На правах рукописи

Темникова Наталья Владимировна

Эпидемиологическая характеристика и лабораторная диагностика урогенитальных инфекций, ассоциированных с уреаплазмами и микоплазмами, у женщин в крупном промышленном центре

14.00.30 - эпидемиология

03.00.07 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Омск Ц 2007

Работа выполнена в ГОУ ВПО Омской государственной медицинской академии федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Рудаков Николай Викторович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Боровский Игорь Владимирович

ГОУ Омской области Медицинский колледж

доктор медицинских наук, профессор

Кузяев Рафаэль Зиафутдинович

ГОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия

Ведущая организация: ГОУ ВПО Уральская государственная медицинская академия

Федерального агентства по здравоохранению и социальному раз витию

Защита состоится л24 октября 2007 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 208.065.03 при Омской государственной медицинской академии (644099, г. Омск, ул. Ленина, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Омской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан л________________________ 2007года

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук, доцент Р.Н. Готвальд

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы среди женщин многих стран мира отмечается рост урогенитальных инфекций. В структуре данной патологии наряду с увеличением встречаемости возбудителей классических инфекций, передаваемых половым путем (ИППП), возрастает удельный вес заболеваний, вызванных микроорганизмами резидентной флоры, в т.ч. урогенитальные уреа- и микоплазмозы составляют от 10 до 50 % по данным разных авторов (ПухнерА.Ф., Козлова В.И., 1998; Дмитриев Г.А., 2003). Возрастанию интереса к этой группе инфекций способствовало более подробное изучение клинико-патогенетических особенностей действия микоплазм, в частности их влияние на репродуктивную, менструальную, половую функции женского организма, что определяет высокую социальную значимость данной проблемы.

До настоящего времени остается актуальной проблема повышения эффективности лабораторной диагностики этих инфекций.

В большинстве случаев диагностика и лечение основываются на выявлении основного возбудителя без учета количественных критериев, не проводится микробиологический контроль эффективности применяемых противомикробных средств для лечения (изучение антибиотикочувствительности).

Недостаточно изучена геновидовая структура штаммов микоплазм и уреаплазм, циркулирующих в Западной Сибири, и их роль в возникновении тех или иных нарушений функций женского организма.

Требует дальнейшего изучения вопрос оценки патогенного потенциала урогенитальных уреа- и микоплазм, которых часть авторов (Кисина В.И. 2001; Гамова Н.А.,2003) относят к условно-патогенным микроорганизмам, другие исследователи (Teylor-Robinson D., 1998; Ильин И.И.,2001) к облигатным патогенам.

Цель исследований:

Повышение эффективности эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики урогенитальных инфекций, ассоциированных с уреаплазмами и микоплазмами.

Задачи исследования.

1.Провести эпидемиологический анализ структуры и распространенности генитальных микоплазм и уреаплазм в различных возрастных и социальных группах, оценить их этиологическую роль в структуре урогенитальной патологии (на примере г. Омска).

2.Усовершенствовать питательные среды и методы культивирования урогенитальных микоплазм и уреаплазм.

3.Изучить структуру чувствительности к основным группам применяемых антибиотиков региональных популяций микоплазм и уреаплазм.

4. Обосновать подходы к эпидемиологическому надзору на региональном уровне и алгоритмы лабораторной диагностики с учетом применения антибиотикограмм для более эффективного лечения больных с урогенитальными инфекциями, ассоциированными с уреаплазмами и микоплазмами.

Научная новизна и теоретическая значимость работы.

Впервые проведено изучение структуры, распространенности и особенностей эпидемического процесса инфекций, ассоциированных с урогенитальными уреа- и микоплазмами, среди различных групп женщин по результатам микробиологических и молекулярно-генетических исследований, анкетирования, данных официальной регистрации.

Впервые, на примере г. Омска, проведена оценка связи (определена степень влияния) между количеством микоплазм в первичных образцах и сопутствующей патологией репродуктивной системы женщины.

