На правах рукописи

ВИЧКУТКИНА ЕЛЕНА АЛЕКСАНДРОВНА

СОЗДАНИЕ ФИТОСБОРА НЕФРОЛЕН С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

РАЦИОНАЛЬНОГО

ХИМИКО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ПОДХОДА

(экспериментальное исследование)

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Пермь - 2007

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Алтайский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию и Алтайской лаборатории ГУ НИИ фармакологии ТН - СО РАМН

Научный руководитель:

доктор биологических наук ампатов Вячеслав Витальевич

Научный консультант:

доктор медицинских наук,

профессор Брюханов Валерий Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Петриченко Василий Михайлович

доктор медицинских наук,

профессор Котегов Виктор Петрович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита состоится л18 сентября 2007 г. в ___ час. на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46

Автореферат разослан л19 июня 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук, доцент Метелева Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: ечение воспалительных заболеваний почек является актуальной проблемой современной терапии и требует поиска новых эффективных и безопасных лекарственных средств. Хорошо известно, что растительные средства, как правило, менее токсичны синтетических противовоспалительных препаратов и могут длительно применяться без каких-либо существенных побочных воздействий на организм [С.Я. Соколов, 2000]. В этом контексте перспективными для изучения и дальнейшего применения являются сборы, составленные из лекарственных растений, произрастающих на Алтае. Ранее было установлено, что водные извлечения из некоторых композиций лекарственных растений Алтая обладают противовоспалительным и противомикробным действием, а также влияют на процессы свободнорадикального окисления и функцию почек [О.Ш. Кривова, 2001; Е.М. Санаров с соавт., 2004; В.М. Брюханов с соавт., 1999; С.В. Замятина, 2006].

Изученные сборы были созданы путем сочетания лекарственного растительного сырья с учетом его фармакологических свойств [О.Ш. Кривова, 2001]. Однако такой подход далеко не всегда позволяет получить фитосборы с желаемым фармакотерапевтическим эффектом. Так, скрининговые фармакологические исследования шести сборов показали, что только один из них может быть рекомендован для углубленного изучения в качестве возможного фитосредства терапии почечной патологии [Е.М. Санаров с соавт., 2003]. В связи с этим актуальной задачей является установление зависимости фармакологического действия извлечений из сборов от их химического состава, что помогло бы в дальнейшем создавать новые эффективные растительные препараты, сочетающие в себе противовоспалительные, антиоксидантные, диуретические и противомикробные свойства, на основе рационального целенаправленного подхода. Предлагаемый подход к созданию комплексных фитопрепаратов, возможно, позволит избегать скрининговых фармакологических исследований, требующих больших затрат труда и времени. Поэтому было решено исследовать химический состав изученных ранее в нашей лаборатории сборов, проявивших фармакологическую активность, и, исходя из полученных результатов и химико-фармакологического анализа, составить новую активную фитокомпозицию, предназначенную для применения в комплексной терапии воспалительных заболеваний почек.

Важнейшее значение в химико-фармакологическом анализе извлечений из сборов отводилось биологически активным фенольным соединениям. Это связано с ведущей ролью фенольных соединений в противовоспалительном, антиоксидантном, противомикробном и диуретическом эффектах растений [В.А. Барабой, 1984; В.Д. Белоногова с соавт., 2003; Xiao Du et al., 2001].

Цель работы: Выявить закономерности между фармакологической активностью сборов и их химическим составом и на этой основе предложить сбор, обладающий терапевтической эффективностью при воспалительных заболеваниях почек.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Определить количественное содержание биологически активных соединений фенольной структуры в водных извлечениях из сборов лекарственных растений Алтайского края;
2. Выявить химико-фармакологические закономерности изученных сборов;
3. Разработать состав сбора из лекарственных растений Алтайского края, используя выявленные химико-фармакологические закономерности;
4. Определить количественное содержание фенольных соединений в водном извлечении из полученного сбора;
5. Провести стандартизацию предложенного сбора;
6. Изучить фармакологическую активность сбора и его влияние на функцию почек.

Научная новизна исследования: Впервые изучено количественное содержание фенольных соединений в водных извлечениях из сборов лекарственных растений Алтая методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). При этом установлено содержание простых фенолов (арбутина, гидрохинона), фенолкарбоновых кислот (салициловой и бензойной кислот), суммы оксикоричных кислот и их отдельных представителей (кофейной и феруловой кислот), суммы флавоноидов и их представителей (рутина, кверцетина), а также суммы всех фенольных соединений в пересчете на арбутин.

Выявлена зависимость фармакологического действия извлечений из сборов от содержания в них биологически активных соединений фенольной структуры. Установлено, что фармакологическое действие извлечений из сборов зависит от количественного содержания арбутина, салициловой кислоты, суммы флавоноидов, оксикоричных кислот и всех фенольных соединений.

В работе предлагается принципиально новый методологический подход к созданию комплексных фитопрепаратов для терапии почечной патологии, основанный на сочетании лекарственного растительного сырья с учетом содержания в нем арбутина, салициловой кислоты, суммы флавоноидов и оксикоричных кислот.

На основе предлагаемого подхода создан фитосбор, сочетающий в себе противовоспалительные, антиоксидантные, противомикробные и диуретические свойства; оформлена заявка на изобретение Сбор лекарственных растений для профилактики и лечения воспалительных заболеваний мочевых путей №а2006117461 (019008) от 22.05.2006 г. Сбору дано условное наименование Нефролен.

Научно-практическая значимость: Получены новые сведения относительно химического состава некоторых лекарственных сборов, позволяющие существенно расширить их фармакогностическую характеристику.

Разработан состав фитосбора Нефролен, обладающего противовоспалительными, антиоксидантными, противомикробными и диуретическими свойствами. Сочетание перечисленных фармакологических свойств позволяет рекомендовать данный сбор в качестве перспективного лекарственного средства для дальнейших клинических фармакологических испытаний. По результатам исследования подготовлен к рассмотрению проект фармакопейной статьи на сбор Нефролен.

Предлагается использование установленных химико-фармакологических закономерностей для целенаправленного создания новых сборов и фитопрепаратов, обладающих терапевтической активностью при воспалительных заболеваниях почек.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Водные извлечения из сборов лекарственных растений Алтая содержат арбутин, гидрохинон, салициловую и бензойную кислоты, флавоноиды и производные оксикоричной кислоты. Количественное содержание перечисленных фенольных соединений колеблется в широких пределах;
2. Фармакологическая активность извлечений из сборов зависит от количественного содержания в них арбутина, салициловой кислоты, флавоноидов и оксикоричных кислот;
3. Разработан состав растительного сбора Нефролен с учетом содержания в его компонентах арбутина, салициловой кислоты, флавоноидов и оксикоричных кислот;
4. Водное извлечение из полученного сбора обладает сравнительно высоким содержанием арбутина, салициловой кислоты, флавоноидов, оксикоричных кислот и суммы фенольных соединений;
5. Установлены морфолого-анатомические признаки и показатели доброкачественности сбора Нефролен, которые включены в проект фармакопейной статьи;
6. Водное извлечение из сбора Нефролен обладает выраженными противовоспалительными, антиоксидантными, противомикробными и диуретическими свойствами.

Апробация материалов диссертации: Материалы диссертации докладывались и обсуждались на научной конференции, посвященной 30-летию фармацевтического факультета АГМУ (г. Барнаул, 2005 г), на научно-практической конференции Современные проблемы фармакологии и фармации, посвященной 70-летию Новосибирской государственной медицинской академии (г. Новосибирск, 2005 г), на международной научно-практической конференции Фармакология и фармакотерапия: достижения и перспективы, посвященной 70-летию кафедры фармакологии ДГМА и 70-летию профессора Ш. М. Омарова (г. Махачкала, 2006 г), на второй Российско-Китайской международной научной конференции Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике (г. Пермь, 2006 г), на конференции Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтического образования, посвященной 25-летию фармацевтического факультета Башкирского государственного медицинского университета (г. Уфа, 2006 г), на III Всероссийской конференции Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья (г. Барнаул, 2007 г).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе одна - в журнале, рекомендованном ВАК; оформлена заявка на изобретение № 2006117461 (019008) от 22.05.2006 г.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста, иллюстрирована 46 рисунками, 16 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы, включающего 202 источника, из них 78 иностранных авторов, и приложения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для проведения фитохимического анализа из скрининговых сборов получали отвары в соотношении 1:10 в соответствии с требованиями ГФ XI издания.

