Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии
На правах рукописи
Рябков
Александр Николаевич
Комплексное биохимическое исследование токсикологических и фармакологических свойств препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного
03.00.04 - биохимия,
14.00.25 Ц фармакология, клиническая фармакология
Автореферат
диссертации на соискание ученой
степени доктора медицинских наук
Рязань Ц 2008
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П.Павлова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию
Научный консультант:
Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор
Макарова Валентина Григорьевна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Дроздов Александр Зосимович
доктор медицинских наук Узбеков Марат Галиевич
доктор медицинских наук Сычев Дмитрий Алексеевич
Ведущая организация:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию
Защита состоится л15 октября 2008 г. в 12.00. часов на заседании диссертационного совета Д 208.084.01 ГОУ ВПО РязГМУ Росздрава (г. Рязань, ул. Высоковольтная, 9).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РязГМУ Росздрава (г. Рязань, ул. Шевченко, 34).
Автореферат разослан л10 сентября 2008 г.
Ученый секретарь Диссертационного совета
доктор медицинских наук, профессор М.М.Лапкин
общая характеристика работы
Актуальность проблемы
Несмотря на многочисленные фармакологические достижения по разработке и внедрению в клиническую практику синтетических лекарств, фитотерапия сохраняет высокие позиции в лечебном процессе, благодаря оптимальному сочетанию результативности и безопасности применения многих препаратов растительного происхождения (Волынский Б.Г. и др., 1988; Курякина Н.В. и др., 2000; Соколов С.Я., 2000; Макарова В.Г. и др., 2001). В настоящее время около 25-30% лекарственных средств, представленных на мировом фармацевтическом рынке, составляют препараты растительного происхождения. Мировой импорт лекарственного растительного сырья возрос за последние годы более чем на 40% (Косенко Н.В., Самылина И.А., Сапронова Н.Н., 2000).
Широкий спектр фармакологической активности и выраженные терапевтические свойства предопределяют особое место в ряду наиболее часто используемых фитосредств препаратов из растений семейства аралиевых (Araliaceae), в частности, женьшеня. Их огромные объемы применяются для профилактики и лечения различных заболеваний, в спортивной медицине, как компоненты биологически активных добавок к пище, в косметологии (Лесиовская Е.Е, Пастушенков Л.В., 2003). Убедительным подтверждением этого является тот факт, что на внутреннем рынке США годовой оборот по продаже препаратов женьшеня составляет 300 млн. долларов (Котин А.М., 2001). Однако исключительно небольшие запасы естественно произрастающего женьшеня и трудности его плантационного выращивания, а также подверженность природного и культивируемого растения многочисленным негативным факторам окружающей среды предопределили необходимость поиска путей преодоления данного сырьевого дефицита. Одним из вариантов решения этой проблемы является использование других растений Araliaceae, в частности рода Polyscias.
Растения рода Poliscias произрастают в тропических странах, где издавна пользуются высокой популярностью как ценное лекарственное сырье. Это особенно относится к виду Poliscias folicifolia (полисциас папоротниколистный), включенному в национальные фармакопеи ряда стран. Так, препараты полисциаса назначаются как эффективные средства, стимулирующие физическую работоспособность, процессы ранозаживления, лактации, устойчивость организма к инфекционным болезням, а также в комплексной терапии ревматических заболеваний и невралгии (Михайлова Н.В., 1981; Котин А.М., 2001; Stoun B.G., 1965; Do Tat Loi, 1977; Paphassarang S., 1990).
В России ни один из видов полисциаса не произрастает. Но благодаря разработкам ученых Института физиологии растений РАН им. К.А.Тимирязева и Санкт-Петербургской химико-фармацевтической академии, из корня полисциаса папоротниколистного выделен штамм, который можно выращивать in vitro и получать требуемые количества биомассы культуры ткани этого растения (Слепян Л.И., Арнаутов Н.Н., Грушевицкий И.В., 1975; Михайлова Н.В., 1981). Проведена разработка оптимальный питательной среды, обеспечивающей не только не только наибольший прирост биомассы, но и накопление в ней максимального количества основных биологически активных веществ (Слепян Л.И. и др.; 1981; Михайлова Н.В., Слепян Л.И., 1984; Марченко А.Л., 2000).
Представленные в публикациях данные о результатах исследования фармакологической активности препаратов из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного (Кашаускас Л.П., 1991; Лекис А.В. и др.; 1992; Трилис Я.Г., 1996; Котин А.М., 2001) достаточно фрагментарны, что затрудняет объективную оценку по определению значимости этих средств в ряду имеющихся аналогов, полученных по соответствующей биотехнологии. Именно системность информации о сравнительной выраженности медико-биологических свойств позволит определить перспективные возможности практического применения препаратов из биомассы полисциаса папоротниколистного как фитотерапевтических средств.
Цель работы
Комплексное исследование ряда токсикологических и фармакологических свойств препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного в рамках максимально жесткого сравнительного анализа с соответствующими характеристиками препарата женьшеня, полученного по аналогичной биотехнологии.
