Методические рекомендации по методикам исследований, проводимым в Диагностическом центре Алтайского края Барнаул 2009

Вид материала

Подобный материал:

1 ... 26 27 28 29 30 31 32 33 34

Общий иммуноглобулин Е

Основное значение IgE имеют в развитии аллергических реакций, в том числе астмы, экземы, сенной лихорадки и других аллергических заболеваний, а также участвует антипаразитарном иммунитете. Когда IgE встречается с соответствующим антигеном, клетка-носитель этого иммуноглобулина секретирует гистамин и другие вазоактивные вещества, вызывающие аллергическую реакцию. IgE участвуют в процессах, вызывающих бронхиальную астму, экзему и другие аллергические заболевания. Наиболее частой причиной повышения в сыворотке IgE являются паразитарные инвазии (аскариды, токсоплазма, нематоды, шистосомы, анкилостомы, эхинококки, трихинеллы) и атопические заболевания. Атопические аллергические заболевания имеют наследственную предрасположенность, могут проявляться в форме отдельного патологического процесса или в комбинации. Клиническими проявлениями могут быть бронхиальная астма, ринит, крапивница, экзематозный дерматит (атопический дерматит). Повышение IgE при астме, сенной лихорадке и других аллергических заболеваниях коррелирует с тяжестью проявления аллергии.

Снижение IgE наблюдается при наследственной и приобретенной гипогаммаглобулинемии, атаксии-телеангиэктазии.

Нормальные показатели IgE в крови

Возраст	Концентрация (МЕ/мл)
Новорожденные До 1 года От 2 до до 5 лет От 6 до 9 лет От 10 до 15 лет Взрослые	до 1,5 до 15 до 50 до 90 до 100 до 130

Диагностика антифосфолипидного синдрома

Антифосфолипидный синдром (АФС)- симптомокомплекс, характеризующийся венозными и/или артериальными тромбозами, акушерской патологией (невынашивание в 1 и 2 триместрах беременности, преждевременные роды), реже тромбоцитопенией, а также другими (сердечно-сосудистыми, неврологическими, кожными ит.д.) проявлениями, связанными с гиперподукцией антифосфолипидных антител (АФЛА). АФЛА являются серологическим маркером и фактором риска развития тромботических осложнений при АФС.

Формы АФС:

- АФС у больных с достоверным диагнозом СКВ (вторичный АФС);

- АФС у больных с волчаночно-подобными проявлениями;

- «катастрофических» АФС (острая диссеминированная коагулопатия) с острым мультиорганным тромбозом;

-другие микроангиопатические синдромы (тромботическая тромбоцитопеническая пурпура); ДВС-синдром; гипопромбинемический синдром;

-серонегативный АФС.

Антитела к кардиолипину

Это антитела к фосфолипидам (кардиолипину-дифосфатидилглицеролу) клеточных мембран, ведущий показатель наличия АФС у больных. Эти антитела взаимодецствуют с фосфолипидами мембран тромбоцитов, вызывая их разрушение и способствуя возникновению тромбозов и тромбоэмболий.

Определяют антитела классов IgG, IgA, IgM. Чаще встречаются антитела к акрдиолипину классов IgG и IgA, чем класса IgM.

Появляются при следующих заболеваниях: тромбоцитопения, гемолитичесеая анемия, аутоиммунные заболевания, СКВ, ревматоидный артрит, ревматизм, узелковый периартериит, инфаркт миокарда,инфекции, облитерирующий эндартериит, акушерская патология с развитием АФС.

Антитела к в-2 –гликопротеину

Для того чтобы прозошло взаимодействие АФЛА с фосфолипидами, небходимо присутствие кофактора - это в-2 –гликопротеин. Установлено, что присутствие в крови анител к в-2 –гликопротеину ассоциируется с развитием АФС.

Антитела к аннексину V

Причиной невынашивания беременности на поздних сроках при пргрессировании АФС является развитие тромботической васкулопатии спиральных артерий плаценты. Доказана роль аннексина V в генезе синдрома потери плода у больных АФС, снижение которого на поверхности ворсинок приводит к развитию тромбозов и инфарктов плаценты. Аннексин V , также известный как плацентарный антикоагулянтный протеин (PAP 1), принадлежит семейству кальций-зависимых белков, связывающих фосфолипиды, представлен во многих тканях, главным образом на эндотелиальных клетках и плацете. Обладает выраженныии антикоагулянтными свойствами. Исчезновение фосфолипидов с внутренней строны плазматической мембраны служит первым признаком апоптоза. При апоптозе фосфатидилсерин находится на наружной стороне клеточной мембраны, где связывается с аннексином V. Аннексин V покрывает фосфолипиды по типу ковра, оказывая местный антикоагулянтный эффект, во время физиологической беременности за счет длительного расположения аннексина V на поверхности трофобласта не происходит тромбообразования. У больных АФС вырабатываются аутоатнитела к этому белку, которые вытесняют аннексин V с поверхности эндотелиоцитов и клеток трофобласта, что приводит к гиперкоагуляции и потере беременности.

Гомоцистеин

Это серодержащая аминокислота,которая является промежуточным продуктом обменааминокислот метионина и цистеина. Ключевую роль в обмене гомоцистеина играют витамины В6, В12 и фолиевая кислота. Содержание гомоцистеина в плазме крови здорового человека составляет 5-15 мкмоль/л.

Гипергооцистеинэмия характерна для некоторых неврологических и психических расстройств (деменция типа Альцгеймера), сопровождается развитием втроричных аутоиммунных реакций и в настоящее время рассматривается как одна из причин антифосфолипидного синдрома. Неблагоприятное воздействие ГГЦ на стенку сосудов и тромбообразование способствует развитию акушерских патологий. На ранних сроках беременности это расстройства фетоплацентарного кровообращения, корорые приводят к бесплодию и невынашиванию беременности. В поздние сроки ГГЦ может стать причиной хронической гипоксии плода, которая приводит к внутриутробной гипотрофии и рождению детей с низким весом. ГГЦ может служить одной из причин ангиопатии второй половины беременности, которая лежит в основе гестоза: нефропатии, преэклампсии и эклампсии. Проникая через фетоплацентарный барьер в кровяное русло плода, гомоцистеин оказывает фетотоксическое и тератогенное действие, являясь одной из причин таких врожденных патологий плода, как анэнцефалия и незаращение спинно-мозгового канала.

Показания к определению уровня гомоцистеина:

- артериальные или венозные тромбозы;

- ишемическая болезнь сердца;

- подготовка к беременности женщин с акушерскими осложнениями в анамнезе;

- беременные с ярко выраженной преэклампсией;

- пациенты, перенесшие операцию на желудке.

6.6. Исследования иммунной системы

Цель данного блока исследований (чаще его называют иммунограммой) состоит в выявлении:

дефицита того или иного звена иммунной системы (диагностика иммунодефицитов);
нарушений регуляции между звеньями иммунной системы (ди-агностика аутоиммунных заболеваний);
иммунофенотипа опухолевых клеток из лимфоцитарного ростка и мониторинг за данными состояниями (диагностика лимфопроли-феративных заболеваний).

Иммунодефициты встречаются почти у 20% обращающихся в клинику пациентов. При этом большая их часть требует специального лечения у иммунолога. Особенно актуальна диагностика иммунодефицитов в педиатрии, пульмонологии, хирургии, оториноларингологии, онкологии. Обращаем внимание врачей, что основным показанием к назначению исследований иммунной системы является клиника иммунодефицита. Задача лаборатории состоит лишь в том, чтобы оценить звено, уровень поражения и оценить степень выраженности.

Клинические проявления иммунологической недостаточности можно сгруппировать в 4 синдрома:

инфекционный синдром (часто рецидивирующие и хронические инфекции лор-органов, трахеи, бронхов, ХНЗЛ, рецидивирующие бактериальные пневмонии, кандидоз трахеи и бронхов, язвенные или афтозные стоматиты, пиодермия и фурункулез, герпетическая инфекция, рецидивирующие острые и хронические двусторонние пиелонефриты);
лимфопролиферативный синдром;
аутоиммунный синдром;
аллергический синдром.

При иммунодефицитах различают несколько уровней поражения иммунной системы:

1. Дефицит Т- клеточного звена,

2. Дефицит В-клеточного звена – недостаточность всех или отдельных классов иммуноглобулинов, недостаточность субклассов иммуноглобулина класса G.

3. Дефицит киллерного звена.

4. Дефицит фагоцитарного звена.

5.Дефицит компонентов комплемента или естественных инактиваторов комплемента.

Диагностика лимфопролиферативных заболеваний

В группу лимфопролиферативных заболеваний (как проявление иммунологической недостаточности) входят опухоли из предшественников клеток иммунной системы – лимфомы, лимфосаркомы, лимфогранулематоз, острый и хронический лимфо-бластные и миелобластные лейкозы. Все случаи подобных заболеваний подлежат обязательному иммунологическому исследованию, как на предмет выраженности иммунодефицита, так и для точного иммунофенотипирования клеток опухоли (мониторинг за течением болезни и эффективности терапии).

Диагностика аутоиммунных заболеваний

Иммунологическая лаборатория может оказать лечащему врачу серьезную помощь как в диагностике, так и определении активности процесса, определение прогноза, слежение (мониторинг) за эффективностью лечения, определение риска развития аутоиммунных процессов у людей, имеющих родственников с аутоиммунными заболеваниями. На сегодняшний день высокоэффективные тесты разбросаны для ревматических поражений, аутоиммунных поражений щитовидной железы, антифосфолипидного синдрома и целого ряда органоспецифических аутоиммунных поражений (сердце, почки и т.п.).

Ниже приведены тесты, проводимые для диагностики состояния иммунной системы.

Основные исследования:

- определение субпопуляций лимфоцитов (проводятся с по мощью моноклональных антител, имеющих международную сертификацию на проточном лазерном цитофлюориметре, так называемым методом двойного иммуноанализа. Это позволяет с высокой специфичностью определять 5 субпопуляций лимфоцитов + незрелые тимоциты, маркеры ранней и поздней активации лим фоцитов, – определение концентрации трех классов иммупоглобулинов;

- исследование основных этапов фагоцитоза и определение функциональных резервов фагоцитоза (адгезия, молекулы адгезии на моноцитах, фагоцитоз, активность ферментов «дыхательного взрыва», т.е. завершенность фагоцитоза).

Дополнительные исследования:

- определение секреторного IgА в слюне;

- определение субклассов IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4; наиболее часто встречается именно дефицит субклассов иммуноглобулина G, а не общего количества этого иммуноглобулина. Особенно актуально их определение в педиатрии);

- определение компонентов комплемента (С1q, СЗ, С4, С1-инактиватора);

- определение активности альвеолярных макрофагов;

- определение общего иммуноглобулина Е;

- определение антител к нативной и денатурированной ДНК;

- определение органоспецифичных и органонеспецифических аутоантител;

- определение антител к кардиолипину;

- определение антител к фосфатидилсерину;

- определение антител к цитоплазме нейтрофилов.

6.7. МОЛЕКУЛЯРНО - ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ (ПЦР)

ПЦР является одним из методов ДНК-диагностики и позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать.

Преимущество ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний перед другими методами исследований:

Прямое определение наличия возбудителей

Многие традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что дает лишь опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции.

Высокая специфичность

Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от иммунологических методов анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами.

Высокая чувствительность

Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-анализ обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Чувствительность ПЦР-анализа составляет 10-100 клеток в пробе (чувствительность иммунологических и микроскопических тестов - 10³-10⁵ клеток).

Универсальность процедуры выявления различных возбудителей

Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это дает возможность диагностировать несколько возбудителей из одной биопробы. В качестве исследуемого материала могут использоваться различные биологические выделения (слизь, моча, мокрота), соскобы эпителиальных клеток, кровь, сыворотка.

Возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и персистирующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.

Перечень методик по ПЦР:

ПЦР хламидии трахоматис
ПЦР уреаплазма
ПЦР гарднерелла
ПЦР микоплазма гоминис
ПЦР микоплазма гениталиум
ПЦР трихомонада
ПЦР гонококк
ПЦР вирус гепатита В
ПЦР вирус гепатита С
ПЦР вирус гепатита Д
ПЦР генотипирование вируса гепатита С
ПЦР вирус простого герпеса (1 и 2 типов)
ПЦР вирус папилломы человека высокого канцерогенного типа
ПЦР вирус Эпштейн-Барр
ПЦР микобактерия туберкулеза
ПЦР токсоплазма гондии
ПЦР цитомегаловирус
ПЦР кандида альбиканс
ПЦР вирус герпеса 6 типа
ПЦР количественное определение вирусного гепатита С
ПЦР количественное определение вирусного гепатита В
ПЦР микоплазма ферментас
ПЦР микоплазма pneumonia
ПЦР хламидия psittaci
ПЦР хламидия pneumonia
Мутация протромбина
Мутация метилтетрафолатредуктазы
Мутация активатора плазминогена PAI-1
Мутация Лейдена
Полиморфизм гена цитохрома Р450(2аллеля)
Мутация гена МВТР (5 аллелей)

Диагностика микоплазмоза

ПЦР микоплазма гениталиум

ПЦР микоплазма хоминис
ПЦР уреплазма
ПЦР микоплазма ферментас
ПЦР дифференцирование уреаплазм (Parvum и Urealyticum T-960)
ПЦР микоплазма pneumonia

Материал: урогенитальные мазки, моча, синовиальная жидкость. Для обнаружения микоплазма pneumonia –мазок с задней стенки глотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, плевральная жидкость

Микоплазмы - это самые маленькие микроорганизмы, широко распространенные в природе и обитающие в организме человека. Особенностью микоплазм является отсутствие "жёсткой" клеточной стенки, а их плазматическая мембрана содержит антигены, сходные с человеческими. В последнее время стало известно, что уреаплазмы способны встраивать в свою оболочку антигены человеческих лимфоцитов. Шесть видов (Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma primatum, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma spermatophilum и Mycoplasma penetrans) колонизируют преимущественно половые пути. Известно, что М. hominis и U. urealyticum часто присутствуют в половых путях здоровых мужчин и женщин. Биологические особенности М. genitalium (способность прикрепляться к клеткам и возможная внутриклеточная локализация), а также результаты опытов на животных свидетельствуют о том, что этот микроорганизм обладает патогенным потенциалом. Данные, полученные в ходе исследований случай-контроль с участием мужчин с негонококковым уретритом (НГУ) и женщин с цервицитом, показали, что М. genitalium может вызывать заболевания так же, как Chlamydia trachomatis. При этом носительство М. genitalium не ассоциируется с хламидийной инфекцией. М. genitalium может считаться возбудителем уретрита у мужчин, причем в ряде случаев заболевание протекает в персистирующей или рецидивирующей форме. Урогенитальные инфекции, вызванные микоплазмами, могут быть острыми, хроническими и бессимптомными. Продолжительность инкубационного периода при остром микоплазмозе может колебаться от 3 дней до 3 -5 недель, иногда до 2 мес. Есть данные, что средняя продолжительность инкубационного периода при воспалении мочеиспускательного канала - уретры - составляет 19 дней. К хроническим могут быть отнесены, в частности, негонококковые уретриты, простатиты, воспаление семенных пузырьков, придатков яичка, мочевого пузыря, возможно развитие восходящей инфекции почек. Уреаплазмы, способные расщеплять мочевину, считаются фактором, вызывающим образованием мочевых камней в почках. Микоплазмы часто обнаруживают при хронических гинекологических заболеваниях: вагинитах, бартолинитах, цервицитах, эндометритах, воспалительных процессах в брюшной полости. В ассоциации с другой микрофлорой мико - и уреаплазмы участвуют в формировании бактериального вагиноза. Бессимптомные формы (или микоплазмоносительство) не сопровождаются реакцией организма в форме воспаления. При полноценном иммунитете носительство может продолжаться неограниченно долго без отрицательных последствий для организма, в котором микоплазмы персистируют (но носитель может быть источником передачи инфекции половым партнёрам. При ослаблении иммунитета (причины которого могут быть различными - неполноценное питание, переохлаждение, стресс, общее заболевание, беременность, роды, аборты и т.д.) носительство перестаёт быть бессимптомным, появляются признаки воспаления и развивается заболевание. Есть данные, что приблизительно 40% всех воспалительных заболеваний мочеполовых органов вызываются микоплазмами. Адаптируясь к длительному существованию в условиях конкретного организма, мико - и уреаплазмозы трудно поддаются лечению, часто рецидивируют, приводят к осложнениям. Микоплазма ферментас – представитель рода Mycoplasma, обладает всеми патогенными свойствами данных возбудителей (паразитирование на мембране клеток эукариот, снижение иммунитета, токсическое воздействие на организм хозяина). Данный инфект может вызывать воспалительные заболевания урогенитального тракта, верхних и нижних отделов дыхательных путей, суставов, патологию беременности и плода, а также может провоцировать развитие аутоиммунных заболеваний. Метод ПЦР является основным методом определения микоплазмы ферментас в биологическом материале. Микоплазма pneumoniae – главная причина атипичной пневмонии и составляет 30% всех пневмоний, ассоциируется с нереспираторными заболеваниями, такими, как менингиты, энцефалиты, панкреатиты, потеря слуха. Для выявления непосредственно возбудителя (ДНК) в мокроте и в материале с задней стенки глотки применяется метод полимеразной цепной реакции, являющийся наиболее чувствительным, специфичным и экономически более выгодным по сравнению с культуральным.

Диагностика трихомониаза

ПЦР трихомонада

Материал: урогенитальные мазки, моча

Урогенитальный трихомониаз - широко распространенное инфекционное воспалительное заболевание, передаваемое половым путем, вызывается простейшим Trichomonas vaginalis. Основными очагами поражения при урогенитальном трихомониазе являются мочеиспускательный канал у мужчин, влагалище и уретра у женщин. В связи с многоочаговостью трихомонадной инфекции при постановке диагноза следует указывать локализацию поражения. У женщин в воспалительный процесс могут вовлекаться большие вестибулярные и парауретральные железы, шейка матки. Трихомонады обнаруживаются в полости матки, в сактосальпинксах, кистах яичников. Имеются сообщения о связи урогенитального трихомониаза с осложнениями беременности (преждевременные роды, ранний разрыв плодного пузыря и др.). Клиническая картина неосложненного урогенитального трихомониаза у женщин характеризуется наличием воспалительного процесса во влагалище и влагалищной части шейки матки. В дальнейшем может присоединиться вестибулит, парауретрит, эндоцервицит, эндометрит и др., что рассматривается, как осложненное течение заболевания. У мужчин трихомонады могут вызывать поражение предстательной железы, семенных пузырьков, придатков яичек, куперовых желез. Может развиваться восходящая инфекция мочевыводящих путей и почек (цистит, пиелит, пиелонефрит). Осложнения при трихомонадных уретритах у мужчин встречаются чаще, чем при гонорее. Клиническая картина трихомонадных простатитов, везикулитов, эпидидимитов отличается от таковой гонорейной этиологии, протекающей, как правило, более бурно. При затяжном течении возможно образование одиночных или множественных стриктур уретры. У девочек урогенитальный трихомониаз протекает с поражением вульвы и влагалища.

Диагностика гонореи

ПЦР гонококк

Материал: урогенитальные мазки

Neisseria gonorrhoeae - грамотрицательный диплококк, тропный преимущественно к эпителиальным клеткам слизистых оболочек мочеполовых органов, является возбудителем гонореи и относится к заболеваниям, передаваемым половым путем (ЗППП). В последнее время клиническая картина заболевания претерпела существенные изменения (торпидное течение; отсутствие манифестных форм; возрастание частоты регистрации штаммов Neisseria gonorrhoeae с устойчивостью к основным антибиотикам и др.), что может приводить к установлению ошибочного диагноза. В этой связи, перспективным методом детекции Neisseria gonorrhoeae представляется метод ПЦР, способный выявлять минимальное количество микроорганизмов в анализируемом материале, благодаря многократной наработке числа копий заданного участка ДНК в присутствии фермента Taq-полимеразы. Полимеразная цепная реакция обладает рядом особенностей, позволяющей ей занять достойное место среди других методов диагностики гонорейной инфекции, а в ряде случаев (хроническая инфекция , стертая клиническая картина, прием антибиотиков ) может служить единственным инструментом, способным обнаружить Neisseria gonorrhoeae.

Диагностика вирусных гепатитов

ПЦР вирус гепатита G

Материал: плазма крови

Вирус гепатита G (ВГG)- это РНК-содержащий вирус. Источник инфекции – больные острыми и хроническими формами ГG. Механизм передачи- парэнтеральный, чаще при переливании крови и ее препаратов, у наркоманов, при татуаже.

Клинические проявления менее выражены чем при остром гепатите С. Исход заболевания -выздоровление и формирование хронической формы инфекции. При сочетании с гепатитами В, С и Д повышается риск развития цирроза печени и первичного рака печени.

Диагностика основана на обнаружении РНК гепатита G методом ПЦР.

ПЦР вирус гепатита TTV

Материал: плазма крови

TTV - ДНК-содержащий вирус. Выявляется у пациентов с заболеваниями печени с неизвестной этиологии, при фульминантной форме гепатита и циррозе печени примерно в 15-25 % случаев.

Передается фекально-оральным путем, половой и инъекционный пути передачи не являются основными.

ДНК TTV выявляют с помощью метода ПЦР в плазме крови и лейкоцитах.

ПЦР вирус гепатита D

Материал: плазма крови

Вирус гепатита D выявляют как суперинфекцию при гепатите В, обусловленную вирусом, который не может существовать самостоятельно и способен инфицировать только носителя вируса гепатита В. Не экспрессируется на поверхность гепатоцитов, не принимает участие в Т-клеточном иммунном ответе. Обладает прямой цитотоксичностью. Чаще всего выявляется у наркоманов. Течение заболевания носит, как правило, фульминантный характер. Выявление РНК вируса в крови методом ПЦР служит свидетельством активной инфекции и подтверждает диагноз в сомнительных случаях.

ПЦР вирус гепатита С

ПЦР генотипирование HCV(1а,1в,2,3а)

ПЦР количественное определение вируса гепатита С

Обнаружение ВГС в крови с использованием ПЦР - более информативный метод диагностики Выявление РНК вируса свидетельствует о виремии, позволяет судить о репликации вируса в организме и является одним из критериев противовирусной терапии. Обнаружение РНК ВГС на ранних этапах развития вирусной инфекции на фоне полного отсутствия серологических маркёров может служить самым ранним свидетельством инфицирования. Метод ПЦР позволяет установить генотип ВГС. Определение генотипа вируса имеет большое значение для подбора схемы лечения и его продолжительности. Пациенты с генотипами 2 и 3 более чувствительны к лечению, чем с генотипом 1.Количественное определение РНК ВГС имеет важное значение для контороля за лечением а-интерфероном. Показано, что наиболее благоприятный прогноз заболевания и наибольшую вероятность ответа на противовирусную терапию имеют лица с низким уровнем виремии (30000 коп/мл). При эффективном лечении уровень виремии снижается.

Устойчивый вирусологический ответ (отсутствие РНК ВГС в крови) - это оптимальный критерий эффективности лечения.

ПЦР вирус гепатита В

ПЦР количественное определение вируса гепатита В

Примерно 5-10% случаев цирроза и других заболеваний печени обусловлены хроническим носительством ВГВ. Маркёром активности таких заболеваний является ДНК вируса гепатита В в крови. ПЦР позволяет определять ДНК ВГВ как качественно, так и количественно. Качественное определение позволяет подтвердить наличие вируса в организме. Количественный метод даёт важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к антивирусным препаратам. Вирусная ДНК в крови обнаруживается у 50% больных при отсутствии HBeAg.Существует зависимость между исходом острого ВГВ и концентрацией ДНК вируса в крови больного. При высоком уровне виремии острый ВГВ чаще всего переходит в хронический.

Диагностика кандидоза

ПЦР кандида альбиканс

Материал: урогенитальный мазок

Урогенитальный кандидоз - грибковое заболевание слизистых оболочек и кожи мочеполовых органов, вызываемое дрожжеподобными грибами Candida. Это заболевание является достаточно частым, протекает хронически и склонно к рецидивам. Возбудителем является Candida albicans, который распространяются половым путем, при этом определенную роль играют различные факторы: физиологические состояния организма (возраст, гормональный статус, например беременность), наличие эндокринологического заболевания (диабет, ожирение, синдром Кушинга, полиэндокринопатия, гипотиреоз), новообразования, инфекционные заболевания, истощение, медикаментозные факторы: антибиотики, кортикостероиды, цитостатики, оперативные вмешательства, применение гормональных контрацептивов.

Диагностика токсоплазмоза

ПЦР токсоплазма гондии

Материал: плазма, цельная кровь, биоптаты, спинномозговая жидкость.

Токсоплазмоз, паразитарное заболевание человека и животных, вызываемое токсоплазмами. Токсоплазмы (Toxoplasma), род паразитических простейших, включающий один достоверный вид - Т. gondii. Изучение жизненного цикла и ультраструктуры Т. gondii показало, что они относятся к отряду кокцидий. Источник инфекции - различные виды (свыше 180) домашних и диких животных (собаки, кошки, кролики; хищники, травоядные, грызуны и др.) и птиц. Заражение человека происходит при употреблении мясных продуктов и яиц, не прошедших достаточную термическую обработку. Не исключена возможность заражения при попадании возбудителя на слизистые оболочки и поврежденные кожные покровы, трансмиссивным и др. путём. Наблюдается и внутриутробное заражение. Различают врождённый и приобретённый (острый и хронический) токсоплазмоз. При врождённом наблюдаются гибель плода в утробе матери, смерть новорождённого в результате общей инфекции или (у оставшихся в живых) поражение нервной системы, глаз и др. органов. Острая приобретённая форма протекает как тифоподобное заболевание (с высокой температурой, увеличением печени, селезёнки) либо с преимущественным поражением нервной системы (головная боль, судороги, рвота, параличи и др.). Чаще токсоплазмоз протекает хронически, с субфебрильной температурой, головной болью, увеличением лимфоузлов и печени, понижением работоспособности; может сопровождаться поражением глаз, сердца, нервной и др. систем и органов. Заболевание может протекать и в латентной (скрытой) форме. Для распознавания используют методы серодиагностики и внутрикожную аллергическую пробу, ПЦР диагностика позволяет определить наличие в организме живого паразита по присутствию его ДНК в клиническом образце.

Диагностика герпетической инфекции

Материал: урогенитальные мазки, плазма, цельная кровь, слюна, моча, спинномозговая жидкость

ПЦР цитомегаловирус

Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВ) - антропонозное вирусное инфекционное заболевание. Характеризуется преимущественно латентным течением у взрослых, а также генерализированной формой с поражением нервной системы и внутренних органов при внутриутробном заражении плода. Возбудитель - ДНК-содержащий вирус. Резервуар и источники возбудителя: человек, больной острой или латентной формой заболевания. Период заразительности источника может длиться месяцы и даже годы в связи с латентным сохранением возбудителя в организме. Механизм передачи возбудителя аспирационный; путь передачи - воздушно-капельный, так как возбудитель выделяется со слюной. Возможен контактный путь передачи через контаминированные инфицированной мочой объекты, половой путь. Доказана возможность трансплацентарной передачи возбудителя, а также передачи при трансплантации почек или сердца; не исключена возможность передачи вируса переливании крови инфицированного донора. Цитомегаловирусной инфекции принадлежит основная роль среди всех видов перинатальной патологии, она может быть причиной недоношенности, мертворождаемости, врожденных дефектов развития. У детей старшего возраста и взрослых цитомегаловирусная инфекция в основном наблюдается как сопутствующее заболевание при процессах, сопровождающихся иммунодепрессивным состоянием организма. Различают приобретенную и врожденную формы цитомегаловирусной инфекции. Приобретенная цитомегаловирусная инфекция может протекать в латентной (локализованной) и генерализованной формах. Латентная форма обычно не проявляется четкими клиническими симптомами, иногда наблюдаются легкие гриппоподобные заболевания. Генерализованная форма в виде вяло текущей интерстициальной пневмонии. Врожденная цитомегаловирусная инфекция в большинстве случаев проявляется острой формой в виде поражения печени, головного и костного мозга, геморрагического синдрома, анемии, эритробластоза; как правило, заболевание заканчивается гибелью плода, а в случае выздоровления приводит к микроцефалии, двигательным расстройствам, замедленному умственному развитию

ПЦР вирус Эпштейн-Барр

Вирус Эпштейна - Барр является ДНК содержащим вирусом. Вирус Эпштейна -Барр является причиной инфекционного мононуклеоза, состояния клинически схожего с абортивным течением лимфомы. Первичная инфекция, вызванная вирусом Эпштейна - Барр, может отмечаться в детском, подростковом или взрослом возрасте; примерно 50% детей переболевают до 5 лет, у большинства из них инфекция протекает субклинически. У взрослых и подростков, в зависимости от различных факторов, она может протекать как субклинически, так и в виде явного клинического синдрома (инфекционный мононуклеоз, синдром хронической усталости). С вирусом Эпштейна - Барр связаны некоторые В-клеточные новообразования. В 90% случаев инфекция протекает бессимптомно. Большинство людей к началу взрослого возраста уже инфицированы. После первичного инфицирования вирус Эпштейна—Барр остается в организме пожизненно. 15-25% здоровых ВЭБ-позитивных взрослых выделяют вирус из ротоглотки. Передача вируса может осуществляться при переливании препаратов крови, но наиболее часто она происходит при непосредственных контактах слизистой рта (поцелуях) между неинфицированными и ВЭБ-позитивными лицами.

ПЦР вирус герпеса 1, 2 типа

Вирусы простого герпеса подразделяются на 2 типа – вирус первого типа обусловливает преимущественно поражение органов дыхания (лабиальный, т.е. локализованный на губах), а с вирусом второго типа связано возникновение генитального герпеса у взрослых и генерализованная герпетическая инфекция новорожденных. У 80-90% взрослого населения обнаруживаются антитела к вирусу, что свидетельствует если и не о хроническом носительстве этих вирусов (чаще всего), то, по крайней мере, о контакте с ними. Наиболее важным биологическим свойством герпесвирусов в патогенезе заболеваний является их способность к латентному существованию. Герпесвирусы способны пожизненно персистировать в организме человека и вызывать заболевания с многообразными клиническими проявлениями: острые и хронические рецидивирующие инфекции с поражением кожных покровов и слизистых оболочек, внутренних органов, центральной нервной системы; лимфопролиферативные заболевания. Герпетическая инфекция может приобретать крайне тяжелые формы, если она протекает на фоне иммунодефицитных состояний, к числу которых относится беременность. А если учесть, что клинические проявления герпеса имеют место только в одном из четырех случаев обнаружения серологических признаков ВПГ-2 (по исследованиям, проведенным в США), становится понятным особый интерес к изучению проблемы генитального герпеса во время беременности. Несмотря на то, что инфицирование новорожденного ВПГ-2 от матери происходит достаточно редко (в среднем 1:5000 родов), тяжесть проявлений неонатального герпеса и неблагоприятный прогноз для новорожденного делают актуальной эту проблему. Наиболее часто (85%) инфицирование новорожденного происходит интранатально (при прохождении родового канала), независимо от того, имеются в данный момент очаги повреждения в области шейки матки и вульвы или нет (при бессимптомном выделении вируса). Инфекция у новорожденных протекает тяжело с распространенными поражениями кожи, слизистых оболочек ротовой полости, глаз и головного мозга. Часто поражаются и внутренние органы – печень, легкие. Наиболее точное диагностирование для выявления герпеса на сегодняшний день возможно в лабораториях, оснащенных оборудованием для проведения ПЦР. В различных вариантах этот метод позволяет не только обнаружить наличие вируса в образце, но и определить его активность.

ПЦР вирус герпеса 6 типа

ВГЧ-6 репродуцируется в Т -, В-лимфоцитах и макрофагах, в большей степени поражая Т-лимфоциты. Имеет тропизм к глиальным клеткам. Описано два подтипа ВГЧ-6 - А и В, отличающиеся генетически и эпидемиологически: более распространен подтип В, подтип А чаще обнаруживают у пациентов с иммунодефицитом. Механизм и пути передачи изучены недостаточно. В естественных условиях инфекция распространяется воздушно-капельным и орально-оральным путями, поскольку ВГЧ-6 постоянно обнаруживают в носоглоточной слизи и слюне инфицированных лиц. Возможно заражение при гемотрансфузиях, трансплантации органов, при использовании медицинских инструментов, контаминированных вирусом. Имеются сообщения о случаях заражения наркоманов, а также медицинских работников при случайных уколах иглой, содержащей кровь инфицированных или больных. У подавляющего большинства зараженных ВГЧ-6 формируется латентная инфекция. Однако описаны заболевания и клинические синдромы, которые связывают с этиологической ролью ВГЧ-6. Так, воздействием ВГЧ-6В обусловлено развитие внезапной экзантемы, мононуклеозоподобного синдрома, острого лихорадочного заболевания. С ВГЧ-6А ассоциированы: синдром хронической усталости, энцефалит у лиц с иммунодефицитным состоянием, некоторые виды лимфом и др. Внезапная экзантема - распространенное детское заболевание в возрасте от 4-5 мес до 3 лет, характеризующееся острым началом, иногда подъемом температуры до 39 °С и умеренно выраженной интоксикацией в последующие дни. На 4-й день болезни температура снижается, одновременно или через несколько часов появляется сыпь в виде дискретных бледно-розовых элементов диаметром 2-5 мм.
Обычно высыпания появляются сначала на спине, а затем на животе, груди, разгибательных поверхностях конечностей. На лице сыпь встречается редко. Через 2-3 дня сыпь исчезает, не оставляя следов.

Мононуклеозоподобный синдром. Предполагают, что до 30% случаев инфекционного мононуклеоза, серонегативного по антителам к ВЭБ, обусловлены ВГЧ-6. Предполагается, что ВГЧ-6 может вызывать гистиоцитарный некротический лимфаденит, энцефалит с судорожным синдромом и фульминантный энцефаломиелит при первичном инфицировании лиц с тяжелыми иммунодефицитами. Кроме того, у реципиентов различных органов ВГЧ-6 может вызывать гепатит, лейкопению, интерстициальную пневмонию, менингоэнцефалит. Имеются косвенные данные о роли ВГЧ-6 в развитии как доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний (лимфаденопатия и др.), так и злокачественных лимфом.

Диагностика хламидиоза

ПЦР хламидия трахоматис

Материал: урогенитальный мазок

Хламидиоз является самым распространённым заболеванием, передающимся половым путём, вызывается хламидиями (вид Chlamidia trahomatis), поражает урогенитальный тракт и другие органы. Последствиями поражения хламидиями являются воспалительные заболевания мочеполовой системы у мужчин и женщин, часто развивающиеся бесплодие, внутриутробное инфицирование плода, если хламидиями инфицирована беременная женщина, а также артриты, конъюнктивиты, пневмонии. Хламидии могут поражать многие органы и системы: органы зрения, дыхательные пути, мочеполовую систему, сердечно-сосудистую систему, центральную нервную систему, печень, желчевыводящие пути, лимфатические узлы, суставы и пр. Особенностью хламидий является то, что они развиваются только в цилиндрическом эпителии (плазматическом эпителии), поэтому поражаются органы, покрытые этим эпителием. Хламидии поражают слизистую оболочку уретры, канала шейки матки, маточных труб и приводят не только к воспалительным процессам, но и к их хронизации с последующими осложнениями, наиболее грозным из которых является бесплодие. Хламидии относятся к безусловно патогенным для человека микроорганизмам, а урогенитальный хламидиоз — к наиболее распространенным заболеваниям, передаваемым половым путем (венерическим заболеваниям) Хламидиоз выявляется у каждой второй женщины с хроническими воспалительными заболеваниями урогенитальной сферы, у 57% женщин, страдающих бесплодием, у 87% женщин, у которых отмечается невынашивание беременности! Для хламидиоза характерна стёртость клинических проявлений. Может присутствовать болезненное и учащённое мочеиспускание, зуд, боли внизу живота наличие слизистых или слизисто-гнойных выделений из уретры и цервикального канала, а также фолликулярные образования на шейке матки (фолликулярный цервицит). Первоначальным очагом инфекции чаще всего является слизистая уретры у мужчин и канала шейки матки у женщин. Во многих случаях заболевание может длительно протекать бессимптомно. Опасность хламидиоза заключается в том, что, длительно существуя, он приводит к осложнениям, наиболее частыми из которых являются:

•    у мужчин - простатит, цистит, везикулит, бесплодие, уретрит, эпидидимит, реже - проктит.

•    у женщин - эрозия шейки матки, вагинит, бесплодие, цервицит и его осложнения: сальпингит и сальпингоофорит.

•    при беременности - хламидии повреждают многие системы формирующегося плода;

• при инфицировании в родах - резко повышают угрозу пневмонии и коньюнктивита у новорожденных. Характерно, что хламидийная инфекция не приходит одна. Моноинфекция встречается значительно реже, чем ассоциация нескольких возбудителей. Для хламидиоза характерен тандем с гонореей. Из других распространенных микробных ассоциаций можно назвать триаду гарднерелла - микоплазма хоминис - уреаплазма при бактериальном вагинозе. Сочетания инфекций обусловлены тем, что имеющиеся у больного хламидиозом серьезные иммунные нарушения дают возможность и многим другим вирусным и бактериальным инфекциям функционировать на организме. В настоящее время установлено, что в результате хламидийной инфекции происходят дальнейшие нарушения как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета, приводящие к хронизации инфекции и развитию различных осложнений, в том числе заболеваний внутренних органов и суставов. Диагностика хламидиоза с помощью ПЦР - наиболее чувствительный и специфичный метод из всех, которые используются в лабораториях в настоящее время. Особенно применим для разрешения сомнительных результатов других методов исследования, контроля эффективности лечения, подозрении на ассоциативную инфекцию.

Диагностика гарднереллёза

ПЦР гарднерелла

Материал: урогенитальный мазок

Гарднерелла (Gardnerella vaginalis) - условно - патогенный микроорганизм, считающийся возбудителем гарднереллеза. Некоторые исследователи придерживаются мнения, что, обитая во влагалище многих женщин, саму по себе гарднереллу не стоит считать опасной, однако при факторах, снижающих общее состояние организма, она начинает активно размножаться, а вызванные этим нарушения микрофлоры способствуют развитию микроорганизмов с более высоким патогенным уровнем. Продукты жизнедеятельности этих условно-патогенных микроорганизмов превращают кислую среду влагалища в щелочную, что является благоприятным условием активного размножения болезнетворных инфекций и развития воспалительных процессов наружных половых органов, а также органов малого таза. Гарднереллез (бактериальный вагиноз) - это распространенное среди женщин детородного возраста инфекционное заболевание, возбудителем которого является ссылка скрыта. Размножение бактерий приводит к нарушению баланса микрофлоры влагалища, часто этому сопутствуют вторичные инфекции, передаваемые половым путем. К факторам риска развития гарднереллеза относятся: активная сексуальная жизнь, недавняя смена полового партнера сопутствующие инфекционные заболевания, особенно венерические, использование методов контрацепции местного действия (свечи, вагинальные таблетки, спринцевания и др.), длительное лечение антибиотиками, нарушения гормонального фона, общее снижение иммунитета. Мужчины чаще всего являются носителями этого заболевания, не страдая им, однако известны случаи, когда гарднерелла становилась причиной развития воспалительных процессов мочеиспускательного канала. Среди наиболее частых последствий, и для женщин, и для мужчин, называют такие серьезные осложнения, как развитие воспалительных процессов мочеполовых органов, а также бесплодие. Беременные женщины подвержены риску преждевременных и осложненных родов, при которых достаточно велика опасность инфицирования плода, развития у него пневмонии, менингита и других заболеваний.

Диагностика папилломавирусной инфекции

ПЦР вирус папилломы высокого канцерогенного риска

Материал: урогенитальный мазок

Вирус папилломы человека (ВПЧ) является ДНК-содержащим вирусом, имеет форму икосаэдра, состоящего из 72 капсомеров. Принадлежит к семейству Papovaviridae. Обладает тропностью к эпителиальным клеткам человека (клетки кожи и слизистых оболочек). Геном вируса состоит из двухспиральной скрученной ДНК в виде кольца. Отличительной особенностью ВПЧ является его тканевая специфичность. Изучено около 100 типов вируса папиллом человека, каждый из которых поражает определенные ткани. Также определенные типы являются высокоонкогенными, среднеонкогенными и низкоонкогенными. Под онкогенностью ВПЧ понимают его способность вызывать трансформацию инфицированного вирусом эпителиального пласта в рак. Типы вируса папилломы человека обозначаются цифрами. К вирусам низкого онкогенного риска относят 6, 11, 42, 43, 44 и 73 типы. Вирусы типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 отнесены к опасным видам способными, при определенных условиях, вызвать злокачественный процесс. Самыми неблагополучными типами являются 16 и 18 тип ВПЧ. Они ответственны за развитие плоскоклеточного рака шейки матки и аденокарциномы, соответственно. ВПЧ не размножается в культуре клеток. Внедрение вируса происходит в базальные клетки эпидермиса, а также клетки слизистой оболочки, где происходит накопление вируса и его репликация. Далее наступает персистенция вируса в различных слоях эпителиальной ткани с последующим включением механизмов канцерогенеза.

Папилломавирусная инфекция – это распространенное вирусное заболевание, возбудителем которого является ВПЧ. Носителями считается большинство здоровых людей, при этом часто без выраженных симптомов, однако в ряде случаев наблюдаются образования (бородавки, ссылка скрыта, папилломы) на различных участках кожи, слизистых оболочках. Заражение папилломавирусом, обитающим в крови человека, происходит достаточно легко, в том числе и контактно-бытовым путем: при использовании общих средств личной гигиены, при соприкосновении с кожей, слизистой больного или носителя, особенно поврежденными участками. Чрезвычайно распространена передача вируса половым путем, кроме того, велик риск внутриутробного заражения. Методом обнаружения вируса папилломы человека и оценки эффективности лечения является ПЦР.

Диагностика туберкулёза

ПЦР микобактерия туберкулёза

Материал: мокрота, моча, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж и пр.

В отличие от серологических методов диагностики туберкулёза, где выявляются антитела к микобактерии туберкулёза, ПЦР позволяет обнаружить непосредственно ДНК микобактерий в исследуемом материале. Тест имеет видовую специфичность и высокую чувствительность (95%) в отличие от микробиологических методов, имеющих чувствительность 50%. Для детекции ДНК достаточно, чтобы в материале было около 10 микобактерий. Обнаружение ДНК микобактерии туберкулёза с помощью ПЦР необходимо для: быстрого обнаружения источника инфекции, диагностики легочного туберкулёза и туберкулёза внелегочной локализации, контроля эффективности лечения, раннего выявления случаев рецидива.

Диагностика полиморфизмов в геноме человека

Материал: цельная кровь

Blog

Методические рекомендации по методикам исследований, проводимым в Диагностическом центре Алтайского края Барнаул 2009