Исследуемые фитосборы имели следующий состав: сбор 1 включал цветки ромашки аптечной (ГФ ХI, Изменения №№ 1-6) 1ч, листья бадана толстолистного (ТУ 9373-131-00482192-96) 2ч, листья ортилии однобокой (ТУ 9198-007-50655048-06) 2ч, плоды укропа пахучего (ГФ ХI) 1ч, плоды шиповника майского (ГФ ХI) 3ч, траву зверобоя продырявленного (ГФ ХI) 1ч, траву череды трехраздельной (ГФ ХI, Изменение №1) 2ч, корневища аира болотного (ГФ ХI) 1ч; сбор 2 - цветки ромашки аптечной (ГФ ХI, Изменения №№ 1-6) 1ч, цветки тысячелистника обыкновенного (ФС 42-44-72) 1ч, листья брусники обыкновенной (ГФ ХI) 2ч, листья подорожника большого (ГФ ХI) 1ч, плоды смородины черной (ГОСТ 21450-75) 2ч, плоды шиповника майского (ГФ ХI) 3ч, траву череды трехраздельной (ГФ ХI, Изменение №1) 1ч; сбор 3 - листья березы повислой (ВФС 42-2487-95) 2ч, плоды шиповника майского (ГФ ХI) 3ч, траву володушки многожильчатой (ВФС 42-580-76) 2ч, траву душицы обыкновенной (ГФ ХI, Изменение №1) 1ч, траву зверобоя продырявленного (ГФ ХI) 2ч, траву хвоща полевого (ГФ ХI, Изменения №1, №2) 1ч, корни солодки голой (ГФ Х) 1ч; сбор 4 - цветки ромашки аптечной (ГФ ХI, Изменения №№ 1-6) 1ч, цветки тысячелистника обыкновенного (ФС 42-44-72) 1ч, листья грушанки круглолистной (ТУ 9198-192-21428156-04) 2ч, листья подорожника большого (ГФ ХI) 1ч, плоды смородины черной (ГОСТ 21450-75) 2ч, плоды шиповника майского (ГФ ХI) 3ч, траву череды трехраздельной (ГФ ХI, Изменение №1) 1ч; сбор 5 - цветки ромашки аптечной (ГФ ХI, Изменения №№ 1-6) 1ч, цветки тысячелистника обыкновенного (ФС 42-44-72) 1ч, цветки календулы лекарственной (ГФ ХI, Изменение №2) 2ч, листья березы повислой (ВФС 42-2487-95) 2ч, листья зимолюбки зонтичной (ТУ 9198-193-21428156-04) 2ч, листья крапивы двудомной (ГФ ХI) 1ч, плоды аронии черноплодной (ФС 42-66-87) 3ч, плоды шиповника майского (ГФ ХI) 4ч, траву хвоща полевого (ГФ ХI, Изменения №1, №2) 1ч, семена льна посевного (ГФ ХI) 3ч; сбор 6 - плоды рябины обыкновенной (ГФ ХI, Изменения №1, №2) 3ч, плоды укропа пахучего (ГФ ХI) 2ч, почки березы повислой (ГФ ХI) 1ч, траву володушки многожильчатой (ВФС 42-580-76) 2ч, траву зверобоя продырявленного (ГФ ХI) 2ч, траву хвоща полевого (ГФ ХI, Изменения №1, №2) 1ч, корни солодки голой (ГФ Х) 1ч. Качество представленных сборов регламентировано ТУ 9198-024-485-405-79-02 и ТУ 9198-015-100-460-11-03.

екарственное сырье, вошедшее в состав сборов, было заготовлено в районах Алтайского края в соответствии с правилами сбора и сушки лекарственного растительного сырья [Сборник инструкций, 1985]. Сборы готовили согласно ГФ ХI издания.

Идентификацию и количественное определение биологически активных веществ (БАВ) в водных извлечениях из сборов осуществляли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе Милихром А-02. Качественный и количественный анализ БАВ в водных извлечениях из сборов проводили с использованием стандартных образцов арбутина, гидрохинона, рутина, кверцетина, салициловой, бензойной, кофейной и феруловой кислот. Расчеты осуществлялись в программе МультиХром. Статистическую обработку результатов проводили, используя критерий Стьюдента.

Результаты фитохимического анализа сопоставляли с результатами фармакологических исследований соответствующих сборов, полученными ранее в нашей лаборатории. Корреляционный анализ осуществляли в программе BioStat.