Биохимия витаминов и гормонов занятие 24 Витамины Цель занятия

Вид материала

Документы

Содержание Биохимия мышечной ткани и миокарда Лабораторные работы Принцип метода. Ход работы Расчет. Рассчитывают количество лабильно связанного фосфора (в мг) на 100 г сырой ткани, учитывая разведение: x А – содержание АТФ в пробе, мг; 3,3 и 400 – коэффициенты перерасчета на 1 г ткани с учетом разведения растворов. Выводы. Ингибирование активности холинэстеразы сыворотки крови прозерином O  но-сн Ход работы. Клинико-диагностическое значение.

Подобный материал:

• Урок биологии. 8 класс. Тема «Витамины», 113.2kb.
• Конспект урока по теме: "Витамины", 128.92kb.
• Занятие Государственные гербы в XX веке. Цель занятия, 201.64kb.
• Семинарского занятия по теме «Физиология эндокринной системы», 22.12kb.
• Правда и вымысел вокруг витаминов Витамины, 191.49kb.
• Семинарского занятия по теме По теме: «Физиология эндокринной системы», 22.75kb.
• Тема: Витамины. Чудесные вещества. Цель урока, 37.36kb.
• Молоко полезный продукт. Самое ценное в нём специальный белок, который усваивается, 24.15kb.
• Учебный комплекс. М.: Изд-во мэи, 2000. Практические занятия 1 занятие, 129.1kb.
• Витамины, 717.21kb.

Занятие 33

Биохимия мышечной ткани и миокарда


Цель занятия: изучить особенности метаболизма мышечной ткани и миокарда, биохимическую основу мышечного сокращения. Изучить биохимическую основу острой и хронической сердечной недостаточности. Научиться определять содержание макроэргических соединений мышечной ткани (АТФ и креатинфосфата).


Исходный уровень знаний и навыков


Студент должен знать:

1. Морфо-функциональную характеристику мышечной ткани.
   
2. Саркомер, миофибриллы, мембранный аппарат мышечной ткани.
   
3. Понятие «моторная бляшка», систему Т-трубочек, триады.
   
4. Сократительный аппарат гладких мышц.
   
5. Метаболизм и механизм действия "вторичных" посредников.
   
6. Реакции энергетического обмена и его регуляцию.
   
7. Механизмы электрогенеза в мышечной ткани.
   
8. "Весельный" механизм мышечного сокращения.
   
9. Механизмы нейро-гуморальной регуляции мышечного сокращения.
   

Студент должен уметь:

1. Проводить качественные реакции на фосфат, колориметрический анализ.
   

Структура занятия

1. Теоретическая часть
   
   1. Основные функции мышечной системы (движение, стимуляция метаболизма и вегетативных функций). Ограничение двигательной активности (гипокинезия). Основные элементы патогенеза гипокинетического синдрома.
      
   2. Особенности метаболизма мышечной ткани, обеспечивающие ей относительную автономию.
      
      1. Наличие эндогенного запаса субстратов энергетического обмена (гликоген, ТГ). Особенности их обмена.
         
      2. Наличие запаса макроэргов. Метаболизм креатинфосфата (синтез и распад). Характеристика креатинфосфокиназы.
         
      3. Своеобразный набор ферментов стабилизирующих уровень АТФ (креатинфосфокиназа, аденилаткиназа, ферменты цикла пуриновых нуклеотидов, АМФ-дезаминаза). Особенности дезаминирования аминокислот.
         
      4. Наличие депо кислорода. Строение и характеристика оксимиоглобина.
         
      5. Своеобразный набор белков и их характеристика: миозин, актин (G, F), тропомиозин, тропонин (I, T, C).
         
      6. Наличие дипептидов (карнозин, ансерин), их строение и биологическая роль.
         
      7. Наличие депо Ca²⁺, особенности метаболизма Ca²⁺ в мышечной ткани, характеристика саркоплазматического ретикулума.
         
   3. Особенности энергообразования в мышечных волокнах. Типы мышечных волокон, их морфо-функциональная характеристика. Особенности метаболизма миокарда.
      
   4. Пути утилизации АТФ в мышечной ткани (миозиновая АТФ-аза, ионные АТФ-азы, биосинтезы и др.).
      
   5. Роль мышечной ткани в межорганном обмене субстратами: циклы – глюкозо-лактатный (цикл Кори) и глюкозо-аланиновый (цикл Фелига).
      
   6. Особенности метаболизма миокарда.
      
   7. Теория мышечного сокращения. Механизм электромеханического сопряжения (роль АЦ, мембран саркоплазматического ретикулума, ионов Ca⁺⁺, кальмодулина, белков мышечной ткани, АТФ-аз). Механизм расслабления. Механизм образование ригорного комплекса (трупное окоченение).
      
   8. Особенности сокращения гладкой мускулатуры.
      
   9. Механизм развития сердечной недостаточности. Адаптивные изменения структуры и метаболизма миокарда при хронической сердечной недостаточности. Биохимическое обоснование лечения сердечной недостаточности:
      

а) препараты, увеличивающие сократимость миокарда (сердечные гликозиды, их механизм действия, ингибиторы фосфодиэстеразы, Са-сенситезато­ры и др.)

б) препараты, уменьшающие нагрузку на миокард (вазодилятаторы и др.)

в) препараты, блокирующие нейро-эндокринную регуляцию миокарда (бета-адреноблокаторы и др.)

г) препараты, улучшающие метаболизм миокарда (коронаролитики, субстраты энергетического обмена, рибоксин, фосфокреатин, антигипоксанты, антиоксиданты, анаболики, Ca²⁺ антагонистов и др.).

2. Практическая часть
   
   1. Решение задач.
      
   2. Лабораторная работа.
      
   3. Проведение контроля конечного уровня знаний.
      

Задачи

1 Диагностическим критерием заболеваний мышечной системы является уровень выделения с мочой:

а) аминокислот; б) мочевины; в) мочевой кислоты; г) аммонийных солей; д) креатина; е) креатинина; ж) глютатиона; з) тионеина?

2 При каких заболеваниях увеличивается экскреция креатина с мочой:

а) обтурационная желтуха; б) острый гепатит; в) закупорка мочевых путей; г) значительные оперативные вмешательства; д) прогрессирующая мышечная дистрофия; е) инфаркт миокарда; ж) пневмония; з) акромегалия; и) сахарный диабет; к) гипертиреоз?

3 При каких состояниях увеличивается концентрация креатинина в сыворотке крови:

а) прогрессирующая мышечная дистрофия; б) опухоли мочевых путей; в) кишечная непроходимость; г) гломерулонефрит; д) острый панкреатит; е) цирроз печени; ж) диарея; з) акромегалия; и) сахарный диабет; к) гипертиреоз?

4. Гипокальциемия обнаруживается у больных, страдающих:

а) рахитом; б) хронической почечной недостаточностью; в) закупоркой желчевыводящих путей; г) гипопаратиреоидизмом; д) метастазами рака в костную ткань; е) гипотиреозом; ж) сахарным диабетом; з) дефицитом магния; и) циррозом печени; к) алкоголизмом?

5 Гипокалиемия клинически проявляется в виде:

а) снижения тонуса гладкой и скелетной мускулатуры; б) усиления рефлексов; в) появления вялых параличей; г) расширения сердца; д) усиления перистальтики кишечника; е) общей слабости; ж) гиперкинезов; з) пареза кишечника; и) тахикардии; к) брадикардии?

6 Накопление молочной кислоты в организме происходит при:

а) полном прекращении кровообращения (клиническая смерть); б) сердечно-сосудистой недостаточности; в) кровопотере; г) гипоксии; д) усиленной мышечной работе; е) гипероксии; ж) диарее; з) гиповитаминозе В₁?

7 Что является характерным для мышечной дистрофии:

а) креатинемия; б) кетонурия; в) глюкозурия; г) креатинурия; д) креати­нинурия; е) аминацидурия; ж) фосфатурия; з) гипераммонемия?

8 При каких заболеваниях повышается концентрация миоглобина в крови:

а) хроническом гепатите; б) инфаркте миокарда; в) пневмонии; г) тубер­кулезе легких; д) остром панкреатите; д) остром холецистите; е) краш-син­дроме; ж) пиелонефрите?

9 Для диагностики инфаркта миокарда в первые 6–8 часов после приступа целесообразно исследовать плазму крови на:

а) содержание тропонина; б) уровень миоглобина; в) активность креатинкиназы; г) активность АСТ; д) активность гамма-глутамилтранспептидазы; е) активность АЛТ; ж) активность амилазы; з) активность аргиназы?

10 Для диагностики инфаркта миокарда в первые сутки после приступа целесообразно исследовать плазму крови на:

а) изоферменты ЛДГ; б) миоглобин; в) альдолазу; г) АСТ; д) аргиназу; е) изоферменты КФК; ж) АЛТ; з) щелочную фосфатазу; и) кислую фосфатазу; к) тропонин Т?

11 Какие тесты целесообразно исследовать на 2–3-е сутки после инфаркта миокарда:

а) креатинфосфокиназа (КФК); б) бета-оксибутират ДГ; в) гамма-глутамилтрансфераза; г) изоферменты АСТ; д) изоферменты ЛДГ; е) церулоплазмин; ж) изоферменты КФК; з) АСТ; и) АЛТ; к) амилаза?

12 Активность каких ферментов информативна на 4–6-е сутки после инфаркта миокарда:

а) креатинфосфокиназы; б) холинэстеразы; в) гамма-глутамилтрансфера­зы; г) изоферментов АСТ; д) изоферментов ЛДГ; е) церулоплазмина; ж) изо­ферментов КФК; з) АСТ; и) ЛДГ; к) бета-оксибутират ДГ?

13 При каких заболеваниях увеличивается концентрация креатинина в крови:

а) остром бронхите; б) значительных оперативных вмешательств; в) сахарном диабете; г) обширных травмах; д) хроническом гастрите; е) инфаркте миокарда; ж) хроническом гломерулонефрите?

14 Специфичными для скелетной мышечной ткани ферментами являются:

а) фруктозомонофосфат-альдолаза; б) аргиназа; в) алкогольдегидрогена­за; г) креатинфосфокиназа; д) бета-оксибутират ДГ; е) BB изоформы КФК; ж) MВ изоформы КФК; з) MM изоформы КФК; и) амилаза; к) ЛДГ₁ и ЛДГ₂; л) ЛДГ₄ и ЛДГ₅?

15 Специфичными для миокарда ферментами являются:

а) фруктозомонофосфат-альдолаза; б) аргиназа; в) алкогольдегидрогена­за; г) креатинфосфокиназа; д) бета-оксибутират ДГ; е) BB изоформы КФК; ж) MВ изоформы КФК; з) MM изоформы КФК; и) амилаза; к) ЛДГ₁ и ЛДГ₂; л) ЛДГ₄ и ЛДГ₅?

16 Какой из ферментных тестов отражает процессы репарации после инфаркта миокарда:

а) креатинкиназа; б) АСТ; в) гамма-глутамилтранспептидаза; г) холинэстераза; д) церулоплазмин; е) лейцинаминопептидаза; ж) амилаза; з) ЛДГ?

17 Появление миоглобина в крови при инфаркте миокарда отмечается через:

а) 2,5–3 часа; б) 8 часов; в) 24 часа; г) 48 часов; д) неделю; е) 0,5–1 час?

18 Наиболее ранний срок появления миоглобина в моче при инфаркте миокарда (через):

а) 1,5–3 часа; б) 8 часов; в) 24 часа; г) 48 часов; д) неделю; е) 2–3 недели?

19 Для диагностики каких заболеваний исследуют содержание миоглоби­на в сыворотке крови:

а) инфаркта миокарда; б) вирусного гепатита; в) гемолитической анемии; г) патологии костной ткани; д) пневмонии; е) язвы желудка; ж) постгеморра­гической анемии; з) ожоговой болезни; и) сахарного диабета I типа; к) краш-синдрома?

20 Фосфорилированная форма креатина в мышцах является:

а) источником неорганического фосфата для образования АТФ; б) компонен­том цикла Фелига; в) одним из факторов электромеханического сопряжения; г) важным источником макроэргов; д) компонентом цикла Кори; е) переносчиком цитрата через мембрану митохондрий; ж) транспортной формой макроэргов в кардиомиоците?

21 Что из указанного включается в биосинтез креатинфосфата:

а) пиридоксальфосфат; б) АТФ; в) метионин; г) цистеин; д) валин; е) NADP; ж) аргинин; з) триптофан; и) АМФ; к) глицин; л) биотин; м) аскорбат?

22 Мышечные клетки, инкубированные с ³H-тимидином, быстрее акку­мулируют радиоактивную метку:

а) в митохондриях; б) рибосомах; в) гяРНК; г) гладком ЭПР; д) ядре; е) аппарате Гольджи; ж) лизосомах; з) шероховатом ЭПР?


Лабораторные работы


Лабораторная работа №1. Количественное определение макроэргических соединений мышц (АТФ и креатинфосфата)


В мышечной ткани содержится два основных макроэргических соединения – АТФ и креатинфосфат. Основным путем образования АТФ в тканях является окислительное фосфорилирование, осуществляемое в процессе тканевого дыхания. Креатинфосфат образуется в мышце при участии АТФ в состоянии покоя (см. уравнение) и является транспортной и резервной формой макроэргического фосфата при активной мышечной работе.



Принцип метода. Метод основан на количественном определении (по цветной реакции с молибдатом аммония в присутствии аскорбиновой кислоты) макроэргического фосфата в молекулах АТФ и креатинфосфата, который легко отщепляется при непродолжительном гидролизе в кислой среде (так называемый лабильно связанный фосфор).

Определение содержания неорганического фосфора в пробах мышечного экстракта, до гидролиза и после него, дает представление о количестве лабильно связанного фосфора, макроэргических соединений мышцы.

Ход работы. Работа состоит из 5 этапов:

1 Экстракция органического фосфата. 0,5 г мышечной кашицы помещают в пробирку, стоящую в ледяной бане, и добавляют в нее 5 мл охлажденного 3 %-го раствора ТХУ. Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой для экстрагирования АТФ и креатинфосфата в течение 5 мин. Экстракт фильтруют в мерную пробирку, стоящую в ледяной бане. Остаток мышечной кашицы в пробирке заливают 5 мл дистиллированной воды, продолжают экстракцию в течение 5 мин на холоде. Полученный экстракт фильтруют в ту же мерную пробирку и доводят общий объем до 10 мл дистиллированной водой.

2 Гидролиз органического фосфата. В две пробирки отбирают по 0,5 мл безбелкового фильтрата. Первая пробирка – контрольная, вторая – опытная. В опытную пробирку добавляют 1 мл 1 М раствора HCl. Закрывают фольгой и помещают в кипящую баню на 10 мин для гидролиза фосфорных связей. Затем раствор охлаждают и добавляют 1 мл 1 М раствора NaOH. В контрольную пробирку (без предварительного кипячения) добавляют 1 мл 1 М раствора NaOH и 1 мл 1 М раствора HCl. В опытную и контрольную пробирки добавляют из бюретки по 7,5 мл дистиллированной воды для получения объема 10 мл.

3 Проведение качественной реакции. Дальнейшие процедуры обязательно проводят одновременно с опытной и контрольной пробами. Из обеих пробирок отбирают по 0,8 мл жидкости, переносят в две другие пробирки, содержащие по 5 мл активного буфера, затем добавляют по 0,5 мл 1 М раствора молибдата аммония, 0,5 мл 1 %-го раствора аскорбиновой кислоты. Содержимое каждой пробирки быстро перемешивают и оставляют стоять при комнатной температуре точно 10 мин.

4 Фотометрия окрашенного комплекса. Контрольную и опытную пробы колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (длина волны 670 нм) против воды. В опытной пробе (после гидролиза) определяемый неорганический фосфор представляет собой сумму лабильно связанного фосфора и фосфатных солей, присутствующих в тканях. В контрольной пробе – только фосфатные соли.

5 Расчет содержания макроэргических фосфорных соединений. Из величины оптической плотности, найденной для опытной пробы, вычитают величину оптической плотности, полученную для контрольной пробы. Концентрацию лабильно связанного неорганического фосфора в пробе находят по калибровочному графику.

Расчет. Рассчитывают количество лабильно связанного фосфора (в мг) на 100 г сырой ткани, учитывая разведение:

x = А  3,3  400 100,

где x – содержание (мг/100 г) макроэргических соединений в перерасчете на 1 мг АТФ в 100 г сырой ткани;

А – содержание АТФ в пробе, мг;

3,3 и 400 – коэффициенты перерасчета на 1 г ткани с учетом разведения растворов.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.


Рекомендуемая литература

Основная

1. Материал лекций.
   
2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 504–517; 1998. С. 645–660.
   

Дополнительная

3. Бэгшоу К. Мышечное сокращение. М.: Мир, 1985.
   
4. Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 1993. Т. 2. С. 332–351.
   
5. Уайт А. и др. Основы биохимии. М.: Мир, 1981. Т. 3. С. 1400–1424.
   
6. Албертс Б. и др. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1994. Т. 2. С. 254–274.
   

Занятие 34

Биохимия нервной системы


Цель занятия: изучить особенности метаболизма нервной ткани, биохимическую основу ее функционирования в норме и при различных патологических состояниях. Научиться определять активность холинэстеразы сыворотки крови.


Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

1. Особенности строения и функции нейрона и нейроглии.
   
2. Строение и функции синапса.
   
3. Метаболизм глюкозы, липидов и аминокислот.
   
4. Метаболизм этанола и гидрофобных ксенобиотиков.
   
5. Низкоэнергетические состояния, причины и механизм развития.
   
6. Строение, локализацию и функции ионных АТФ-аз (Na/K, Са и др.).
   
7. Биофизические механизмы возникновения и проведения потенциалов.
   

Студент должен уметь:

1. Выполнять качественные реакции на активность ферментов биологических жидкостей.
   

Структура занятия

1. Теоретическая часть
   
   1. Общая характеристика метаболизма и химического состава мозга.
      
   2. Особенности метаболизма в мозге:
      

а) углеводов (гликолиз, пентозный цикл, ЦТК), роль инсулина в метаболизме мозга;

б) макроэргов (АТФ и креатинфосфата);

в) белков, их состав, специфические белки нервной ткани S-100, белки миэлина, тубулин, факторы роста нервов и др. Олиго- и полипептиды нервной ткани – ансерин, карнозин, гомокарнозин, либерины, статины, вещество P, кальцийнейрин и др., их функции. Энкефалины, эндорфины, их природа, механизм действия и физиологическая роль;

г) аминокислот, роль дикарбоновых аминокислот – глу и асп в метаболизме мозга (цикл Робертса, цикл пуриновых нуклеотидов – реакции, ферменты, субстраты, физиологическая роль);

д) нуклеиновых кислот;

е) липидов – липиды миэлина, особенности биосинтеза и роль холестерина.

3. Основные функции нейронов:
   

а) электрогенез (механизм электрогенеза);

б) метаболизм (синтез и распад) медиаторов, типы медиаторов. Краткая характеристика (синтез, биохимические и физиологические эффекты, распад) – ацетилхолин, катехоламины, серотонин, дофамин, ГАМК, ГОМК, аминокислоты, гистамин. Состояние медиаторного обмена в норме и при некоторых патологических состояниях (паркинсонизм, шизофрения, маниакальные состояния, депрессии и др.);

в) строение синапса, механизмы синаптической и аксональной передачи. Понятие об аксональном транспорте и его физиологической роли;

г) биохимические механизмы памяти.

1. Особенности метаболизма мозга при гипоксии.
   
2. Биохимические механизмы действия на мозг алкоголя, наркотиков (опиоиды, кокаин, ЛСД-25 и др.) и гидрофобных токсических соединений. Биохимические механизмы развития алкоголизма, наркоманий и токсикоманий.
   
3. Понятие о гематоэнцефалическом барьере.
   
1. Практическая часть
   
   1. Решение задач.
      
   2. Лабораторная работа.
      
   3. Проведение контроля конечного уровня знаний.
      

Задачи

1 Основным источником аммиака в ткани мозга является реакция (напишите реакции):

а) дезаминирования асп; б) дезаминирования глу; в) дезамидирования асн; г) дезамидирования глн; д) дезаминирования АМФ; е) дезаминирования АТФ; ж) трансаминирования; з) распада нуклеиновых кислот?

2 В каких случаях увеличивается активность холинэстеразы в сыворотке крови:

а) нефротический синдром; б) инфекционный гепатит; в) бронхиальная астма; г) миома матки; д) инфаркт миокарда; е) отравление фосфорорганическими веществами; ж) травма мозга; з) отек мозга; и) гипертоническая болезнь?

3 Активность холинэстеразы сыворотки крови понижается при:

а) инфаркте миокарда; б) отравлении фосфорорганическими инсектици­дами; в) отравлении боевыми фосфорорганическими веществам; г) панкреатите; д) язвенной болезни желудка; е) вирусном гепатите; ж) токсическом гепатите; з) отравлении миорелаксантами; и) гемолитической анемии?

4 Развитие печеночной комы при тяжелом вирусном гепатите связано главным образом:

а) с нарушением синтеза альбумина; б) дисглобулинемией; в) увеличени­ем содержание в крови аммиака; г) снижением содержание в крови глюкозы; д) увеличением содержание в крови билирубина; е) повышением осмолярности крови; ж) кетоацидозом?

5 Какие из указанных реакций обезвреживания аммиака характерны для ткани мозга (напишите реакции):

а) восстановительное аминирование -кетоглутарата; б) амидирование глу; в) амидирование асп; г) аминирование ИМФ; д) дезаминирование АМФ; е) амидирование белков; ж) орнитиновый цикл?

6 Какие из указанных ферментов участвуют в реакциях инактивации биогенных аминов:

а) холинэстераза; б) моноаминооксидаза; в) оксидазы D-аминокислот; г) оксидазы L-аминокислот; д) цитохром Р₄₅₀; е) катехол-o-метилтранс­фераза; ж) глютатионпероксидаза; з) супероксиддисмутаза?

7 Наркотическое действие алкоголя связано:

а) с ингибированием Са каналов; б) гиперпродукцией NADH; в) торможе­нием первого комплекса дыхательной цепи; г) торможением третьего комплекса дыхательной цепи; д) ингибированием сукцинатдегидрогеназы; е) продукцией эндогенных медиаторов торможения; ж) дефицитом эндоген­ных медиаторов торможения; з) ингибированием цитохромоксидазы; и) ак­тивацией сукцинатдегидрогеназы?

8 Наркотическое действие гидрофобных веществ связано:

а) с ингибированием Са каналов; б) гиперпродукцией NADH; в) торможе­нием первого комплекса дыхательной цепи; г) торможением третьего комплекса дыхательной цепи; д) ингибированием сукцинатдегидрогеназы; е) продукцией эндогенных медиаторов торможения; ж) дефицитом эндоген­ных медиаторов торможения; з) ингибированием цитохромоксидазы; и) ак­тивацией сукцинатдегидрогеназы?

9 Тормозным медиатором нейронов спинного мозга и ствола мозга является:

а) ГАМК; б) ГОМК; в) глу; г) глн; д) гли; е) таурин; ж) гистамин; з) эн­дорфины; и) серотонин; к) белок S-100?

10 Главным тормозным медиатором нейронов головного мозга является:

а) ГАМК; б) ГОМК; в) глу; г) глн; д) гли; е) таурин; ж) гистамин; з) эн­дорфины; и) серотонин; к) белок S-100?

11 Антагонистом серотониновых рецепторов мозга является:

а) ЛСД-25; б) алкоголь; в) кокаин; г) теофиллин; д) резерпин; е) новока­ин; ж) стрихнин; з) аммиак?

12. Антагонистом рецепторов норадреналина в мозге является:

а) ЛСД-25; б) алкоголь; в) кокаин; г) теофиллин; д) резерпин; е) новока­ин; ж) стрихнин; з) аммиак?

13 В везикулах пресинаптических адренэргических нервных окончаний находятся:

а) связанный норадреналин; б) серотонин; в) АТФ; г) свободный норадреналин; д) хромогранин; е) дофамингидроксилаза; ж) ГАМК; з) моноаминооксидаза?

14 Антагонистом глициновых рецепторов спинного мозга является:

а) ЛСД-25; б) алкоголь; в) кокаин; г) теофиллин; д) резерпин; е) новока­ин; ж) стрихнин; з) аммиак?

15 Для паркинсонизма характерно:

а) увеличение содержания в мозге дофамина;

б) резкое снижение содержания в мозге дофамина;

в) резкое снижение содержания в мозге норадреналина;

г) резкое увеличение содержания в мозге норадреналина;

д) ингибирование сукцинатдегидрогеназы;

е) увеличение содержания в мозге серотонина?

16 Тормозное действие медиатора ГАМК связано:

а) с ингибированием Са каналов;

б) гиперпродукцией NADH;

в) торможением первого комплекса дыхательной цепи;

г) торможением третьего комплекса дыхательной цепи;

д) ингибированием сукцинатдегидрогеназы;

е) продукцией эндогенных медиаторов торможения;

ж) гиперполяризацией постсинаптической мембраны;

з) ингибированием цитохромоксидазы;

и) увеличением проводимости для ионов Сl^-?

Лабораторная работа Ингибирование активности холинэстеразы сыворотки крови прозерином


Принцип метода. Основан на том, что при гидролизе ацетилхолина холинэстеразой происходит подкисление среды за счет накопления уксусной кислоты:

Холинэстераза

СН₃-СO-О-СН₂-СН₂-N(СН₃)₃ + H₂ O  НО-СН₂-СН₂-N(СН₃)₃+ СН₃-СОO^- + Н⁺,

которую можно обнаружить по изменению окраски в присутствии индикатора – бромтимолового синего. В нейтральной среде этот индикатор сине-зеленый, а в кислой он имеет красную окраску. В присутствии антихолинэстеразного препарата – прозерина, а также инсектицидов или других фосфорорганических соединений, которые ингибируют активность холинэстеразы, расщепления ацетилхолина не происходит, и индикатор не меняет своей окраски.

Ход работы. В две пробирки вносят по 0,2 мл 0,1 %-го раствора бромтимолового синего и по 0,2 мл 0,1 %-го раствора ацетилхолина (предварительно нейтрализованного NaOH). В одну из пробирок (контрольную) добавляют 3 капли 0,05 %-го раствора прозерина.

В каждую пробирку вносят по 0,02 мл крови, содержимое пробирок перемешивают и ставят в термостат при температуре 38 °C на 15–20 мин. По истечении этого времени наблюдают изменение окраски в опытной пробе и сохранение исходной окраски в контрольной.

Клинико-диагностическое значение. В организме человека существует два типа холинэстераз:

а) ацетилхолинэстераза (АХЭ), которая встречается преимущественно в мозге, эритроцитах, мышцах, нервах; это высокоспецифический фермент, катализирующий гидролитическое расщепление ацетилхолина на холин и уксусную кислоту;

б) холинэстераза (ХЭ), которая содержится в основном в печени, поджелудочной железе и плазме крови. ХЭ обладает более широкой субстратной специфичностью, т. е. расщепляет ацетилхолин и другие эфиры холина.

Определение активности АХЭ сыворотки и тканей имеет большое клинико-диагностическое значение.

Сывороточная ХЭ представляет собой высокомолекулярный гликопротеид, связанный в крови с альбумином. Функция этого фермента выяснена недостаточно. Предполагают, что ХЭ плазмы крови выполняет защитную функцию, предотвращая накопление и распространение ацетилхолина по тканям, при попадании его в кровяное русло.

В норме активность ХЭ сыворотки крови колеблется в широких пределах – 160–340 мкмоль/(мл ∙ ч). При патологических состояниях ее активность ча­ще всего снижается. Значительное снижение активности ХЭ сыворотки крови отмечается при заболеваниях печени, гипотиреозе, суставном ревматизме, инфаркте миокарда, ожогах, а также отравлениях различными фосфорорганическими соединениями.

Угнетение активности ХЭ в сыворотке крови наблюдается значительно раньше проявления других симптомов интоксикации.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.