 Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по разным специальностям
На правах рукописи Корсакова Нина Анатольевна
ОЦЕНКА СТЕПЕНИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОСТИ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ ТОЛСТОЙ КИШКИ НА ОСНОВЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОФЕНОТИПА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК 14.00.15. Ц патологическая анатомия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2007 Работа выполнена в Московском областном научно-исследовательском клиническом институте им. М.Ф.Владимирского (МОНИКИ) Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Ирина Александровна Казанцева доктор биологических наук Лариса Евсеевна Гуревич Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Леонард Леонидович Капуллер доктор медицинских наук, профессор, Юрий Георгиевич Пархоменко Ведущая организация: Кафедра патологической анатомии Российского Университета Дружбы Народов Защита состоится ----- 2007г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.001.004.01 ГУ НИИ морфологии человека РАМН по адресу: 117418 Москва, ул.Цюрупы, д.3 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РУ НИИ морфологии человека РАМН Автореферат разослан л______________2007 года Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук Лилия Петровна Михайлова СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АК аденокарцинома(ы) ВД АК высокодифференцированная аденокарцинома Е-кад Е-кадхерин ИГХ иммуногистохимия; иммуногистохимический НД АК низкодифференцированная аденокарпцинома ТК толстая кишка УД АК умереннодифференцированная аденокарцинома -кат -катенин СК цитокератин(ы) MUC муцин(ы) ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Проблема морфологической диагностики рака толстой кишки в настоящее время имеет особую актуальность, что связано с постоянным ростом заболеваемости раком этой локализации. В большинстве экономически развитых стран Европы и Северной Америки частота заболеваемости колоректальным раком среди злокачественных новообразований занимает второе-третье место у лиц обоего пола [ P.Buckhaults et al, 2001 ]. В России колоректальный рак в общей структуре онкозаболеваемости в 1999г. занял 5 место и составил 9,3%. Показатель неблагоприятного прогноза данного заболевания, груз заболеваемости, т.е. соотношение показателей смертности к заболеваемости, по данным 1999 г. в России достиг 0,72 при раке ободочной и 0,76 при раке прямой кишки [Е.М.Аксель, Т.И.Ушакова, 2001; В.И. Кныш., 1997 ]. Высокий уровень смертности во многом связан с поздней диагностикой, что и определяет низкую эффективность лечения. Известно, что значительный процент опухолей выявляют в инкурабельном состоянии, поэтому 90% пациентов умирает от рецидива заболевания [Ю.И.Патютко, И.В.Сайгадак, 2001]. В связи с этим очень важной проблемой является изучение факторов прогноза, которые непосредственно влияют на выживаемость больных. Основным критерием степени злокачественности в патоморфологической диагностике аденокарцином толстой кишки согласно Международной Гистологической Классификации опухолей кишечника (ВОЗ, Женева, 2000) является степень дифференцировки опухолевых клеток. Подобное подразделение опухолей по мнению большинства исследователей достаточно субъективно и не может характеризовать истинный злокачественный потенциал новообразования [ А.Г. Перевощиков, 1997; C.C.Compton. et al, 2000; C.C.Compton, 2000; С.С. Compton et al, 1999]. Для того, чтобы оценить инвазивность опухоли и судить о ее прогнозе недостаточно рутинного гистологического исследования. Особое значение имеет изучение экспрессии ряда клеточных маркеров, участвующих в механизмах канцерогенеза, таких как онкобелки, протеины, связанные с апоптозом, межклеточной адгезией и пролиферацией. С этих позиций исследование иммунофенотипа клеток эпителиальных опухолей толстой кишки имеет большое практическое значение, оно позволяет уточнить диагноз и более объективно судить о прогнозе заболевания. Проведенное нами комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование факторов, участвующих в механизмах канцерогенеза и опухолевой прогрессии с определением иммунофенотипа клеток разных гистологических вариантов опухолей толстой кишки направлено на совершенствование морфологической диагностики предраковых заболеваний и рака толстой кишки, а также уточнение прогноза заболевания, что может быть использовано при разработке оптимальной тактики их лечения. Цель исследования: На основе иммунофенотипирования клеток опухоли установить морфологические критерии дифференциальной диагностики и прогноза эпителиальных опухолей толстой кишки. Задачи исследования
