Тезисы докладов

Вид материала

Тезисы

Содержание ИССЛЕДОВАНИЕ УЧАСТИЯ МНОГОФУНКЦИОНАЛЬНОГО БЕЛКА YB-1 (р50) В ПРОГРЕССИИ ОПУХОЛЕЙ И РАЗРАБОТКА ТЕСТА ДЛЯ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ Экспериментальное обоснование возможности компонентного спектрального анализа картины аутофлуоресценции

Подобный материал:

• Тезисы докладов, 3726.96kb.
• Тезисы докладов, 1225.64kb.
• Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
• «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
• Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
• Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
• Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
• Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.

ИССЛЕДОВАНИЕ УЧАСТИЯ МНОГОФУНКЦИОНАЛЬНОГО БЕЛКА YB-1 (р50) В ПРОГРЕССИИ ОПУХОЛЕЙ И РАЗРАБОТКА ТЕСТА ДЛЯ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ

Л.П.Овчинников¹⁾, Т.П.Стромская²⁾, Н.И.Моисеева²⁾, Е.Ю.Рыбалкина²⁾, А.В.Вайман²⁾, Д.Н.Лябин¹⁾, С.Г.Гурьянов¹⁾, И.А.Елисеева¹⁾, Г.П.Генс³⁾, А.А.Ставровская²⁾

¹⁾Институт белка РАН, Пущино; ²⁾НИИ канцерогенеза Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

³⁾Кафедра онкологии и лучевой терапии МГМСУ, Центральная клиническая больница им. Н.А.Семашко № 2 ОАО «РЖД», Москва


Наши предыдущие исследования, выполненные в рамках программы ФНМ, показали, что анализ содержания мРНК многофункционального белка YB-1 в клетках рака молочной железы (РМЖ) и его внутриклеточного распределения может служить тестом на множественную лекарственную устойчивость (МЛУ) этих клеток. В отчетном году эта работа продолжалась. В общей сложности содержание мРНК YB-1 было проанализировано в 98 образцах опухолей РМЖ, и 72 образца были протестированы на внутриклеточное распределение YB-1. Результаты этого анализа, сопоставленные с особенностями применяемого лечения, позволили предположить, что предоперационная (нео-адьювантная) терапия может приводить к перемещению белка YB-1 в ядра опухолевых клеток, где он может функционировать в качестве фактора транскрипции. В опытах с культурами опухолевых клеток разного гистогенеза показано, что химиотерапевтические препараты индуцируют перемещение YB-1 в ядра клеток и что при этом повышается экспрессия генов нескольких АВС транспортеров и возникает множественная лекарственная устойчивость.

На культурах опухолевых клеток также показано, что добавление сыворотки после сывороточного голодания приводит к тому же результату – транслокации белка YB-1 из цитоплазмы в ядра клеток. Это перемещение зависит от активности киназы Akt. Сывороточное голодание приводит к снижению количества мРНК YB-1. В части культур это сопровождается снижением количества мРНК АВС транcпортера ABCC1. Таким образом, ядерная локализация YB-1 отражает реакцию опухолевых клеток на разные внешние воздействия. Очевидно, что перемещение YB-1 в ядра клеток может обеспечивать временную адаптацию опухоли к неблагоприятным воздействиям.

При длительном воздействии антиракового препарата нового поколения, протеосомного ингибитора бортезомиба, на культуры клеток хронического миелолейкоза человека К562/i-S9, гиперэкс-прессирующих транспортер АВСВ1, селективное преимущество по-лучают клетки с конститутивно активированным сигнальным каска-дом PI3K/Akt. При этом отбираются клетки с гиперэкспрессией генов АВСВ1 и СD34, т.е. клетки с признаками стволовых клеток опухоли, обеспечивающие дальнейшее развитие новообразования.

Показано, что добавление экзогенного белка YB-1 к культивируемым опухолевым клеткам приводит к стимуляции пролиферации этих клеток и к усилению их подвижности, но не влияет на степень чувствительности клеток к химиотерапев-тическим препаратам. В работе зарубежных исследователей было показано, что белок YB-1 может секретироваться иммунными клетками крови. Наши данные могут свидетельствовать об участии YB-1 в воспалительных процессах в опухолях.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ КОМПОНЕНТНОГО СПЕКТРАЛЬНОГО АНАЛИЗА КАРТИНЫ АУТОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ГЛАЗНОГО ДНА

М.А.Островский¹⁾, Т.Б.Фельдман¹⁾, М.А.Яковлева¹⁾, П.М.Арбуханова²⁾, К.О. Муранов¹⁾, С.А.Борзенок²⁾, Х.П.Тахчиди²⁾

¹⁾ Учреждение Российской академии наук Институт биохимической физики им. Н.М.Эмануэля РАН, ²⁾ ФГУ МНТК «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н.Федорова Росмедтехнологии, Москва


Аутофлуоресценция глазного дна – новый неинвазивный метод диагностики старческих изменений и дегенеративных заболеваний сетчатки. Источником аутофлуоресценции являются флуорофоры липофусциновых гранул (ЛГ), локализованных в клетках ретинального пигментного эпителия (РПЭ). Флуорофорами ЛГ являются продукты превращения свободного полностью-транс-ретиналя, т.н. бис-ретиноиды. Насущной задачей является анализ состава и спектральных характеристик бис-ретиноидов ЛГ в норме в зависимости от возраста человека и при патологии.

Нами выполнено обширное исследование, касающееся состава и спектральных характеристик флуорофоров ЛГ в норме. Исследование выполнено на уникальном материале – РПЭ, выделенном из кадаверных глаз человека разных возрастов без видимых глазных патологий. Кадаверные глаза с соответствующим протоколом предоставлялись Глазным банком МНТК «Микрохирургия глаза».

Основные результаты исследования сводятся к следующему:

1. Опыты in vitro. В хлороформном экстракте из ЛГ, согласно данным хроматографического и спектрального исследований, содержится более десятка флуорофоров, спектральный диапазон флуоресценции которых лежит от ультрафиолетовой до красной (540-630 нм) области спектра. Методом масс-спектрометрии, совме-щенной с хроматографией, получены предварительные данные о химической структуре отдельных флуорофоров ЛГ. Показано, что основной по содержанию в ЛГ бис-ретиноид А2Е в хлороформном экстракте не является доминирующим флуорофором. Важно, что в ЛГ с повышением возраста накапливаются как неокисленные (менее полярные), так и окисленные (более полярные) флуорофоры, максимумы спектров флуоресценции которых смещены в более коротковолновую область спектра по сравнению с неокисленными формами флуорофоров.

2. Опыты in situ. Разработана оригинальная методика выделения ткани РПЭ из глазного бокала кадаверных глаз (подана заявка на изобретение № 036051/2011124360 от 17.06.2011 «Способ выделения и фиксации клеток ретинального пигментного эпителия трупных глаз человека»). Непосредственно в клетках РПЭ, выделенных с помощью этой методики из кадаверных глаз разных возрастов (от 20 до 80 лет) и без видимых глазных патологий, проведён дифференцированный флуоресцентный анализ ЛГ (конфокальный лазерный сканирующий микроскоп «Leica TCS SP5»). Установлено, что при длине волны возбуждения флуоресценции 488 нм, используемой в офтальмоскопе HRA-2 (Heidelberg, Германия), соотношение интенсивностей флуоресценции в более коротковолной области видимого спектра (окисленные формы флуорофоров) по сравнению с более длинноволной (неокисленные формы) оставалось практически неизменным. Если в ходе дальнейших исследований окажется, что в патологическом кадаверном глазу это соотношение меняется, то оно может стать важным диагностическим параметром компонентного спектрального анализа картины аутофлуоресценции глазного дна человека.