Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии
На правах рукописи
Фролова Наталья Александровна
ОТВЕТНАЯ РЕАКЦИЯ ОРГАНИЗМА КРЫС ПЕРВОГО И ВТОРОГО ПОКОЛЕНИЙ НА ХРОНИЧЕСКОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ КАДМИЯ
Специальность: 03.02.08 - Экология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
г. БАЛАШИХА, 2012
Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной радиологии и агроэкологии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИСХРАЭ Россельхозакадемии), г. Обнинск
Научный руководитель: доктор биологических наук,
Мирзоев Эльдениз Балабек оглы
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор
Камалов Рамазан Абусупиянович
доктор биологических наук, профессор
Сынзыныс Борис Иванович
Ведущая организация: ФГБОУ ВПО УМосковская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. СкрябинаФ
Защита диссертации состоится 20 марта 2012 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 220.056.01 в ФГБОУ ВПО Российский государственный аграрный заочный университет по адресу 143900, Московская область, г. Балашиха, ул. Юлиуса Фучика, д.1.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского государственного аграрного заочного университета.
Автореферат размещен на сайтах www.rgazu.ru, referat_vak@mon.gov.ru и разослан 17 февраля 2012 г.
Ученый секретарь
специализированного совета
кандидат биологических наук О.Л. Сойнова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Технический прогресс приводит к загрязнению биосферы тяжелыми металлами, в частности кадмием. Главными источниками поступления кадмия в окружающую среду являются предприятия по добыче и переработке цветных и черных металлов, тепловые электростанции (ТЭС), транспорт, машиностроительная, химическая и сельскохозяйственная промышленности, жилищно-коммунальные комплексы [Goering P.L., 1994]. В последние годы в высокотехнологичных производствах используют нанопорошки сульфида, селенида и теллурида кадмия, которые могут вносить существенный вклад в общее загрязнение биосферы [Klaine S.J.et al., 2008].
В промышленно развитых районах концентрация кадмия превышает допустимые нормативы в десятки раз, а около мощных источников выброса - в сотни и тысячи раз. Высокие уровни токсичных веществ регистрируют в радиусе 1-2 км от ТЭС, рудников и 2-5 км от металлургических комбинатов, а также на расстоянии 50-100 м от автомагистралей [Оценка и регулированиеЕ, 1996]. В сточных водах свинцово-цинковых и машиностроительных заводов содержание кадмия составляет 1,5-5,0 и 1,0-6,0 мг/л, соответственно [Грушко Я.М., 1979]. Ненормированное внесение в почву в качестве удобрений осадков сточных вод также приводит к избыточному накоплению металла [Черных Н.А. и др., 1999]. В целом, глобальная годовая эмиссия кадмия из природных источников (пыль, лесные пожары, извержения вулканов) составляет 840 т [Nriagu J.O., 1979], а в результате хозяйственной деятельности человека - 7200 т [Мур Дж. В. и Рамамурти С., 1987].
В организм млекопитающих кадмий поступает в основном с кормом и водой. В зависимости от дозы и продолжительности воздействия металла отмечают высокую общую токсичность, эмбриотоксичность, генотоксичность и канцерогенность [Fernandez E.L. et al., 2003; Godt J. et al., 2006; Jrup L., 2002; Jiang G. et al., 2008; Joseph P., 2009; Lau A.T.Y. and Chiu J.F., 2007; Valko M. et al., 2006; Waalkes M.P. et al., 1999; Wang L. et al., 2008]. Токсическое действие кадмия характеризуется нарушением структурно-функционального состояния клеток периферической крови и тканей органов, что в конечном итоге приводит к их гибели. В качестве одного из механизмов цитотоксического действия ионов металла рассматривают активацию процесса свободнорадикального перекисного окисления липидов (ПОЛ) [Franko R. et al., 2009; Kara H. et al., 2005; Thijssen S. et al., 2007; Yang M.S. et al., 2008]. Вместе с тем в клетках органов кадмий индуцирует синтез металлотионеинов, которые связывают ионы металла и действуют как ловушка для свободных радикалов [Beattie J.H. et al., 2005; Brako E.E. et al., 2002; Klaassen C.D. et al, 2009; Lynes M.A. et al., 2006; Miler E.A. et al., 2010; Park J.D. et al., 2001; Saboli l. et al., 2010].
Основные закономерности ответной реакции организма млекопитающих получены при воздействии кадмия в больших дозах. Данные о биологических эффектах металла в малых дозах практически отсутствуют. Продемонстрирована высокая кумулятивная способность металла и возможность его попадания в ткани плода через плацентарный барьер, что может негативно влиять на состояние здоровья потомства в ряду поколений. В связи с этим актуальность исследования хронического воздействия кадмия в малых дозах не вызывает сомнений.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение ответной реакции организма крыс первого и второго поколений на хроническое воздействие кадмия.
Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:
- оценить количество эритроцитов и лейкоцитов в периферической крови; содержание металлотионеинов в органах и малонового диальдегида (МДА) в плазме и эритроцитах, а так же синтез ДНК в тимоцитах крыс первого поколения (F1), подвергнутых хроническому воздействию кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития;
- исследовать вышеперечисленные показатели у крыс первого и второго поколений, подвергнутых хроническому воздействию кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития.
Основные положения, выносимые на защиту:
- При хроническом воздействии кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода онтогенеза в организме крыс первого поколения формируются как адаптивно-защитные, так и негативные реакции.
- Ответная реакция организма крыс второго поколения (F2) при хроническом воздействии нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода онтогенеза характеризуется развитием негативных реакций.
- Формирование адаптивно-защитных и/или негативных реакций при хроническом поступлении нитрата кадмия с питьевой водой в организм крыс зависит от концентрации металла и длительности его поступления.
Научная новизна. Впервые показано, что ответная реакция организма крыс (F1 и F2), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и постнатальный периоды онтогенеза, характеризуется развитием адаптивно-защитных и/или негативных реакций.
Установлено, что хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития (молочное вскармливание) оказывает негативное влияние на крыс первого поколения (F1) в начальные сроки исследования. Обнаруженные изменения носили обратимый характер.
Хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода онтогенеза приводит к развитию адаптивно-защитных реакций организма крыс (F1) на 120-е сутки исследования, которое проявляется активацией синтеза ДНК в тимоцитах, увеличением содержания металлотионеинов в печени и снижением уровня МДА в эритроцитах периферической крови. Последующее поступление металла с питьевой водой в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л в организм характеризуется формированием негативных реакций на клеточном уровне: отмечали ингибирование синтеза ДНК в тимоцитах и увеличение уровня МДА в эритроцитах периферической крови.
У крыс второго поколения (F2), подвергнутых хроническому воздействию кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода онтогенеза, наблюдали развитие только негативных реакций как на клеточном уровне (ингибирование синтеза металлотионеинов в клетках в печени и почках), так и в системе кроветворения (снижение количества лейкоцитов в периферической крови).
Формирование адаптивно-защитных и/или негативных реакций при хроническом поступлении нитрата кадмия с питьевой водой в организм крыс (F1 и F2) зависит от концентрации металла и длительности его поступления.
Теоретическая и практическая значимость работы. Получены новые экспериментальные данные об ответной реакции организма крыс (F1 и F2) линии УВистарФ при хроническом поступлении нитрата кадмия с питьевой водой в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л. Результаты работы позволяют понять молекулярно-клеточные механизмы действия кадмия и оценить степень реальной опасности металла при длительном хроническом воздействии на млекопитающих.
Данные диссертационной работы могут быть использованы при разработке санитарно-гигиенических нормативов и проведении экологического мониторинга.
ичный вклад диссертанта. Представленная работа является частью плановых исследований сектора №3 УМолекулярная биология сельскохозяйственных животныхФ(2005Ц2009 гг.), с личным вкладом в получении экспериментальных данных не менее 80%. Частично экспериментальные исследования выполнены при финансовой поддержке правительства Калужской области и Российского фонда фундаментальных исследований (Гранты № 02-04-96026; № 04-04-97217; № 09-04-97539). Автор принимал участие в постановке и проведении экспериментов, проводил статистическую обработку данных, анализировал и описывал полученные результаты, сформулировал основные положения и выводы.
Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на международной научно-производственной конференции УАктуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животныхФ, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва А.А. Воронеж, 2006; 3rd International Conference in Lithuania Metals in the environment. Vilnius, 2006; в научных трудах КФ МСХА имени К.А. Тимирязева. Калуга, 2006; УАктуальные проблемы экологии и природо-пользованияФ, посвященной 50-летию РУДН Москва, 2010.
Материалы диссертационной работы, удостоены премии: Министерства экономического развития Калужской области по итогам конкурса научных работ молодых ученых (Калуга, 2006); Всероссийской общественной организации токсикологов за научно-исследовательскую работу среди молодых ученых (Москва, 2006).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, включенных в перечень периодических научных и научно-практических изданий, рекомендованных ВАК РФ для публикаций основных результатов диссертационного исследования.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материала и методик исследования, трех разделов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Работа изложена на 109 машинописных страницах, иллюстрирована 2 таблицами и 36 рисунками. Список литературы содержит 176 источников, из которых 43 принадлежат отечественным и 133 иностранным авторам.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Характеристика подопытных животных и схемы проведения экспериментов
Модельные исследования были проведены на 150 крысах линии УВистарФ. Содержание, кормление, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями УПравил проведения работ с использованием экспериментальных животныхФ (Приказ Минздрава России №267 от 19.06.2003 г.).
В соответствии с поставленными задачами были проведены 3 серии экспериментов:
- Первая серия экспериментов была выполнена на крысах первого поколения (F1), которые были подвергнуты хроническому воздействию кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития. Для этого родители экспериментальных животных за месяц до спаривания взамен питьевой воды получали раствор нитрата кадмия в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л по иону металла. Через 30 суток постнатального периода развития (молочный период вскармливания) подопытных животных переводили на УчистуюФ питьевую воду.
- Часть животных первого поколения (F1) продолжала получать раствор нитрата кадмия в течение 365 суток постнатального периода развития (вторая серия экспериментов).
- Третья серия экспериментов выполнена на втором поколении крыс (F2), которые были получены от животных первого поколения. Для этого были сформированы пары животных (F1), которые в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития взамен питьевой воды получали раствор нитрата кадмия в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л по иону металла. Подопытные животные (F2) также были подвергнуты хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития.
Сроки отбора периферической крови, тимуса, селезенки, почек, печени были определены целью и задачами исследования. Образцы органов и крови отбирали под нембуталовым наркозом.
Таблица 1. Характеристика подопытных животных и схема проведения экспериментов
№ п/п | Группы | Живот-ные | Кол- во, гол. | Поколе-ние | Концентра-ция Cd в воде, мг/л | Сроки исследования, сутки |
1 | опыт | крысы | 20 | F1 | 0.05 | 30, 60, 90, 120 |
2 | опыт | крысы | 20 | 0.1 | ||
3 | контроль | крысы | 20 | 0 | ||
4 | опыт | крысы | 15 | F1 | 0.05 | 120, 210, 365 |
5 | опыт | крысы | 15 | 0.1 | ||
6 | контроль | крысы | 15 | 0 | ||
7 | опыт | крысы | 15 | F2 | 0.05 | 120, 210, 365 |
8 | опыт | крысы | 15 | 0.1 | ||
9 | контроль | крысы | 15 | 0 |
Методы исследования
Биологическое действие нитрата кадмия оценивали по комплексу показателей:
- Содержание МДА в плазме и клетках крови определяли методом спектрофотометрии [Гончаренко М.С. и Латинова А.М., 1985].
- Синтез ДНК в тимоцитах исследовали по включению 3H-тимидина [Шевченко А.С. и др., 1991].
- Содержание металлотионеинов в тканях органов животных определяли радиохимическим методом [Eaton D.L. and Toal B.F., 1982].
- Жизнеспособность клеток оценивали в тесте с трипановым синим [Практикум Е, 2001].
