Методические рекомендации по методикам исследований, проводимым в Диагностическом центре Алтайского края Барнаул 2009
| Вид материала | Методические рекомендации |
- Заместитель Губернатора Алтайского края, председатель комитета администрации Алтайского, 315.23kb.
- Развития алтайского края, 1819.61kb.
- Принят Постановлением Алтайского краевого закон, 58.52kb.
- Воспитание гражданина, 702.38kb.
- Алтайский край закон об административной ответственности за совершение правонарушений, 535.17kb.
- Администрация алтайского края управление алтайского края по развитию предпринимательства, 10.04kb.
- Алтайского края, 2052.16kb.
- Алтайского края, 2447.61kb.
- 18 декабря 2011 года состоялся Второй открытый чемпионат Смоленского района по скоростному, 17.19kb.
- А. И. Ломакина Об итогах работы управления Алтайского края по культуре, управления, 666kb.
Серологические признаки стадий инфицированности вирусом гепатита В
| Стадия инфекции | HBsAg | HBeAg | Anti HBcIgM | Anti-HBc(общие) | Anti-HBe | Anti-HBs |
| Острая (ранная) | + | + | + | + | - | - |
| Острая (разрешающаяся) | + | - | + | + | +или- | - |
| Хроническая (высокая инфекционность) | + | + | - | + | - | - |
| Хроническая (низкая нинфекционность) | + | - | - | + | +или- | - |
| Излечение (иммунитет) | - | - | - | + | +или- | +или- |
| Успешная вакцинация | - | - | - | -- | | + |
Количественное определение анти-НВs
Анти-НВs –это протективные антитела к поверхностному антигену гепатита В (НВV). Они указывают на перенесенную инфекцию или наличие поствакцинальных антител (их защитный титр от НВV –инфекции >10 МЕ/л)
Обнаружение в первые недели ГВ прогнозирует развитие гипериммунного варианта фульминантного ГВ.
Иммунологическая диагностика гепатита С
Только в 1989 г. был идентифицирован вирус гепатита С как главный этиологический агент посттрансфузионных гепатитов. Благодаря многолетним исследованиям удалось разработать тест-систему для обнаружения методом иммуноферментного анализа (ИФА) специфических антител к вирусу гепатита С. Исследования показали, что это мелкий РНК-содержащий вирус, который может заразить человека только через кровь. Источником инфекции являются больные вирусом гепатита С, прежде всего с хроническим течением заболевания и хронические носители этого вируса. В основе генетической вариабельности лежит отсутствие редактирующей активности вирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы, вследствии чего происходит накопление мутаций в процессе вирусной репликации. Точно установлено, что передача вируса гепатита С связана с парентеральным механизмом передачи: в медицинских учреждениях при переливании крови до введения контроля за донорами, через инъекционное оборудование до введения одноразовых шприцев, игл, катетеров. Там, где продолжают повторно использовать плохо простерилизованные медицинские инструменты, продолжается распространение гепатита С. Высокая опасность этого пути подтверждается распространением этого гепатита среди наркоманов. Весьма вероятна передача этого вируса во время выполнения татуировки, при акупунктуре и любых повреждениях целостности кожных покровов нестерильными инструментами. Хотя передача вируса гепатита С половым путем происходит относительно редко, но из-за большого числа половых контактов между партнерами общее число новых случаев заражения достаточно велико. Хронический гепатит С может развиться примерно у 10 % детей, которые были рождены женщинами, инфицированными вирусом гепатита С. Важнейшей особенностью и опасностью гепатита С является многолетнее малосимптомное течение. Очень часто этот гепатит не распознается, но потом заболевание быстро заканчивается циррозом и раком печени. Острая фаза большей частью остается нераспознанной. Самочувствие больных удовлетворительное, жалобы не возникают, сохраняется трудоспособность, желтухи нет. Но уже в это время может быть выявлено небольшое увеличение печени, а через 7 - 8 недель после заражения в крови повышается концентрация АлАТ. Позже, через 5 - 50 недель в крови обнаруживаются специфические антитела. Именно поэтому при однократном исследовании часто дается отрицательный ответ. Даже в остром периоде заболевания клиническая симптоматика остается скудной. Больные отмечают слабость, вялость, быструю утомляемость, ухудшение аппетита, иногда ощущение тяжести в правом подреберье. Форма болезни чаще безжелтушная, реже с желтухой малой интенсивности. Признаки интоксикации выражены незначительно, течение болезни легкое. Закономерно повышается АлАТ, чаще с повторными пиками; реже этот фермент бывает повышен постоянно. Степень повышения большей частью значительная, превышая нормальные значения в 5-10 и более раз. При желтушной форме повышение уровня ферментов сочетается с небольшим увеличением содержания общего и прямого билирубина. Острый, латентный или клинически выраженный вирусный гепатит С может закончиться выздоровлением с элиминацией вируса из организма. Этому обычно соответствует и нормализация АлАТ. Но часто повышенный уровень этого фермента сохраняется. И, наоборот, нормальный уровень АлАТ необязательно свидетельствует об исчезновении вирусемии. У больше части больных острая фаза сменяется скрытой (латентной) с многолетним, до 20 лет, течением инфекционного заболевания, хотя инфицированные лица часто считают себя здоровыми. Периодически повышается АлАТ. Анти - HCV периодически исчезают, затем появляются вновь. Это с трудностью выявления низких концентраций, что заставляет производить повторные исследования. Хронический гепатит представляет основную клиническую форму гепатита С. Он нередко первоначально проявляется повышением уровня ферментов, хотя другие проявления болезни еще могут отсутствовать. Затем больные начинают жаловаться на быструю утомляемость, слабость, недомогание, снижение трудоспособности, нарушение сна, ухудшение аппетита, похудание. Основным объективным признаком является увеличение и уплотнение печени, нередко в сочетании с увеличением селезенки. Эта фаза заболевания протекает преимущественно без желтухи. Иногда отмечается повторный субфебрилитет. Характерны обострения, всегда знаменующиеся дальнейшим повышением АлАТ. Причем колебания АлАТ в мере соответствуют уровню вирусемии. Содержание Гамма-ГТ и гаммаглобулина закономерно повышается. Анти - HCV стабильно положительны. В преимущественном формировании цирроза печени определенное значение имеет наличие сопутствующей патологии, в частности, хронического алкогольного поражения печени. Прогностическое значение имеет повышения АсАТ с увеличением коэффициента АсАТ/АлАТ. Вирус гепатита С является важнейшей причиной возникновения рака печени. Достоверность диагноза существенно повышается при комплексной оценке анти - HCV с определением ферментов, обязательно в условиях динамического контроля. Оценка результатов только одноразовых исследований не всегда убедительна. В латентную фазу анти - HCV класса IgM практически не улавливаются. Они вновь появляются во время обострений, большей частью в сочетании с повышением АлАТ. Динамический контроль за АлАТ существенно дополняет оценку динамики анти - HCV и является важным критерием характеристики течения болезни. Сегодня наиболее распространенным методом этиологической диагностики вирусного гепатита С является ИФА. Однако, даже при использовании тест-систем 3-го поколения, не всегда удается своевременно поставить диагноз. Это обусловлено существованием так называемого “серологического окна” - периода между моментом инфицирования и появлением специфических антител. Этот период может длиться от 2 недель до 6 месяцев. Использование ПЦР тест-систем для выявления РНК ВГС позволяет выявить инфекцию на самых ранних этапах болезни. При хроническом вирусном гепатите С критериями успешного лечения являются: благополучная динамика клинических данных: уменьшение размеров печени, ликвидация желтухи (при желтушных формах), нормализация показателей АлАТ, уменьшение морфологических изменений в печени. Повышение невосприимчивости населения к вирусу гепатита С пока не получило решения. Трудности создания вакцины против HCV определяются неоднородностью этого вируса, огромным количеством генотипов и субтипов. Нерешенность проблемы терапии вирусного гепатита С обуславливает первостепенное значение предупреждения его развития и необходимость ранней лабораторной диагностики. Одним из наиболее перспективных подходов является ПЦР диагностика, имеющая в качестве мишени непосредственно РНК вируса в консервативных участка генома и независящая от иммунного состояния организма и изменчивости белковых структур вириона. Появившиеся в последние годы антивирусные препараты новых поколений (в том числе и различные формы рекомбинантного интерферона) выявили неоднозначное отношение различных генотипов возбудителя гепатита С к лечению. Для наиболее эффективного лечения гепатита С дорогостоящими препаратами необходим мониторинг вирусной нагрузки и генотипирование возбудителя гепатита С . Генотипы HCV при хроническом гепатите разной степени тяжести
Диагностика заболеваний, вызванных простейшими и гельминтами
Лямблиоз
Лямблиоз – кишечное заболевание, вызываемое протозойным паразитом Giardia Lamblia .
Острые симптомы лямблиоза могут включать в себя диарею, нарушение всасывания, спазмы кишечника, анорексию, тошноту, потерю веса, общую слабость, зачастую на фоне нормальной температуры тела, продолжающуюся от нескольких недель до нескольких месяцев. Хроническая инфекция может протекать и без острой фазы и часто является следствием безуспешного лечения, приводящего к рецидивам заболевания.
Для диагностики лямблиоза используют определение в кале методом ИФА специфического антигена GSA 65, продуцируемого в больших количествах во время размножения Giardia Lamblia в кишечнике хозяина. GSA 65 является специфическим антигеном Giardia и не обладает перекрестной реактивностью по отношению к другим кишечным паразитам.
В сыворотке крови инвазированных лямблиями людей выявляются антитела к антигенам лямблий, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов. Показано, что попадание антигенов лямблий в периферическую кровь увеличивается при резорбции слизистой оболочки кишечника. В связи с этим выявление IgМ к специфическим антигенам лямблий в сыворотке крови может свидетельствовать о наличии острого лямблиоза, диагностика которого возможна на 10-14 день от начала инвазии.
Описторхоз
Описторхозы – гельминтозоонозы, вызываемые различными трематодами, характеризующиеся хроническим течением с преимущественным поражением печени, желчного пузыря и поджелудочной железы.
Механизм патологического влияния описторхисов на организм человека складывается, в основном, из трех моментов:
- сенсибилизация организма к антигенам паразита с последующим развитием аллергических реакций;
- воздействие продуктов жизнедеятельности паразита на организм человека;
- повреждение органов и тканей человека в месте обитания паразита.
Описторхоз вызывает значительные изменения в гепатобиллиарной системе, что ведет, в свою очередь, к возникновению различных форм панкреатита, раку печени и поджелудочной железы. В случае интенсивного распада гельминтов могут развиться тяжелые проявления аллергии по типу реакции немедленного типа.
Обнаружение специфических антител подтверждает диагноз описторхоза.
Антитела IgM появляются в крови спустя 1 нед.после инфицирования, Достигают максимальных значений через 1,5-2 нед.,а через 6-8 нед. Начинают быстро снижаться. Ig G вырабатываются на 2-3 нед. позже IgM. Их максимальная концентрация достигается к 2-3 месяцу после заражения и может держаться на таком уровне до года и более. Однако при длительных сроках заболевания нередко отмечают снижение уровня специфических антител ниже порога чувствительности диагностических методов вследствие связывания антител антигенами гельминтов и образования ЦИК.
Восприимчивость человека высокая. Иммунитет после перенесенного заболевания нестойкий.
Токсокароз
Токсокароз – заболевание человека, вызываемое миграцией личинок гельминтов, поражающих главным образом представителей псовых (Toxocara canis) и семейства кошачих (Toxocara mystax).
Человек для токсокар не является истинным хозяином, поэтому личинки паразита в его организме не достигают половой зрелости, однако они способны к длительной миграции, поражая различные органы и ткани.
Прижизненный паразитологический диагноз токсокароза практически невозможен, поскольку обнаружить мигрирующие личинки трудно, а идентифицировать их по гистологическим срезам весьма непросто. Ограниченная возможность паразитологической диагностики приводит к тому, что ведущими в диагностике токсокароза являются иммунологические тесты. Установлена коppеляция между клиническими проявлениями, тяжестью пpоцесса и титpами антител. Кpитеpиями эффективности лечения следует считать пpогpессивное снижение уpовня эозинофилии, pегpесс клинических проявлений болезни, снижение титров специфических антител.
Определение антител к вирусу Эпштейн-Барр (ВЭБ)
ВЭБ - это ДНК-содержащий вирус, является вирусом герпеса человека 4 типа, поражает клетки слизистых оболочек (дыхательных путей, пищеварительного тракта, половых органов), а также клетки иммунной системы, в том числе В-лимфоциты, в которых происходит репликация вирусных частиц. Является этиологическим агентом таких заболеваний, как инфекционный мононуклеоз, назофарингеальная карцинома, лимфома Беркита, Т-клеточная лимфома, болезнь Ходжкина. В организме ослабленных людей ВЭБ часто вызывает лимфопролиферативные изменения.
Особенностью гуморального иммунного ответа человека на ВЭБ является дифференцированная во времени продукция иммуноглобулинов классов G и M на различные вирусные белки. Это позволяет с высокой эффективностью диагностировать различные стадии ВЭБ-инфекции у пациента.
В ИФА диагностике выявляют антитела к трем классам антигенов
ЕА-ранние аг; VCA- капсидные /структурные аг; EBNA- ядерные аг, экспрессируемые на протяжении латентной фазы.
Наиболее специфичными и чувствительными маркерами острой стадии инфекции являются IgM к капсидному комплексу (VGA) и IgG к раннему антигену (ЕА). Лица, переболевшие ВЭБ-инфекцией, завершившейся благоприятной сероконверсией, характеризуюся только наличием IgG к ядерному антигену (EBNA-1). Таким образом, определение серологического профиля дает необходимую и достаточную информацию для постановки диагноза и установления стадии инфекции.
Интерпретация серологических данных
| N п/п | | VCA-IgM | ЕА-IgG | EBNA-IgG |
| 1 | Инкубационный период или отсутствие инфицирования | - | - | - |
| 2 | Очень ранняя первичная инфекция | + | - | - |
| 3 | Ранняя первичная инфекция | + | + | - |
| 4 | Поздняя первичная инфекция | +/- | + | +/- |
| 5 | Атипичная первичная инфекция | + | - | + |
| 6 | Хроническая инфекция | -/+ | + | - |
| 7 | Ранняя паст- инфекция | | + | + |
| 8 | Поздняя паст-инфекция | - | - | + |
| 9 | Реактивация | + | + | + |
| 10 | Атипичная реактивация | + | - | + |
Хламидиоз
Хламидии являются внутриклеточными энергетическими паразитами слизистой оболочки человека и животных. Известны три вида хламидий, патогенных для человека: Clamydia trahomatis, Clamydia pneumoniae, Clamydiapsittaci.
Clamydia trahomatis. Вызываемая этим возбудителем инфекция занимает второе место среди заболеваний, переносимых половым путем.
Во время острой хламидийной инфекции и вскоре после нее наблюдается повышение титра антител IgА, IgМ, IgG к Clamydia trahomatis в крови. Инфицированный Clamydia trahomatis организм продуцирует антитела, однако эти антитела имеют слабое защитное действие: обычно возбудители персистируют даже при наличии высоких титров антител. Раннее интенсивное лечение может угнетать синтез антител. Вследствие относительно большой антигенной массы хламидий при генитальных инфекциях сывороточные IgG обнаруживаются довольно часто и в высоких титрах.
Наличие IgМ свидетельствует об активности хламидиоза.
Антитела класса IgА выявляются через 10-14 дней после начала заболевания, их уровень снижается к 2-4 мес. В результате успешного лечения. При реинфекции титр IgА вновь возрастает. Если после курса лечения титр антител IgА не снижается, то это указывает на хроническую или персистирующую инфекцию. Антитела IgG появляются через 15-20 дней после начала инфекциии могут сохраняться многие годы. Реинфекция сопровождается увеличением имеющегося титра антител IgG.
Определение антител к Clamydia trahomatis в крови является вспомогательным тестом диагностики хламидиоза, так как из-за низкой иммуногенности у 50 % больных хламидиозом антитела не обнаруживают.
Определение антител к хламидиям psittaci u pneumoniae
Chlamydia pneumoniae является возбудителем заболеваний респираторного тракта у человека, вызывая острые и хронические бронхиты и пневмонии, 10% домашних пневмоний у детей школьного возраста, 5% острых отитов и фарингитов, 19% тонзиллитов, до 25% бронхитов и синуситов у детей от 5 до 14 лет.
Clamydia psittaci паразитирует у птиц, передается человеку, вызывая пситтакоз, передается и от человека к человеку.
Особое значение имеет генерализованная форма пситтакоза у беременных - гестационный пситтакоз (атипичная пневмония, сепсис, плацентарная недостаточность ведущая к гибели плода).
Определяются сывороточные иммуноглобулины А, М, G для диагностики стадии заболевания с определением титров антител.
Для выявления непосредственно возбудителя (ДНК) в мокроте и в материале с задней стенки глотки применяется метод полимеразной цепной реакции, являющийся наиболее чувствительным, специфичным и экономически более выгодным по сравнению с культуральным (ПЦР хламидии psittaci, ПЦР хламидия pneumoniae).
6.5.5. МАРКЕРЫ АУТОИММУННЫХ И АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ
Антиспермальные антитела
Это надежный количественный анализ на определение антител к сперматозоидам человека в сыворотке.
Антитела к антигенам сперматозоидов могут приводить к бесплодию и мужчин и женщин.
В 20 % бесплодных супружеских пар это имеет место.
АСАТ оказывают ингибирующее действие на подвижность сперматозоидов за счет связывания их с поверхностью и агглютинацией.
Ослабляют слияние яйцеклетки и сперматозоида.
Обнаруживаются не только в сыворотке, но и эякуляте или на поверхности сперматозоидов и у женщин и у мужчин. У женщин могут находиться в шеечной слизи, в жидкости яйцевода или фолликулярной жидкости.
N 0-60ме\мл
Завышенные значения более 60
Если 55-65 - рекомендуется повторное исследование в течении 2х недель.
Определение антител к тканевой трансглутаминазе (Ig G, IgА)
К аутоиммунным заболеваниям относится целиакия, которая характеризуется поражением тонкого кишечника, диареей, потерей веса и недостаточностью питания. Распространенность заболевания (1:200) и огромное количество целиакия-ассоциированных заболеваний (инсулинзависимый сахарный диабет, остеопороз, анемия, эндокринные нарушения) говорит о социальной значимости этого теста. Титр антител остается на постоянном уровне и является прекрасным тестом для скрининга этой патологии и контроля за лечением. Чувствительность и специфичность метода 90-95%.