Впервые на территории Западной Сибири изучена антибиотикорезистентность выделенных штаммов различных видов Ureaplasma и M.hominis.

На основании полученных данных предложен диагностический алгоритм обследования женщин с целью верификаций инфекций, ассоциированных с уреаплазмами и микоплазмами.

Практическая значимость работы

Разработаны новые питательные среды для индикации и идентификации микоплазм с улучшенными селективными свойствами.

В связи с развитием антибиотикорезистентности и необходимости более эффективного лечения больных с уреамикоплазмозами, разработаны экспериментальные серии нового комплекта для определения чувствительности к 6 антибиотикам современных поколений фторированных хинолонов и макролидов и тетрациклинов (сумамед, рулид, ровамицин, офлоксацин, юнидокс и джозамицин).

Выделены и изучены штаммы U.parvum и U.urealyticum, которые депонированы во Всероссийский музей микоплазменных культур НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.

По результатам исследования разработаны методические рекомендации для врачей и студентов Лабораторная диагностика инфекций, ассоциированных с уреаплазмами и микоплазмами, которые внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ОмГМА.

Получено положительное решение о выдаче патента на изобретение Способ определения антибиотикочувствительности аэробов от 28 марта 2006 г по заявке № 2006109928/13.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на V межрегиональной научно-практической конференции Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты. - Омск,2004; на Всероссийской научно-практической конференции Медицинская микробиология - XXI век - Саратов, 2004.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 3 - в журналах перечня ВАК.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 137 страницах, содержит 13 таблиц и 19 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы. Библиографический указатель включает 167 работ, в том числе 102 отечественных и 65 иностранных авторов.

На защиту выносятся следующие положения.

1. Основные закономерности эпидемического процесса при урогенитальных уреамикоплазмозах в целом схожи с эпидемическими проявлениями при других ИППП (основные факторы и группы риска). В этиологической структуре заболеваемости основное значение имеют уреаплазмы, при преобладании распространенности U.parvum.

2. Разработанные питательные среды с улучшенными селективными свойствами, повышают эффективность индикации и идентификации молликут и могут быть использованы для повышения эффективности лабораторной диагностики и мониторинга, циркулирующих штаммов. Рост заболеваемости уреамикоплазмозами в г.Омске обусловлен преимущественно улучшением качества лабораторной диагностики.

3. В условиях развития антибиотикорезистентности для более эффективного лечения больных с уреамикоплазмозами необходим мониторинг чувствительности урогенитальных микоплазм с учетом применяемых антибиотиков.

4. Комплексный алгоритм обследования женщин, с учетом данных анамнеза (отнесение к группе риска), позволяет выявить возбудителей с наименьшими лабораторными затратами, оптимизирует микробиологический мониторинг за урогенитальными инфекциями, ассоциированными с уреа- и микоплазмами, и повышает достоверность информации, используемой при эпидемиологическом анализе.

Материалы и методы исследования. Работа проводилась в 2003-2006 гг. в соответствии с планом научно-исследовательской работы Омской государственной медицинской академии, номер государственной регистрации 0120.0601310.

Сбор материала для изучения распространения уреа- и микоплазменной инфекции среди женщин был осуществлен в период с 2003 года по 2005 год на базе женской консультации родильного дома № 1 г.Омска. Проведено бактериологическое исследование образцов вагинального отделяемого 239 женщин, которые наблюдались в учреждении по поводу беременности, обследования или первично обратившиеся с жалобами, в т.ч. 53 беременных и 186 не беременных. В целом по результатам лабораторного исследования у 128 обследованных женщин выделены уреаплазмы в монокультуре, у 9 пациенток M.hominis в монокультуре и сочетание видов обнаружено у 17 женщин. Всего было выделено и идентифицировано 26 штаммов микоплазм и 145 штаммов уреаплазм.