- Количество эритроцитов и лейкоцитов в периферической крови определяли в камере Горяева [Клиническая Е., 1985].
Экспериментальный материал был обработан методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента [Лакин Г.Ф., 1990]. Различия значений считали достоверными при p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Ответная реакция организма крыс первого поколения (F1), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития
Оценка содержания лейкоцитов и эритроцитов в периферической крови крыс, подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития (молочный период вскармливания), выявила следующие особенности. Количество лейкоцитов у животных первой группы на 30-е, 60-е и 90-е сутки исследования было ниже контроля на 28%, 48% и 46%, соответственно (р<0,05). В то же время у крыс второй группы снижение числа клеток наблюдали на 30-е и 60-е сутки на 53% и 45%, соответственно (р<0,05). Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 30-е и 90-е сутки.
Изменения количества эритроцитов в периферической крови носили фазовый характер. У животных первой группы на 60-е сутки регистрировали уменьшение, а на 120-е - увеличение (р<0,05). У крыс второй группы на 30-е и 60-е сутки исследования наблюдали тенденцию к снижению числа клеток, а на 90-е сутки - повышение (р<0,05). Достоверные различия значений показателя у животных опытных групп отмечали в течение всего периода исследования.
При воздействии кадмия одной из первичных ответных реакций организма является индукция синтеза металлотионеинов, которые связывают ионы металла и действуют как ловушка для свободных радикалов. Хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и молочный период вскармливания крыс индуцировало синтез металлотионеинов в печени (табл. 2). У животных первой группы увеличение показателя регистрировали в течение всего периода исследования. Различия значений были достоверны на 30-е сутки. В то же время у крыс второй группы содержание ме-таллотионеинов возрастало на 30-е и 60-е сутки (51% и 36%, соответственно). В пос-
едующие сроки значения показателя были на уровне контроля.
В почках подопытных крыс активацию синтеза металлотионеинов наблюдали на 120-е сутки исследования (табл. 2). Достоверные различия значений отмечали у животных первой группы.
В то же время в селезенке крыс первой группы содержание металлотионеинов было на уровне контрольных значений в течение всего периода наблюдения. У животных второй группы на 30-е и 60-е сутки регистрировали увеличение уровня показателя на 80% и 71%, соответственно (р<0,05). Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 30-е сутки.
Таблица 2. Содержание металлотионеинов в органах крыс первого поколения (F1), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития, % от контроля
Группы животных | Сроки исследования, сутки | |||||||
30 | 60 | 90 | 120 | |||||
Печень | ||||||||
1(0,05 мг/л) | 123,2 | 6,3* | 134,9 | 19,8 | 126,7 | 8,1 | 111,0 | 9,8 |
2 (0,1 мг/л) | 150,7 | 10,6* | 136,5 | 2,9* | 77,7 | 8,5+ | 100,6 | 10,4 |
3 (контроль) | 100,0 | 4,2 | 100,0 | 0,9 | 100,0 | 15,7 | 100,0 | 7,4 |
Почки | ||||||||
1(0,05 мг/л) | 99,7 | 5,5 | 115,8 | 9,1 | 85,1 | 8,4* | 180,6 | 19,3* |
2 (0,1 мг/л) | 106,9 | 4,6 | 98,3 | 4,1 | 91,1 | 7,8 | 128,1 | 14,1+ |
3 (контроль) | 100,0 | 3,8 | 100,0 | 5,4 | 100,0 | 6,2 | 100,0 | 8,5 |
Селезенка | ||||||||
1(0,05 мг/л) | 119,1 | 12,5 | 128,9 | 11,1 | 105,5 | 3,2 | 91,1 | 9,1 |
2 (0,1 мг/л) | 180,1 | 6,8*+ | 170,9 | 9,8* | 129,1 | 14,4 | 91,2 | 7,2 |
3 (контроль) | 100,0 | 6,4 | 100,0 | 5,0 | 100,0 | 10,9 | 100,0 | 8,7 |
Примечание здесь и далее:* - достоверно относительно контроля при р<0,05;
+ достоверные различия между опытными группами при р<0,05
Оценка концентрации МДА в плазме крови крыс первой группы на 30-е и 120-е сутки обнаружила увеличение величины показателя на 55% и 39%, соответственно (табл. 3). У животных второй группы на протяжении всего эксперимента уровень МДА был вы-
Таблица 3. Содержание МДА в плазме и эритроцитах периферической крови крыс первого поколения (F1), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития, % от контроля
Группы животных | Сроки исследования, сутки | |||||||
30 | 60 | 90 | 120 | |||||
Плазма | ||||||||
1(0,05 мг/л) | 155,1 | 11,6* | 120,2 | 13,1 | 94,3 | 5,1 | 139,1 | 7,2* |
2 (0,1 мг/л) | 99,8 | 25,7+ | 147,6 | 8,7* | 104,6 | 11,7 | 118,9 | 6,6* |
3 (контроль) | 100,0 | 26,1 | 100,0 | 10,6 | 100,0 | 8,9 | 100,0 | 9,7 |
Эритроциты | ||||||||
1(0,05 мг/л) | 67,6 | 11,7* | 76,7 | 22,5 | 98,7 | 12,4 | 85,1 | 5,9 |
2 (0,1 мг/л) | 122,1 | 6,3+ | 82,6 | 2,7 | 101,4 | 9,2 | 114,6 | 5,7 |
3 (контроль) | 100,0 | 7,5 | 100,0 | 23,3 | 100,0 | 26,7 | 100,0 | 11,5 |
ше контроля. Достоверные различия значений регистрировали на 60-е и 120-е сутки исследования (47% и 19%, соответственно).
В эритроцитах периферической крови крыс изменения показателя в зависимости от концентрации нитрата кадмия в питьевой воде носили разнонаправленный характер (табл. 3). У животных первой группы на 30-е сутки содержание МДА было ниже контроля на 32% (р<0,05), а второй - выше. В последующие сроки существенных изменений не отмечали. Достоверные различия значений между показателями животных опытных групп наблюдали на 30-е сутки.
