 2006г.); международной научно-практической интернет - конференции, посвященной 75-летию кафедры физиологии и 60-летию кафедры хирургии Ставропольского государственного аграрного университета (г. Ставрополь, 15.11.2005г.-30.01.2006г.); всероссийской научно-практической конференции Наука в современных условиях: от идеи до внедрения (г. Димитровград, 13 марта 2007г.); международной научно-производственной конференции Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения (г. Белгород, 14-18 мая 2007г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано  36 работы, в том числе учебное пособие и 8 статей в журналах, рекомендованных ВАК для публикаций при защите докторской диссертации, 7 патентов на изобретение.

Объем и структура диссертации.  Диссертация изложена на  267  листах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы, включающего 303 отечественных и 61 иностранных источников, приложения. Работа иллюстрирована 57 таблицами, 16 диаграммами, 6 рисунками.

2 Материалы и методы исследования

Работа проводилась с 1997 по 2007 год на базе учхоза Лавровский и опытного хозяйства Научприбор Орловской области. При проведении научно - производственных опытов использовали коров, телят и поросят.

Для проведения исследований использовали цеолиты Хотынецкого месторождения, приготовленные для добавки в корм животным, согласно техническим условиям, специалистами ООО Ладья 95. Цеолитовая мука готовая к употреблению, отвечает ТУ 9318-001-96 и имеет сертификат соответствия № РОСС RU ПРОВ, АОО 53, выданный органом по сертификации Агрохимэкологии Орловский и Временному наставлению по применению Хотынецких природных цеолитов в кормлении животных и птиц (в порядке широкой производственной апробации), утвержденному департаментом животноводства и племенного Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации.

Исследования образцов природных цеолитов на токсичность проводили в отделе токсикологии и биохимии Орловской областной ветеринарной лаборатории в соответствии с ГОСТом 13496.7-92.

абораторные исследования биологических жидкостей проводили в Орловской областной ветеринарной лаборатории, биохимической лаборатории больницы им. Семашко, биохимической лаборатории им.Боткина, Больницы МОПРА, Мценской контрольно-аналитической станции, на кафедре химии Орловского аграрного университета, кафедре биохимии Московской академии биотехнологии и вет. медицины им.К.И. Скрябина по ниже приведенным методикам.

Активность церулоплазмина определяли экспресс-методом по З.В.Тэну (1981).

Определение содержания диеновых конъюгатов в плазме крови проводили по методу Стальной (Стальная, Горешвили, 1977).

Определение содержания малонового диальдегида (МДА) определяли по взаимодействию с тиобарбитуровой кислотой с образованием окрашенного триметинового комплекса (Стальная, Горешвили, 1977).

Содержание белка в сыворотке крови определяли по методу Lowry О.Н. et al. (1951), основанному на образовании окрашенных продуктов реакции в щелочной среде фосфомолибдатно-вольфраматного реактива Фолина с циклическими аминокислотами при одновременном протекании биуретовой реакции на пептидные связи.

Определение микроэлементов в сыворотке крови проводили на атомно-абсорбционном спектрофотонметре С-302.

Определение содержания общих липидов в плазме крови осуществляли с помощью набора "Био-Ла-Тест" (Чехия) по методу Knight I et al.

Содержание витамина Е в сыворотке крови oпpeдeляли спектрофотометрическим методом.

Статистическую обработку данных проводили на компьютере FP Р -200 ММХ по методу Е.В. Монцевичуте - Эрингене (1964).

3 Результаты исследований

3.1 Клинико-биохимическая оценка адаптационных процессов при технологическом стрессе

Согласно современным представлениям, многие жизненно-важные метаболические и физиологические процессы, протекающие в организме, тесно связаны со свободно-радикальным окислением. В тоже время этот вид окисления является универсальной неспецифической основой патогенеза различных заболеваний и негативного воздействия факторов среды и технологического стресса у животных.

Изучение систем, контролирующих процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты, имеет существенное значение для оценки ранних обратимых изменений в организме животного.

Развитие окислительного стресса может сопровождаться изменением антиоксидантной активности не только сыворотки крови, но и других биологических жидкостей.

Нами был изучен ряд биологических показателей, характеризующих, состояние перекисного окисления и антиоксидантной защиты.

Проведенные исследования показали, что наиболее адекватными в оценке физиолого-биохимического состояния являются показатели уровня малонового диальдегида и активности антиоксидантного фермента церулоплазмина.

Один из подходов, позволяющих оценить состояние антиоксидантной системы организма заключается в определении активности церулоплазмина, который представляет собой полифенолоксидазу, обладающую антиоксидантной активностью.

Выбор в качестве объекта исследования не только крови, являющейся отражением состояния биохимического гомеостаза всего организма, но и молока и мочи продиктован тем, что синтез церулоплазмина происходит в различных тканях и органах, что может быть использовано для диагностики заболеваний, характеризующихся патологией конкретного органа.

Оценка адаптационных процессов при эндометрите.

В основе формирования различных патологических процессов, как правило, лежат механизмы реакций, развивающихся по общим закономерностям, независимым от этиологии и локализации патологии.

Одним из этих механизмов является свободно-радикальное окисление.

Для проведения эксперимента использовали 5 групп коров по 5 голов в каждой.

1 группа - гнойно-катаральный эндометрит,

2 группа- субклиническая форма эндометрита,

3 группа - здоровые животные (контрольные животные),

4 группа - животные с клинической формой мастита,

5 группа- с субклинической формой мастита.

У коров при мастите исследовали кровь и молоко на содержание малонового диальдегида как показателя уровня свободно-радикального окисления и церулоплазмина, как одного из антиоксидантов. При эндометрите анализировали кровь и мочу на содержание малонового диальдегида. В контрольной группе определяли МДА и церулоплазмин в крови, моче и молоке.

Результаты анализа крови и мочи у коров при эндометрите представлены в таблице №1.

Таблица №1 - Значение МДА в сыворотке крови и моче при эндометрите

Показатель	Группы коров
	I Гнойно-катаральный эндометрит		II Субклинический эндометрит			III Здоровые животные (контроль)
	в сыворотке крови	в моче		в сыворотке крови	в моче	в сыворотке крови	в моче
Малоновый диальдегид, мкМ/л	1,000,10	0,980,02		0,780,06	0,760,04	0,260,03	0,250,01

Р<0,01

Анализ полученных результатов говорит об усилении свободно-радикального окисления как в организме в целом, так и в очаге воспаления, что дало нам возможность на основе определения малонового диальдегида в моче производить диагностику эндометрита. (Патент № 2182461).

Показатели свободно-радикального (перекисного) окисления в крови и молоке у коров, больных маститом представлены в таблице №2.

Таблица №2 Ц Значение МДА в сыворотке крови и молоке у коров при мастите

Показатель	Группы животных
	IV Клиническая форма мастита		V Субклинический мастит		III Здоровые животные (контроль)
	в сыворотке крови	молоко	в сыворотке крови	молоко	в сыворотке крови	молоко
Малоновый диальдегид, мкМ/л	0,980,04	1,150,02	0,770,05	0,820,09	0,260,03	0,260,01

Р<0,01

Значения малонового диальдегида в молоке у коров с клинической формой мастита в 4,2 раза, а в субклинической в 3,15 раза превышали таковые у животных контрольной группы (здоровые животные).

Факт резкого усиления свободно-радикального окисления в молочной железе, подтверждаемый ростом показателей малонового диальдегида в молоке, можно также использовать в ранней диагностике мастита (Патент № 2277246).

Результаты анализа молока на активность антиоксиданта церулоплазмина (таблица №3) показали уменьшение его активности при субклинической форме в 1,3 раза, при клинической в 1,8 раза в сравнении со здоровыми животными, что позволяет использовать определение активности церулоплазмина в молоке в качестве нетрудоемкого, недорогого и не требующего больших затрат времени способа диагностики мастита у коров (Патент № 2279678).

Таблица №3 Ц Активность церулоплазмина в молоке у коров при мастите

Р<0,01

Показатель	Группы животных
	Клиническая форма мастита		Субклинический мастит		Здоровые животные (контроль)
	в сыворотке крови	молоко	в сыворотке крови	молоко	в сыворотке крови	молоко
Активность церулоплазмина, мкМ/л	1,100,02	1,100,10	1,500,01	1,400,09	2,200,09	2,000,11

Предлагаемый нами подход, основанный на анализе свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты в наиболее пораженных органах и тканях при изучаемых заболеваниях, является доступным и удобным и делает возможным использование определения малонового диальдегида и активности церулоплазмина в различных биологических жидкостях не только для ранней диагностики заболеваний репродуктивной системы, но и других патологий, сопровождающихся избыточной пероксидацией.

Оценка адаптационных процессов при гипертермии

При анализе крови у коров в летний пастбищный период, благоприятный по условиям кормления и содержания нами отмечены существенные изменения биохимических показателей крови в дни, отличающиеся резким повышением температуры (с 20 С до 34-36С).

При повышении температуры воздуха с 200 С до 340 С уже через сутки отмечено увеличение диеновых коньюгатов в 1,38 раза, кетодиенов в 1,81 раза, МДА - в 1,76 раза. При этом активность церулоплазмина упала в 1,84 раза и витаминов - антиокислителей Е, А и С в 2,02; 2,82 и 1,82 раза соответственно, что позволяет рассматривать гипертермию как температурный стресс.

Таблица №4 Ц Влияние гипертермии на уровень свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты

Показатель	Температурный режим
	Оптимальный (t=20-21)	Гипертермия (t=34-36)
Диеновые коньюгаты, ед.оп.пл./мг.	0,170,06	0,2450,18
Кетодиены, ед.оп.пл./мг липидов	0,060,01	0,1090,007
Малоновый диальдегид, мкМ/л	0,260,02	0,450,02
Активность церулоплазмина, мкМ/л	2,300,17	1,250,130
Витамин Е, мкМ/л	1,720,900	0,850,03
Витамин А, мкМ/л	2,400,030	0,850,04
Витамин С, мкМ/л	6,100,13	33,500,17

P 0,05

Адаптационные процессы при нитратной интоксикации

Повышенное содержание нитратов в кормах вызывает токсическое действие на животных и человека. Наше исследование было направлено на выявление зависимости биохимических показателей крови и, прежде всего перекисного окисления липидов,  являющегося  ключевым  звеном  в  развитии  стресс-реакции, от повышенного содержания нитратов в кормах.

Таблица №5 Ц Суммарное содержание нитритов и нитратов в крови телят

Показатель	Группы животных
	I Контрольная	II Основной рацион + нитрат	III Основной рацион + нитраты + антиоксидант	IV Основной рацион + антиоксидант
Сумма нитратов и нитритов, ммоль/л	0,140,03	0,350,04	0,240,01	0,210,01

P 0,05

Исследования проводились на базе учхоза "Лавровский" Орловской области. Было сформировано четыре группы (по пять голов в каждой) телят-аналогов по живой массе и возрасту. Одна группа являлась контрольной, во второй телята дополнительно получали нитраты, в третьей - нитраты плюс антиоксидант, в четвертой - только антиоксидант. Все животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления. В течение двух недель ежедневно животные второй группы получали добавочное количество нитратов (из расчета 5 мг на 100 кг живой массы) в виде нитрата натрия. Кровь на анализ была взята до опыта и через 14 суток после начала опыта. B крови был определен  уровень нитратов  и  нитритов.

Для изучения состояния нитрооксидергических процессов использовали метод Н.Л. Емченко с соавторами.

Суммарное содержание метаболитов оксида азота (нитратов и нитритов) у телят представлено в таблице №5.

В группе телят, получавших нитрат натрия, содержание нитрат - ионов увеличилось в 2,5 раза; в группе получавшей нитраты и антиоксидант - в 1,7 раза. В группе телят получавших антиоксидант содержание нитратов было заметно выше, чем у контрольных. Параллельно определяли биохимические показатели, характеризующие состояние перекисного окисления (малоновый диальдегид, холестерин, общие липиды).

Уровень свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты у телят представлен в таблице №6.

Таблица №6 Ц Показатели малонового диальдегида и активность церулоплазмина при нитратной интоксикации у телят

Показатели	Группы животных
	I Контрольная	II Основной рацион + нитрат	III Основной рацион +нитраты + антиоксидант	IV Основной рацион + антиоксидант
Малоновый диальдегид, мкМ/л	0,270,01	0,780,04	0,640,02	0,330,01
Церулоплазмин, мкМ/л	2,300,03	1,200,02	1,400,02	1,850,02

P 0,05

В группе животных, получавших нитраты, уровень малонового диальдегида увеличился в 3 раза, из чего можно сделать вывод, что нитраты являются прооксидантами, увеличивающими уровень перекисного окисления липидов. Следовательно, нитратная интоксикация вызывает у животных состояние стресса.

Нами отмечено также повышение малонового диальдегида и в группе телят, получавших нитраты и антиоксиданты (амбиол). Повышение уровня перекисного окисления показывает на неоднозначное действие антиоксидантов на организм. Очевидно, несмотря на рост свободнорадикального окисления липидов, характерного для стрессового состояния любой этиологии, антиоксиданты нужно подбирать, учитывая характер стресс-факторв и механизм действия конкретного антиоксиданта.

Оценка адаптационных процессов при беременности.

Организм стельной коровы через нейроэндокринные регуляторные механизмы отвечает на воздействия внешних и внутренних раздражителей общими неспецифическими реакциями. Известно, что беременность характеризуется высоким уровнем свободно-радикального окисления. При этом у стельных коров отмечается параллельный рост активности антиоксидантной системы, что отличает беременность от возможных стрессовых состояний, при которых с ростом свободно-радикального окисления наблюдается истощение "мощности" антиоксидантной адаптации.

В нашем эксперименте у стельных коров имело место повышение уровня -токоферола и церулоплазмина на фоне умеренно выраженной активации ПОЛ, о чем свидетельствует увеличение в сыворотке крови малонового диальдегида (МДА).

Таблица №7 Ц Показатели свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты у стельных коров (в пастбищный период)

Показатели	Небеременные животные	Беременные (стельность 24 сут)	Беременные (стельность 48 сут)
Малоновый диальдегид, мкМ/л	0,480,06	0,910,032	1,150,25
Диеновые коньюгаты, ед.оп.пл./мг	0,170,001	0,180,03	0,2340,02
Кетодиены, ед.оп.пл./мг	0,060,001	0,080,001	0,0880,001
- токоферол, ед.оп.пл./мг	9,000,25	11,970,13	13,950,17
Активность церулоплазмина, мкМ/л	1,400,11	1,960,12	1,610,03

P 0,05

Анализ таблицы показывает увеличение МДА на 24 сутки в 2,19 раза, на 48 сутки в 2,8 раза и параллельное увеличение активности церулоплазмина в 2,04 и 2,4 раза и - токоферол в 1,97 раза и 2,69 раза соответственно.

Учитывая обнаруженные нами изменения, в генезе нормально протекающей беременности у коров мы пришли к выводу о целесообразности диагностики беременности у коров по показателям активности церулоплазмина (Патент № 2306701).

3.2 Механизм влияния цеолитов на процессы адаптации у поросят

Отъём, являющийся обязательным элементом современной технологии производства свинины, оказывает неблагоприятное влияние на организм поросят и зачастую ведёт к технологическому стрессу.

Мы решили использовать природные цеолиты, обладающие сорбционными, ионообменными и каталитическими свойствами для регуляции процесса адаптации и профилактики неблагоприятных последствий отъёмного стресса у поросят.

Эксперимент проводился в подсобном хозяйстве завода Научприбор Орловской области на одном из комплексов по производству свинины. Анализировался биохимический состав крови следующих трёх групп поросят после отъёма:

группа 1 (контрольная) - основной рацион хозяйства;

группа 2 (опытная) - основной рацион + 3 %-ный цеолит ежедневно;

группа 3 (опытная) - основной рацион + 3 %-ный цеолит +прополис (0,5% вводно-спиртовая настойка прополиса в дозе 4 мл. на 1 кг. массы тела в течение первого месяца).

У всех групп поросят были одинаковые условия ухода кормления и содержания.

При постановке на опыт, а затем через каждые 10 суток в течение месяца определяли уровень перекисного окисления липидов по количеству малонового диальдегида, содержанию холестерина, общих липидов и -липопротеидов, а также уровень церулоплазмина как одного из антиоксидантов. Параллельно определяли содержание мочевины и активности ферментов трансфераз (аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы), содержание микро- и макроэлементов.