В целях улучшения лабораторной диагностики сконструированы модифицированные среды для индикации урогенитальных микоплазм, вызванных аргинин-утилизирующими видами микоплазм (M. hominis и др.) и уреаплазм с улучшенными ингибирующими свойствами. Проведена апробация сред на штаммах, полученных от больных.

Для определения антибиотикочувствительности штаммов микоплазм и уреаплазм, осуществлена разработка нового диагностического набора, состоящего из 6 антибиотиков новых поколений хинолонов, макролидов и тетрациклинов. Осуществлен подбор минимальных ингибирующих концентраций (МИК) для антибиотиков (АБ). Разработанный диагностический набор, апробирован на 50 свежевыделенных штаммах молликут.

1. Эпидемиологические методы. Описательная часть эпидемиологического исследования (структура, уровень и динамика заболеваемости) проводилась на основании анализа данных официальной статистики по заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем на территории Омска и Омской области в период 1999-2005гг. С целью анализа эпидемиологических данных были набраны и анкетированы две группы женщин репродуктивного возраста: основная, в которую вошли указанные пациентки с выявленными микоплазмами и уреаплазмами, состоящая из 154 женщин и контрольная, в которую входили 85 женщин не инфицированных этими микроорганизмами. При обследовании пациентов основной и контрольной групп, использована специально разработанная анкета, которая содержала данные медицинского анамнеза, субъективные жалобы, данные о социальном статусе женщины, ее возрасте, а так же особенностях социально-культурных условий жизни, лечебно-диагностических процедурах (17 пунктов).

2.Микробиологические методы. На территории Омской области лабораторная диагностика данных нозоформ осуществляется с помощью двух наиболее распространенных методов: иммунофлюоресцентных методов и ПЦР, позволяющих выделить антиген и ДНК в клиническом материале соответственно. Нами же был апробирован и использован комплекс микробиологических методов, включающий метод посевов на жидкие и плотные среды для идентификации молликут с количественным определением микоплазм и уреаплазм в первичных материалах (образцы от больных) и определением чувствительности выделенных штаммов к наиболее часто применяемым антибактериальным препаратам.

При работе по совершенствованию ингибирующих (селективных) свойств мико- и уреаплазменных сред использовали эталонные тест-штаммы микроорганизмов и стандарт мутности Государственного института стандартизации и контроля сред им. Л.А.Тарасевича (ГИСК им. Л.А.Тарасевича). Стабильность биологических свойств сред определяли по показателям чувствительности и селективности в разные сроки хранения при условиях холодильника.

Часть исследований была проведена в лаборатории зоонозных инфекций ФГУ Омского НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора совместно с ст. научным сотрудником, к.м.н. Т.А.Решетниковой и ст. научным, к.м.н. сотрудником Г.В. Березкиной. Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю работы Рудакову Николаю Викторовичу, всем сотрудникам кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ОмГМА, в том числе к.м.н., ст. преподавателю кафедры Е.В.Наумкиной за оказанную помощь в выполнении данной работы.

3.Молекулярно-генетические методы. Генотипирование культур, накопленных в жидкой питательной среде для индикации уреаплазм, проводили методом ПЦР для определения геновидов U. parvum и U. urealyticum с тест-системами Полимик Б НПФ Литех (г.Москва). Определение биоваров (геновидов) уреаплазм проведено на культурах, полученных от 104 больных. Данный раздел выполнен на базе ЦНИЛ ОмГМА.

4.Статистические методы. Статистическую обработку результатов исследования проводили на ПК IBM Pentium IV Inc., версия 5,5, использован пакет прикладных программ Microsoft Office XP (Word, Excel). При статистической обработке материала использованы альтернативный и вариационный анализ, а также традиционные методы параметрической и непараметрической статистики. Для подтверждения достоверности различий в основной и контрольной группах был использован непараметрический метод оценки достоверности, достоверными считались различия при p<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Эпидемиологическая характеристика инфекций, ассоциированных с уреа- и микоплазмами