По мере накопления в клетках ионы Cd2+ могут оказывать негативное влияние на структурно-функциональное состояние молекулы ДНК. Оценка интенсивности синтеза ДНК в тимоцитах выявила нелинейный характер изменений (рис. 1). У крыс первой группы на 30-е и 60-е сутки регистрировали снижение уровня показателя на 37% и 27%, соответственно. В то же время у животных второй группы интенсивность синтеза ДНК была ниже контроля в течение всего периода исследования. На 90-е и 120-е сутки отмечали уменьшение величины показателя на 32% и 19%, соответственно (p<0,05). Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 120-е сутки.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития оказывает негативное влияние на организм крыс (поколение F1) в начальные сроки исследования. Выявленные изменения носили обратимый характер, так как в последующие сроки наблюдения регистрировали восстановление значений исследуемых показателей до уровня контроля. Следует отметить, что хроническое поступление нитрата кадмия с питьевой водой в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л в течение 60 суток постнатального периода развития не вызывало в организме крыс отклонений биологических показателей от нормы [Мирзоев Э.Б. и др., 2004]. Поэтому можно предположить, что потомство (F1) получено от физиологически здоровых родителей (F0), а выявленные у животных (F1) нарушения зависят от дозы, величины перехода кадмия в ткани плода во время беременности и продолжительности его поступления в постнатальный период развития. Вероятно, обратимый характер изменений обусловлен не только прекращением поступления и интенсивностью выведения металла из организма, но и снижением концентрации кадмия в тканях органов по мере увеличения живой массы млекопитающих в процессе постнатального развития.
Таким образом, хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития приводило к снижению количества лейкоцитов в периферической крови крыс (F1) в начальные сроки исследования. В то же время изменения количества эритроцитов носили нелинейный характер. Содержание металлотионеинов в печени и селезенке было увеличено на 30-е и 60-е сутки, а в почках - на 120-е сутки. Изменения концентрации МДА в плазме и эритроцитах периферической крови носили нелинейный характер. В плазме крови наблюдали достоверное повышение значений показателя, а в эритроцитах - снижение. Оценка интенсивности синтеза ДНК в тимоцитах выявила уменьшение её значений практически во все сроки исследования.
2. Ответная реакция организма крыс первого поколения (F1), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития
Оценка количества лейкоцитов и эритроцитов в периферической крови крыс, подвергнутых хроническому воздействию кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития, обнаружила следующие особенности. В зависимости от концентрации нитрата кадмия в питьевой воде у подопытных животных четвертой и пятой групп на 120-е сутки исследования отмечали разнонаправленный характер изменений содержания лейкоцитов. У животных четвертой группы количество лейкоцитов возрастало относительно контроля на 37,3%. Напротив, у крыс пятой группы наблюдали снижение числа клеток на 26,3%. В последующие сроки исследования (210-е и 365-е сутки) существенных изменений не регистрировали. Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 120-е сутки.
В то же время определение количества эритроцитов у подопытных животных выявило повышение на 120-е и 210-е сутки исследования. На 365-е сутки у крыс четвертой группы регистрировали уменьшение числа клеток, а пятой - увеличение на 77% относительно контроля (р<0,05). Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 120-е и 365-е сутки.
Хроническое воздействие кадмия индуцировало синтез металлотионеинов в печени крыс на 120-е и 210-е сутки исследования. У животных четвертой группы на 210-е сутки отмечали достоверное увеличение концентрации металлотионеинов на 70% (табл. 4). На 365-е сутки значения показателя были на уровне контроля. В то же время у крыс пятой группы на 120-е сутки регистрировали максимальное содержание металлотионеинов в печени, что было выше значений показателя у животных шестой (контроль) и четвертой групп, соответственно, на 123% и 110%, (p<0,05). В последующие сроки исследования (210-е и 365-е сутки) наблюдали снижение уровня металлотионеинов до контрольных значений.
В почках изменения показателя носили слабо выраженный характер (табл. 4). На 365-е сутки у крыс пятой группы регистрировали достоверное увеличение относительно животных четвертой и шестой групп на 27% и 39%, соответственно.
В то же время концентрация металлотионеинов в тканях селезенки подопытных животных возрастала в течение всего периода наблюдения (табл. 4). У крыс пятой группы на 365-е сутки исследования отмечали увеличение на 56% относительно контроля (p<0,05).
Таблица 4. Содержание металлотионеинов в органах крыс первого поколения (F1), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития, % от контроля
Группы животных | Сроки исследования, сутки | ||
120 | 210 | 365 | |
Печень | |||
4 (0,05 мг/л) | 112,8±14,6 | 170,9±39,3 | 81,2±17,5 |
5 (0,1 мг/л) | 223,3±42,8*+ | 113,9±16,9* | 113,2±17,9 |
6 (контроль) | 100,0±3,6 | 100,0±14,9 | 100,0±10,7 |
Почки | |||
4 (0,05 мг/л) | 111,4±7,5 | 81,4±0,3 | 88,5±6,6 |
5 (0,1 мг/л) | 106,9±14,5 | 94,6±9,6 | 126,9±3,7*+ |
6 (контроль) | 100,0±2,1 | 100,0±12,8 | 100,0±10,2 |
Селезенка | |||
4 (0,05 мг/л) | 119,5±11,5 | 112,0±3,2 | 131,6±15,8 |
5 (0,1 мг/л) | 106,3±4,2 | 111,3±2,9 | 156,5±14,6* |
6 (контроль) | 100,0±5,4 | 100,0±8,8 | 100,0±11,0 |
Оценка содержания МДА в плазме и эритроцитах периферической крови крыс выявила следующие особенности. В плазме крови животных четвертой группы на 120-е и 210-е сутки регистрировали увеличение на 41% и 30%, соответственно (p<0,05). На 365-е сутки отмечали уменьшение значений показателя до уровня контроля (табл. 5). У животных пятой группы на 120-е сутки содержание МДА возрастало на 31% (p<0,05). В последующие сроки исследования не наблюдали существенных изменений. Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 210-е сутки.
В эритроцитах периферической крови крыс изменения уровня МДА носили фазовый характер (табл. 5). Достоверное уменьшение концентрации МДА на 29% и 20% наблюдали у животных четвертой и пятой групп на 120-е сутки исследования, соответственно. Напротив, на 210-е сутки значения показателя возрастали на 182% и 97%, соответственно (p<0,05). На 365-е сутки в зависимости от уровня кадмия в питьевой воде у
Таблица 5. Содержание МДА в плазме и эритроцитах периферической крови крыс первого поколения (F1), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития, % от контроля
Группы животных | Сроки исследования, сутки | ||
120 | 210 | 365 | |
Плазма | |||
4 (0,05 мг/л) | 141,0±104* | 130,2±3,7* | 101,2±4,6 |
5 (0,1 мг/л) | 131,2±13,6* | 87,6±9,5+ | 106,8±11,9 |
6 (контроль) | 100,0±4,4 | 100,0±4,3 | 100,0±1,7 |
Эритроциты | |||
4 (0,05 мг/л) | 71,6±2,7* | 282,4±11,8* | 143,4±8,0* |
5 (0,1 мг/л) | 78,4±0,8 | 196,7±5,0*+ | 81,3±9,2+ |
6 (контроль) | 100,0±3,4 | 100,0±15,5 | 100,0±2,0 |
крыс четвертой и пятой групп отмечали разнонаправленный характер изменений. У животных четвертой группы концентрация МДА была выше контроля, а в пятой - ниже. Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 210-е и 365-е сутки.
Определение интенсивности синтеза ДНК в тимоцитах крыс на 120-е сутки обнаружило достоверное повышение на 25% и 36% у животных четвертой и пятой групп, соответственно (рис. 2). В последующие сроки наблюдали снижение значений показателя у животных опытных групп относительно контроля: на 210-е сутки на 25% и 44%, а на 365-е сутки на 28% и 19%, соответственно (р<0,05). Наиболее выраженные изменения отмечали у животных пятой группы. Различия значений между показателями крыс опытных групп были достоверны на 210-е сутки.
Интенсивность синтеза ДНК в тимоцитах, вероятно, зависит от внутриклеточного содержания ионов Cd2+. При низких концентрациях металла синтез ДНК активируется, а высоких, напротив, - ингибируется. Предполагается, что ионы Cd2+ по мере увеличения внутриклеточной концентрации оказывают повреждающее действие на ДНК.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода онтогенеза приводит к изменению у крыс первого поколения (F1) количества лейкоцитов и эритроцитов в периферической крови, содержания металлотионеинов в органах (печень, почки, селезенка), концентрации МДА в плазме и эритроцитах крови, интенсивности синтеза ДНК в тимоцитах. Обнаруженные на 120 сутки исследования изменения носят компенсаторно-приспособительный характер и свидетельствуют о формировании в организме адаптивно-защитных реакций. В последующие сроки наблюдения (210-е и 365-е сутки) регистрировали развитие негативных реакций: отмечали ингибирование синтеза ДНК в тимоцитах и увеличение концентрации МДА в эритроцитах.
Известно, что в системе мать-плод через плацентарный барьер проникает 0,02% кадмия от его общей дозы [Sonawane B.R. et al., 1975]. Учитывая короткий период воздействия металла на родителей (F0) и, следовательно, низкие уровни накопления в организме матери (F0), можно предположить, что формирование негативных реакций у крыс первого поколения обусловлено воздействием кадмия в постнатальный период развития.
Действительно, наибольшее количество металла в организм крысят поступает в молочный период вскармливания, так как с молоком матери всасывается практически 100% токсичного элемента. В то же время при поступлении кадмия в организм крыс с питьевой водой всасывается лишь 1-5%. Несмотря на то, что максимальное количество металла переходит в организм крысят в начальный период постнатального онтогенеза, развитие негативных реакций в клетках регистрировали на 210-е и 365-е сутки исследования. Возможно, это связано со снижением действующей концентрации металла в органах и тканях в результате увеличения живой массы крысят. Необходимо подчеркнуть, что процесс интенсивного роста крысят завершается к 180 суткам постнатального периода онтогенеза.
Следовательно, ответная реакция организма крыс (F1), подвергнутых хрони-ческому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития характеризуется развитием как адаптивно-защитных, так и негативных реакций на уровне клеток. Следует отметить, что степень проявления этих изменений зависит от концентрации кадмия в питьевой воде и продолжительности его поступления в организм.
3. Ответная реакция организма крыс второго поколения (F2), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития
Оценка содержания лейкоцитов и эритроцитов в периферической крови крыс второго поколения (F2), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития выявила снижение количества лейкоцитов у животных седьмой и восьмой групп в течение всего периода наблюдения. Наиболее выраженный характер изменений регистрировали у крыс восьмой группы. На 120-е, 210-е и 365-е сутки исследования величина показателя была ниже контроля на 61%, 46% и 65%, соответственно (р<0,05). Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 120-е и 365-е сутки.
В то же время изменения количества эритроцитов носили нелинейный характер. У крыс седьмой группы на 120-е сутки наблюдали увеличение числа клеток на 27% и 40% относительно контроля и восьмой группы, соответственно (р<0,05). В дальнейшем значения показателя были на уровне контроля. У животных восьмой группы на протяжении всего срока исследования существенных изменений не регистрировали.
Определение содержания металлотионеинов в органах (печень, почки, селезенка) крыс второго поколения обнаружило следующие особенности (табл. 6). В печени животных седьмой группы после незначительной активации синтеза металлотионеинов на 120-е сутки отмечали ингибирование на 210-е и 365-е сутки. У животных восьмой группы изменения показателя носили более выраженный характер. На 120-е сутки регистрировали увеличение на 250%, а на 210-е и 365-е сутки уменьшение на 40% и 35%, соответственно (р<0,05). Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 120-е сутки.
Аналогичную динамику показателя регистрировали в почках, однако эти изменения имели менее выраженный характер (табл. 6). У животных восьмой группы на 120-е сутки отмечали увеличение на 25% (р<0,05), а на 210-е сутки - уменьшение на 15% (р<0,05). Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 210-е сутки.
Таблица 6. Содержание металотионеинов в органах крыс второго поколения (F2), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития, % от контроля
Группы животных | Сроки исследования, сутки | ||
120 | 210 | 365 | |
Печень | |||
7 (0,05 мг/л) | 115,8±21,2 | 91,1±14,0 | 68,2±1,8* |
8 (0,1 мг/л) | 350,3±46,9*+ | 60,3±6,2* | 65,4±6,7* |
9 (контроль) | 100,0±22,5 | 100,0±10,4 | 100,0±10,4 |
Почки | |||
7 (0,05 мг/л) | 132,3±20,9 | 108,2±7,3 | 81,5±13,8 |
8 (0,1 мг/л) | 152,3±8,1* | 84,7±2,9*+ | 94,9±10,9 |
9 (контроль) | 100,0±11,4 | 100,0±5,1 | 100,0±10,4 |
Селезенка | |||
7 (0,05 мг/л) | 223,6±47,9* | 120,3±8,0 | 104,7±4,1 |
8 (0,1 мг/л) | 123,4±8,0+ | 151,7±23,5*+ | 81,8±3,0 |
9 (контроль) | 100,0±7,2 | 100,0±10,1 | 100,0±10,4 |
В то же время в селезенке изменения концентрации металлотионеинов носили нелинейный характер (табл. 6). На 120-е сутки у животных седьмой группы наб-людали увеличение значений показателя на 123% (р<0,05) с последующим сни-жением до уровня контроля на 210-е и 365-е сутки. В тканях селезенки крыс восьмой группы на 120-е и 210-е сутки регистрировали повышение активности синтеза металлотионеинов на 23% и 51%, соответственно (р<0,05). Напротив, на 365-е сутки постнатального периода развития отмечали тенденцию к снижению содержания металлотионеинов. Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны на 120-е и 210-е сутки.
Оценка содержания МДА в плазме периферической крови крыс выявила повышение его величины на 120-е сутки (табл. 7). Различия значений между показателями животных опытных групп были достоверны. У крыс седьмой группы наблюдали рост концентрации МДА относительно контроля на 55% (р<0,05), а восьмой - на 20% (р<0,05).
Таблица 7. Содержание МДА в плазме и эритроцитах периферической крови крыс второго поколения (F2), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития, % от контроля
Группы животных | Сроки исследования, сутки | ||
120 | 210 | 365 | |
Плазма | |||
7 (0,05 мг/л) | 155,0±6,2* | 102,2±2,2 | 89,7±9,1 |
8 (0,1 мг/л) | 120,1±8,3*+ | 107,0±16,9 | 65,0±9,8*+ |
9 (контроль) | 100,0±6,2 | 100,0±10,6 | 100,0±26,1 |
Эритроциты | |||
7 (0,05 мг/л) | 90,7±5,6 | 88,6±7,2 | 101,9±3,1 |
8 (0,1 мг/л) | 78,1±3,6* | 147,8±11,5*+ | 103,8±7,4 |
9 (контроль) | 100,0±11,4 | 100,0±8,7 | 100,0±7,6 |
В дальнейшем содержание МДА в плазме крови имело тенденцию к снижению. У животных восьмой группы на 365-е сутки исследования регистрировали уменьшение уровня МДА на 35% и 24% относительно контроля и седьмой группы, соответственно (р<0,05).
В эритроцитах периферической крови подопытных животных концентрация МДА на 120-е сутки исследования была ниже контроля (табл. 7). Достоверные различия значений наблюдали у крыс восьмой группы. На 210-е сутки в зависимости от концентрации кадмия в питьевой воде регистрировали разнонаправленный характер изменений величины показателя. У животных восьмой группы отмечали увеличение концентрации МДА на 48% (p<0,05). К концу эксперимента (365-е сутки) значения показателя у крыс контрольной и опытных групп были на одинаковом уровне. Достоверные различия значений между показателями животных опытных групп регистрировали на 210-е сутки.
Длительное хроническое воздействие нитрата кадмия на организм крыс второго поколения (F2) оказывало влияние на синтез ДНК. Оценка интенсивности синтеза ДНК в тимоцитах, выявила фазовый характер изменений (рис. 3). У животных седьмой группы на
120-е сутки постнатального периода развития отмечали активацию синтеза ДНК на 60% (p<0,05) с последующим ингибированием на 50% - на 210-е сутки (p<0,05). На 365-е сутки наблюдали повышение величины показателя на 20% (р<0,05). Аналогичные изменения интенсивности ДНК регистрировали у крыс восьмой группы. На 210-е сутки исследования значения показателя были снижены на 56% относительно контроля (p<0,05).
Полученные результаты свидетельствуют о том, что хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития характеризуется формированием негативных реакций в организме крыс второго поколения (F2): изменением количества лейкоцитов в периферической крови; содержания металлотионеинов в органах (печень, почки, селезенки), МДА в плазме и эритроцитах периферической крови, синтеза ДНК в тимоцитах. Очевидно, что степень проявления нарушений зависит от концентрации кадмия в питьевой воде и продолжительности его поступления в организм.
Длительное поступление кадмия с питьевой водой в организм крыс-родителей (F1) повышает его содержание в органах и тканях, что влияет на величину перехода металла в плод через плаценту во время беременности, и, соответственно, усиливает воздействие металла на потомство в антенатальный период развития. Кроме того, в период спаривания у животных (F1), отмечали развитие реакций негативного характера на клеточном уровне. Более того, не от всех крыс-самцов (F1) было получено потомство (F2), что свидетельствует о нарушении их репродуктивной функции и подтверждается данными о повышении количества аномальных головок спермиев на 80-е сутки исследования при хроническом воздействии хлорида кадмия [Осипов А.Н. и др., 2000].
Следовательно, ответная реакция организма крыс (F2) при хроническом поступлении нитрата кадмия с питьевой водой в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л зависит не только от концентрации металла и длительности его поступления, но и, возможно, от периода воздействия (антенатальный и/или постнатальный) и физиологического состояния родителей (F1).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Техногенное загрязнение окружающей среды кадмием оказывает негативное влияние на млекопитающих. В организм животных он в основном поступает с кормом и водой. На всасывание металла в ЖКТ млекопитающих влияют возраст, пол, лактация, рацион. Кадмий обладает высокой кумулятивной способностью и в период беременности животных, проникая через плаценту, оказывает повреждающее действие на плод как непосредственно, так и косвенно, вызывая изменения в организме матери [Залавина С.В., 2009]. Характер нарушений развития плода зависит от срока беременности, продолжительности воздействия токсичного элемента и его дозы (концентрации). Значительное увеличение перехода кадмия через плаценту характерно в поздние сроки беременности животных.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития оказывает негативное влияние на организм крыс (поколение F1) в начальные сроки исследования: наблюдали снижение количества лейкоцитов, увеличение содержания МДА в плазме периферической крови и ингибирование синтеза ДНК в тимоцитах. В последующие сроки наблюдения (90-е и 120-е сутки) регистрировали восстановление значений исследуемых показателей до уровня контроля. Вероятно, обратимый характер изменений обусловлен не только прекращением поступления и интенсивностью выведения металла из организма, но и снижением концентрации кадмия в тканях и органах по мере увеличения живой массы млекопитающих в процессе онтогенеза.
В то же время у животных первого поколения (F1), которые продолжали получать раствор нитрата кадмия в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л в течение 365 суток постнатального периода развития, динамика содержания лейкоцитов и эритроцитов в периферической крови, металлотионеинов в печени, почках и селезенке, МДА в плазме и эритроцитах периферической крови и интенсивности синтеза ДНК в тимоцитах имела другой характер. Сравнительный анализ данных позволяет предположить, что обнаруженные изменения на 120-е сутки исследования носили компенсаторно-приспособительный характер и свидетельствовали о формировании адаптивно-защитных реакций организма. В последующие сроки наблюдения (210-е и 365-е сутки) отмечали формирование негативных реакций на клеточном уровне.
Ранее нами было показано, что хроническое поступление нитрата кадмия в организм крыс (3-4 месячного возраста) с питьевой водой в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л в течение первых 60 суток не вызывает отклонений биологических показателей от нормы [Мирзоев Э.Б. и др., 2004]. Поэтому можно предположить, что потомство (F1) получено от физиологически здоровых родителей (F0), а выявленные у животных (F1) нарушения зависят от дозы, величины перехода кадмия в ткани плода во время беременности и продолжительности его поступления в постнатальный период развития.
Учитывая тот факт, что у крыс первого поколения дозы кадмия и величина перехода в ткани плода во время беременности одинаковы, то различия в ответной реакции организма можно объяснить продолжительностью поступления металла в постнатальный период развития. Действительно, животные (F1) в первой серии экспериментов получали кадмий только с молоком матери в течение 30 суток, а второй - как в молочный период вскармливания, так и с питьевой водой.
Количество токсичного элемента, которое переходит в плод во время внутриутробного развития в несколько раз ниже, чем в период молочного вскармливания [Булдаков Л.А. и Москалев Ю.И., 1968]. Поэтому наиболее опасным периодом воздействия металла можно считать поступление кадмия с молоком матери. Более того, в постнатальный период онтогенеза всасывание металла в ЖКТ в период молочного вскармливания составляет практически 100%, а с питьевой водой 1-5%.
На 120-е сутки исследования у животных F1 в первой серии экспериментов регистрировали восстановление обнаруженных изменений. В то же время у крыс F1 во второй серии экспериментов, которые продолжали получать кадмий с питьевой водой, значения показателей превышали контроль, что позволяет предположить формирование адаптивно-защитных реакций.
Хроническое поступление кадмия в организм крыс (F2) на фоне развития негативных процессов у родителей (F1) оказывало неблагоприятное влияние на потомство во втором поколении: отмечали снижение количества лейкоцитов в периферической крови у животных (F2) в течение всего периода наблюдения; изменение содержания металлотионеинов в органах (печень, почки, селезенка) и МДА в плазме и эритроцитах периферической крови, синтеза ДНК в тимоцитах.
Необходимо отметить, что если первое поколение животных было получено от физиологически здоровых крыс (F0), то второе поколение животных было получено от крыс (F1), у которых регистрировали негативные реакции, обусловленные хроническим воздействием кадмия в антенатальный и постнатальный периоды развития (365 суток). Более того, не от всех крыс-самцов (F1) было получено потомство (F2), что свидетельствует о нарушении их репродуктивной функции.
Сравнительный анализ ответной реакции крыс в первом и втором поколении выявил различия. У крыс первого поколения наблюдали развитие как адаптивно-защитных, так и негативных реакций на уровне клеток. Формирование негативных реакций отмечали на 210-е и 365-е сутки исследования (увеличение содержания МДА в эритроцитах и ингибирование синтеза ДНК в тимоцитах), тогда как у крыс во втором поколении негативные реакции выявлены как на клеточном уровне, так и в системе органов кроветворения (лейкопения). Возможно, это зависит от величины трансплацентарного перехода кадмия.
Действительно, коэффициент перехода кадмия в ткани плода у животных одинаков, однако уровни накопления в организме матери (F0 и F1) разные. Это предположение подтверждают данные, полученные при хроническом воздействии радионуклидов на овец. Установлено, что с каждым последующим окотом повышается поступление токсикантов в плод [Булдаков Л.А. и Москалев Ю.И., 1968].
Следовательно, формирование адаптивно-защитных и/или негативных реакций при хроническом поступлении нитрата кадмия с питьевой водой в организм крыс (F1 и F2) зависит от концентрации металла, длительности его поступления, периода воздействия (антенатальный и/или постнатальный) и физиологического состояния родителей.
В рамках исследования биологического действия кадмия определенное внимание уделяли механизмам цитотоксического действия. Известно, что одной из ключевых реакций цитотоксического действия ионов кадмия является процесс свободнорадикального ПОЛ. При воздействии металла в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития отмечали ингибирование процесса свободнорадикального ПОЛ в эритроцитах периферической крови крыс (поколение F1) на 30-е и 60-е сутки исследования. В последующие сроки наблюдения существенных изменений относительно контроля не регистрировали. В то же время в эритроцитах периферической крови крыс первого и второго поколений, которые в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода развития были подвергнуты хроническому воздействию кадмия, на 120-е сутки регистрировали ингибирование процесса свободнорадикального ПОЛ, а на 210-е сутки - активацию. Вероятно, обнаруженные изменения зависят от уровня биоантиоксидантов в организме, Cd2+-индуцированного синтеза металлотионеинов и внутриклеточной концентрации кадмия. Не исключается также то, что это связано с обновлением пула эритроцитов.
ВЫВОДЫ
1. Хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 30 суток постнатального периода развития оказывало негативное влияние на крыс (поколение F1) в начальные сроки исследования, что характеризовалось снижением количества эритроцитов и лейкоцитов в периферической крови и интенсивности синтеза ДНК в тимоцитах. Динамика содержания металлотионеинов в тканях органов и МДА в плазме и эритроцитах периферической крови имела нелинейный характер. Обнаруженные изменения носили обратимый характер.
2. Хроническое воздействие нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода онтогенеза характеризуется развитием у крыс первого поколения (F1) как адаптивно-защитных, так и негативных реакций. На 120-е сутки исследования регистрировали активацию синтеза ДНК в тимоцитах, увеличение содержания металлотионеинов в печени и снижение МДА в эритроцитах, что свидетельствует о развитии компенсаторно-приспособительных реакций у животных. Последующее поступление металла в организм с питьевой водой в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л приводило к развитию негативных реакций: отмечали ингибирование синтеза ДНК в тимоцитах и увеличение концентрации МДА в эритроцитах периферической крови.
3. У крыс второго поколения (F2), подвергнутых хроническому воздействию нитрата кадмия в антенатальный и в течение 365 суток постнатального периода онтогенеза, развитие негативных реакций наблюдали как на клеточном уровне (ингибирование синтеза металлотионеинов в клетках органов), так и в системе кроветворения (снижение количества лейкоцитов в периферической крови). Изменения концентрации МДА и интенсивности синтеза ДНК носили нелинейный характер.
4. Ответная реакция организма крыс (F1 и F2) на хроническое поступление нитрата кадмия с питьевой водой в концентрациях 0,05 и 0,1 мг/л характеризуется развитием адаптивно-защитных и/или негативных реакций. Формирование адаптивно-защитных и/или негативных реакций зависит от концентрации металла в питьевой воде и длительности его поступления в организм.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Публикации в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК
1. Фролова Н.А. Биологическое действие кадмия при хроническом воздействии в антенатальный и постнатальный периоды развития крыс // Токсикологический вестник. - 2007. №1. - С.11-13.
2. Фролова Н.А. Оценка содержания металлотионеинов в органах крыс первого поколения (F1), подвергнутых хроническому воздействию кадмия // Вестник РУДН, серия Экология и безопасность жизнедеятельности. - 2010. №1. - С. 14-17.
3. Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Губина О.А., Фролова Н.А. Ответная реакция организма крыс (поколение F1) при хроническом воздействии кадмия в антенатальный и молочный период вскармливания // Токсикологический вестник. 2011. №4. ЦС. 16-19
Статьи в сборниках трудов конференций
1. Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Фролова Н.А., Губина О.А., Мельник А.Д. Содержание металлотионеинов в органах крыс при хроническом воздействии кадмия // Международная научно-производственная конференция УАктуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животныхФ, посвященную 100-летию со дня
рождения профессора Авророва А.А. Воронеж. 22-23 июня. - 2006. - С.730-733.
2. Mirzoev E., Kobyalko B., Gubina O., Frolova N. A study into biological effects of cadmium nitrate chronically uptaken by rats with drinking water // 3rd International Conference in Lithuania УMetals in the environmentФ. Vilnius. 26- 29 April. - 2006. - Р.239-240.
3. Фролова Н. А., Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Губина О.А. Биологическое действие кадмия при хроническом поступлении в организм крыс в антенатальный и постнатальный периоды развития // Научные труды КФ РГАУ-МСХА. Вып. 8. - Калуга: ИП Кошелев А.Б. Издательство УЭйдосФ. - 2008. - С.157-161.
4. Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Губина О.А., Фролова Н.А. Ответная реакция организма крыс при хроническом воздействии кадмия в антенатальный и молочный период вскармливания // Актуальные проблемы экологии и природопользования. Вып. 12: Сборник научных трудов. - М.: ИПЦ УЛучФ. - 2010. - С. 226-230.
Публикации в других изданиях
1. Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Шевченко Т.С., Губина О.А., Валейчик А.И., Силкина Н.А. Отдаленные биологические эффекты кадмия при хроническом поступлении в организм крыс с питьевой водой // Труды регионального конкурса научных проектов в области естественных наук. Выпуск 8. - Калуга: Издательский дом УЭйдосФ - 2005. - С.277-282.
2. Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Губина О.А., Силкина Н.А. Отдаленные биологические эффекты кадмия при хроническом поступлении в организм крыс в малых и больших дозах // Труды регионального конкурса научных проектов в области естественных наук. Выпуск 10. - Калуга: Издательский дом УЭйдосФ. - 2006. - С.318-325.
3. Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Фролова Н.А., Губина О.А., Мельник А.Д. Отдаленные биологические эффекты кадмия при хроническом поступлении в организм крыс в малых и больших дозах // Труды регионального конкурса научных проектов в области естественных наук. Выпуск 11. - Калуга: Изд-во АНО ФКНЦУ. - 2007. - С. 352-360.
4. Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Губина О.А., Фролова Н.А. Ответная реакция организма крыс при хроническом воздействии кадмия в антенатальный и молочный период вскармливания // Труды регионального конкурса научных проектов в области естественных наук. Выпуск 15. - Калуга: Изд-во АНО ФКНЦУ. - 2010. - С. 151-155.
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии