Методическая разработка по подготовке лабораторного занятия №41 для студентов медицинского факультета Тема: Патогенные энтеробактерии.

Вид материала

Методическая разработка

Содержание Антигенная структура и факторы патогенности видовой О-Аг типоспецифический Н-Аг (13 серотипов) Механизм действия нейротоксина Экзотоксин (типоспецифический Аг) Эпидемиология, патогенез и лабораторная диагностика столбняка Факторы передачи раневой столбняк; -столбняк новорожденных; - после-родовой столбняк; - крипт-генный столбняк. Бактериоскопический метод Схема микробиологической диагностики ботулизма Бактериоскопический метод Автор: доцент, к.м.н. Грабик И.Н. Актуальность темы. Цели изучения темы.

Подобный материал:

• План занятия: 10 00 Проверка готовности студентов к занятию (тестовый контроль, устный, 259.7kb.
• План занятия: 10 00 Проверка готовности студентов к занятию (тестовый контроль, устный, 128.17kb.
• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №11 для студентов, 777.95kb.
• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №31 для студентов, 622.65kb.
• Календарный план лекций по микробиологии, вирусологии и иммунологии для студентов, 23.61kb.
• Методическая разработка для преподавателей. Тема: (для студентов курса факультета), 103.03kb.
• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №21 для студентов, 595.87kb.
• Методическая разработка для проведения практического занятия со слушателями тема 16., 432.07kb.
• Методическая разработка по хирургии для студентов IV курса медицинского факультета, 42.2kb.
• Календарный план лекций по микробиологии для студентов 2 курса медицинского факультета, 12.99kb.

3. Антигенная структура и факторы патогенности
   

Виды	Антигенная структура	Факторы патогенности
C.tetani	видовой О-Аг типоспецифический Н-Аг (13 серотипов); 3. Экзотоксин (одинаковый по специфичности у всех серотипов)	Экзотоксин. Имеет 2 фракции: тетаноспазмин (нейротоксин) и тетанолизин (мембранотоксин, гемолизин) Механизм действия нейротоксина: угнетение выделения тормозящих нейромедиаторов в синапсах вставочных нейронов ЦНС
C.botulinum	Экзотоксин (типоспецифический Аг); Виделяют 8 сероваров (А, В, С1, С2, D, E, F ) О-Аг Н-Аг	Экзотоксин- ботулотоксин ( у некоторых серотипов выделяется в виде протоксина, активируется протеолитическими ферментами) Механизм действия: нейротоксин, который связывает ацетилхолин в нервно-мышечных синапсах центральной, вегетативной и периферической нервной системы

4. Эпидемиология, патогенез и лабораторная диагностика столбняка
   

Столбняк – острая токсичная раневая инфекция, которая вызывается нейротоксином C. tetani, и проявляется судорогами скелетных мышц и периодическими генерализованными судорогами.

Механизм и пути передачи заболевания	Патогенез	Формы заболевания/ инкуб. период	Основные клинические признаки	Иммунитет	Профилактика	Лабораторная диагностика
Контактный Факторы передачи: инородные тела в ране; Нестерильный инструментарий, и т.п. Источник инфекции Животные, человек (клостридии -постоянные комменсалы ЖКТ людей и животных)	1.Попадание спор в рану 2.проростание спор в анаэробных условиях 3. Фиксация экзотоксина в мышечно-нейронных синапсах 4. Ретро-градный аксональный транспорт токсина в ЦНС 5.Фиксация в синапсах тормозящих нейронов, связывание медиаторов	Инкубационный период - от 2 до 14 суток. Формы: -раневой столбняк; -столбняк новорожденных; - после-родовой столбняк; - крипт-генный столбняк.	Подергивание в области раны; Развитие вегетативных нарушений; Тризм; развитие судорог по нисходящемутипу; Опистотонус; паралич	Постинфек-ционный, Антибакте-риальный Антитокси-ческий, Слабо напряжен-ный, Непродол-жительный.	Неспецифическая Хирургическая обработка раны, удаление чужеродных тел, сгустков крови; соблюдение асептики при хирургических вмешатель-ствах Специфичес-кая: 1) плановая: иммунизация детей АКДС, АДС; 2) экстренная: -активная (анатоксин); -активно-пассивная (анатоксин + сыворотка; Пассивная (антитоксичес-кая сыворотка)	Осуществ-ляется редко Основные методы: Бактерио-скопичес-кий Биологическая проба (реакция нейтрали-зации на белых мышах) Бакте-риологи-ческий (посев по Филдсу) Серо-логический (определе-ние тетано-спазмина в материале с помощью ИФА, РНГА

5. Эпидемиология, патогенез и лабораторная диагностика ботулизма
   

Ботулизм – острое инфекционное заболевание, обусловленное специфическим действием нейротоксина С. botulinum , которое характеризуется развитием прогрессирующих вялых параличей и гастроинтестинального синдрома

Механизм и пути передачи заболевания	Патогенез	Формы заболевания/инкуб. период	Основные клинические признаки	Иммунитет	Профилактика	Лабораторная диагностика
Алиментарный Факторы передачи: Консервированные продукты, мясные изделия; Вяленная, копченая, соленая рыба	Экзотоксин накапливается в продуктах, при попадании в желудок может активиро-ваться протеолити-ческими ферментами; Всасывание в кровь; Фиксация в нервно-мышечных синапсах; транспорт к ЦНС	Инкубационный период - от 2 часов до 10 суток Формы: 1) гастро-интести-нальная; 2) раневой ботулизм; 3) ботулизм новорож-денных	Симптомы пищевой токсикоин-фекции + неврологические нарушения со стороны двигатель-ных ЧМН (нарушение глотания, птоз, глазные симптомы) Вегетатив-ные нарушения	Постинфек-ционный, Антибакте-риальный Антитокси-ческий, Слабо напряжен-ный, Непродол-жительный.	Неспецифичес-кая: Контроль за изготовлением консервирован-ных продуктов; Специфическая экстренная: 1) активная (редко); 2) пассивная (поливалентная антитоксическая вакцина)	1)Бактериоско-пический метод 2)Биологичес-кая проба 3)Бактериоло-гический метод 4)Серологичес-кий метод для выявления ботулотоксина в пищевых продуктах, материале от больного (ИФА, РНГА)

1. Перечень теоретических вопросов.
   

1. Морфобиологическая характеристика патогенных клостридий, значение в патологии человека.
   
2. Морфология, культуральные, вирулентные свойства возбудителя столбняка. Характеристика токсина, механизм действия.
   
3. Принципы лабораторной диагностики столбняка.
   
4. Специфическая профилактика и лечение столбняка.
   
5. Морфология, культуральные, вирулентные свойства возбудителя ботулизма. Характеристика токсинов, антигенные свойства, механизм действия.
   
6. Микробиологическая диагностика ботулизма.
   
7. Специфическая профилактика и терапия ботулизма. Характеристика иммунобиологических препаратов.
   
8. Реакция нейтрализации, методика определения экзотоксинов патогенных клостридий.
   

3. Источники учебной информации.
   

Литература (основная):

27. К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 316-322, 329-333.
    
28. В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр. 330-336.
    
29. А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, Санкт-Петерб.,2002. Стр.427-435.
    
30. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999. Стр.291-297.
    
31. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков, 1999. Стр.308-310, 314-316,317-319.
    
32. Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 193-198, 148-149.
    
33. Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., 2002. Стр. 453-455.
    
34. Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр. 150-154.
    
35. М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. Г., 1973. Стр.270-276.
    

Литература (дополнительная):

11. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием. Общая ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
    
12. Б.Л.Черкасский. Особо опасные инфекции, М.: «Медицина», 1996. Стр. 50-56.
    
13. А.Н.Маянский. Микробиология для врачей. Н.Новгород, 1999. Стр.139-153.
    
14. Лекционный материал.
    

4. Ориентировочная основа действия (ОДД)
   

Схема микробиологической диагностики столбняка

Материал для исследования: раневое содержимое, екссудат, некротизованные ткани, тампоны из раны, при родовом столбняке – выделения и биоптаты из матки, вагины; при столбняке новорожденных – выделение из пупка

Бактериоскопический метод (предварительная диагностика):

Мазок, окраска по Грамму (клостридии в виде «барабанных палочек)

Иммунофлюоресцентная микроскопия

Бактериологический метод

1. Материал прогревают при 80⁰С на протяжении 20 мин;
   
2. Высев материала на среду Китта-Тароцци или в конденсационную воду скошенного кровяного агара по Филдсу;
   
3. Инкубация 48-72 ч., пересев на кровяной агар Цейсслера;
   
4. Инкубация 24-48 ч, изолированные колонии пересевают на Китта-Тароцци;
   
5. Инкубация 24-48 ч.
   
6. Идентификация чистой культуры на основании:
   
   1. Морфологии, культуральных свойств;
      
   2. Ферментативных признаков;
      
   3. Результатов биологической пробы (реакция нейтрализации)
      

Методы для определения нейротоксина клостридий столбняка в исследуемом материале

Биологический метод (реакция нейтрализации)

1. введение смеси фильтрата материала ( или жидкой культуры) и антитоксической сыворотки, предварительно выдержанной в термостате 30-40мин. (экспериментальная мышь)
   
2. введение фильтрата материала без антитоксической сыворотки (контрольная мышь);
   
3. учет результатов биологической пробы через 4-5 суток
   

Серологический метод:

4. определение тетаноспазмина с помощью РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом;
   
5. выявление токсина с помощью ИФА
   

Схема микробиологической диагностики ботулизма

Материал для исследования: промывные воды желудка, рвотные массы, кровь, остатки пищевых продуктов

Бактериоскопический метод (предварительная диагностика):

Мазок из остатков пищевых продуктов, окраска по Грамму (клостридии в виде «теннисных ракеток»)

Бактериологический метод

1. Материал прогревают при 80⁰С на протяжении 20 мин;
   
2. Высев материала на среду Китта-Тароцци; инкубация 48-72 ч.,
   
3. пересев на кровяной агар Цейсслера; инкубация 24-48 ч.
   
4. изолированные колонии пересевают на Китта-Тароцци; инкубация 24-48 ч.
   
5. Идентификация чистой культуры на основании:
   

1. Морфологии, культуральных свойств;
   
2. Ферментативных признаков;
   
3. Результатов биологической пробы (реакция нейтрализации) для определения серотипа токсина
   

Методы для определения типа ботулотоксина в исследуемом материале

Биологический метод (реакция нейтрализации) – проводят на 5 парах мышей

6. введение смеси фильтрата материала ( или жидкой культуры) и антитоксической сыворотки определенного типа (A, B, E, F), предварительно выдержанной в термостате 30-40мин. экспериментальным мышам;
   
7. введение фильтрата материала без антитоксической сыворотки (контрольная мышь);
   
8. учет результатов биологической пробы через 2-3 суток
   

Серологический метод:

9. определение ботулотоксина с помощью РНГА с антетельным эритроцитарным диагностикумом;
   
10. выявление токсина с помощью ИФА, иммуноелектрофореза
    

1.7. Краткие методические рекомендации для работы студентов на лабораторном занятии.

1.7.1. Методика проведения занятия.

17. Изучить морфологию возбудителей стовбняка и ботулизма в демонстрационных препаратах, окрашенных по Грамму. Микроскопическую картину зарисовать в протокол, обращая внимание на форму, размер и место расположения спор.
    
18. Изучить характер роста клостридий в среде Китта-Тароцци, на лакмусовом молоке.
    
19. Ознакомиться с питательными средами, которые используют для выделения патогенных клостридий из исследуемого материала и накопления чистой культуры (кровяно-сахарный агар Цейсслера, среда Вильсона- Блера, среда Китта-Тароцци, скошений кровяно-сахарный агар по Филдсу).
    
20. Учесть результаты демонстрационной РПГА, поставленной с целью выявления ботулотоксина в разных образцах пищевых продуктов.
    
21. Ознакомиться с препаратами, которые используют для диагностики, специфической терапии и профилактики стовбняка и ботулизма. Данные внести в протокол.
    
22. Внести схему лабораторной диагностики стовбняка и ботулизма в протокол.
    
23. Оформить протокол, сделать выводы.
    

2. Организационная структура проведения лабораторного занятия.
   

№ этапа	Этапы работы	Время, мин..	Средства обучения	Оборудование	Место проведения
1.	Организационная часть	2	-	-	У Ч Е Б Н А Я К О М Н А Т А
2.	Проверка исходного уровня знаний: Устно по предварительным вопросам Письменно – по тестам	5 10	Источники обуч. информации Тесты на исходный уровень знаний-умений	-
3.	Инструктаж преподавателя по выполнению практической работы в соответствии с методическими рекомендациями	5	Методические рекомендации	-
4.	Самостоятельная работа студентов: микроскопия мазков-препаратов возбудителей стовбняка и ботулизма, занесение сведений в протокол; изучение характера роста патогенных клостридий в среде Китта-Тароцци, в лакмусовом молоке; ознакомление с питательными средами для культивирования клостридий учет результатов демонстрационной РПГА, поставленной с эритроцитарным анти тельным диагностикумом и образцами разных пищевых продуктов с целью обнаружения ботулотоксина; ознакомление с биопрепаратами, которые используют для лабораторной диагностики, специфической профилактики и лечения столбняка и ботулизма, занесение сведений в протокол оформление выводов после проведения лабораторного занятия	15 5 5 10 10 3	Таблицы «Лабораторная диагностика столбняка», «Лабораторная диагностика ботулизма», «Методы куль-тивирования анаэробов», «Выделение чистых культур анаэробных бактерий», алгоритмы исследования	Мазки возбудителей столбняка и ботулизма, окрашенные по Грамму; Микроскоп; Среды: кровяно-сахарный агар Цейсслера, среды Китта-Тароцци, Вильсон-Блера, лакмусовое молоко Планшет з демонстрационной РПГА Набор препаратов: вакцины АКДС, АДС-М, протистолбнячная гетеро логическая сыворотка, протистолбнячный гамма-глобулин, поливалентная протиботулиническая гетерологическая сыворотка, моновалентные протиботулинические сыворотки, столбнячный анатоксин (АС), ботулиничный анатоксин
5.	Оценка деятельности каждого студента и проверка усвоения темы: письменно – с помощью обучаючих заданий;	15	Система обучающих заданий
6.	Подведение итогов занятия, задание для самостоятельной работы студентов при подготовке следующей темы	5

Автор: доцент, к.м.н. Грабик И.Н.


Методические рекомендации

по подготовке и работе на лабораторном занятии №48

для студентов медицинского факультета


Тема: Споровые и аспорогенные анаэробные бактерии – возбудители раневой газовой инфекции и гнойно-воспалительных процессов. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.

1. Актуальность темы. Анаэробные микроорганизмы достаточно часто вызывают гнойно-воспалительные заболевания человека в ассоциации с факультативно-анаэробными и аэробными бактериями. Особенно тяжелым течением характеризуется раневая клостридиальная инфекция, которая сопровождается токсичным поражением продуктами распада тканей почек, центральной нервной системы и т.д. Особенностью этой группы раневых инфекций также является трудности в лечении в связи с резистентностью большинства клостридий к химиотерапевтическим препаратам, а также их недоступности в очаге поражения из-за нарушения кровообращения. Такие особенности течения раневой анаэробной инфекции обуславливают основную роль профилактики подобных осложнений. Знание биологических особенностей возбудителей, их экологии и условий, при которых споры клостридий приобретают возможность прорастать в контаминированных тканях, необходимо будущему врачу для проведения полноценных профилактических мероприятий с целью предупреждения развития анаэробной инфекции в ране.
   
2. Цели изучения темы.
   
   1. Цель общая: усвоить основные биологические свойства возбудителей газовой анаэробной инфекции и гнойно-воспалительных осложнений, принципы лабораторной диагностики, профилактики и лечения инфекций.
      
   2. Цель конкретная:
      

1. Усвоить основные биологические свойства клостридий, возбудителей газовой анаэробной инфекции, условия для спорообразования и прорастания спор в ране.
   
2. Знать механизмы действия экзотоксинов возбудителей газовой анаэробной инфекции и гнойно-воспалительных процессов.
   
3. Уметь правильно выбрать метод лабораторной диагностики раневой газовой инфекции и гнойно-воспалительных процессов (предварительной и окончательной).
   
4. Знать пути проникновения клостридий и неспорообразующих анаэробов в рану, условия для развития осложнений раневого процесса.
   
5. Уметь правильно выбрать препараты для лечения газовой анаэробной инфекции и гнойно-воспалительных процессов.
   
6. Знать основные биологические свойства неспорообразующих анаэробов, - возбудителей гнойно-воспалительных процессов.
   

3. Содержание обучения.
   
   1. Граф логической структуры содержания:
      

1. Классификация патогенных для человека анаэробов – возбудителей газовой раневой инфекции и гнойно-воспалительных осложнений
   

№№	Название рода	Патогенные виды
неспорообразующие анаэробы
1	Bacteroides	B. fragilis, B.melaninogenicus
2	Fusobacterium	F.nucleatum, F.necroforum
3	Propionobacterium	P. acnes, P.avidus
4	Peptococcus	P. niger
5	Peptostreptococcus	P. anaerobius
6	Veilonella	V.atipica, V.dispar
спорообразующие анаэробы
7	Clostridium	C. perfringens C. novi C. septicum C. hystolyticum C. difficile C. sporogenes