Задачи исследования
1. Провести оценку возможных проявлений различных видов токсичности препарата из биомассы культуры ткани полисцаса папоротниколистного в зависимости от пути его введения, дозы, длительности назначения и функционального состояния организма подопытных животных.
2. Изучить особенности влияния препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного на показатели физической работоспособности крыс в условиях различных модификаций плавательного теста.
3. Исследовать биохимические и гистологические характеристики наличия и выраженности гепатопротекторного эффекта препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного при назначении животным с экспериментальным тетрахлорметановым гепатитом, а также его антиоксидантные свойства при данной свободно-радикальной патологии.
4. Изучить антигипоксическое действие препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного путем оценки его влияния на показатели газового состава и кислотно-щелочного равновесия крови, сывороточные, эритроцитарные и тканевые биохимические параметры в условиях воздействия на подопытных животных факторов, вызывающих развитие острой гипоксической гипоксии.
5. Провести анализ динамики комплекса гематологических и биохимических показателей сыворотки крови и некоторых тканей при назначении препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного животным с острой радиационной патологией, моделируемой их однократным гамма-облучением.
6. Изучить антиатеросклеротические свойства испытуемого препарата путем оценки его влияния на показатели липидного спектра крови и параметры перекисного окисления липидов в сосудистой ткани кроликов, находящихся на строго безантиоксидантном рационе.
7. Провести комплексное биохимическое, массаметрическое, функциональное и гистологическое исследование эффективности применения препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного при экспериментальных эндокринопатиях - посткастрационном гипогонадизме, аллоксановом диабете, тироксиновом гипертиреозе, мерказолиловом гипотиреозе.
Основные положения, выносимые на защиту
1. По результатам выполненных экспериментов установлено, что по базисному параметру, характеризующему острую токсичность, т.е. по значениям LD50, исследуемый препарат из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного при внутрибрюшинном введении не токсичнее препарата женьшеня, полученного по аналогичной биотехнологии, а при пероральном введении он с достаточной статистической надежностью характеризуется большей степенью безопасности. Отсутствие функционально-метаболических и гистологических изменений у крыс, постоянно получавших оцениваемый препарат в течение 2, 4 и 6 месяцев в дозах 0,5 и 5 мл/кг, служит подтверждением высокой степени его безопасности даже при применении в режиме относительно интенсивного и длительного назначения. В моделируемых экспериментальных условиях он практически не проявляет и специфических видов токсичности - аллергенного, мутагенного, эмбриотоксичного эффектов.
2. Использованный комплекс регистрируемых хронометрических параметров и их производных величин при выполнении подопытными животными различных модификаций плавательного теста убедительно свидетельствует о выраженных актопротекторных свойствах препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного, не уступающих по значениям большинства показателей соответствующим характеристикам данного действия препарата из биомассы женьшеня.
3. Биохимический анализ состояния перекисного окисления липидов в печеночной ткани крыс при моделировании тетрахлорметанового гепатита подтверждает наличие антиоксидантного эффекта у препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного, превосходящего по выраженности таковой у препарата из биомассы женьшеня. Именно этот механизм, вероятнее всего, предопределяет и другие проявления гепатопротекторного действия и степень их выраженности.
4. Судя по результатам развернутого биохимического исследования крови, сравнительной динамике ферментных и метаболических показателей эритроцитов, а также параметров интенсивности перекисного окисления липидов в периферических тканях лабораторных животных с моделируемой острой гипоксической гипоксией, степень антигипоксического действия более значима при применении препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного.
5. Оценка динамики комплекса гематологических параметров, биохимических показателей функционально-метаболического состояния эритроцитов и активности перекисного окисления липидов в тканях селезенки и тонкой кишки в различные сроки после радиационного облучения свидетельствует о наличие у сравниваемых препаратов равновыраженного защитного эффекта к его воздействию на подопытных животных. Он проявляется практически на всех этапах 30-дневного контролируемого пострадиационного периода.
6. Оцениваемый препарат вызывает достаточно выраженный и близкий по количественным характеристикам к препарату женьшеня профилактический эффект к воздействию факторов, индуцирующих атерогенез у кроликов. При назначении в варианте лечебного антиатеросклеротического средства терапевтическая активность препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного, проявляющаяся как по значениям динамики показателей липидного спектра сыворотки крови, так и параметров интенсивности перекисного окисления липидов в гомогенате стенки аорты, более выражена.
7. Биохимический, массаметрический, функциональный и гистологический анализы течения экспериментальных эндокринопатий, моделируемых у крыс, свидетельствуют о равновыраженной эффективности применения сравниваемых препаратов при посткастрационном гипогонадизме и мерказолиловом гипотиреозе. Степень протективного действия препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного при аллоксановом диабете и тироксиновом гипертиреозе по большинству регистрируемых показателей превосходит соответствующие эффекты препарата из биомассы женьшеня.
Научная новизна
Впервые проведено сравнительное экспериментальное исследование широкого комплекса токсикологических показателей и фармакодинамических характеристик препаратов из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного и женьшеня, позволившее установить степень безопасности применения оцениваемого препарата и выраженность его профилактических и терапевтических свойств.
