Geum.ru

Биохимия витаминов и гормонов занятие 24 Витамины Цель занятия

Вид материалаДокументы

Содержание


Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф.
Определение активности щелочной фосфатазы сыворотки крови
Ход работы
Контрольный раствор
Клинико-диагностическое значение.
Принцип метода.
Ход работы
Клинико-диагностическое значение.
Биохимия нервной, мышечной
Подобный материал:
1   2   3   4   5   6   7   8

Рекомендуемая литература

Основная
  1. Материал лекций.
  2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 473–487; 1998. С. 608–624.
  3. Николаев А. Я. Биохимия. М.: Высшая школа, 1989. С. 358–368.

Дополнительная
  1. Уайт А. и др. Основы биохимии. Т. 3. М.: Мир, 1981.
  2. Наточин Ю. В. Основы физиологии почки. Л.: Медицина, 1982.
  3. Почки и гомеостаз в норме и при патологии. М.: Медицина, 1987.


Занятие 31

Биохимия печени. Обмен ксенобиотиков


Цель занятия: изучить особенности метаболизма печени и биохимическую основу ее основных функций в норме и при патологии. Научиться определять активность щелочной фосфатазы сыворотки (плазмы) крови.


Исходный уровень знаний и навыков


Студент должен знать:
  1. Клеточный состав печени, строение и функции гепатоцита.
  2. Особенности кровоснабжения печени и печеночной балки.
  3. Функциональная гетерогенность гепатоцитов.
  4. Метаболизм и механизм действия витаминов и гормонов.
  5. Метаболизм углеводов, липидов и аминокислот.
  6. Механизмы регуляции уровня глюкозы в крови.
  7. Микросомальное окисление.
  8. Механизмы регуляции гемостаза.
  9. Принципы энзимодиагностики.


Студент должен уметь:
  1. Работать на колориметре.


Структура занятия
  1. Теоретическая часть
    1. Общая характеристика печени как органа гомеостаза. Клеточный состав печени. Метаболическая гетерогенность гепатоцитов.
    2. Роль печени в углеводном обмене (синтез и распад гликогена, глюконеогенез), функциональные пробы, характеризующие роль печени в углеводном обмене (сахарная кривая, нагрузка глюкозой, фруктозой, галактозой).
    3. Роль печени в липидном обмене (переваривание и всасывание, синтез ТГ, ФЛ, ХС, ЛП, кетоновых тел). Состав и функции желчи. Печеночные камни, их состав и механизм образования. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в липидном обмене (липидный спектр, содержание общих липидов, ТГ, ХС, ФЛ, кетоновых тел).
    4. Роль печени в азотистом обмене (синтез белков плазмы, регуляция пула аминокислот, синтез мочевины, обмен билирубина). Механизм развития печеночной комы. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в азотистом обмене (электрофореграммы белков плазмы крови, содержание свободных аминокислот, пробы на гемокоагуляцию – протромбиновый индекс и др., аммиак, мочевину, билирубин).
    5. Роль печени в гормональном гомеостазе – метаболизм гормонов в печени. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в развитии вторичного гиперальдостеронизма.
    6. Основные пути метаболизма ксенобиотиков:

а) транспорт в крови и через мембраны;

б) гидроксилирование и микросомальная ДЦ и др. реакции;

в) конъюгация (роль ФАФС, УДФГК, АМ, ацетил КоА и др.).
    1. Пробы на детоксикацию (амидопириновая и др.).
    2. Энзимодиагностика заболеваний печени:

а) гепатоцеллюлярных – альдолаза, ЛДГ, АСТ, АЛТ, ГДГ;

б) холестатических – ЩФ, 5-нуклеотидаза, холинэстераза, ГГТП, ЛАП.
  1. Практическая часть
    1. Решение задач.
    2. Лабораторная работа.
    3. Проведение контроля конечного уровня знаний.



Задачи

1 При каких заболеваниях отмечается повышение тимоловой пробы:

а) острый ревматизм; б) хронический гепатит в стадии обострения; в) хронический гепатит вне стадии обострения; г) желчно-каменная болезнь; д) цирроз печени; е) хронический гастрит; ж) инфаркт миокарда; з) острая пневмония?

2 При каких заболеваниях наблюдается снижение уровня мочевины в крови:

а) острая желтая атрофия печени; б) подагра; в) обтурационная кишечная непроходимость; г) гемолитическая желтуха; д) брюшной тиф; е) гломерулонефрит; ж) гипертоническая болезнь?

3 Какие биохимические параметры характеризуют воспалительный про­цесс при заболеваниях печени:

а) белковые фракции;
д) содержание мочевины;

б) активность трансаминаз;
е) содержание электролитов;

в) тимоловая проба;
ж) содержание билирубина?

г) содержание холестерина;



4 Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови повышается при:

а) рахите; б) остеомаляции; в) остеопорозе; г) мышечной дистрофии; д) панкреатите; е) раке простаты; ж) регенерации кости; з) инфаркте миокарда?

5 Активность кислой фосфатазы сыворотки крови повышается при:

а) остеосаркомах; б) инфаркте миокарда; в) лейкозах; г) язвенной болезни желудка; д) костном туберкулезе; е) пневмонии; е) раке простаты; з) пере­ломах кости?

6 Активность АЛТ сыворотки крови повышается при:

а) механической желтухе; б) холангите; в) остром гепатите; г) инфаркте миокарда; д) мышечной дистрофии; е) рахите; ж) пневмонии; з) панкреатите; и) раке печени; к) язве желудка?

7 При каких заболеваниях возрастает активность фруктозо-1,6-дифосфат­альдолазы сыворотки крови:

а) острый гепатит; б) мышечная дистрофия; в) дерматомикоз; г) инфаркт миокарда; д) острые респираторные инфекции; е) пневмония; ж) атероскле­роз; з) ларингит; и) холангит; к) пиелонефрит?

8 Активность фруктозо-1-фосфатальдолазы сыворотки крови повышается при:

а) гемолитической анемии; б) функциональной гипербилирубинемии; в) циррозе печени (неактивная фаза); г) вирусном гепатите; в) циррозе печени (активная фаза); д) уремии?

9 Какие тесты характеризуют антиоксидантную систему организма:

а) уровень -токоферола; б) уровень C-реактивного белка; в) уровень гамма-глобулинов; г) уровень общих липидов; д) уровень церулоплазмина; е) активность АЛТ; ж) активность АСТ?

10 Основными антиоксидантами организма являются:

а) -токоферол; б) убихиноны; в) витамин K; г) холестерин; д) НЭЖК; е) аскорбат; ж) ионы Са++; з) витамин А; и) стеркобилиноген; к) гамма-глобулины?

11 Ферментами, ингибирующими процесс ПОЛ являются:

а) липоксигеназа; б) ксантиноксидаза; в) NADРH-зависимая микросомальная диоксигеназа; г) супероксиддисмутаза; д) глутатионпероксидаза; е) каталаза?

12 Для надпеченочных желтух характерно увеличение в плазме крови:

а) уровня неконъюгированного билирубина;

б) уровня билирубин-глюкуронидов;

в) уровня желчных кислот; г) активности трансаминаз; д) уровня липидов; е) уровня лактата?

13 Для печеночной желтухи характерно повышение уровня:

а) неконъюгированного билирубина;
д) стеркобилиногена в кале;

б) билирубин-глюкуронидов;
е) стеркобилиногена в крови;

в) уробилиногена в моче;
ж) желчных кислот в моче?

г) уробилиногена в крови;



14 Какой из синдромов поражения печени характеризуется одновремен­ным увеличением активности щелочной фосфатазы и гамма-глутамилтранс­пептидазы, повышением уровня холестерина, ЛПОНП, ЛПНП и общего билирубина:

а) цитолиза;
г) печеночно-клеточной недостаточности;

б) холестаза;
д) тотальной печеночной недостаточности?

в) воспалительный;



15 Какой из синдромов поражения печени характеризуется увеличением активности АЛТ, фруктозо-1 фосфатальдолазы, ЛДГ и содержания билирубина:

а) цитолиза;
г) печеночно-клеточной недостаточности;

б) холестаза;
д) тотальной печеночной недостаточности?

в) воспалительный;



16 Какой из синдромов патологии печени характеризуется уменьшением активности холинэстеразы, содержания холестерина, протромбина и увеличением концентрации билирубина:

а) цитолиза;
г) печеночно-клеточной недостаточности;

б) холестаза;
д) тотальной печеночной недостаточности?

в) воспалительный;



17 Какой из синдромов патологии печени характеризуется положитель­ной тимоловой пробой, умеренной гиперпротеинемией, гиперглобулинемией, увеличением уровня фибриногена:

а) цитолиза;
г) печеночно-клеточной недостаточности;

б) холестаза;
д) тотальной печеночной недостаточности?

в) воспалительный;



18 Где синтезируется альфа-глобулины и белки гемостаза:

а) костный мозг; б) селезенка; в) кишечник; г) лимфоузлы; д) печень; е) тимус?

19 Где синтезируются часть бета- и гамма-глобулины:

а) костный мозг; б) селезенка; в) кишечник; г) лимфоузлы; д) печень; е) тимус?

20 При каких состояниях увеличивается активность гамма-глутамил­транспептидазы:

а) гемолиз; б) обтурация желчевыводящих путей; в) отравление барбитуратами; г) острые инфекции; д) хронический гастрит; е) реактивные гепатиты алкоголиков; ж) язвенная болезнь желудка?

21 Активность холинэстеразы крови понижается при:

а) хронических гепатитах; б) циррозе печени; в) вирусном гепатите; г) остром панкреатите; д) механической желтухе; е) инфаркте миокарда?

22 При патологии каких органов наблюдается снижение уровня факторов свертывающей системы крови:

а) заболевания почек; б) болезни печени; в) заболевания легких; г) болезни суставов; д) болезни поджелудочной железы; е) диарея; ж) сердечная недостаточность?

23 При каких заболеваниях становится положительным показатель тимо­ловой пробы:

а) паренхиматозный гепатит;
д) острая пневмония;

б) острая желтая атрофия печени;
е) острые вирусные инфекции;

в) острый панкреатит;
ж) инфаркт миокарда;

г) гемолитическая анемия;
з) желтушный цирроз печени?

24 Какие изменения характерными для печеночной комы:

а) гипопротеинемия; б) повышение уровня аммиака в крови; в) наруше­ние синтеза мочевины; г) увеличение количества альбумина; д) уменьшение количества альбумина; е) повышение уровня фибриногена; ж) гиперглике­мия; з) гипогликемия?

25 Синдром холестаза характеризуют такие показатели, как:

а) активность трансаминаз; б) активность холинэстеразы; в) активность щелочной фосфатазы; г) уровень билирубина; д) уровень общего белка; е) активность кислой фосфатазы; ж) активность лейцинаминопептидазы (ЛАП); з) билирубин мочи; и) активность гаммаглутамилтранспептидазы (ГГТП)?


Лабораторная работа Определение активности щелочной фосфатазы сыворотки крови

Принцип метода: щелочная фосфатаза расщепляет в глициновом буфере п-нитрофенилфосфат с образованием п-нитрофенола и фосфата. Мерой каталитической концентрации фермента является количество освобожденного п-нитрофенола.



Ход работы.

Вносят реагенты в пробирки согласно таблице.

Отмерить

Опытная проба
Контрольный раствор

Рабочий реагент
1,00
1,00

Нагревать при температуре 37C в течение 5 минут

Сыворотка или плазма
0,02
-

Тщательно перемешать и инкубировать при температуре 37C в течение 15 минут

Раствор ингибитора
5,00
5,00

Сыворотка или плазма
-
0,02

Тщательно перемешать и измерить величину экстинкции опытной пробы против контрольной пробы на фотоэлектроколориметре в интервале длин волн 400-420 нм в кюветах с длиной оптического пути 1 см. Окраска раствора устойчива в течение 30 минут.

Расчет активности ЩФ произвести по калибровочному графику.

Клинико-диагностическое значение.

Нормальные величины для взрослых: 30-90 Ед/л (0,5-1,5 мккат/л).

Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови увеличивается при костных заболеваниях, связанными с пролиферацией остеобластов, и заболеваниями, сопровождающимися явлениями холестаза (механическая желтуха, холангит, лекарственные и алкогольные гепатиты, первичный билиарный цирроз печени, абсцесс печени, опухоли и метастазы). У детей активность щелочной фосфатазы резко возрастает при рахите. Снижение активности ЩФ наблюдается при гипофосфатемии, нарушении роста костей, накоплении радиоактивных веществ в костях.


Принцип метода. Основан на количественном определении неорганического фосфора, образующегося в процессе гидролиза бета-глицерофосфата щелочной фосфатазой сыворотки крови:





Фосфор определяют колориметрическим методом по цветной реакции с молибденовым реактивом (молибдатом аммония) в присутствии восстановителя – аскорбиновой кислоты. Продукт реакции – молибденовый синий дает синее окрашивание раствора, интенсивность окраски которого, определяемая на фотоэлектроколориметре, прямо пропорциональна количеству фосфора в пробе.

За единицу активности щелочной фосфатазы принимают прирост 1 мг фосфора на 100 мл сыворотки. Нормальная активность щелочной фосфатазы сыворотки крови взрослых равна 2–4 ед., а у детей, в связи с интенсивным костеобразованием, – 5–15 ед.

Ход работы. В опытную пробирку вносят по 0,1 мл сыворотки крови. В опытную и в контрольную пробирки – 1 мл щелочного раствора бета-глицерофосфата (pH 9,0). Обе пробирки, опытную и контрольную, инкубируют в термостате в течение 1 часа при температуре 37 С. После инкубации пробирки охлаждают, в контрольную пробирку вносят 0,1 мл сыворотки и 0,9 мл раствора ТХУ (для осаждения белков), а в опытную пробирку прибавляют 0,8 мл раствора ТХУ. Содержимое каждой пробирки фильтруют в цилиндр вместимостью 10 мл. Осадок на фильтре промывают 1 мл воды. Объем доводят водой до 5 мл и определяют количество неорганического фосфора в опытном и контрольном фильтратах. Для этого в каждый цилиндр приливают по 1 мл молибденового реактива, по 0,5 мл 0,5 %-го свежеприготовленного раствора аскорбиновой кислоты. Объем проб доводят дистиллированной водой до 10 мл, перемешивают и через 5 мин фотометрируют обе пробы против воды с красным светофильтром в кювете с толщиной слоя 5 мм.

Количество фосфора в пробе определяют по оптической плотности, используя калибровочную кривую.

Клинико-диагностическое значение. Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови увеличивается при болезнях печени, например при механической желтухе, в меньшей степени она повышается при гепатитах, циррозах и др. Активность щелочной фосфатазы резко возрастает также при рахите.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.


Рекомендуемая литература

Основная
  1. Материал лекций.
  2. Березов Т. Т. Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 427–437; 1998. С. 551–564.
  3. Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989. С. 411–426.

Дополнительная
  1. Клиническая биохимия / Под ред. М. А. Базарновой. Киев, 1986.
  2. Хашен В. Очерки по патологической биохимии. М.: Медицина, 1978.
  3. Зилва Ф. Пэннел П. Клиническая химия в диагностике и лечении. М.: Медицина, 1988.


Занятие 32

Контрольное по разделу «Биохимия крови, почек
и печени»


Цель занятия: контроль усвоения вопросов пройденного раздела “Биохимия крови, почек и печени”.

Контрольные вопросы
  1. Функции крови.
  2. Кровь. Основные физико-химические константы крови (pH, pCO2, pO2, плотность, осмолярность). Их изменения при патологии.
  3. Плазма крови, ее количественный и качественный состав. Содержание общих липидов, триглицеридов, холестерина, глюкозы, белка, мочевины, мочевой кислоты, натрия, калия, кальция, хлора, магния, бикарбонатов норме и при патологии.
  4. Белки плазмы крови, их классификация. Характеристика их отдельных представителей. Методы фракционирования.
  5. Изменение белкового спектра при патологии.
  6. Основные небелковые компоненты крови. Остаточный азот, его происхождение, диагностическое значение.
  7. Понятие о КОС. Принципы регуляции КОС.
  8. Механизмы регуляции КОС – физико-химические и физиологические.
  9. Классификация нарушений КОС.
  10. Причины и механизм развития метаболического ацидоза.
  11. Причины и механизм развития респираторного ацидоза.
  12. Причины и механизм развития метаболического алкалоза.
  13. Причины и механизм развития респираторного алкалоза.
  14. Физиологические механизмы коррекции нарушений КОС.
  15. Лабораторная диагностика и оценка нарушений КОС (показатели КОС, электролиты крови, pH мочи) на примере метаболического и респираторного ацидоза.
  16. Общая характеристика эритроцита. Особенности метаболизма. Минеральный состав эритроцитов.
  17. Характеристика мембран эритроцитов. Антиоксидантная защита. Глутатион, его строение, функции.
  18. Hb, его строение, свойства.
  19. Производные Hb, виды Hb. Аномальные Hb.
  20. Сравнительная характеристика Hb и миоглобина.
  21. Дыхательная функция крови, ее регуляция. Роль 2,3-ДФГК. Виды гипоксии, аноксия. Нарушение обмена при гипоксии.
  22. Обмен хромопротеидов. Переваривание и всасывание.
  23. Биосинтез гема (до порфобилиногена), его регуляция.
  24. Распад Hb в клетках РЭС.
  25. Обмен билирубина в печени.
  26. Превращение билирубина в ЖКТ.
  27. Лабораторная диагностика желтух (гемолитической, паренхиматозной, обтурационной).
  28. Метаболизм железа (всасывание, транспорт в крови, депонирование).
  29. Особенности метаболизма лейкоцитов. Биохимическая основа фагоцитоза.
  30. Особенности метаболизма тромбоцитов.
  31. Строение и особенности кровоснабжения нефрона. Механизм и биохимические основы образования мочи в отдельных частях нефрона: фильтрация, реабсорбция, секреция.
  32. Нарушение процессов фильтрации, реабсорбции, секреции и их лабораторная диагностика.
  33. Механизм активного транспорта глюкозы, аминокислот.
  34. Общие свойства мочи в норме и при патологии (суточное количество, цвет, прозрачность, удельный вес, pH и др.).
  35. Органические компоненты мочи (мочевина, мочевая кислота, аминокислоты, креатин, креатинин, гормоны); неорганические (Na+, К+, Ca2+, Мg2+, NH3+, фосфаты, сульфиты, HCO3-) в норме и при патологии.
  36. Патологические компоненты мочи (кровь, белок, сахар, билирубин). Причины их появления и диагностическое значение.
  37. Клиренс в норме и при патологии. Его диагностическое значение.
  38. Гомеостатическая функция почек. Роль почек и механизм регуляции:

- объема циркулирующей крови (ОЦК) и артериального давления;

- баланса электролитов;

- КОС (механизмы ацидо- и аммониогенеза);

- уровня глюкозы в крови (особенности глюконеогенеза в почках);

- уровня биологически активных веществ;

- эритропоэза.
  1. Метаболическая гетерогенность почечной ткани. Особенности липидного, углеводного и белкового обменов почечной ткани.
  2. Нарушение обмена при острой и хронической почечной недостаточности.
  3. Почечные камни, их состав, причины и механизм возникновения.
  4. Клеточный состав печени. Метаболическая гетерогенность гепатоцитов.
  5. Печень как главный орган гомеостаза. Особенности липидного, углеводного и белкового обмена печени.
  6. Роль печени в углеводном обмене.
  7. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в углеводном обмене.
  8. Роль печени в липидном обмене. Механизм развития жировой инфильтрации и дегенерации печени.
  9. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в липидном обмене.
  10. Роль печени в азотистом обмене. Механизм развития печеночной комы.
  11. Функциональные пробы, характеризующие роль печени в азотистом обмене.
  12. Роль печени в регуляции КОС.
  13. Роль печени в регуляции уровня биологически активных веществ и функциональные пробы, характеризующие эту роль.
  14. Роль печени в гормональном гомеостазе – метаболизм гормонов. Общая схема метаболизма гормонов в печени.
  15. Основные пути метаболизма ксенобиотиков.
  16. Пробы на детоксикацию.
  17. Энзимодиагностика заболеваний печени – гепатоцеллюлярных и холестаза.
  1. БИОХИМИЯ НЕРВНОЙ, МЫШЕЧНОЙ
    И СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНЕЙ,
    МИОКАРДА И ЛЕГКИХ