Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по сельскому хозяйству
На правах рукописи
Шмидт Галина Олеговна
МИКРОБИОЦЕНОЗ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА
ПЕРЕПЕЛОВ В ОНТОГЕНЕЗЕ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ ЭМ-КУРУНГОЙ ПРИ ДИАРЕЙНОМ СИМПТОМОКОМПЛЕКСЕ
06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Новосибирск 2012
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина
Научный руководитель: | Плешакова Валентина Ивановна, доктор ветеринарных наук, профессор |
| Официальные оппоненты: | Аликин Юрий Серафимович, доктор биологических наук, Институт медицинской биотехнологии ФБУН ГНЦВиБ Вектор, старший научный сотрудник; |
Афонюшкин Василий Николаевич, кандидат биологических наук, ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока, старший научный сотрудник | |
Ведущая организация | ФГБОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины |
Защита состоится л_06_ июня 2012г. в ____ ч. на заседании диссертационного совета Д 006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, пос. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62,
E-mail: dis.ievsidv@list.ru
С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.
Автореферат разослан л_____ апреля 2012г.
Ученый секретарь
диссертационного совета Г.М. Стеблева
- ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Перепеловодство в настоящее время является одним из приоритетных направлений птицеводства, как наиболее интенсивно развивающаяся и экономически выгодная отрасль сельского хозяйства (Р.аКарапетян, 2005; А.Н. Белогуров с соавт., 2008; Л. Белякова с соавт., 2006, 2008; I. Yeshwanth, 1990; J. Baumgartner, 1994). Однако смоделированные доместикационные технологии содержания перепелов существенно отличаются от природных условий, что вызывает длительное напряжение адаптационных механизмов птицы и приводит к нарушению гомеостаза, снижению иммунитета и, как следствие, ухудшению качественных показателей выхода продукции - мяса и яиц (А.Н. Белогуров, 2009).
Среди причин отхода молодняка сельскохозяйственной птицы основное место занимают болезни желудочно-кишечного тракта, возбудителями которых является условно-патогенная микрофлора. Микроэкологические изменения бактериального баланса в пищеварительном тракте птенцов приводят к возникновению патологических состояний, что нарушает переваривание и усвоение питательных веществ (И. Егоров с соавт., 2004; Е.аЛазуткина, 2007; Н.С. Кухаренко, 2010).
Для повышения сохранности и резистентности птицы применяют различные препараты растительного и животного происхождения: антибактериальные препараты, пробиотики, пребиотики, витаминно-минеральные добавки, органические кислоты, иммуномодуляторы и другие (Л.Т. Даниелян, 2003; Ю.В. Косинцев, 2005; В.аОркин, 2006).
В настоящее время в птицеводстве наблюдается снижение интенсивности использования кормовых антибиотиков в качестве добавок, что связано с решением ЕС (2006). В связи с чем широкое применение в птицеводстве нашли пробиотики, как наиболее доступные на рынке и безвредные для организма птицы препараты (А.Б.аИванова, 2004; В.Г.Денисов, 2009). Одним из таких препаратов является кормовой концентрат ЭМ-курунга.
Актуальность темы исследования обусловлена тем, что в доступной литературе отсутствуют данные о формировании микробиоценоза пищеварительного тракта перепелов в постнатальном онтогенезе, а фрагментарные сведения о влиянии пробиотических препаратов на состав микрофлоры, физиологические и продуктивные показатели птицы немногочисленны.
Цель исследования: изучить микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов в постнатальном онтогенезе при промышленном разведении, а также возможность его коррекции кормовым концентратом ЭМ-курунга при диарейном симптомокомплексе.
Задачи исследования:
- Изучить видовой состав и биологические свойства микроорганизмов, обитающих в различных отделах пищеварительного тракта клинически здоровых перепелов в постнатальном онтогенезе.
- Установить количественные и качественные показатели микробиоценоза, а также изменение биологических свойств микроорганизмов, выделенных от перепелов с диарейным симптомокомплексом.
- Изучить микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов при введении в рацион кормового концентрата ЭМ-курунга.
- Определить влияние ЭМ-курунги на основные гематологические, биохимические показатели крови и продуктивные качества перепелов.
Научная новизна. Получены новые данные о количественном и качественном составе микрофлоры пищеварительного тракта у перепелов в постнатальном онтогенезе при промышленном разведении. Установлены показатели нормальной микрофлоры различных отделов пищеварительного тракта клинически здоровых перепелов. Изучены биологические свойства отдельных представителей микробиоценоза при диарейном симптомокомплексе и антагонистическая активность лактобацилл и бифидобактерий, содержащихся в кормовом концентрате ЭМ-курунга, в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры пищеварительного тракта больных перепелов. Установлено корригирующее влияние ЭМ-курунги на микробиоценоз и сохранность перепелов при нарушениях функций пищеварительного тракта, а также положительное действие полезных микроорганизмов на продуктивные качества перепелов.
Теоретическая и практическая значимость работы. Диссертационная работа является разделом комплексной темы научно-исследовательской работы кафедры ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А.Столыпина Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц (№ гос. регистрации 01.2.00100602).
Полученные данные об основных представителях микробиоценоза в возрастном аспекте позволили установить количественный и качественный состав микрофлоры пищеварительного тракта клинически здоровых перепелов породы фараон. Использование кормового концентрата ЭМ-курунга в рационе птицы способствовало восстановлению нормальной микрофлоры пищеварительной системы при диарейном симптомокомплексе, оказывая положительное влияние на продуктивные качества перепелов.
Материалы диссертационной работы использованы при разработке методических рекомендаций Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов и его коррекция пробиотиком, утвержденных на подсекции Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии (2011 г.).
Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на следующих конференциях:
- Научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМиБ ОмГАУ им. П.А.Столыпина (2009, 2010, 2011 гг.).
- Международной научно-практической конференции Основные проблемы и перспективы развития ветеринарной медицины в обеспечении животноводства Прикаспийского региона Российской Федерации (2009 г.).
- V Международной научноЦпрактической конференции Интеллектуальный потенциал XXI: ступени познания (Новосибирск, 2011г.).
- V Международной научно-практической конференции молодых исследователей Наука и молодежь: новые идеи и решения (Волгоград, 2011аг.).
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано шесть научных работ, в том числе две в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ (Ветеринария Кубани, Ветеринарная патология).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения материалов собственных исследований, выводов, практических предложений, списка литературы, приложений, иллюстрирована 10 рисунками и 20 таблицами. Список литературы включает 180 источников, в том числе 43 иностранных.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Формирование микробиоценоза пищеварительного тракта перепелов в постнатальном онтогенезе.
- Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов при диарейном симптомокомплексе и его коррекция кормовым концентратом ЭМ-курунга.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы исследования
Работа выполнена в 2009-2012 гг. на кафедре ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Омский государственный аграрный университет имени П.А.Столыпина и ЗАО Иртышское Омской области. Отдельные исследования проведены на базе лаборатории резистентности животных ФГОУ ВПО ОмГАУ и БУ Омская областная ветеринарная лаборатория.
Объект исследования - перепела породы фараон с момента вывода до достижения 45 сут. (n=2000), половозрелые перепела и несушки от 45 до 105 сут. возраста (n=279). Все манипуляции с птицей производили согласно Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (2003аг.).
На первом этапе изучали качественный и количественный состав микрофлоры различных отделов пищеварительного тракта перепелов с момента вывода до достижения 105 сут. возраста.
На втором этапе изучали состав микробиоценоза пищеварительного тракта у перепелов с диарейным симптомокомплексом и возможность его коррекции ЭМ-курунгой.
В период производственного эксперимента было изучено влияние ЭМкурунги на ряд гематологических и биохимических показателей крови, а также продуктивность птицы. При этом учитывали сохранность молодняка, яйценоскость несушек, после убоя определяли массу тела и внутренних органов.
Определение количественного и качественного состава микрофлоры осуществляли посевом разведений содержимого пищеварительного тракта на дифференциально-диагностические и селективные питательные среды (Эндо, Левина, Плоскирева, элективный солевой агар, агар Сабуро, среда Бликфельдта, бифидум-среда).
Патогенные свойства культур, выделенных от больных перепелов, изучали постановкой биологической пробы на белых мышах. LD50/мл определяли по методу Рида-Менча в модификации В.Л. Троицкого (1950 г.).
Чувствительность выделенных культур к антибактериальным препаратам изучали дискодиффузионным методом (МУК 4.2.1890-04).
Изучение антагонистической активности лактобацилл и бифидобактерий в отношении условно-патогенных культур микроорганизмов, выделенных от перепелов, проводили in vitro методом отсроченного антагонизма (МУК 4.2.2602-10).
Статистическую обработку результатов, полученных в ходе экспериментов и наблюдений, проводили при помощи компьютерной программы Microsoft Excel 2000 и пакета программ Statistica.
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. Формирование микробиоценоза
пищеварительного тракта перепелов
Установлено, что пищеварительный тракт перепелят сразу после вывода колонизировали микроорганизмы родов Enterococcus, Escherichia. В ротовой полости их количество составило 2,30,4102 и 1,80,2102 КОЕ/г, а в толстом кишечнике 2,20,4102 и 2,00,6102 КОЕ/г соответственно.
На третьи сутки появились и другие представители облигатной микрофлоры: Lactobacillus spp. (1103) и Bifidobacterium spp. (1104), а также транзиторные микроорганизмы, такие как Staphylococcus saprophyticus (4,1105) и Staphylococcus aureus (2103 КОЕ/г).
В семисуточном возрасте микробиоценоз значительно изменился в качественном отношении (табл. 1). Увеличилось количество представителей облигатной и транзиторной микрофлоры, появились дрожжеподобные грибы Candida albicans.
В ротовой полости и краниальном отделе пищевода увеличилось количество энтерококков, в частности E. faecium (2,10,3106), стафилококков - Staphylococcus aureus (4,20,9104), а также Lactobacillus spp. (3,76,2103); появились Bifidobacterium spp. (4,05,8102).
В мышечном желудке общее количество микрофлоры не превышало 1104. Зарегистрировали появление E. faecalis (7,2102).
Таблица 1 Ц Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов (7 сут.)
Вид микро-организма КОЕ/г | Отдел | ||||||
рот. полость, краниальный отдел пищевода | каудальный отдел пищевода, зоб | железистый желудок | мышечный желудок | тонкий кишечник | слепые отростки | толстый кишечник, клоака | |
E. faecalis | 1,40,4106 | 9,61,6105 | 2,00,4104 | 7,20,3102 | 5,40,5105 | 1,30,4105 | 1,50,4106 |
E. faecium | 2,10,3106 | 7,82,4105 | 3,70,1104 | 5,20,1102 | 4,21,2106 | 3,61,2105 | 1,30,3107 |
E. coli | 2,30,8105 | 1,00,7105* | 5,41,3102 | - | 7,30,6106 | 1,10,2106 | 5,53,5106* |
C. albicans | 3,20,7102 | 2,30,6103 | 6,21,6104 | 7,10,4102 | 5,70,4103 | 8,31,4103 | 2,10,8104 |
S. saprophyticus | 3,90,6105 | 3,40,9105 | 1,70,8102* | 1,40,7101* | 2,80,8102 | 6,50,7102 | 4,31,5104 |
S. aureus | 4,20,9104 | 3,31,1104 | - | - | 5,11,2101 | 4,71,3101 | - |
Bifidobacterium spp. | 4,05,8102* | 7,05,8102* | 7,05,8102* | 4,05,8102* | 4,05,8104* | 7,05,8105* | 3,76,2106* |
Lactobacillus spp. | 3,76,2103* | 4,05,8104* | 7,05,8103* | 4,05,8103* | 4,05,8104* | 4,05,8106* | 4,05,8106* |
* - р < 0,05
- - отсутствие роста
В тонком кишечнике у семисуточных перепелят возросло содержание E.аfaecalis в 7,3 раза, а E. faecium в 26 раз, по сравнению с показателями трехсуточных птенцов. В 19 раз снизилось количество S. saprophyticus.
В слепых отростках значительно возросло содержание кишечной палочки, а количество стафилококков, в том числе S. saprophyticus - снизилось.
Из толстого кишечника и клоаки представителей аэробной и анаэробной микрофлоры выделяли в соотношении 1:1.
В процессе дальнейшего формирования микробиоценоза верхних отделов пищеварительного тракта (ротовая полость, пищевод, зоб) превалировали кокковые формы, главным образом Enterococcus faecium, а в кишечнике - Bifidobacterium spp.и Lactobacillus spp.
К двухнедельному возрасту в ротовой полости, пищеводе и зобе менее значительные изменения в составе микробиоценоза по сравнению с показателями семисуточных перепелят (табл. 2). Возросло содержание Candida albicans (3,72,8104), а также бифидобактерий, количество которых достигло 1105 КОЕ/г. В то же время содержание E.аfaecium и S. saprophyticus снизилось до 1,10,6105 и 2,71,2105 КОЕ/г соответственно.
Таблица 2 - Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов (14асут.)
Вид микро-организма КОЕ/г | Отдел | ||||||
рот. полость, краниальный отдел пищевода | каудальный отдел пищевода, зоб | железистый желудок | мышечный желудок | тонкий кишечник | слепые отростки | толстый кишечник, клоака | |
E. faecalis | 1,50,9 106* | 2,10,7106 | 4,90,3104 | 4,80,4102 | 3,00,6 106 | 5,02,2105 | 2,20,5107 |
E. faecium | 1,10,6 105* | 3,92,3105* | 6,22,4104 | 3,10,2102 | 7,70,5 106 | 3,80,9106 | 7,33,3107* |
E. coli | 1,81,5 106* | 6,20,8105 | 3,70,5103 | - | 9,20,8 106 | 1,60,8107* | 9,73,2106 |
C. albicans | 3,72,8 104* | 5,62,4104* | 5,10,9104 | 9,51,7102 | 3,30,4103 | 2,50,3103 | 8,31,4103 |
S.saprophyticus | 2,71,2 105* | 1,40,9104* | 1,10,7102* | 4,22,6101 | 4,80,8103 | 2,10,9104 | 3,30,6104 |
S.aureus | 1,70,9 105* | 2,50,8104 | - | - | 6,51,5103 | 6,21,5103 | 1,81,3104* |
Bifidobacterium spp. | 7,05,8 103* | 4,05,8104* | 4,05,8104* | 7,05,8103* | 3,76,2109* | 7,05,8108* | 4,05,81011* |
Lactobacillus spp. | 7,05,8 104* | 4,05,8104* | 7,05,8105* | 4,05,8103* | 7,05,8108* | 4,05,8108* | 7,05,81010* |
Proteus vulgaris | - | - | - | - | - | - | 4,01,0101 |
* - р < 0,05
- - отсутствие роста
В железистом желудке количество E. coli увеличилось по сравнению с показателем семисуточным перепелят до 3,7103 КОЕ/г, Bifidobacterium spp. до 4,05,8104 и Lactobacillus spp. до 7,05,8105 КОЕ/г. Содержание других представителей микробиоценоза изменилось незначительно.
В кишечнике и клоаке значительно возросло содержание Bifidobacterium spp.и Lactobacillus spp., количество которых составило почти 90% всей численности микробиоценоза. В толстом кишечнике их количество достигло 11011 КОЕ/г. Одновременно произошло снижение содержания дрожжеподобных грибов C.аalbicans (1104 КОЕ/г). В клоаке зарегистрировали микроорганизмы Proteus vulgaris (4,01,0101аКОЕ/г).
К 30 сут. возрасту в верхних отделах пищеварительного тракта отмечали снижение количества Enterococcus spp. (до 1,5106 КОЕ/г) и E. coli (до 4,0105 КОЕ/г) (табл. 3).
Таблица 3 Ц Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов (30асут.)
Вид микро-организма КОЕ/г | Отдел | ||||||
рот. полость, краниальный отдел пищевода | каудальный отдел пищевода, зоб | железистый желудок | мышечный желудок | тонкий кишечник | слепые отростки | толстый кишечник, клоака | |
E. faecalis | 2,40,6105 | 3,10,5105 | 1,40,3104 | 1,70,3102 | 7,33,2 105* | 6,12,5106* | 9,23,0106 |
E. faecium | 4,91,5106 | 6,31,3105 | 2,20,4104 | 2,40,9102 | 6,50,5 106 | 4,91,2106 | 5,42,5107* |
E. coli | 2,80,5105 | 5,20,9105 | 3,00,5103 | - | 4,12,8 106* | 7,13,7107* | 4,81,2107 |
C. albicans | 8,22,3103 | 3,13,2104* | 1,20,3104 | 4,82,4102* | 2,10,7 103 | 4,31,6104 | 1,30,9104* |
S. saprophyticus | 9,32,9105 | 7,61,5104 | 4,10,6104 | 3,30,7101 | 5,30,9104 | 5,50,8104 | 5,21,7105 |
S. aureus | 1,51,4105* | 8,12,4103 | 1,10,7103* | - | 2,93,3 102* | 2,72,3103* | 6,10,6104 |
Bifidobacterium spp. | 4,05,8 104* | 7,05,8 103* | 4,05,8 105* | 1,00,1105 | 4,05,8 109* | 7,05,8 107* | 4,05,8 1011* |
Lactobacillus spp. | 4,05,8 106* | 4,05,8 106* | 1,00,1106 | 4,05,8 105* | 7,05,8 108* | 4,05,8 107* | 4,05,8 1010* |
Proteus vulgaris | - | - | - | - | - | 2,30,6102 | 2,61,3102* |
* - р < 0,05
- - отсутствие роста
Наиболее выраженные изменения микробиоценоза отмечали в ротовой полости и краниальном отделе пищевода, где содержание E. faecalis составило снизилось до 2,40,6105, а E. coli - уменьшилось в 6,4 раза по сравнению с аналогичным показателем двухнедельных перепелов и составило 2,80,5105 КОЕ/г. Заметно увеличилось содержание Lactobacillus spp. - 1107 КОЕ/г.
В слепых отростках уменьшилось количество E. faecalis в 12,2 раза по сравнению с показателем двухнедельных перепелов, появились микроорганизмы P. vulgaris (2,30,6102 КОЕ/г).
В толстом кишечнике и клоаке количество E. coli снизилось в 5 раз (4,81,2107), а S.аsaprophyticus в 15,7 раза - 5,21,7105 КОЕ/г. В клоаке возросло количество P. vulgaris до 2,61,3102 КОЕ/г.
У перепелов 45 сут. возраста и старше основу микробиоценоза ротовой полости, пищевода и зоба составили E. faecalis, E. faecium, S. aureus и S.аsaprophyticus. Общая численность энтерококков в ротовой полости - 4,10,6106 КОЕ/г, что в 3 раза превысило содержание других видов микроорганизмов в данном отделе пищеварительного тракта (табл. 4).
Таблица 4 Ц Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов (45 сут.)
Вид микроорганизма КОЕ/г | Отдел | ||||||
рот. полость, краниальный отдел пищевода | каудальный отдел пищевода, зоб | железистый желудок | мышечный желудок | тонкий кишечник | слепые отростки | толстый кишечник, клоака | |
E. faecalis | 1,20,4 106 | 2,20,6105 | 4,30,3104 | 1,40,4102 | 6,80,6 104 | 5,80,4106 | 3,60,8106 |
E. faecium | 2,90,9 106 | 3,30,7106 | 7,11,5104 | 1,80,3102 | 3,10,5 106 | 2,40,4107 | 2,10,5107 |
E. coli | 1,80,4 105 | 8,70,5104 | 5,21,4103 | 2,10,5102 | 8,31,8 105 | 3,80,7106 | 5,20,5106 |
C. albicans | 8,21,2 104 | 4,50,4104 | 3,90,3103 | 6,32,1102 | 6,10,6 103 | 4,70,5104 | 7,61,7104 |
S. saprophyticus | 7,21,3 105 | 4,11,5104* | 1,30,9104* | 7,30,7101 | 3,00,8 104 | 8,21,1104 | 2,70,4104 |
S.aureus | 3,50,8 105 | 3,90,6103 | 5,10,6102 | - | 8,41,9 102 | 1,50,2103 | 5,91,3104 |
Bifidobacterium spp. | 4,05,8 103* | 7,05,8103* | 7,05,8102* | 4,05,8102* | 4,05,8 109* | 7,05,8108* | 4,05,8 1012* |
Lactobacillus spp. | 4,05,8 105* | 4,05,8105* | 7,05,8104* | 4,05,8104* | 7,05,8108* | 4,05,8108* | 4,05,81010* |
Proteus vulgaris | - | - | - | - | - | 3,70,8102 | 6,41,4102 |
* - р < 0,05
- - отсутствие роста
Количество микроорганизмов рода Lactobacillus spp. (4,05,8105) в ротовой полости и пищеводе превалировало над Bifidobacterium spp. (4,05,8103). Аналогичная тенденция прослеживалась в зобе и каудальном отделе пищевода.
В железистом и мышечном желудках общее количество микрофлоры не превышало 1104 КОЕ/г. Так, в железистом желудке основную массу микрофлоры составляли E. faecium (7,11,5104 КОЕ/г) и Lactobacillus spp. (7,05,8104 КОЕ/г), а в мышечном Enterococcus spp., Staphylococcus spp., C.аalbicans, E.аcoli Bifidobacterium spp. выделяли почти в равном соотношении.
В кишечнике доминирующее положение занимали Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. Если в тонком кишечнике и слепых отростках их численность не превышала 1109 КОЕ/г, то в толстом кишечнике и клоаке достигала 11012аКОЕ/г.
В меньшем количестве в толстом кишечнике и клоаке идентифицировали E. coli (5,20,5106), E. faecium (2,10,5107) и E. faecalis (3,60,8106 КОЕ/г).
Содержание других представителей (C. albicans, S.aureus, S. saprophyticus) не превышало 1% от общего числа микроорганизмов. Proteus vulgaris выделяли из слепых отростков, толстого кишечника и клоаки в количестве не превышающем 6,41,4102 КОЕ/г.
2.2.2. Изменение состава микрофлоры
при диарейном симптомокомплексе
Наиболее часто (87%) диарейный симптомокомплекс регистрировали у перепелят первых двух недель жизни. В двух-трехсуточном возрасте микробиоценоз значительно изменен, по сравнению с показателями клинически здоровых перепелят. Отметили увеличение количества E. coli и Enterococcus spp., особенно E. feacalis на фоне полного отсутствия бифидобактерий и снижения количества лактобацилл (табл. 5).
Таблица 5 Ц Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов с диарейным симптомокомплексом (3 сут.)
Вид микро- организма КОЕ/г | Отдел | ||||||
рот. полость, краниальный отдел пищевода | каудальный отдел пищевода, зоб | железистый желудок | мышечный желудок | тонкий кишечник | слепые отростки | толстый кишечник, клоака | |
E. faecalis | 1,60,9 105 | 5,60,2 104 | 4,10,6 104 | - | 3,50,9 105 | 5,40,6 105 | 2,90,3 105 |
E. faecium | 9,40,6 105 | 3,70,1 105 | 3,90,7 104 | 5,30,8102 | 4,50,7 105 | 1,90,3 105 | 3,30,9 106 |
E. coli | 8,71,1 104 | 6,11,2 104 | 2,70,9 103 | 2,10,3102 | 7,21,3 104 | 5,80,4 103 | 5,70,3 106 |
S.saprophyticus | 5,50,7 105 | 8,90,5 105 | 1,60,3 103 | 6,60,5102 | 6,11,9 103 | 2,30,4 103 | 5,20,7 104 |
S.aureus | 6,31,2 103 | 5,20,4 103 | 4,30,8 102 | - | 3,80,8 102 | 1,61,2 103 | 4,11,1 104 |
Bifidobacterium spp. | - | - | - | - | - | - | - |
Lactobacillus spp. | - | - | 4,05,8 101* | - | 7,05,8 101* | 4,05,8 102* | 7,05,8 102* |
* - р < 0,05
- - отсутствие роста
При диарейном симптомокомплексе у перепелов разного возраста количество транзиторных микроорганизмов, таких как стафилококки, изменялось не всегда достоверно, но наиболее значительно в ротовой полости, зобе, а также в слепых отростках, толстом кишечнике и клоаке. Варьировало количество S.aureus, содержание которого в некоторых отделах превышало показатели клинически здоровых перепелов более чем в 10 раз. На этом фоне отмечали значительное снижение количества или полное отсутствие бифидобактерий и лактобацилл.
У перепелов 29-32-сут. возраста причиной диареи чаще служил стресс после пересадки перепелов из брудеров в клетки, а также смена структуры и состава кормосмеси. При этом в ротовой полости (табл. 6) увеличилось количество S.aureus в 9,3 раза (1,40,3106 КОЕ/г). Регистрировали плесневые грибы родов Penicillium и Mucor (5,21,3103 КОЕ/г).
Таблица 6 Ц Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов с диарейным симптомокомплексом (30 сут.)
Вид микро-организма КОЕ/г | Отдел | ||||||
рот. полость, краниальный отдел пищевода | каудальный отдел пищевода, зоб | железистый желудок | мышечный желудок | тонкий кишечник | слепые отростки | толстый кишечник, клоака | |
E. faecalis | 1,30,7 107 | 5,30,7 106 | 1,20,3 106 | 7,50,6 102 | 1,60,4 106 | 4,30,6 107 | 5,60,5 107 |
E. faecium | 2,10,4 107 | 2,70,6 106 | 8,60,9 105 | 6,91,3102 | 7,62,3 106 | 1,70,3 107 | 1,10,3 108 |
E. coli | 9,31,1 106 | 1,00,2 106 | 6,10,7 103 | 2,80,6 103 | 5,01,1 107 | 2,60,5 108 | 6,61,7 108 |
C. albicans | 2,30,5 104 | 7,51,1 104 | 1,30,4 104 | 7,62,5 103 | 8,91,4 103 | 3,10,7 105 | 5,41,2 104 |
S.saprophyticus | 2,20,4 105 | 1,50,5 105 | 7,40,9 103 | 1,10,2102 | 3,31,6 104* | 2,40,5 105 | 7,92,8 104 |
S.aureus | 1,40,3 106 | 6,40,9 104 | 2,80,6 103 | 3,70,8101 | 1,20,3 104 | 3,40,9 104 | 2,50,4 105 |
Bifidobacterium spp. | 4,05,8 102* | 7,05,8 102* | - | - | 4,05,8 103* | 4,05,8 103* | 7,05,8 102* |
Lactobacillus spp. | 4,05,8 104* | 4,05,8 104* | 7,05,8104* | 4,05,8102* | 7,05,8 102* | 7,05,8 104* | 4,05,8 104* |
Proteus vulgaris | - | - | - | - | 2,00,6 103 | 3,01,6 103 | 5,71,5 104 |
Penicillium и Mucor | 5,21,3 103 | 2,80,7 102 | - | - | 3,90,8 103 | 4,71,4 104 | 5,21,2 104 |
Klebsiella pneumoniae | - | - | - | - | - | - | 3,01,0 103 |
* - р < 0,05
- - отсутствие роста
В зобе и каудальном отделе пищевода содержание E. faecalis возросло более чем в 17,5 раз (5,30,7 106ааКОЕ/г), а S.aureus - в 7,9 раза (6,40,9104 КОЕ/г) по сравнению с аналогичными показателями клинически здоровых перепелов (30 сут).
В слепых отростках, тонком, толстом кишечнике и клоаке регистрировали наиболее значительные изменения: обнаруживали плесневые грибы и микроорганизмы Klebsiella pneumoniae (3,01,0103). В толстом кишечнике и клоаке численность Penicillium и Mucor достигла 5,01,6104, P.аvulgaris - 5,21,2104 КОЕ/г.
В результате экспериментальных исследований из кишечника перепелов с диарейным симптомокомплексом были выделены следующие культуры: Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Candida albicans, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae и Escherichia coli.
Из семи выделенных культур микроорганизмов три (42,8%) были патогенны для белых мышей в дозе 0,5х109 м.т./мл (K. pneumoniae, S.аaureus, P.аvulgaris), три (42,8%) - в дозе 1,0х109 м.т./мл (E. faecalis, E. coli, C.аalbicans), вызывая гибель более 50% зараженных животных.
Наиболее высокой патогенностью для белых мышей обладали культуры P.аvulgaris, S.аaureus, K. pneumoniae и E. coli. Меньшей патогенностью обладали E.аfaecalis и C. albicans. При заражении культурой Enterococcus faecium в дозе 0,5х109 м.т./мл гибели мышей не регистрировали.
2.2.3. Коррекция микробиоценоза пищеварительного тракта
ЭМ-курунгой при диарейном симптомокомплексе
В ходе эксперимента у перепелят двух-трехсуточного возраста и старше с диарейным симптомокомплексом, в рацион которым вносили ЭМ-курунгу (опытная группа), отмечали постепенное улучшение состава микробиоценоза, а к 30тиасут. - качественные и количественные показатели микрофлоры пищеварительного тракта приближались к данным клинически здоровых перепелов (табл. 7).
Гибель птенцов в опытной группе составила 24,2% (восемь гол.) за период эксперимента, а в контрольной пали все заболевшие перепелята (n=34).
При изучении антагонистической активности Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp., содержащихся в кормовом концентрате ЭМ-курунга, в отношении условно-патогенных и патогенных культур, выделенных из кишечника перепелов с диарейным симптомокомплексом, установлено, что антагонистические свойства наиболее выражены у лактобацилл, чем у бифидобактерий. Микроорганизмы рода Lactobacillus проявили наибольшую антагонистическую активность в отношении S.аaureus, E. faecalis, P.аvulgaris, K.аpneumoniae и гемолитических штаммов E.аcoli; меньшую - в отношении E.аfaecium, негемолитических E.аcoli и C.аalbicans. Наиболее активно микроорганизмы рода Bifidobacterium проявляли антагонизм в отношении S.аaureus, гемолитических и негемолитических штаммов E.coli; меньше - в отношении E.аfaecalis, E. faecium, P.аvulgaris, K.аpneumoniae и C.аalbicans. Культивируемые в одном объеме питательной среды Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp. проявляли синергизм антагонистической активности в отношении условно-патогенных и патогенных культур микроорганизмов.
Таблица 7 Ц Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов после коррекции ЭМ-курунгой (30 сут.)
Вид микро-организма КОЕ/г | Отдел | ||||||
рот. полость, краниальный отдел пищевода | каудальный отдел пищевода, зоб | железистый желудок | мышечный желудок | тонкий кишечник | слепые отростки | толстый кишечник, клоака | |
E. faecalis | 1,90,4105 | 3,30,5105 | 2,60,2104 | 3,20,4102 | 6,30,8105 | 4,40,8106 | 8,91,3106 |
E. faecium | 3,60,3106 | 5,90,9105 | 3,51,1104 | 2,50,7102 | 4,61,5106 | 3,30,9106 | 4,81,3107 |
E. coli | 3,20,9105 | 4,11,2105 | 2,10,3103 | - | 5,11,3106 | 6,61,1107 | 5,21,4107 |
C. albicans | 6,80,8103 | 2,20,3104 | 8,82,6103 | 1,30,3102 | 1,70,5103 | 7,12,2103 | 4,60,6103 |
S. saprophyticus | 8,41,3104 | 2,70,6102 | 7,31,4101 | 3,70,9101 | 2,40,6104 | 5,70,8103 | 1,50,4104 |
S.aureus | 6,20,7104 | 4,80,8103 | - | - | 3,80,8102 | 2,90,4102 | 7,71,2103 |
Bifidobacterium spp. | 4,05,8104* | 4,05,8103* | 4,05,8105* | 7,05,8104* | 7,05,8109* | 7,05,8108* | 7,05,81011* |
Lactobacillus spp. | 7,05,8106* | 7,05,8106* | 4,05,8105* | 4,05,8105* | 7,05,8109* | 4,05,8109* | 4,05,81011* |
* - р < 0,05
- - отсутствие роста
2.2.4. Влияние ЭМ-курунги на гематологические, биохимические показатели крови и продуктивность перепелов
Гематологическими исследованиями установлено, что у перепелов 45-ти сут. возраста, ежедневно получавших кормовой концентрат ЭМ-курунга в течение всего периода эксперимента, количество эритроцитов было выше на 7,7% по сравнению с контролем. У птиц опытной группы этот показатель был достоверно выше (р < 0,01) и составил 3,490,51012/л, а у птиц в контрольной - 3,240,41012/л. Содержание лейкоцитов в крови перепелов контрольной группы составило 31,083,28109/л, а в опытной группе - 36,132,12109/л (ра<а0,01). Уровень гемоглобина у птиц в контроле был равен 131,79,6 г/л, в опыте - 138,38,5 г/л - выше на 5% (р < 0,01).
В производственных условиях установлено, что применение ЭМ-курунги перепелятам опытной группы с суточного возраста в течение всего периода выращивания повысило сохранность молодняка до 96,4%, по сравнению с контролем - 93,2%. В опытной группе снизилось количество заболевшей птицы с патологией пищеварительной системы на 7,65%. При этом перепелята опытной группы были активнее, лучше поедали корм, чем птенцы, не получавшие кормового концентрата.
После завершения эксперимента было проведено взвешивание птицы и установлено, что добавление к основному рациону закваски ЭМ-курунга позволило повысить показатели абсолютного прироста массы тела в опытной группе в среднем на 4,2-6,5%. В 45-ти сут. возрасте масса самцов составила 154,65,2 г, в контроле - 148,44,8 г (р < 0,05), самок 168,27,5 г и 157,98,7 г соответственно (р < 0,05). При этом перепела опытной группы были более однородны по массе. Масса потрошеной тушки птиц опытной группы была выше контроля на 8,2-9,6% (р < 0,01). Яйценоскость несушек опытной группы в 45-ти сут. возрасте составила 14%, в контроле - 8%, в 75-ти сут. возрасте: 81% и 76%, а в 105-ти сут. возрасте - 86% и 80% соответственно.
Сумма предотвращенного ущерба от падежа составила 792 руб. из расчета на 1000 голов молодняка в течение первого месяца, прибыль от повышения мясной продуктивности - 1240 руб. на 1000 голов молодняка и 11000 руб. - за первые 60 суток яйценоскости на 1000 несушек.
3. ВЫВОДЫ
- Пищеварительный тракт перепелят сразу после вывода колонизировали микроорганизмы родов Enterococcus, Escherichia. В ротовой полости их количество составило 2,30,4102 и 1,80,2102 КОЕ/г, а в толстом кишечнике 2,20,4102 и 2,00,6102 КОЕ/г соответственно. На третьи сутки обнаружили Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., а также S.аsaprophyticus и S.аaureus.
- Микробиоценоз ротовой полости, пищевода, зоба и желудка у клинически здоровых перепелов (45 сут.) был представлен, в основном, кокковой микрофлорой: E.аfaecalis (3,20,5106), E.аfaecium (3,30,7106), S.аsaprophyticus (7,21,3105), S.аaureus (3,50,8105), а также E.аcoli (2,80,4105). В меньшем количестве регистрировали C.аalbicans (8,21,2104), Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. (7,05,8105аКОЕ/г).
- Доминирующее положение в микробиоценозе кишечника, слепых отростков и клоаки перепелов занимали Bifidobacterium spp. и Lactobacillusаspp. (4,05,81012 КОЕ/г). В меньшем количестве выделяли E.аcoli (5,20,5106), E.аfaecalis (2,40,4107), E.аfaecium (5,80,4106), C.аalbicans (7,61,7104) и Staphylococcus spp. (8,21,1104 КОЕ/г).
- При диарейном симптомокомплексе в кишечнике возросло содержание условно-патогенных микроорганизмов: P.аvulgaris (5,71,5104), K.аpneumoniae (3,60,8103) и плесневых грибов родов Penicillium и Mucor - 5,21,2104 КОЕ/г, на фоне снижения количества Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp. (до 7,05,8102Ц7,05,8104аКОЕ/г).
- Условно-патогенная микрофлора, выделенная от перепелов с диарейным симптомокомплексом, обладала выраженной патогенностью. Наибольшую вирулентность проявляли культуры Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae и Escherichia coli, вызывающие гибель белых мышей при заражении в дозе 1,0х109 м.т./мл.
- Коррекция микрофлоры кормовым концентратом ЭМ-курунга способствовала увеличению содержания лактобацилл и бифидобактерий при одновременном снижении количества условно-патогенных микроорганизмов во всех отделах пищеварительного тракта перепелов, а также стабилизации основных гематологических и биохимических показателей организма.
- Микроорганизмы Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp., содержащиеся в кормовом концентрате ЭМ-курунга, обладали выраженной антагонистической активностью в отношении представителей условно-патогенной микрофлоры пищеварительного тракта больных перепелов. Наибольшую антагонистическую активность регистрировали у смешанной культуры Lactobacillus spp.+Bifidobacterium spp. в отношении K.аpneumoniae, гемолитических штаммов E.аcoli, P. vulgaris, S.аaureus и Enterococcus spp.
- Добавление в рацион перепелам с суточного возраста кормового концентрата ЭМ-курунга из расчета 1 мл на 1 кг живой массы птицы повысило сохранность молодняка до 96,4%, увеличило на 8,9% мясную и на 6,5% яичную продуктивность.
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
- Для коррекции микробиоценоза пищеварительного тракта с лечебно-профилактической целью рекомендуем добавлять в рацион перепелам с первого дня жизни кормовой концентрат ЭМ-курунга из расчета 1мл закваски на 1кг живого веса птицы ежедневно в течение периода выращивания.
- На основании проведенных исследований разработаны методические рекомендации Микробиоценоз пищеварительного тракта перепелов и его коррекция пробиотиком, рассмотренные научно-техническим советом ИВМиБ ОмГАУ им. П.А. Столыпина и утвержденные на подсекции Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии (2011 г.).
5. СПИСОК РАБОТ,
ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
- Шмидт, Г.О. Оптимизация микробиологических показателей воды, используемой для поения сельскохозяйственных животных и птицы/ Г.О.аШмидт, А.Н. Колотило // Ветеринария Кубани. Ц 2011. Ц № 1. Ц С. 2627.
- Шмидт, Г.О. Биологические свойства микроорганизмов, выделенных из толстого кишечника перепелов в норме и при дисбактериозе / Г.О. Шмидт, В.И. Плешакова // Ветеринарная патология. Ц 2012. Ц № 1. Ц С. 61-64.
- Шмидт, Г.О. Микрофлора пищеварительного тракта перепелов / Г.О.аШмидт, В.И.Плешакова // Основные проблемы и перспективы развития ветеринарной медицины в обеспечении животноводства Прикаспийского региона Российской Федерации: Межд. науч.-практ. конф. - Дагестан, 2009. - С.а15-17.
- Шмидт, Г.О. Видовой состав и возрастная динамика микроорганизмов пищеварительного тракта перепелов / Г.О. Шмидт // Достижения сравнительной, возрастной и видовой морфологии - практике ветеринарной медицины: сб. науч. тр. / ФГОУ ВПО ОмГАУ. - Омск, 2011. - С. 234-237.
- Шмидт, Г.О. Повышение продуктивности перепелов с помощью пробиотика / Г.О. Шмидт // Наука и молодежь: новые идеи и решения: Материалы V Межд. науч.-практ. конф. молодых исследователей. - Волгоград, 2011. - С.55-57.
- Шмидт, Г.О. Коррекция микрофлоры пищеварительного тракта перепелов с помощью ЭМ-препарата / Г.О. Шмидт // Интеллектуальный потенциал XXI века: ступени познания: Материалы V Междунар. студенческой науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2011. - С.42-45.
______________________________________________________________
Подписано к печати Е Формат бумаги 60х84, 1/16.
Печать оперативная. Гарнитура Times New Roman.
Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз.
Отпечатано в редакционно - полиграфическом отделе
Издательство ФГБОУ ВПО ОмГАУ имени П.А.Столыпина
при институте ветеринарной медицины и биотехнологии
644122, г. Омск, Октябрьская, 92.
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по сельскому хозяйству