Результаты оценки токсикологических характеристик препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного (острая, хроническая токсичность, аллергенность, мутагенность, эмбриотоксичность) с использованием различных методов регистрации их возможных проявлений (функциональные, биохимические, массаметрические, гематологические, гистологические, математико-статистические) убедительно свидетельствуют о безопасности его использования в широком диапазоне доз и длительности назначения.
Впервые путем скринингового анализа влияния широкого диапазона доз на показатели плавательного теста лабораторных животных установлены эквитерапевтические соотношения препаратов из биомассы культуры ткани женьшеня и полисциаса папоротниколистного, используемые в дальнейшем в качестве одной из основ, обеспечивающей корректность проводимого сравнения.
Впервые в условиях жесткой стандартизации проведена оценка эффективности применения препаратов из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного и женьшеня при ряде экспериментальных эндокринологических патологий (аллоксановый диабет, тироксиновый гипертиреоз, мерказолиловый гипотиреоз, посткастрационный гипогонадизм) и их способности повышать устойчивость организма к интенсивной физической нагрузке, воздействию радиации, атерогенных факторов, гепатотоксических агентов и гипоксии.
По результатам исследования особенностей изменения параметров перекисного окисления липидов в различных биосубстратах при модулируемых экспериментальных патологиях впервые установлена более выраженные антиоксидантные свойства у препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного по сравнению с препаратом женьшеня, что во многом предопределило сравнительную выраженность и других проявлений гепатопротекторного, антигипоксического, антиатеросклеротического, антидиабетического и антигипертиреозного эффектов.
Изучение динамики параметров, отражающих состояние гормонообразующей активности щитовидной железы в различные сроки после прекращения введения лабораторным животным субтоксических доз мерказолила, позволило определить максимальную продолжительность сохранения гипотиреоза как основу экспериментальной модели по оценке эффективности влияния препаратов с метаболическим типом действия (к которым относятся и фитоадаптогены) на течение этой эндокринной патологии. На разработанный способ моделирования экспериментального гипотиреоза получен Патент на изобретение (№97120428).
Практическая значимость
Практическим итогом проведенного исследования стала базирующаяся на полученных результатах обоснованность применения препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного в качестве эффективного актопротекторного средства, что особенно актуально в спортивной медицине при интенсивных физических нагрузках, при пребывании в экстремальных ситуациях, а также в гериатрии и в период восстановления после длительной вынужденной иммобилизации.
Выявленное гепатопротекторное свойство препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного является достаточно важной фармакодинамической характеристикой, которая предопределяет возможность его использования в условиях повышенного риска гепатотоксического эффекта различных лекарственных средств, производственных токсинов, обладающих сходным с четыреххлористым углеродом механизмом деструктивного влияния на печень. Кроме того, антиоксидантные свойства, четко проявившиеся на использованной модели экспериментального тетрахлорметанового гепатита, предопределяют целесообразность апробации его эффективности и при других патологиях, в происхождении которых ключевое значение принадлежит активации свободно-радикального окисления.
Антигипоксическое действие исследованного препарата может быть реализовано при многочисленных состояниях различного генеза, сопровождающихся кислородной недостаточностью, а его радиопротекторные свойства - для повышения устойчивости организма к радиации особенно в регионах с повышенным риском ее воздействия.
Препарат из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного вызывает достаточно выраженный профилактический эффект при воздействии факторов, индуцирующих атерогенез, что расширяет перспективы его практического применения в качестве антиатеросклеротического средства.
Установленная достаточно высокая гонадотропная активность препарата полисциаса папоротниколистного в условиях андрогенной недостаточности, сопоставимая с действием препарата из биомассы женьшеня, может быть использована при различных широкораспространенных половых расстройствах функционального генеза.
Антигипергликемическое действие исследуемого препарата после его клинического подтверждения может явиться основой его применения в качестве вспомогательного средства в эндокринологической практике, особенно с учетом того обстоятельства, что и многие другие фармакодинамические характеристики полисциаса папоротниколистного могут оказывать положительное влияние на течение сахарного диабета и препятствовать развитию возможных осложнений.
Полученные данные о четком положительном влиянии на проявления тироксиновой интоксикации позволяют реально прогнозировать возможную перспективу клинического применения оцениваемого препарата при гипертиреозе. Это может способствовать снижению дозировок применяемых тиреостатиков, а стало быть повышению безопасности проводимой терапии.
Установленная эффективность препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного при мерказолиловом гипотиреозе может служить основой обоснования его использования в эндокринологической практике в качестве: вспомогательного средства базисной фармакотерапии гипотиреоза, повышающего ее результативность и безопасность; средства, способствующего восстановлению и стабилизации сниженных при гипотиреозе андрогенного статуса и физической работоспособности; эффективного средства, предупреждающего развитие и устраняющего побочные эффекты мерказолила - одного из наиболее широко применяемого тиреостатика.