3.2.1  Коррекция цеолитами процессов пероксидации и антиоксидантной защиты в организме поросят

Данные по изучению свободно-радикального окисления представлены в таблице 8.

Таблица №8 Ц Динамика показателей свободно-радикального окисления в сыворотке крови поросят (по уровню МДА) (в мкМ/л)

Группа животных и использованные препараты	Фон			Сроки исследований в сутках от начала эксперимента
	До отъема	После отъема на 3и сут	10		20		30		60
1-контроль	0,280,01	0,800,01		0,760,01		0,720,01		0,600,01		0,500,01
2-цеолиты	0,290,04	0,790,04		0,680,01		0,510,01		0,400,01		0,350,01
3-цеолиты + прополис	0,290,04	0,800,01		0,640,13		0,420,01		0,320,02		0,300,01

P 0,05

Фоновый показатель малонового диальдегида до отъема равнялся 0,2800,025 мкМ/л. Максимальный показатель МДА зарегистрирован сразу после отъема (3-и сутки - 8,00,13 мкМ/л, в 2,8 раза). К концу опыта его уровень все еще оставался высоким в контрольной группе.

В сыворотке крови животных 2-й группы регистрировали понижение уровня свободно-радикального окисления (по показателям МДА) уже на 10-е сутки. Значения его в крови поросят 3-й группы превышали фоновые показатели на 10-е сутки только в 2,3 раза, на 30-е сутки почти выровнялись с фоновыми показателями.

Динамика антиоксиданта церулоплазмина в сыворотке крови поросят

Данные по изучению активности церулоплазмина представлены в таблице. До отъема показатель активности церулоплазмина равнялся 2,240,17 мкМ/л. На третьи сутки после отъема значения у всех 3-х групп равнялись в пределах от 1,530,13 мкМ/л до 1,540,25 мкМ/л, что было значительно ниже фоновых показателей. Уже на третьи сутки в 2 и 3 группах наблюдается некоторые увеличения активности церулоплазмина. На 10-е сут активность церулоплазмина  в 2-ой группе равнялось 1,640,02, в 3-ей 1,690,17 мкМ/л  . В обеих группах (2 и 3) прослеживается тенденция к увеличению активности церулоплазмина, но в 3-й группе в большей степени. В конце опыта (на 30-е сутки) показатель активности церулоплазмина достигал фонового значения и в 3-й группе даже превысил его.

Таблица №9 Ц Динамика активности церуплазмина в сыворотке крови

поросят, (в мкМ/л)

Группа животных и использованные препараты	Фон		Сроки исследований в сут от начала эксперимента
	До отъема	После отъема на 3и сут	10	20	30
1-контроль	2,250,13	1,530,13	1,590,11	1,700,03	1,70,04
2-цеолиты	2,220,17	1,540,25	1,640,2	1,900,04	2,00,03
3-цеолиты +прополис	2,230,24	1,540,28	1,690,12	2,00,017	2,250,03

P 0,05

3.2.2 Воздействие цеолитами на физиолого-биохимические показатели

Прежде всего после отъема мы исследовали гематологические показатели, которые отличаются чрезвычайной вариабельностью. (А.П. Ястребов с соавт., 1988).

Анализ получаемых результатов показал, что на 3-и сутки после отъема отмечается у поросят стрессовое состояние, что подтверждается следующими изменениями в лейкограмме крови: содержание сегментоядерных нейтрофилов у поросят после отъема увеличилось в 2 раза (Р<0,001), палочкоядерных нейтрофилов достоверно возросло в 1,9 раза. Активация нейтрофилов в крови говорит о наличии окислительного стресса у поросят после отъема.

В послеотъемный период отмечено также достоверное уменьшение лимфоцитов в крови, что характерно для развития начальных реакций проявления стресса.

3.2. 3 Механизм влияния Хотынецких цеолитов на минеральный обмен

Таблица №10 Ц Влияние Хотынецких цеолитов на показатели минерального обмена у поросят после отъема

Показатели	До отъема	После отъема
		На 3и сутки			На 10ые сутки			На 20ые сутки
		1	2	3	1	2	3	1	2	3
Кальций мМ/л	2,610,15	2,400,40	2,410,17	2,390,24	2,200,09	2,510,35	2,550,29	2,200,34	2,590,21	2,730,33
Фосфор мМ/л	2,700,15	2,200,13	2,250,09	2,230,17	2,000,15	2,350,09	2,500,11	2,150,18	2,570,13	2,680,14
Кобальт мкМ/л	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	0,10 0,03	0,10 0,02	не обнаружен	0,10 0,02	0,10 0,03
Цинк мкМ/л	42,40 0,45	37,001,40	38,00 1,25	38,001,24	35,000,28	39,000,28	40,000,35	35,000,17	40,000,25	42,800,28
Медь, мкМ/л	90,9	8,11,1	8,21,5	8,11,25	8,30,8	9,641,34	9,651,6	9,20,8	10,41,7	10,451,3
Никель мкМ/л	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	0,080,18	0,080,14	не обнаружен	0,080,29	0,080,35
Хром мкМ/л	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен

P 0,05

Анализ влияния Хотынецких цеолитов на минеральный обмен у поросят после отъема показал, что после отъема содержание кальция и фосфора снижается на 7,6% и 16,6% соответственно, содержание цинка падает с 42,4 ммоль/л до 37,60,92 ммоль/л. При добавлении Хотынецких цеолитов в корм уже на 10 сутки наблюдается увеличение Са на 4,5%, фосфора на 6,6%, цинка на 2,6%, по сравнению с послеотъемным периодом. В группе поросят, получавших цеолиты с прополисом содержание изучаемых минеральных элементов увеличивается несколько быстрее. На 20-е сутки эксперимента во 2-й группе содержание кальция превосходило значение послеотъемного периода на 7,9%, оставаясь при этом несколько ниже значений доотъемного периода. В третьей группе содержание кальция увеличилось на 13% в сравнении с послеотъемным периодом и даже на 4,5% превысило значения в период перед отъемом.

Количество фосфора в крови после отъема уменьшилось на 16%. На 10Це сутки после отъема отмечено дальнейшее уменьшение фосфора в контрольной группе, тогда как во 2-й и 3-й группах на 10-е сутки отмечено увеличение на 4,4% и на 1,1% соответственно, по сравнению с 3-и сутками после отъема, а к 20-м суткам значения почти достигли значений перед отъемом (во 2-й группе -2,570,18 мМ/л, в 3-й группе 2,680,14 мМ/л).

Значительное увеличение минеральных элементов в третьей группе в сравнении со 2-й группой можно объяснить более эффективным усвоением минеральных элементов из цеолитов, что может заключаться в проявлении действия биологически активных соединений.

3.3 Механизм влияния Хотынецких цеолитов на процессы адаптации у коров

3.3.1 Характеристика адаптации коров в зимнее-стойловый период

В результате эксперимента по определению уровня свободно-радикального окисления, антиоксидантной защиты и минерального обмена у коров в течение года нами были обнаружены изменения свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты в зимне-стойловый период на фоне низкого уровня кальция, фосфора, меди, цинка, кобальта в группах, находящихся на рационах, сложившихся в Орловской области и отличающихся уровнем минерального питания ниже существующих норм.

Эксперимент проводили на базе учхоза Лавровский Орловской области. Была создана группа животных из 15 голов. Один раз в месяц брали кровь, в которой определяли уровень свободно-радикального окисления (по показателям МДА), антиоксидантной защиты по активности экстрацеллюлярного антиоксиданта церулоплазмина, показателей минерального обмена и ряда других биохимических показателей.

Анализ полученных результатов показал наибольшее отклонение от референтных величин в крови коров в зимне-стойловый период и наименьшее в летний пастбищный, что позволило нам использовать его в качестве контроля.

Зимний стойловый период является неблагоприятным по условиям содержания (гиподинамия, гипоксия и алиментарный стресс).

Результаты показали низкий уровень микроэлементов в этот период, что говорит о возможности развития алиментарного стресса.

Отмечено уменьшение кальция в сыворотке крови на 0,19 мМ/л у сухостойных и 0,30 мМ/л у коров после отела; фосфора на 0,50 мМ/л и 0,20 мМ/л соответственно.

Кобальт  в зимне-стойловый период не обнаружен в обеих группах, тогда как в летний пастбищный период кобальт присутствовал в количестве 0,1 мМ/л. Уменьшение цинка в зимне-стойловый период равнялось 9,1 у сухостойных - 9,2 мМ/л. Количество меди падало с 12,00,35 в летний пастбищный период до 10,10,03 в зимне-стойловый у сухостойных коров, и коров после отела с 11 до 10 мМ/л.

Никель и хром не были обнаружены в обоих исследованных периодах и группе сухостойных коров и у коров после отела.

Таблица №11 Ц Основные показатели перекисного окисления липидов в зимний стойловый и летний пастбищный период у сухостойных коров

Показатели	Период года
	Зимне-стойловый	етний пастбищный
Конъюгированные диены, ед.оп.пл./мг липидов	2,380,007	0,170,05
Кетодиены, ед.оп.пл./мг липидов	0,090,07	0,060,04
Малоновый диальдегид, мкМ/л	0,480,02	0,260,01
Общие липиды, г/л	2,920,17	2,280,04

P 0,05

Таблица №12. Сравнительное содержание некоторых антиоксидантов у коров в зимний стойловый и летний пастбищный период

Показатели	Сухостойные коровы		Коровы после отела
	етний Пастбищный	Зимне-стойловый	етний пастбищный	Зимне-стойловый
Витамин Е, мкМ/л	17,300,40	9,000,25	17,200,30	8,900,24
Витамин А, мкМ/л	2,500,03	0,800,04	2,400,03	0,070,03
Витамин С, мкМ/л	62,000,30	35,000,42	60,000,40	34,000,38
Церулоплазмин мкМ/л	2,300,15	1,400,13	2,200,13	1,400,15

P 0,05

Из таблиц  11 и 12 видно резкое усиление процессов пероксидации в зимне-стойловый период в сравнении с летним пастбищным. Коньюгированные диены выросли на 35%, кетодиены на 50%, МДА на 84% (в 1,84 раза); общие липиды на 28%.

В то же время отмечено угнетение антиоксидантной системы, что проявляется в снижение активности антиоксиданта церулоплазмина в 1,64 раза у сухостойных и 1,57 раза у коров после отела; витамин А в 3,1 раза и 3,4 раза;  витамин Е в 1,9 раза и 1,93 раза; витамин С в 1,77 раза и 1,76 раза соответственно.

3.3.2 Коррекция адаптационных процессов в организме  Хотынецкими цеолитами

Ниже приводим таблицы, показывающие влияние Хотынецких цеолитов на биохимические показатели коров в зимне-стойловый период.

Таблица №13 Ц Некоторые показатели белкового, липидного и углеводного обменов в зимне-стойловый период с использованием в кормлении Хотынецких цеолитов

Показатели	Период года
	Зимне-стойловый (кормление без использования Хотынецких цеолитов)		Зимне-стойловый (кормление с использования Хотынецких цеолитов)		етний пастбищный (контроль)
	До начала опыта	Через 2 недели	До начала опыта	Через 2 недели после начала кормления
Общий белок, г/л	641,40	64,501,30	64,201,30	74,000,50	81,000,30
Альбумины,%	34,500,30	34,700,06	34,600,13	34,300,30	35,000,20
-глобулины,%	14,500,15	14,600,40	14,500,11	12,500,14	15,000,15
-глобулины,%	13,000,11	13,100,11	13,100,5	14,100,11	12,000,11
-глобулины, %	38,000,15	38,000,13	38,000,07	39,100,12	38,000,41
Общие липиды, г/л	5,600,15	5,600,13	5,500,11	4,200,11	4,300,17
Холестерин мкМ/л	6,500,15	6,600,14	6,500,17	5,000,12	5,100,13
Мочевина, мМ/л	6,100,17	6,000,13	6,200,16	4,600,13	4,200,13
ПВК, ммоль/л	350,0017	380,0023	352,0016	150,0014	84,305,90
Фосфолипиды ммоль/л	10,100,80	10,202,3	10,20,93	8,300,90	7,800,90
Триглицериды ммоль/л	2,500,13	2,500,11	2,60,14	2,000,22	1,900,10

P 0,05

Таблица №14 Ц Морфологические показатели крови у коров в зимне-стойловый период при кормлении их Хотынецкими цеолитами и без них

Показатели	Период года
	Зимне-стойловый (О.Р.)		Зимне-стойловый (О.Р. + Хотынецкие цеолиты)		етний пастбищный (контроль)
	До начала опыта	Через 1 месяц	До начала опыта	Через 1 месяц
ейкоциты, 109/л	11,000,42	11,10,43	11,100,42	9,000,10	8,040,12
Базофилы %	0,780,01	0,800,13	0,780,13	1,200,04	1,420,03
Эозинофилы %	3,400,11	3,300,14	3,400,15	5,600,04	4,500,11
Юные нейтрофилы, %	0,700,12	0,700,11	0,700,12	0,300,11	-
Палочкоядерные нейтрофилы,%	7,200,07	7,10,08	7,100,06	6,30,15	5,300,17
Сегментоядерные нейтрофилы,%	23,901,70	23,80,90	23,91,10	211,45	20,301,63
имфоциты,%	56,202,00	56,001,80	56,100,9	591,8	62,702,00
Моноциты,%	2,300,01	2,300,13	2,200,12	3,70,34	4,000,02

P 0,05

В группе коров, получавших Хотынецкие цеолиты в виде кормовой добавки из расчёта 5% от сухой массы, уже через 2 недели после начала включения их в рацион отмечена нормализация минерального обмена и уровня свободно-радикального окисления. Показатели малонового диальдегида, характеризующего уровень свободно-радикального окисления, резко снизились и приблизились к уровню летних месяцев, благоприятных по кормлению и содержанию.

Накопление свободных радикалов инактивирует многие ферменты, молекулы которых содержат ионы металлов.

Таблица №15 Ц Влияние Хотынецких цеолитов на активность ферментов

Показатели	Период года
	Зимне-стойловый (О.Р.)		Зимне-стойловый (О.Р. + Хотынецкие цеолиты)		етний пастбищный (контроль)
	До начала опыта	Через 2 недели	До начала опыта	Через 2 недели
1	2	3	4	5	6
Щелочная фосфатаза, мМ/ч.л	0,600,12	1,200,02	1,300,02	0,800,13	1,200,03
АЛТ, мМ/ч.л	0,500,05	0,290,11	0,280,11	0,420,11	0,280,12

Продолжение таблицы 15

1	2	3	4	5	6
АСТ, нМ/с.л	0,650,01	0,380,15	0,380,04	0,500,13	0,370,04
Сукцинаде-гидрогеназа, нМ/мин.мг	12,800,90	12,700,85	12,800,90	8,250,38	7,680,85
-амилаза, мг/с.л	823,0017,00	825,0016,50	824,0016,00	613,0014,80	535,0012,50
актатде-гидрогеназа, нМ/с.л	912,0015,00	918,0017,50	935,0018,00	704,0017,8	650,0017,25

P 0,05

Таблица №16 Ц Сравнительная характеристика показателей минерального обмена в зимне-стойловый период

Показатели	Период года
	Зимне-стойловый (О.Р.)		Зимне-стойловый (О.Р. + Хотынецкие цеолиты)		етний пастбищный (контроль)
	До начала опыта	Через 1 месяц	До начала опыта	Через 1 месяц
Кальций, ммМ/л	2,350,03	2,260,40	2,340,30	2,730,04	2,560,03
Фосфор, ммМ/л	2,200,02	2,300,12	2,250,01	2,590,04	2,700,30
Кобальт, мМ/л	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	0,100,02	0,100,01
Цинк, мкМ/л	35,400,5	35,500,13	35,400,11	40,300,12	44,500,34
Медь, мкМ/л	10,100,03	10,200,04	10,00,03	11,40,03	12,00,35
Никель, мМ/л	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	0,070,13	не обнаружен
Хром, мкМ/л	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен
Стронций, мкМ/л	10,001,10	10,801,2	10,501,10	4,000,90	9,801,13
Na, мМ/л	128,400,13	128,500,13	128,300,17	138,500,17	141,002,50
K, мМ/л	3,100,05	3,100,04	3,000,05	3,900,03	4,200,03

P 0,05

Рисунок №1 Ц Основные показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в зимний стойловый период в группах коров с использованием в кормлении Хотынецких цеолитов и без их использования

3.3.3 Воздействие цеолитами на процессы адаптации при эндометрите

3.3.3.1 Перекисное окисление и антиоксидантная защита при эндометрите

Таблица №17 Ц Показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты при эндометрите

Показатель	Группы коров
	I Субклинический эндометрит	II Гнойно-катаральный эндометрит	III Контроль (здоровые коровы)
Конъюгированные диены, ед.оп.пл./мг липидов	0,230,01	0,350,01	0,170,07
Кетодиены, ед.оп.пл./мг липидов	0,080,01	0,120,01	0,050,006
Малоновый диальдегид, мкМ/л	0,780,01	1,000,03	0,260,01
Общие липиды, г/л	3,100,15	3,500,09	2,290,05
Церулоплазмин, мкМ\л	1,400,01	1,100,02	2,200,16
Витамин Е, мкМ\л	9,900,20	7,900,09	17,300,10
Витамин А, мкМ\л	0,920,11	0,830,01	2,500,30
Витамин С, мкМ\л	37,500,10	29,800,14	63,000,13

P 0,05

Нами отмечены также нарушения белкового,  липидного, углеводного и минерального обменов.

Наблюдается увеличение активности ряда ферментов.

3.3.3.2 Коррекция физиолого-биохимических процессов при эндометрите

Некоторые исследованные нами показатели физиолого-биохимического гомеостаза у пролеченных полисаном животных несколько коррегируются в сторону показателей здоровых, но в целом свидетельствует о сохранении расстройств в иммунной и антиоксидантной системе и требует обязательного применения средств адаптогенного действия.

В качестве такого средства мы решили использовать Хотынецкие природные цеолиты.

1ая-группа здоровые (контроль).

2ая-группа больные (гнойно-катаральный эндометрит) без лечения.

3яя-группа больные (гнойно-катаральный эндометрит) лечили полисаном.

4ая-группа больные (гнойно-катаральный эндометрит) лечили полисаном + Хотынецкие цеолиты.

Комплексное лечение с использованием Хотынецких цеолитов начинали на 7 сутки послеродового периода. Таким образом, 7ой день лечения соответствует 14 суткам послеродового периода.

Динамика физиолого-биологических показателей в крови у коров при лечении их полисаном Е и Хотынецкими природными цеолитами в сочетании с полисаном Е представлена в таблицах.

Таблица №18 Ц Влияние Хотынецких цеолитов на физиолого-биологические показатели крови при эндометрите

Показатели	Группы коров
	Эндометрит (лечение полисаном Е)		Эндометрит (лечение полисаном Е + Хотынецкие цеолиты)		Контроль (здоровые животные)
	До ечения	После ечения	До ечения	После лечения
ейкоциты, 109л	11,200,34	10,800,23	11,300,15	9,000,11	8,040,12
Базофилы, %	0,780,01	0,870,22	0,770,13	0,880,13	1,420,03
Эозинофилы, %	3,800,11	4,000,13	3,600,11	5,600,11	4,500,11
Юные нейтрофилы, %	0,700,01	0,500,01	0,700,02	0,200,01	0,200,02
Палочкоядерные, %	7,500,03	6,900,05	7,500,02	5,800,01	5,300,17
Сегментоядерные, %	24,000,9	22,300,13	24,100,80	21,100,07	20,301,63
имфоциты, %	56,300,11	58,000,17	56,300,13	61,500,13	62,702,00
Моноциты, %	2,300,01	2,800,18	2,200,02	3,900,17	4,000,02
Общий белок	63,001,30	70,300,17	62,900,9	79,000,15	81,000,30
Фракции белка в %
-глобулины,%	14,300,06	14,500,07	14,300,07	14,900,07	15,000,15
-глобулины,%	13,000,05	13,200,03	13,000,02	13,300,02	12,000,11
-глобулины,%	39,000,13	39,000,13	39,000,17	38,500,03	38,000,41
Альбумины,%	34,300,04	34,900,06	34,200,09	34,900,001	35,000,20

P 0,05

Таблица №19 Ц Основные показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты при лечении коров, больных эндометритом полисаном Е и Хотынецкими цеолитами в сочетании с полисаном Е

Показатели	Группы коров
	Эндометрит (лечение полисаном Е)		Эндометрит (лечение полисаном Е + Хотынецкие цеолиты)		Контроль (здоровые животные)
	До ечения	После лечения	До ечения	После лечения
Конъюгированные диены, ед.оп.пл./мг липидов	0,220,12	0,210,01	0,220,01	0,170,05	0,170,07
Кетодиены, ед.оп.пл./мг липидов	0,090,006	0,080,007	0,090,006	0,060,004	0,050,006
Малоновый диальдегид, мкМ/л	0,760,05	0,670,051	0,750,052	0,370,03	0,260,018
Общие липиды, г/л	3,000,17	2,900,15	2,900,17	2,350,015	0,290,05
Церулоплазмин, мкМ/л	1,500,01	1,70,02	1,500,017	2,100,01	2,200,16
Витамин Е, мкМ/л	9,700,12	11,90,03	9,850,13	16,900,17	17,300,40
Витамин А, мкМ/л	1,100,13	1,750,12	0,950,12	2,100,17	2,500,30
Витамин С, мкМ/л	39,500,14	49,500,13	39,000,12	60,500,90

P 0,05

Таблица №20 Ц Показатели минерального обмена при использовании

Хотынецких цеолитов в лечении эндометрита

Показатель	Группы коров
	I Субклинический эндометрит		II Гнойно-катаральный эндометрит		III Контроль (здоровые животные)
	До ечения	После лечения	До ечения	После лечения
1	2	3	4	5	6
Кальций, мкМ/л	2,100,20	2,520,13	2,000,3	2,500,13	2,550,03
Фосфор, мкМ/л	2,200,02	2,630,25	2,200,03	2,600,09	2,700,40

Продолжение таблицы 14

1	2	3	4	5	6
Кобальт, мкМ/л	0,050,001	0,10,02	не обнаружен	0,100,01	0,100,02
Цинк, мкМ/л	34,000,04	42,10,93	34,200,13	40,500,30	43,600,33
Медь, мкМ/л	9,900,18	11,90,8	9,800,17	11,900,02	12,000,35
Никель, мкМ/л	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен
Хром, мкМ/л	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен	не обнаружен
Стронций, мкМ/л	9,700,12	4,70,45	9,900,13	4,700,30	9,801,14
Na, мкМ/л	131,000,13	1402,5	130,000,14	138,000,07	141,002,50
K, мкМ/л	3,200,04	4,30,04	3,200,3	3,900,06	4,200,03

P 0,05

Таблица №21 Ц Влияние Хотынецких цеолитов на активность ферментов у коров, больных эндометритом

Показатели	Группы коров
	Эндометрит (лечение полисаном Е)		Эндометрит (лечение полисаном Е+ Хотынецкие цеолиты)		Контроль (здоровые животные)
	До ечения	После ечения	До ечения	После ечения
Активность щелочной фосфатазы мМ/ч.л	1,200,01	0,900,011	1,200,05	0,780,012	1,200,11
Активность АЛТ, мМ/ч.л	0,640,01	0,400,05	0,630,08	0,290,01	0,550,05
Активность АСТ,нМ/с.л	0,630,01	0,540,03	0,680,01	0,360,03	0,630,15

P 0,05

Во время лечения и после клинического выздоровления уровень общего белка в крови существенно увеличивается. Такие изменения в обмене белка характерны для мобилизации защитных сил организма.

Третью и четвертую группу составляли коровы с острым катаральным эндометритом, третью лечили только  полисаном Е, четвертую полисаном Е + Хотынецкие природные цеолиты. Установлено, что у животных четвертой группы положительные сдвиги в течении болезни наступали на 4ые -5 сутки. К этому времени у коров ослабевали признаки воспаления половых путей, происходил переход воспаления эндометрия в катаральную форму.

Таким образом, все регистрируемые нами физиолого-биохимические показатели свидетельствуют о более полном выздоровлении за более короткие сроки в 4ой группе, то есть при использовании дополнительного к традиционным методам Хотынецких природных цеолитов.

3.3.4 Эффективность использования Хотынецких цеолитов при лечении мастита

К числу проблемных болезней крупного рогатого скота в настоящее время относится мастит, который наносит хозяйствам огромный экономический ущерб за счет снижения молочной продуктивности, ухудшения качества молока, преждевременной выбраковки животных и больших затрат средств на лечение. (Мутовин В.И., 1980; Smith K.L., Todhunter D.A., 1985; Карташова В.М., Ивашура А.И., 1988; Париков В.А., Сапожникова Н.А., 1988; Berthelot X., Fabre J.M., Lebret P., Fekerici C., 1989; Ивашура А.И., 1991; Серопян Г.Б., Мелконян Ж.С., Хоцанян В.В., Сиреконян А.Б., 2007).

Нами были обследованы 3 группы коров в сухостойный период: I - субклинический мастит  II - клиническая форма мастита, III - контрольная.

При анализе крови опытных животных нами было установлено, что содержание белых кровяных клеток достоверно выше у больных животных, (Р<0,001), чем у здоровых и в сухостойный период и в период после отела.

В крови больных маститом животных отмечено увеличение лейкоцитов. В крови здоровых животных количество лейкоцитов равнялось в сухостойный период 8,04 0,23*109/л и 6,2 0,21*109/л после отела.

В результате исследований нами было установлено, что в крови больных животных, в сухостойный период содержание палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов достоверно выше, чем у здоровых животных (Р<0,001). Причем в крови больных животных в период сухостоя и после отела находили юные нейтрофилы, что свидетельствует об угнетении органов лейкопоэза и функциональном сдвиге ядра влево. Содержание лимфоцитов, моноцитов и эозинофилов достоверно выше у здоровых животных, чем у больных (Р<0,05). Содержание эозинофилов на 37 % меньше, а палочкоядерных нейтрофилов на 28% и сегментоядерных нейтрофилов на 16% больше у больных, чем у здоровых животных.

Следующим механизмом патогенеза мастита является ПОЛ.

Нами получены следующие показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при мастите.

Таблица №22 Показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при мастите

Показатели	Группы коров
	I Субклинический мастит	II Клиническая форма мастита	III Контроль (здоровые коровы)
Коньюгированные диены, ед.оп.пл./мг липидов	0,210,013	0,290,011	0,1790,07
Кетодиены, ед.оп.пл./мг липидов	0,090,008	0,110,007	0,0590,006
Малоновый диальдегид, мкМ/л	0,770,046	0,980,038	0,260,018
Общие липиды, г/л	3,100,18	3,400,09	2,290,05
Церулоплазмин, мкМ/л	1,500,014	1,200,017	2,200,16
Витамин Е, мкМ/л	9,800,11	8,300,08	1,730,40
Витамин А, мкМ/л	0,960,13	0,840,03	2,500,30
Витамин С, мкМ/л	38,900,13	30,100,012	63,000,13

P 0,05

Анализ полученных данных говорит об усилении свободно-радикального окисления при мастите и снижении антиоксидантной защиты. При анализе свободно-радикального окисления липидов и антиокислительной активности на системном уровне (в сыворотке крови), у больных маститом коров в активной стадии воспаления, установлено понижение содержания церулоплазмина на 27%. Наряду с увеличением АОА в сыворотке крови отмечается прирост молекулярных продуктов перекисного окисления липидов. Содержание гидроперекисей и малонового диальдегида в сыворотке крови увеличивается на 54 % и 95 % соответственно. В крови коров с субклиническим маститом активность церулоплазмина уменьшалась по сравнению с контролем, а уровень малонового диальдегида вырос почти в 2 раза. Это наводит на мысль о необходимости использования при лечении мастита веществ, обладающих адаптогенным действием.

Параллельно с ростом свободно-радикального окисления и падением уровня антиоксидантной защиты нами отмечены нарушения минерального обмена.

Таблица №23 Ц Показатели минерального обмена у коров при мастите

Показатели	Группы коров
	I Субклинический мастит			II Клиническая форма мастита		III Контроль (здоровые коровы)
Кальций, мМ/л		2,000,15	1,930,11		2,550,03
Фосфор, мМ/л		2,400,01	2,200,01		2,700,40
Кобальт, мкМ/л		не обнаружен	не обнаружен		0,100,02
Цинк, мкМ/л		34,100,50	33,200,27		43,600,33
Медь, мкМ/л		9,800,13	9,500,11		12,000,35
Никель, мкМ/л		не обнаружен	не обнаружен		не обнаружен
Хром, мкМ/л		не обнаружен	не обнаружен		не обнаружен
Стронций, мкМ/л		9,800,13	9,800,14		9,801,14
Na+, мМ/л		132,000,50	131,000,12		141,002,50
K+, мМ/л		3,200,03	3,210,15		4,200,03

P 0,05

Результаты наших исследований показали также изменения и в других сторонах обмена.

На сегодняшний день предложено большое разнообразие антибиотических препаратов для лечения маститов.

Все они в той или иной степени являясь токсичными и вредными для человека, выделяются с молоком.

После температурной обработки продуктов животноводства для употребления в пищу, антибиотики, содержащиеся в них приобретают свойства сильнейших аллергенов.

Поэтому сегодня крайне необходимы разработка и внедрение новых методов лечения и профилактики маститов. В этой связи большой интерес вызывает патогенетическое лечение и профилактика Хотынецкими цеолитами, эффективность которого объясняется стимулирующим действием на активность важнейших тканевых ферментов, в том числе и ферментной составляющей антиоксидантной системы за счет нормализации содержания микроэлементов. Наличие в составе Хотынецких цеолитов металлов с переменной валентностью, а также их сорбционная структура позволяют объяснить снижение уровня свободных радикалов в крови коров при мастите.

3.3.4.1 Коррекция физиолого-биохимических процессов цеолитами

Предполагаемая нами терапевтическая эффективность Хотынецких цеолитов должна была быть подтверждена изучением влияния их на физиолого-биохимические показатели.

С этой целью были отобраны животные, находящиеся в сухостойном периоде, у которых диагностировали субклинический мастит, которые были поделены на 2 группы: 1 группа- лечили мастисаном, 2 группа - лечили мастисаном Е + Хотынецкие цеолиты, 3 группа - здоровые животные (контрольная).

Таблица №24 Ц Влияние Хотынецких цеолитов на  физиолого-биохимические показатели крови при мастите

Показатели	Группы коров
	Мастит				Контроль (здоровые животные)
	Эндометрит (лечение мастисаном)		Эндометрит (лечение мастисаном + Хотынецкие цеолиты)
	До ечения	После ечения	До ечения	После ечения
ейкоциты *109/л	11,200,34	10,800,23	11,000,02	9,100,12	8,040,12
Базофилы, %	0,770,01	0,820,13	0,760,01	0,920,07	1,420,03
Эозинофилы, %	3,700,11	4,000,11	3,600,13	5,400,17	4,500,11
Юные нейтрофилы, %	0,700,01	0,400,02	0,700,03	0,200,01	5,301,63
Палочкоядерные нейтрофилы, %	7,400,03	6,800,04	7,400,02	5,900,12	5,300,17
Сегментоядерные нейтрофилы, %	24,200,07	22,500,01	24,100,01	20,900,13	20,301,63
имфоциты, %	56,500,15	57,000,25	56,500,13	57,000,14	62,700,20
Моноциты, %	2,400,01	2,800,13	2,400,03	3,500,16	4,000,02
Общий белок, г/л	64,000,90	70,500,17	64,000,75	78,000,33	81,000,30
Фракции белка в %:
Альбумины ,%	34,200,03	34,800,05	34,300,06	35,900,15	35,000,20
- глобулины ,%	14,200,05	14,600,01	14,200,03	14,900,15	15,000,14
- глобулины ,%	13,300,2	12,900,11	13,300,17	12,400,05	12,000,11
- глобулины ,%	39,000,21	39,000,11	39,000,17	38,400,05	38,000,41

P 0,05

3.3.4.2 Хотынецкие цеолиты Ц лечебное средство свободно-радикальной патологии при мастите

Рисунок №2 Ц Основные показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты при лечении коров мастисаном Е и Хотынецкими цеолитами в сочетании с мастисаном Е

3.3.4.3 Механизм влияния цеолитов на минеральный обмен в организме

Рисунок №3 Ц Влияние Хотынецких цеолитов на минеральный обмен при мастите

Таблица  №25 Ц Влияние Хотынецких цеолитов на активность ферментов у коров, больных маститом

Показатели	Группы коров
	Мастит (лечение мастисаном Е)		Мастит (лечение мастисаном Е + Хотынецкими цеолитами)		Контроль (здоровые коровы), среднее значение за наблюдательный период
	До ечения	После ечения	До ечения	После ечения
Активность щелочной фосфатазы, мМ/ч.л	1,520,01	1,400,01	1,530,01	0,900,05	0,700,11
Активность АЛТ, нМ/с.л	0,850,01	0,690,05	0,860,09	0,610,01	0,550,05
Активность АСТ, мм/л	0,810,01	0,720,03	0,820,01	0,660,02	0,630,15

P 0,05

Полученные нами данные свидетельствуют об эффективности проводимого лечения, так как все величины, характеризующие физиолого-биохимический статус организма коровы возвращались в норму.

Выводы

1. Развитие  изученных нами патологических процессов и состояний в организме сельскохозяйственных животных приводит к изменению уровня свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты и характеризуется нарушением белкового, углеводного и липидного обменов. Отмечено резкое усиление процессов пероксидации у коров при эндометрите (в 1,52 раза; кетодиены в 1,4 раза; малоновый диальдегид в 3 раза), при мастите: в 1,17 раза; в 1,54 раза; в 2,96 раз соответственно, в зимне-стойловый период:  конъюгированные диены выросли на 35%, кетодиены на 50%, МДА на 84% (в 1,84 раз).
2. Окислительный стресс протекал на фоне пониженного содержания ряда микро- и макроэлементов, что позволяет предположить наличие гипомикроэлементозов у животных со свободно-радикальной патологией различной этиологии. Так отмеченные нами нарушения в антиоксидантной системе у коров при мастите сопровождались снижением содержания меди на 18 %, цинка на 17%, кобальт не обнаружен, кальция на 21%, фосфора на 11%. при эндометрите меди на 17,5%, цинка на 16%, кобальта на 50%, кальция на 17%, фосфора на 11%.
3. Активность церулоплазмина крови и других биологических жидкостей (молоко) является важным показателем, позволяющим осуществлять динамические наблюдения за функциональным состоянием антиоксидантного потенциала организма и эффективностью применения экзогенных средств адаптогенного действия. Так активность церулоплазмина снижается при мастите на 0,6 мкМ/л (27%), эндометрите на 0,7 мкМ/л (31%), в зимне-стойловый период на 0,7 мкМ/л; у поросят на 3 сутки после отъема на 0,7 мкМ/л (32%).
4. Результаты изучения свободно-радикальных процессов и антиоксидантной защиты крови и других биологических жидкостей при некоторых патологических процессах и физиологических состояниях показывают изменения ещё до появления клинических признаков болезни и могут служить тестом для ранней диагностики отдельных патологий и физиологических состояний (мастита, эндометрита и беременности у коров).
5. Физиолого-биохимическая оценка гомеостаза у экспериментальных животных подтвердила у коров в зимне-стойловый период, при эндометрите и мастите, а также у поросят после отъема наличие окислительного стресса.
6. В показателях перекисного окисления и антиоксидантной защиты наблюдается зависимость от физиологического состояния животного. Так при беременности у коров отмечены увеличение показателей антиоксидантной защиты церулоплазмина в 1,4 раз, витамина Е  1,55 раз, что может быть использовано для ранней диагностики беременности. (Патент № 2306701)
7. Определение церулоплазмина позволяет зарегистрировать изменение антиоксидантного статуса в организме животного при развитии патологического процесса или состояния. Так было обнаружено понижение активности церулоплазмина при заболеваниях, сопровождающихся усилением реакций свободно-радикального окисления - мастите и эндометрите.
8. Совокупность проведенных исследований свидетельствует  о единстве механизмов метаболических сдвигов, наблюдаемых при различных по этиологии формах нарушения физиолого-биохимического гомеостаза при технологическом стрессе.
9. Хотынецкие цеолиты можно использовать в качестве комплексной минеральной добавки при микроэлементозах различного происхождения. Так, отмеченное у коров уменьшение содержания минеральных элементов при скармливании цеолитов постепенно нормализуется. На 12 сутки при эндометрите отмечено увеличение фосфора на 0,3 мМ/л, цинка на 2 мМ/л, меди на 1,5 мкМ/л. При мастите фосфора на 0,45 мМ/л, цинка на 2,6 мкМ/л, меди на 1,6 мкМ/л.
10. Изучение адаптогенного действия Хотынецких природных цеолитов при состояниях, сопровождающихся избыточной пероксидацией (гиподинамия, гипоксия, алиментарный стресс в зимне-стойловый период у коров, отъем у поросят) показало, что в условиях окислительного стресса, индуцированного воздействием на животных повреждающего фактора, антиоксидантное действие цеолитов проявлялось через снижение уровня активности ПОЛ в плазме крови и повышение активности отдельных антиоксидантов (в частности церулоплазмина и витамина Е). При использовании цеолитов МДА падает в зимне-стойловый период в 2 раза, у коров при эндометрите в 2,1 раза, при мастите в 2,14 раза, и увеличивается активность церулоплазмина в 1,25 раза; в 1,3 раза; в 1,35 раза соответственно.
11. Хотынецкие цеолиты являются эффективным антиоксидантным средством для комплексного лечения заболеваний репродуктивной системы у коров (эндометрита и мастита). Улучшение клинических и физиологических показателей у больных, получавших цеолиты, по сравнению с больными животными, не получавшими цеолиты, положительно коррелировало с увеличением активности антиоксиданта церулоплазмина крови, повышением в ней уровня витамина Е и уменьшением содержания показателей липидной пероксидации.
12. На основании анализа полученных результатов считаем необходимым использование Хотынецких природных цеолитов в качестве лечебно-профилактического средства  при послеотъемном  стрессе у поросят.
13. Морфологические и биохимические показатели крови свидетельствуют, что Хотынецкие природные цеолиты хотя и не заменяют основные питательные вещества, но благодаря своим физико-химическим свойствам  стабилизируют физиологические функции и повышают резистентность  организма животных.

7 Рекомендации и практические предложения

На основании полученных результатов рекомендуем использование показателей свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты для диагностики заболеваний и состояний (Способы диагностики мастита у коров - патент № 2277246  и патент № 2292893, Способ диагностики эндометрита у коров - патент № 2306142, Способ диагностики беременности у коров - патент № 2306701). Хотынецкие природные цеолиты рекомендуем в качестве средства свободно-радикальной терапии при мастите и эндометрите, адаптогенного средства в зимний стойловый период у коров (патент №2314108) и поросят после отъёма, а также в качестве комплексной минеральной добавки для поросят.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ярован, Н.И. Изменение биохимических показателей крови крупного рогатого скота при стрессе/ А.М.Гуськов, Н.И. Ярован, Н.В. Ермакова//Материалы всероссийской научно - практической конференции Достижения физиологии - животноводству XXI века. - Орёл, 1999.- С.9.
2. Ярован, Н.И. Прогнозирование и реализация продуктивного потенциала сельскохозяйственных животных / Н.И. Ярован //Материалы всероссийской научно - практической конференции Достижение физиологии - животноводству XXI века.- Орёл, 1999. - С.10.
3. Ярован, Н.И. Изменение биологических показателей крови телят при повышенном содержании нитратов в кормах / Н.И. Ярован, А.М Гуськов, Н.В. Ермакова //Материалы международной научно - практической конференции Использование научного обеспечения АПК в России. -  Орел, 2000.- С.190.
4. Ярован, Н.И. Уровень перекисного окисления липидов при эндометрите / Н.И. Ярован, А.М Гуськов, Н.В. Ермакова // Материалы международной научно - практической конференции Использование научного обеспечения АПК в России. - Орел, 2000. - С.191.
5. Ярован, Н.И. Сезонная динамика репродуктивной способности и способы диагностики функционального состояния крупного рогатого скота / Н.И. Ярован, А.М. Гуськов, А.В. Мамаев, Н.В. Масалов // Материалы всероссийской научно - практической конференции Гигиена содержания и кормления животных - основа сохранения их здоровья и получения экологически чистой продукции. - Орел, 2000.- С.16.
6. Ярован, Н.И. Стимуляция репродуктивной функции животных антиоксидантами и адреноблокатарами / Н.И. Ярован, А.М. Гуськов, А.В. Мамаев, Н.В. Масалов //Материалы всероссийской научно - практической конференции Гигиена содержания и кормления животных - основа сохранения их здоровья и получения экологически чистой продукции.- Орел, 2000. - С.14.
7. Ярован, Н.И. Физиологические аспекты производства продуктов животноводства / Н.И. Ярован, А.М. Гуськов и др. // Материалы всероссийской научно - практической конференции Использование научного потенциала вузов в решении проблем научного обеспечения сельскохозяйственного производства. - Орел, 2000.- С.187.
8. Ярован, Н.И. Экологическая загрязненность нитратами - одна из причин алиментарного стресса животных / Н.И. Ярован //Материалы Псковской областной экологической конференции РИО+10: охрана окружающей среды, природопользование, образование. - Великие Луки, 2002.-Вып. 7. - С. 247-249.
9. Ярован, Н.И. Влияние Хотынецких природных цеолитов Орловской области на нормализацию содержания отдельных элементов в крови свиней / Н.И. Ярован, Б.Л Белкин, //Материалы VIII Международной конференции Актуальные проблемы сохранения устойчивости живых систем - Белгород, 2004. - С. 252-253.
10. Ярован, Н.И. Адаптогенное действие Хотынецких цеолитов Орловской области / Н.И. Ярован, Б.Л. Белкин //Материалы всероссийской научной конференции Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья. - Белгород, 2004.- С. 189-190
11. Ярован, Н.И. Влияние избыточного количества нитратов на уровень свободно - радикального окисления и антиоксидантной защиты у телят / Н.И. Ярован //Материалы международной научно - практической конференции Состояние и проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве. - Чебоксары, 2004. - С. 488-490.
12. Ярован, Н.И. Положительное влияние Хотынецких цеолитов на биохимический гомеостаз крови поросят / Н.И. Ярован., Б.Л. Белкин, Р.И. Тормасов, Т.В. Смагина //Материалы международной научно - практической интернет - конференции, посвященной 75-летию кафедры хирургии Ставропольского аграрного государственного университета Управление функциональными системами организма. - Ставрополь, 2006. - С. 204-206.
13. Ярован, Н.И. Использование природных цеолитов Орловской области для нормализации свободно - радикального окисления у свиней / Н.И. Ярован //Материалы третьего международного симпозиума Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии. - СПб, 2005.- С. 170-171.
14. Ярован, Н.И. Изменение активности ферментов в крови при технологическом стрессе / Н.И. Ярован // Естествознание и гуманизм: сб.науч. работ Сибирского государственного медицинского университета.- Томск, 2005.-Т. 2.- № 4. - С. 21.
15. Ярован, Н.И. Влияние нитратной интоксикации на минеральный обмен и активность церулоплазмина / Н.И. Ярован //Материалы 1-й Всероссийской научно - практической конференции Генетика, молекулярная биология и биохимия сельскохозяйственных животных. - Гагра, - 2005. -  С. 52-154.
16. Ярован, Н.И. Влияние Хотынецких цеолитов на ферментативную активность у поросят после отъема / Н.И. Ярован, Б.Л. Белкин // Актуальные вопросы защиты здоровья сельскохозяйственных животных и повышение их продуктивности: сб.науч.трудов. - Курск, 2006. - С. 88-90.
17. Ярован, Н.И. Свободно - радикальное окисление у стельных коров / Н.И. Ярован //Материалы международной научной конференции профессорско - преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПБ ГАВМ. - СПб, 2006.-С. 127-128.
18. Ярован, Н.И. Лабораторная диагностика мастита у коров / Н.И. Ярован //Аграрная наука. -  2006. - №8. - С. 29-30.
19. Ярован, Н.И. Использование природных цеолитов в кормлении коров / Н.И. Ярован // Молочное и мясное скотоводство. -  2006. - №8. - С. 28-30.
20. Ярован, Н.И. Цеолиты в профилактике оксидативного стресса у поросят / Н.И. Ярован  // Зоотехния. -  2006. - №9. - С. 23-24.
21. Ярован, Н.И. О возможности использования Хотынецких природных цеолитов при лечении мастита коров / Н.И. Ярован // Ветеринарная медицина. -  2006. - № 4. - С. 28-30.
22. Ярован, Н.И. Физиолого - биохимический статус крови коров в зимне-стойловый период / Н.И. Ярован, Н.В. Ермакова // Известия Федерального государственного образования Самарская государственная сельскохозяйственная академия.- Самара, 2007.- Вып. №1. - С. 25-26.
23. Ярован, Н.И. Свободно - радикальная терапия при эндометрите коров / Н.И. Ярован //Аграрная наука. -  2007. - №1. - С. 30.
24. Ярован, Н.И. Оценка свободно - радикального окисления у коров при мастите / Н.И. Ярован //Российский ветеринарный журнал: спец.выпуск. - 2007. - С. 32.
25. Ярован, Н.И. Диагностика беременности у коров / Н. И. Ярован // Молочное и мясное скотоводство. -  2007. - № 4. - С. 31.
26. Ярован, Н.И. Технологический стресс - одна из причин нарушения липидного обмена у коров / Н.И. Ярован, Н.В. Ермакова // Материалы международной научно - практической конференции Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. - Белгород, 2007. - С. 236.
27. Ярован, Н.И. Сезонные изменения морфофизиологических показателей крови при окислительном стрессе / Н.И. Ярован, Н.В. Ермакова // Материалы всероссийской научно - практической конференции Наука в современных условиях: от идеи до внедрения.-Димитровград, 2007.-С. 349-350.
28. Ярован, Н.И. Активность антиоксиданта церулоплазмина при мастите // Зоотехния. - 2007. - № 10. - С. 15.
29. Ярован Н.И. Влияние Хотынецких природных цеолитов на процессы адаптации у коров / Н.И. Ярован // Доклады РАСХН. - 2008. - №2. - С. 87
30. Патент № 2182461 Российская Федерация Способ диагностики мастита у коров  / Н.И. Ярован, А.М. Гуськов, А.В. Мамаев, Н.В. Ермаков//заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет. - № 2000129322; заявл.23.11.00; опубл. 20.05.02, Бюл № 11. - 3 с.
31. Патент № 2277246 Российская Федерация Способ диагностики мастита у коров /Ярован Н.И. // заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет. - № 2005103063; заявл.07.02.05; опубл. 27.05.06, Бюл № 13. - 3 с.
32. Патент №2279678 Российская Федерация Способ диагностики субклинического эндометрита у коров / Ярован Н.И. // заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет.-№ 2005107378; заявл.16.04.05; опубл. 10.07.06, Бюл № 19. - 3 с.
33. Патент № 2292893 Российская Федерация Способ лечения субклинического мастита у коров /Ярован Н.И.; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет.-№ 2005131658; заявл.12.10.05; опубл. 10.02.07, Бюл № 12. - 3 с.
34. Патент № 2306142 Российская Федерация Способ лечения субклинического эндометрита у коров / Н.И. Ярован // заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет. - № 2006116687; заявл.15.05.06; опубл. 20.09.07, Бюл № 23. - 3 с.
35. Патент № 2306701 Российская Федерация  Способ диагностики беременности у коров / Н.И. Ярован // заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет. - № 2006113888; заявл.24.04.06; опубл. 27.09.07, Бюл № 27. - 3 с.
36. Патент № 2292893 Российская Федерация Способ коррекции свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты у коров при технологическом стрессе /  Н.И. Ярован //заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Орловский государственный аграрный университет. - № 2006116687; заявл.05.07.06; опубл. 21.11.07, Бюл № 29. - 3 с.

Издательство Орел ГАУ, 2008, Орел, Бульвар Победы, 19.

Заказ 12. Тираж 120 экз.

   Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии