Книги по разным темам Pages:     | 1 | 2 | удК 616.62-006.6-018-008.9-074-078.63 Оригинальная статья Применение метода автоматиЗированной морФометричеСкой оценки ЭкСПреССии иммУногиСтоХимичеСкиХ маркеров в диагноСтике рака ПредСтательной желеЗы и мочевого ПУЗырЯ В.М. Попков - ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава, ректор, заведующий кафедрой урологии, кандидат медицинских наук; А.Н. Понукалин - ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава, старший научный сотрудник отдела реконструктивной уронефрологии НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии, доцент, кандидат медицинских наук; Г.Н. Маслякова - ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава, замдиректора по научной работе НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии, профессор, доктор медицинских наук; Е.Н. Цмокалюк - ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава, начальник морфологического отдела НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии; А.Б. Бучарская - ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава, руководитель НО - фундаментальной медицины и нанотехнологий НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии, кандидат биологических наук; А.А. Широков - Учреждение РАН, институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов, руководитель центра коллективного пользования Симбиоз, кандидат биологических наук;

А.М. Буров - Учреждение РАН, институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов, ведущий инженер центра коллективного пользования Симбиоз, кандидат химических наук.

APPLICAtION OF AUtOMAteD MORPHOMetRIC MetHOD OF eStIMAtION OF exPReSSION OF IMMUNOHIStOCHeMICAL MARkeRS IN DIAGNOStICS OF PROStAte AND BLADDeR CANCeR V.M. Popkov - Rector of Saratov State Medical University n.a. V.I. Razumovsky, Head of Department of Urology, Candidate of Medical Science; A.N. Ponukalin - Saratov State Medical University n.a. V.I. Razumovsky, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Department of Reconstructive Uronephrology, Assistant Professor, Candidate of Medical Science;

G.N. Maslyakova - Saratov State Medical University n.a. V.I. Razumovsky, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Deputy Director of Scientific Work, Doctor of Medical Science; E.N. Tsmokalyuk - Saratov State Medical University n.a. V.I. Razumovsky, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Head of Morphological Department;

A.B. Bucharskaya - Saratov State Medical University n.a. V.I. Razumovsky, Scientific Research Institute of Fundamental and Clinical Uronephrology, Head of Scientific-Educational Centre of Fundamental Medicine and Nanotechnologies, Candidate of Biological Science; A.A. Shirokov - Institute of Biochemistry and Physiology of Plants and Microorganisms of Russian Academy of Sciences, Head of Centre of Collective Use Symbiosis, Candidate of Biological Science; A.M. Burov - Institute of Biochemistry and Physiology of Plants and Microorganisms of Russian Academy of Sciences, Chief Engineer of Centre of Collective Use Symbiosis, Candidate of Chemical Science.

дата поступления - 10.11.2010 г. дата принятия в печать - 14.12.2010 г.

Попков В.М., Понукалин А.Н., Маслякова Г.Н., Цмокалюк Е.Н., Бучарская А.Б., Широков А.А., Буров А.М. Применение метода автоматизированной морфометрической оценки экспрессии иммуногистохимических маркеров в диагностике рака предстательной железы и мочевого пузыря // Саратовский научно-медицинский журнал. 2010. Т. 6, № 4. С. 845-849.

диагностическая значимость молекулярных маркеров оценивалась при проведении иммуногистохимического исследования операционного и биопсийного материала 106 пациентов с заболеваниями мочевого пузыря и 57 пациентов с заболеваниями предстательной железы, проходивших лечение в НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии, с моноклональными антителами: ki67, Pcna, p63 (маркерами пролиферативной активности клеток); р53 (супрессором опухолевого роста), bcl2, Вах (маркерами апоптоза); EGfR (рецептом эпидермального фактора роста), PSa, PSMa, aMacR (простатспецифическими антигенами) и цитокератинового профиля. Морфометрическое исследование проводилось на автоматизированной системе анализа цифровых изображений ariol Sl50 (Genetix).

ключевые слова: рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, иммуногистохимия, молекулярные маркеры, диагностическая значимость.

Popkov V.M., Ponukalin A.N., Maslyakova G.N., Tsmokalyuk E.N., Bucharskaya A.B., Shirokov A.A., Burov A.M. application of automated morphometric method of estimation of expression of immunohistochemical markers in diagnostics of prostate and bladder cancer // saratov Journal of medical scientific Research. 2010. vol. 6, № 4. p. 845-849.

the diagnostic significance of molecular markers was evaluated by immunohistochemical research of surgical and biopsy material of 106 patients with diseases of bladder and 57 patients with diseases of prostate. they received treatment at Scientific Research institute of fundamental and clinical uronephrology with monoclonal antibodies: ki-67, Pcna, p63 (markers of proliferative activity), p53 (suppressor of tumor growth), bcl-2, bax (markers of apoptosis), EGfR (receptor of epidermal growth factors), PSa, PSMa, aMacR (prostate-specific antigens) and cytokeratin profile.

the morphometric research was conducted оn the basis of automated analysis system of digital images ariol Sl(Genetix).

Key words: bladder cancer, prostate cancer, immunohistochemistry, molecular markers, diagnostic significance.

Введение. Актуальность совершенствования ных, нередко связанным с развитием инвалидности ранней диагностики онкоурологических заболеваний [1]. Среди всех онкоурологических заболеваний на обусловлена их широким распространением, высопервом месте стоят опухоли рака почки, предстакой смертностью и снижением качества жизни больтельной железы и мочевого пузыря.

ответственный автор - Маслякова Галина Никифоровна.

Рак мочевого пузыря является самым частым ноАдрес: 410012, г. Саратов, ул. б. Казачья, 112.

вообразованием мочевыводящих путей. ежегодно в Тел.: 669751.

е-mail: gmaslyakova@yandex.ru. мире раком мочевого пузыря заболевают 335,8 тыс.

Saratov Journal of Medical Scientific Research. 2010. Vol. 6, № 4.

846 УрологиЯ человек и 132,4 тыс. человек, т.е. каждый третий, В клинических рекомендациях, выпущенных по умирают от этого заболевания. В России ежегодно инициативе Российского общества онкоурологов с выявляется 12,5 тыс. больных раком мочевого пузы- разрешения европейской ассоциации по урологии, ря, а смертность от этого новообразования составля- сведения за 2009 г. по применению конкретных молеет 59,2% [2]. кулярных маркеров для диагностики рака мочевого Сегодня в России под динамическим наблюдени- пузыря и простаты отсутствуют.

ем находятся около 60 тыс. больных раком мочевого Все изложенное позволило нам сформулировать пузыря, и только у 45% болезнь диагностируется на цель нашего исследования: разработать панели моранних стадиях заболевания. Известно, что именно лекулярно-биологических и иммуногистохимических стадия рака мочевого пузыря определяет вид, харак- маркеров ранней диагностики рака мочевого пузыря тер лечения и прогноз заболевания для пациента. и простаты.

Вместе с тем частота ошибок, при определении ста- методы. Материалом для исследования послудии рака мочевого пузыря достигает 73% [3]. жил операционный и биопсийный материал, полуРак предстательной железы занимает второе ченный у 108 пациентов с заболеваниями мочевого место среди причин смерти от злокачественных но- пузыря и 57 пациентов с заболеваниями представообразований у мужчин. По данным официальной тельной железы, проходивших лечение в НИИ фунстатистики, абсолютное число зарегистрированных даментальной и клинической уронефрологии ГОу больных с заболеваниями предстательной железы ВПО Саратовский государственный медицинский в Российской Федерации в последние годы прогрес- университет Росздрава в 2007-2010 гг. Операционсивно возрастало, увеличившись с 717 800 человек в ный и биопсийный материал подвергали обзорному 2002 г. до 1 124 417 человек в 2008 г., или на 56,6%. морфологическому анализу, при котором стадию Показатель числа зарегистрированных больных рака определяли в соответствии с классификацией на 100 тыс. взрослого мужского населения за эти tnM, а степень дифференцировки опухолевых клегоды также увеличился с 1408,5 до 2154,1, т.е. на ток оценивали в соответствии с рекомендациями 52,9%. По регионам максимальные показатели ча- ВОЗ (2004).

стоты встречаемости заболеваний предстательной Иммуногистохимические реакции ставили на железы на 100 тыс. взрослого мужского населения серийных парафиновых срезах, используя стрептабыли отмечены в Москве и Санкт-Петербурге. видин-биотиновый метод. В качестве детекционной В Российской Федерации на конец 2008 г. находи- системы применяли систему lSab2 System, Dako, в лись под наблюдением 85 215 больных раком про- качестве хромогена - диаминобензидин (Dako).

статы. В 2008 г. впервые был установлен диагноз для иммуногистохимического исследования были рака простаты 20 887 пациентам. использованы моноклональные антитела, разделенТриада патологических процессов, развивающих- ные на группы по функциональной значимости: марся в предстательной железе, а именно: хронический керы пролиферативной активности - ki67, Pcna;

простатит, доброкачественная гиперплазия и рак регуляторы клеточного цикла - р53, р63; маркеры предстательной железы составляют у мужчин доми- апоптоза bcl2, Вах; цитокератиновый профиль - цК нирующую группу заболеваний по сравнению с лю- 34 е 12, цК7, цК8, цК10/13, цК17, цК18, цК19; пробыми нозологическими единицами. Эти заболевания статспецифичные антигены - PaS, PSMa, aMacR.

имеют общие патогенетические механизмы и сход- Морфометрическое исследование иммуногистоную клиническую картину, что в значительной степе- химических препаратов проводили с использованием ни затрудняет раннюю диагностику онкологического автоматизированной комбинированной системы для процесса в простате. Несомненно, прорыв в диагно- анализа цифровых изображений ariol Sl50 (Genetix, стике рака простаты был совершен при внедрении Великобритания, 2009) на базе центра коллективнов клинику ПСА-диагностики, но известно, что ПСА го пользования Симбиоз уРАН ИбФРМ. Изображеявляется органоспецифическим, но не заболевание- ния в автоматическом режиме были получены с приспецифическим. Повышение его регистрируется при менением микроскопа olympus bx 61 с встроенной любой патологии предстательной железы. В связи с цифровой камерой u-cMaD3 с объективами Planapo этим возникает настоятельная необходимость поис- n 1.25/0,04 и MPlanfl n 5/0,15 для выбора рабока, разработки и внедрения новых критериев ранней чих областей, а также uPlanfl n 20/0,5 для подсчедиагностики различных вариантов опухолевого про- та иммунопозитивных клеток. В работе были испольцесса в предстательной железе. зованы программные модули для ядерных (kiSight) и Анализ результатов лечения больных раком мо- цитоплазматических маркеров (aesight).

чевого пузыря и предстательной железы показывает, При морфометрическом исследовании при исчто назрела необходимость поиска новых допол- пользовании автоматизированной комбинированной нительных маркеров ранней диагностики, позво- системы для анализа цифровых изображений проляющих прогнозировать характер течения болезни водилось выделение клеточных структур на исслеу каждого конкретного больного [4]. К таким новым дуемом гистологическом препарате и объединение маркерам относят показатели биологической агрес- их в классы: ядра и цитоплазма клеток; определение сивности первичной опухоли. до настоящего време- количества позитивно окрашенных клеток и степени ни количество работ, в которых проведено исследо- интенсивности окраски в каждом из классов структур.

вание диагностического и прогностического значения Статистический анализ проводили с использоваширокого спектра биомаркеров, характеризующих нием пакета программ статистической обработки реразличные проявления биологической агрессивности зультатов SSPS 13.0 for windows.

рака мочевого пузыря, незначительно. Окончательно Результаты. Антиген пролиферирующего клене определена панель молекулярных серологиче- точного ядра (Pcna) экспрессируется в делящихся ских, мочевых и иммуногистохимических маркеров, клетках в конце G1-фазы и в первой трети S-фазы.

которая необходима для выбора оптимальной такти- В тканях с низкой пролиферативной активностью, ки хирургического и патогенетического лечения рака по данным литературы, экспрессия антитела миникак мочевого пузыря, так и простаты. мальна, однако результаты нашего исследования поСаратовский научно-медицинский журнал. 2010. Том 6, № 4.

UROLOGY казали, что маркер пролиферирующего клеточного рака мочевого пузыря и рака простаты у конкретного ядра (Pcna) дает положительную реакцию во всех больного. Подобными молекулярными показателями исследуемых группах. В группе больных раком мо- могут быть регуляторы клеточного цикла р53 и ki67, чевого пузыря процент экспрессирующих клеток воз- поскольку имеются сообщения об их связи с рецидирастал по мере увеличения глубины инвазии опухоли вированием, метастазированием и низкой выживаенепосредственно в стенку мочевого пузыря (Т1, Т2). мостью [5].

Как только опухоль начинала прорастать в параве- Как показали наши исследования, маркер kiзикальную клетчатку, процент экспрессирующих кле- в группе больных раком мочевого пузыря не дает ток уменьшался с 73,86% (в стадии Т2) до 46,25% (в экспрессии в группе сравнения, а также отмечается стадии Т4), что, возможно, связано с уменьшением корреляционная зависимость высокой степени знадифференцировки клеток (табл. 1). чимости между стадией рака мочевого пузыря, проТакая же тенденция наблюдалась и при опреде- центом экспрессирующих клеток и интенсивностью лении степени экспрессии маркера Рcna в группе иммуногистохимической реакции (рис. 1). Практичебольных с заболеваниями простаты. В группе срав- ски в два раза повышается количество экспрессирунения пролиферативная активность клеток была ющих клеток при стадиях заболевания Т3 и Т4, т.е.

втрое ниже, чем в группе больных с раком предста- когда опухоль начинает прорастать за пределы стентельной железы (табл. 2). Кроме этого, в группе боль- ки мочевого пузыря (см. табл. 1). Это отличается от ных с раком предстательной железы мы наблюдали результатов, полученных другими авторами [6], котослучаи высокой пролиферативной активности клеток рые выявили практически одинаковый уровень эксстромы. Известно, что в процессе опухолевой транс- прессии в группах больных как поверхностным, так и формации меняются и межклеточные взаимодей- инвазивным раком мочевого пузыря.

Pages:     | 1 | 2 |    Книги по разным темам