Внедрение
Комплексы биохимических параметров, обоснованные и использованные в диссертационной работе для оценки актопротекторного и антигипоксического эффектов, внедрены в исследовательский процесс лабораторий ГНУ НИИ пчеловодства Россельхозакадемии для анализа наличия и выраженности соответствующих эффектов комбинированных апипрепаратов новых технологий как высокоинформативные стандартизированные методы корректной сравнительной оценки при проведении экспериментальных исследований их биологической активности.
Результаты исследования используются при чтении лекций и проведении практических занятий по фармакогнозии (по теме Растения семейства аралиевых), фармакологии и фармакотерапии (по теме Психостимуляторы, ноотропы, адаптогены) на кафедре фармакогнозии с курсом ботаники и на кафедре фармакологии с курсом фармакотерапии ФПДО Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Рязанский государственный медицинский университет им. акад.И.П. Павлова Росздрава.
Апробация работы
Основные результаты диссертационной работы представлены:
- на Международном уровне: Х Азиатско-Тихоокеанском Конгрессе по гастроэнтерологии и VII Азиатско-Тихоокеанском Конгрессе по эндоскопии (Йокогама, Япония, 1996); I и II Международных научно-практических конференциях Пожилой больной. Качество жизни (Москва, 1996, 1997); III Международном Африканском Конгрессе африканской ассоциации по изучению болезней печени (Каир, Египет, 1988); Международном совещании Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений (Новосибирск, 1998); V Международной конференции Актуальные вопросы клинической фармакологии (Москва, 1998); IV Международном конгрессе Реабилитация в медицине и иммунореабилитация (Сочи, 1998); Международной конференции Фармация в XXI веке: инновации и традиции (С.-Петербург, 1999); Международном научном форуме Достижения клинической фармакологии (Москва, 1999); Международной научно-практической конференции Интермед-2001 (Рыбное, 2001); I Международной научно-практической конференции по пчеловодству и пчелотерапии Белорусский мёд-2002 (Минск, 2002); Международной научно-практической конференции по апитерапии (Рязань, 2002); III, IV, V, VI, VII, X, XI Международных конгрессах Парентеральное и энтеральное питание (Москва, 1999, 2000, 2001, 2002, 2003, 2006, 2007); VI Международной научной конференции Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения в современной медицине (Черноголовка, 2006).
- на Российском уровне: I Съезде Российского научного общества фармакологов Фундаментальные исследования, как основа создания лекарственных средств (Москва, 1995); V, VI, VII, VIII, X, ХII, XV Национальных конгрессах по болезням органов дыхания (Москва, 1995, Новосибирск, 1996, Москва, 1997, 1998, С-Петербург, 2000, Москва, 2002, 2005); I, II, III, VIII, ХI Российских Гастроэнтерологических Неделях (С-Петербург, 1995, Москва, 1996, 1977, 2002, 2005); III, IV, V, VI, VII, VIII, IХ, ХI, ХII Российских Национальных конгрессах Человек и лекарство (Москва, 1996, 1997, 1998, 1999, 2000, 2001, 2002, 2004, 2005); I Российском конгрессе Парентеральное питание в гастроэнтерологии (Москва, 1996); I, II, IV Всероссийских научно-практических конференциях Актуальные вопросы эндокринологии (Пермь, 1977, 2000, 2002); IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием Экология и здоровье человек (Самара, 1997); Всероссийской научно-практической конференции От materia media к современным медицинским технологиям (С.-Петербург, 1998); II конгрессе с международным участием Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении (Москва, 1998); VI Всероссийском съезде кардиологов (Москва, 1999); Всероссийской научной конференции с международным участием Актуальные проблемы клинической фармакологии (С-Петербург, 1999); Всероссийской научно-практической конференции Экологозависимая патология (Чита, 1999); VI, VII, IХ, Х, ХII, XIII Российских конференциях Гепатология сегодня (Москва, 2001, 2002, 2004, 2005, 2007, 2008); VIII, Х, ХI Республиканских конференциях с международным участием Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения (Рязань, 2004, 2006, 2007).
- на региональном уровне: 2-м научном конгрессе Традиционная медицина: теоретические и практические аспекты (Чебоксары, 1996); межрегиональной научно-практической конференции, посвящённой 50-летию онкологической службы Рязанской области (Рязань, 1996); региональной научной конференции Проблемы фармакологии и фармации на Дальнем Востоке (Хабаровск, 1997.); юбилейной конференции, посвященной 100-летию Санкт-Петербургского Государственного медицинского университета им. акад. И.П.Павлова Прогресс и проблемы в лечении заболеваний сердца и сосудов (С-Петербург, 1997); межрегиональной научно-практической конференции Современные технологии в медицине (Томск, 1998); VII межрегиональной научно-практической конференции по апитерапии (Рязань, 2000); межрегиональной научно-практической конференции Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения (Рязань, 2000); научно-практической конференции Фитотерапия, лазеротерапия, биологически активные вещества естественного происхождения в XXI веке (Черноголовка, 2000); ежегодной научной конференции РязГМУ (Рязань, 2006).
Публикации
По теме диссертации опубликованы 95 печатных работ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 328 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, данных собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 303 отечественных и 147 зарубежных источников. Диссертация иллюстрирована 50 рисунками и 70 таблицами, включенными в Приложение.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Технология приготовления препаратов, назначаемых лабораторным животным, состояла из нескольких этапов. Первоначально из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного и женьшеня методом перколяции получали настойки при соотношении сырье:экстрагент 1:10 на 40%-ом этаноле. Перед непосредственным применением их деалкоголизировали упариванием на роторном испарителе до каломельного состояния, после чего в колбу добавляли дистиллированную воду для получения необходимой концентрации препарата, которая была различной при оценке безопасности и фармакологической активности.
Для выполнения программы запланированных исследований были использованы лабораторные животные различных видов. Выбор вида и количества животных определялся спецификой и объемами выполняемых экспериментов, обеспечивающими условия для корректного сравнительного анализа оцениваемых свойств испытуемого и лэталонного препаратов. Итоговые количества включенных в опыты животных составили: мыши - 160, морские свинки - 240, кролики - 50, крысы-самки - 42, крысы-самцы - 950.
Объектом проведенных исследований служили:
Ц биохимических: цельная кровь, эритроциты, сыворотка крови, моча, семенная жидкость, гомогенаты печени, сердца, мозга, скелетной мышцы, селезенки, тонкой кишки, стенки аорты, поджелудочной железы;
Ц гематологических: цельная кровь;
Ц массаметрических: печень, почки, легкие, сердце, селезенка, надпочечники, щитовидная железа, семенники, семенные пузырьки, предстательная железа;
Ц гистологических: желудок, тонкая кишка, печень, почки, сердце; цитологических и морфометрических - семенники и семенные пузырьки.
Все манипуляции по взятию биологических субстратов проводились только после обязательного наркотизирования подопытных животных эфиром или тиопенталом натрия.
Оценка безопасности исследуемого препарата включала определение количественных параметров его острой токсичности, возможных проявлений хронической токсичности, аллергизирующего действия, эмбриотоксичности и мутагенности.
Анализ наличия и выраженности фармакодинамических характеристик препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного по сравнению с соответствующими свойствами препарата женьшеня аналогичной биотехнологии проводился по результатам их назначения животным с различными экспериментальными патологиями и состояниями. Комплекс последних включал: предельные плавательные нагрузки, острую гипоксическую гипоксию, тетрахлорметановый гепатит, перекисную модель атеросклероза, радиационную патологию, аллоксановый диабет, посткастрационный гипогонадизм, тироксиновый гипертиреоз, мерказолиловый гипотиреоз.
Методы исследования
Физиологические. При изучении возможных проявлений хронической токсичности препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного у подопытных животных определялся комплекс параметров, отражающих функциональное состояние центральной нервной системы: суммационно-пороговый показатель и количественные характеристики поведенческих реакций (норкового рефлекса, двигательной активности, эмоциональной реакции) и ряд общих физиологических показателей: частоту сердечных сокращений, частоту дыхательных движений, ректальную температуру. При анализе актопротекторного эффекта оценивался комплекс параметров, непосредственно характеризующих состояние физической работоспособности и проводился расчет их производных.
Электрокардиографические. Основным учитываемым показателем являлась частота сердечных сокращений, оценка которой для достижения максимальной точности осуществлялась путем регистрации пролонгированной (не менее 25-30 секунд, т.е. не менее 100-130 комплексов) электрокардиограммы на электрокардиографе ЭК1Т-03М. Значения продолжительности интервалов R-R в 100 последовательных комплексах служили исходными данными для расчета т.н. показателя напряжения, отражающего состояние неспецифических адаптационных механизмов организма (Лапкин М.М., 1994).
Биохимические
Гормоны. При различных моделируемых экспериментальных эндокринных патологиях в сыворотке крови подопытных животных регистрировалась концентрация тироксина, трийодтиронина, инсулина, тестостерона и кортизола. Данные исследования проводились в радиоизотопной лаборатории ЦНИЛ РГМУ радиоиммунными методами с использованием стандартных наборов реактивов. Концентрацию фруктозы, характеризующую уровнь тестостеронпродуцирующей активности семенников и андрогенной насыщенности организма, определяли в содержимом семенных пузырьков (Бурмистрова Л.А., 1999).
Параметры кислотно-щелочного равновесия и газового состава крови. Количественной оценке на цифровом анализаторе ОР-215 фирмы Radelkis (Венгрия) подлежали значения рН, парциального давления кислорода и двуокиси углерода, концентрации гидрокарбонатного аниона.
Показатели интенсивности перекисного окисления липидов. Спектрофотометрическим методом определялось содержание малонового диальдегида (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977) в различных биосубстратах. Активность ферментативного (НАДФ-Н-зависимого) и неферментативного (аскорбат-зависимого) ПОЛ оценивали по скорости накопления малонового диальдегида в гомогенатах тканей (Арчаков А.И., Девический В.М., Карузина И.И., 1968; Панченко Л.Ф., Арчаков А.И., Александрова Т.А., 1969). Концентрацию SH-групп в гемолизатах эритроцитов и гомогенатах печеночной ткани определяли по их реакции с дитис-бис-нитробензойной кислотой (Beutler E., 1975). Показатель перекисного гемолиза эритроцитов рассчитывали как отношение их гемолиза в специальном буферном растворе к полному гемолизу данных клеток крови в дистиллированной воде (Артемьева Г.Б., 1990)].