Научная новизна исследования В работе впервые выполнено комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование клеток доброкачественных и злокачественных эпителиальных новообразований толстой кишки с использованием специально разработанной панели молекулярно-биологических маркеров - антител. Осуществлен сравнительный анализ фенотипических особенностей клеток нормальной слизистой и новообразований толстой кишки - аденом и аденокарцином. Показано, что при изменении клеточной дифференцировки и инвазивных свойств аденокарцином менялся иммунофенотип клеток опухолей. На основе анализа результатов исследования иммунофенотипа опухолевых клеток проведена оценка биологического потенциала опухолей толстой кишки. В работе выявлены существенные различия в интенсивности и локализации экспрессии тканеспецифических протеинов (цитокератинов 19, 20 типа и муцинов 1, 2 типа), а также молекул межклеточной адгезии (Е-кадхерина, -катенина и CD44H) и протеинов - регуляторов клеточного цикла (ВАХ и Bcl-X, р53, Ki67) в клетках тубуло-ворсинчатых аденом и аденокарцином толстой кишки в зависимости от степени дифференцировки и клинической стадии заболевания. Показано, что при снижении степени дифференцировки и возрастании инвазивного потенциала опухолей интенсивность экспрессии антигенов, характерных для нормального эпителия толстой кишки, цитокератинов 19 и 20, муцина 2 типа в цитоплазме опухолевых клеток снижается, а муцина 1 типа возрастает. Для низкодифференцированных аденокарцином с высоким потенциалом злокачественности было свойственно появление аномальных типов экспрессии молекул межклеточной адгезии Е-кадхерина, -катенина и СD44H. Показано, что следствием нарушения дифференцировки клеток является и изменение локализации, а также и интенсивности экспрессии в клетках злокачественных опухолей протеинов-регуляторов апоптоза ВАХ и Bcl-X. Выявлено, что сверхэкспрессия белка р53 свидетельствует о неблагоприятном прогнозе течения заболевания. Уровень пролиферативной активности эпителиальных опухолей толстой кишки варьирует в широких пределах и, по нашим данным, индекс пролиферации Ki 67 не может служить безусловным признаком злокачественного потенциала опухолей этого типа. Полученные результаты могут быть использованы для диагностики и прогнозирования новообразований толстой кишки, а также для разработки более эффективных схем их терапии. Теоретическая и практическая значимость работы В работе показаны различные молекулярно-клеточные механизмы, лежащие в основе злокачественной трансформации клеток эпителиальных опухолей толстой кишки. Установлены иммуногистохимические маркеры, совокупность которых позволяет проводить дифференциальную диагностику этих новообразований. Полученные данные могут быть использованы для более точной оценки инвазивного потенциала и прогноза данной группы опухолей. Результаты работы могут быть использованы для дифференциальной диагностики в практической деятельности патологоанатомических отделений, в работе отделений колопроктологии, онкологии, а также для научно-исследовательских разработок на кафедрах и в научно-исследовательских институтах. Структура диссертации Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, собственных результатов, обсуждения результатов исследования, выводов, практических рекомендаций и списка испльзованной литературы. Работа иллюстрирована 37 таблицами, 43 микрофотографиями, 6 графиками. Апробация работы Результаты работы доложены на IX научной конференции Новые направления и разработки в онкоморфологии, посвященной 75-летнему юбилею академика РАМН, профессора Ю.Н. Соловьева (Москва, 2003); клинической межотделенческой конференции в МОНИКИ (октябрь, 2006 г.); межлабораторной конфереции ГУ НИИ Морфологии человека РАМН (февраль, 2007 г.). ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛА И МЕТОДОВ В работе был использован операционный и аутопсийный материал эпителиальных опухолей толстой кишки от 71 пациента, из них 5 - тубуло-ворсинчатые аденомы, 66 - аденокарциномы различной степени дифференцировки. АК толстой кишки были выявлены у 66 пациентов, из которых 30 случаев (45,5%) были отнесены ко II клинической стадии, 28 (42,5%) - к III, а 8 (12%) - к IV стадии. В соответствии с гистологическим строением в 13 наблюдениях (20%) установлена высокая степень дифференцировки, в 44 (66%) - умеренная степень, а в 9 (14%) - низкая степень дифференцировки опухолевых клеток. В качестве контроля была исследована внеопухолевая слизистая ТК, которая была получена при радикальной резекции фрагмента кишечника с опухолью. Материал фиксировали в 10% растворе формалина, забуференном по Лилли при рН-7,4, затем заливали в парафин по обычной методике. Серийные срезы толщиной 5 мкм депарафинировали по стандартной схеме и окрашивали гематоксилином и эозином. Иммуногистохимический метод ИГХ исследование проводили в соответствии со стандартным протоколом. Был использован набор маркеров, приведенный в таблице 1. Эти ИГХ маркеры (антитела) в соответствии с поставленными задачами разделили на 3 группы: 1 группа - тканеспецифические антитела, использованные для фенотипирования клеток опухолей; 2 группа - антитела к молекулам межклеточной адегезии; 3 группа - антитела к протеинам, регулирующим клеточный цикл. Для ИГХ исследования ткани фиксировали в 10%-ном забуференном формалине (рН 7,2), проводили по спиртам и ксилолам, заливали в парафин. Использовали парафин с температурой плавления 54 аС (Германия). Затем с помощью одноразовых лезвий марки R35 готовили серийные парафиновые срезы толщиной 3-5 мкм и наносили их на стекла с адгезивным покрытием (полилизин), депарафинировали по стандартному протоколу. Далее срезы по 5 минут промывали в деионизированной дистиллированной воде и фосфатном буфере (рН-7,4). Исследование проводили в соответствии с методикой C.R.Taylor., R.Cote., [1994] и L.A.Sternberger. [1979]. Предварительная обработка срезов производилась по методу восстановления антигенных детерминант ткани по методике S-R.Shi и соавт. [1997] с помощью предварительной обработки срезов, погруженных в цитратный буфер (рН-6,0) в микроволновой печи при мощности 690 Вт 2 раза по 5 минут. Таблица 1 Характеристика антител.
|  |
Blog
Home - Blog