Общелабораторные биохимические показатели крови. Используя стандартные наборы реактивов, по общепринятым методикам проводили определение: а) активности ферментов - аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, гамма-глутамилтранспептидазы, амилазы; б) содержания метаболитов белкового, углеводного, липидного обменов - общего белка, составляющих белковой фракции (альбуминов, α1-, α2-, β-, γ-глобулинов), мочевины, креатинина, глюкозы, общих липидов, общего холестерина, триглицеридов, α-, β-липопротеидов, индекса атерогенности; в) концентрации электролитов - натрия, калия, кальция, хлора.
Показатели углеводного обмена в тканях. Содержание пирувата регистрировали колориметрическим методом, используя стандартных наборов фирмы Lachema (Чехия), по количеству восстанавливающегося из него лактата в присутствии НАДН под действием лактатдегидрогеназы. Уровень гликогена в тканях определяли глюкозозксидазным методом по количеству образовавшейся в пробе глюкозы при гидролизе гликогена в щелочной среде (Хныкина И.В., 1999). .
Показатели интенсивности гликолиза и мембранного транспорта эритроцитов. Активность Na+, K+-зависимой АТФ-азы в гемолизатах эритроцитов определяли по методу В.К. Лишко, М.К. Малышевой, Т.И. Чревазирской (1974). Концентрацию неорганического фосфора фиксировали по методу K. Lohman, Р. Langen (1956) после добавления в пробы молибдата аммония и амидола. Активность пируваткиназы определяли по методу К.А. Кожевниковой (1973). Концентрацию 2,3-ДФГ в эритроцитах после осаждения белков и адсорбции из них нуклеотидов рассчитывали по разнице между концентрациями общего и неорганического фосфора (Исаков С.А., 2002).
Гематологические. При проведении оценки хронической токсичности, возможной аллергенности препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного и его эффективности при экспериментальной лучевой патологии проводилось определение количества основных форменных элементов крови: эритроцитов, тромбоцитов, а также лейкоцитов с расчетом их составляющих (палочкоядерные, сегментоядерные, эозинофилы, моноциты, лимфоциты). В гемолизатах крови и эритроцитов определяли концентрацию гемоглобина унифицированным фотоэлектроколориметрическим гемоглобин-цианидным методом (Меньшиков В.В. и др., 1987).
Массаметрические. При решении ряда поставленных задач проводился динамический анализ массаметрических показателей, включающих массу тела лабораторных животных, их внутренних органов (печени, почек, легких, сердца, селезенки, надпочечников, семенных пузырьков, семенников, предстательной железы, щитовидной железы) и весовых коэффициентов, рассчитываемых как отношение массы органа к 1:100-1:1000 массы тела. Взвешивание животных проводили на весах ВЛКТ, внутренних органов - на торсионных весах.
Гистологические. Для проведения общего гистологического анализа кусочки внутренних органов (печени, желудка, тонкой кишки, почки, сердца) подопытных животных фиксировали в 12%-ом растворе нейтрального формалина. Далее они отмывались и обезвоживались в растворах этилового спирта возрастающих концентраций и заливались в парафин. Срезы толщиной 6-7 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. Непосредственная оценка готовых препаратов проводилась на светооптическом уровне с помощью бинокулярного микроскопа. Цитологическое и морфометрическое исследование при оценке гонадотропного эффекта оцениваемого препарата проводилось после аналогичного по технологии приготовления препаратов из семенников и семенных пузырьков.
Математико-статистические. Все первичные экспериментальные данные были подвергнуты математико-статистической обработке на персональном компьютере Pentium 4 с использованием офисного пакета Microsoft Office Professional с расчетом средней, ее ошибки, значений критерия Стьюдента и достоверности фиксируемых изменений между контрольными и опытными сериями.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ Обсуждение
Основой, определяющей схему проведения опытов по изучению безопасности препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного (б.к.т. ПП), явились результаты соответствующих исследований препарата женьшеня, полученного по аналогичной биотехнологии (Высоцкая Р.И., 1978; Крендаль Ф.П. и др., 1982). Они позволили определить виды токсикологических анализов, диапазоны доз вводимых животным препаратов при их выполнении и провести достаточно корректный итоговый сравнительный анализ.
Комплексное изучение возможных токсикологических характеристик препарата из б.к.т. ПП включало оценку острой, хронической токсичности, риска развития аллергенного, эмбриотоксического и мутагеноого эффектов.
Сравнительный анализ острой токсичности проведен на мышах путем определения средней летальной дозы (LD50) после однократных внутрижелудочных и внутрибрюшинных введений препаратов из биомассы фитоадаптогенов. Полученные результаты значений оцениваемого параметра свидетельствуют о том, что препарат из б.к.т. ПП при внутрибрюшинном введении (LD50 = 2,20 ± 0,13 мл/20 г массы тела) не отличается по токсичности от препарата из биомассы культуры ткани женьшеня (LD50 = 1,83 ± 0,13 мл/20 г), а при внутрижелудочном введении он характеризуется большей степенью безопасности (LD50 = 10,08 ± 0,72 мл/20 г и 7,46 ± 0,73 мл/20 г соответственно).
В настоящей работе использован широкий комплекс методик, позволяющий провести многостороннюю и надежную оценку возможных проявлений хронической токсичности оцениваемого препарата. Он включал функциональные, массаметрические, биохимические, гематологические и гистологические исследования, выполненные по истечению 2, 4 и 6 месяцев постоянного ежедневного его введения в дозах 0,5 и 5 мл/кг. Эти дозы по экстрапалятивной оценке значительно превышают средние суточные эффективные дозы для человека лэталонного препарата - настойки из биомассы женьшеня (Крендаль Ф.П. и др., 1982). Они, с учетом сопоставимости параметров острой токсичности в препаратных сериях, были выбраны и для исследуемого средства. Все количественные значения фиксируемых параметров, отражающих функционально-метаболическое состояние подопытных животных, в целом характеризовались стабильностью, что является важнейшим свидетельством безопасности препарата из б.к.т. ПП в условиях его длительного применения в относительно высоких дозах.
Проведенный на морских свинках комплексный анализ аллергенности препарата из б.к.т. ПП, включал оценку анафилактической активности, реакций гипечувствительности замедленного типа и иммунных комплексов, применение метода накожных аппликаций и коньюктивальной пробы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что он, подобно препарату из биомассы культуры ткани женьшеня (б.к.т. ЖШ), характеризуется отсутствием аллергенных свойств. Не было отмечено у животных препаратных серий каких-либо проявлений мутагенного и эмбриотоксического эффектов.
Итак, исследования по экспериментальной оценке различных токсикологических свойств препарата из б.к.т. ПП позволяют констатировать безопасность его использования в широком диапазоне доз и длительности назначения. Данное заключение базируется на комплексности использованных токсикологических характеристик (острая, хроническая токсичность, аллергенность, мутагенность, эмбриотоксичность) и методов регистрации их проявлений (функциональные, биохимические, массаметрические, гематологические, гистологические, математико-статистические). Представленные результаты являются подтверждением безусловно важнейшего свойства исследуемого препарата - высокой степени безопасности.
Для сопоставления актопротекторных свойств препаратов из биомассы фитоадаптогенов использовано несколько методик плавательных тестов лабораторных животных, позволяющих фиксировать как прямые параметры физической работоспособности, так и ряд производных характеристик, что значительно увеличивает информативность исследования (Макарова В.Г. и др., 1996; Киселева В.А., 1998; Бурмистрова Л.А., 1999).
На первом этапе изучена зависимость длительности плавания крыс после однократного применения различных доз препаратов из б.к.т. ПП и б.к.т. ЖШ. Это позволило установить дозы сравниваемых препаратов, вызывающие максимальный по выраженности эффект. Они оказались равными 2,5-5 мл/кг в случае назначения препарата из б.к.т. ПП и 5-10 мл/кг - при применении препарата из б.к.т. ЖШ. Таким образом, доза 5 мл/кг, судя по полученным результатам, является лобщей для обоих препаратов, обеспечивающей максимальное и близкое по выраженности увеличение времени плавания до предела, т.е. до наступления физического истощения. Учитывая то, что влияние на физическую работоспособность является одним из важнейших фармакодинамических свойств фитоадаптогенов, данная доза была использована и в дальнейших исследованиях для корректного сравнительного анализа дополнительных проявлений актопротекторного действия, а также для изучения других соответствующих характеристик данных препаратов.
При проведении экспериментов в варианте одного двойного плавательного теста с часовым интервалом, выполняемого животными с дополнительным стандартным отягощением, установлено, что как однократное, так и, особенно, курсовое 7-дневное применение сравниваемых препаратов вызывает увеличение времени максимального продолжительности плавания и производных от него показателей. В целом результаты использованного варианта плавательного теста свидетельствуют о том, что при назначении в стандартной дозе 5 мл/кг выраженность актопротекторного эффекта препарата из б.к.т. ПП не уступает влиянию на физическую работоспособность препарата из б.к.т. ЖШ.
На завершающего этапа для обеспечения максимального проявления актопротекторного действия и оптимизации его сравнения в препаратных сериях осуществлена оценка переносимости лабораторными животными многократных (каждые 5 дней) повторных (с часовым интервалом) физических нагрузок на фоне курсового 20-дневного применения препаратов из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП.
Ежедневное назначение препаратов из б.к.т. ПП и ЖШ подопытным животным, подвергающихся моделируемым нагрузкам, сопровождалось увеличением и абсолютных (продолжительность первичного и повторного плаваний), и относительных (суммарный показатель двойного плавания, показатель восстановления работоспособности) параметров физической работоспособности. При наращивании массы дополнительного груза, фиксируемого к телу плавающих животных, препараты ускоряют наступление адаптации к более интенсивному режиму нагрузки. Данные сравнительного статистического анализа свидетельствуют о том, что количественные значения определяемых и рассчитываемых показателей физической работоспособности в полисциасовой серии на всех этапах статистически не отличались от таковых у животных, получавших препарат из б.к.т. ЖШ. Но при этом выявлено и одно принципиальное различие: на каждом этапе проводимого исследования способность животных к восстановлению физической активности за время одночасового интервала между первичным и повторным плаваниями под воздействием препарата из б.к.т. ПП была более стабильной, о чем свидетельствуют минимальные колебания значений показателя восстановления работоспособности. При введении препарата из б.к.т. ЖШ соответствующий эффект развивался постепенно. Это можно рассматривать в качестве маркера более раннего проявления данной компоненты актопротекторного действия у животных, получавших препарат из б.к.т. ПП.
Изучение гепатопротекторного действия проведено на модели токсического гепатита, возникающего после курсового введения подопытным животным тетрахлорметана, часто используемой в экспериментальной фармакологии при скрининговых исследованиях. Ее высокая информативность при сравнительной оценке близких по своим свойствам препаратов подтверждена в ряде исследований последних лет, проведенных на кафедре фармакологии РязГМУ им. акад. И.П.Павлова (Макарова В.Г. и др., 1995; Лизунова А.С., 1999).
Помимо непосредственной регистрации гепатопротекторного эффекта у апробируемых средств в отношении данного гепатотоксина эта модель позволяет экстраполировать возможность проявления защитного эффекта к воздействию достаточно широкого ряда ксенобиотиков, включая некоторые часто назначаемые в клинической практике лекарственные средства, обладающие сходным с четыреххлористым углеродом механизмом поражения печени (Лукьянчук В.Д., 1993; Посохова Е.А., 1996). Кроме того, принципиальное значение имеет базисное патогенетическое звено развития этой патологии - активация перекисного окисления липидов (ПОЛ), индуцируемая метаболитами тетрахлорметана и составляющая основу повреждения печеночной паренхемы (Панченко Л.Ф., Арчаков А.И., Александрова Т.А., 1969; Арчаков А.И., 1983). Данные об антиоксидантном действии препаратов женьшеня, включая Биоженьшень (Давыдов В.В., Молоковский Д.С., Лимаренко А.Ю., 1990), во многом предопределили выбор настоящей модели для оценки гепатопротекторных и антиоксидантных свойств препарата из б.к.т. ПП.
Схема эксперимента предусматривала проведение двух этапов исследования. На первом патологический процесс в печени и его сравнительную динамику на фоне применения препаратов из биомассы фитоадаптогенов оценивали по значениям комплекса ферментных и метаболических показателей крови и данным гистологического анализа - классическим индикаторам печеночной патологии. Полученные результаты свидетельствуют о том, что по выраженности гепатопротекторного действия препарат из б.к.т. ПП не уступает (по гистологическим данным) и даже несколько превосходит (по количественным значениям динамики биохимических параметров сыворотки крови) соответствующий эффект препарата из б.к.т. ЖШ. Принципиально важным дополнительным итогом этих экспериментов явилось подтверждение того, что доза 5 мл/кг каждого из сравниваемых препаратов входит в диапазон, обеспечивающий их максимальную активность.
На втором этапе в препаратных сериях проводился анализ непосредственного места события данной патологии, т.е. печеночной ткани, в которой определяли уровень интенсивности перекисного окисления липидов - основного патогенетического звена тетрахлорметанового гепатита. Зафиксированные показатели содержания малонового диальдегида (МДА), активности НАДФ-Н- и аскорбат-зависимого ПОЛ в исследуемом биосубстрате подтвердили наличие антиоксидантного эффекта у препарата из б.к.т. ПП, превосходящего таковой у препарата из б.к.т. ПП. Именно этот механизм, вероятнее всего, предопределил и другие проявления гепатопротекторного действия, зафиксированные на первом этапе данного исследования и степень их выраженности.
Выявленное свойство препарата из б.к.т. ПП является достаточно важной фармакодинамической характеристикой, которая позволяет прогнозировать возможность его использования в качестве гепатопротектора в условиях повышенного риска гепатотоксического эффекта различных лекарственных средств, производственных токсинов, обладающих сходным с четыреххлористым углеродом механизмом деструктивного влияния на печень. Кроме того, антиоксидантные свойства, четко проявившиеся на использованной модели экспериментального тетрахлорметанового гепатита, предопределяют целесообразность апробации его эффективности и при других патологиях, в происхождении которых ключевое значение принадлежит активации свободно-радикального окисления.
Для изучения антигипоксического эффекта классических препаратов из корня и листьев женьшеня, а также из биомассы культуры его ткани применяли модель гипобарической (лвысотной) гипоксии (Кудрин А.Н. и др., 1982; Крендаль Ф.П., Левина Л.П., Виннер Б.И., 1991; Минина С.А., Шигарова Л.В., Вайнштейн В.А., 1998). В настоящем исследовании был использован вариант острой гипоксической гипоксии, вызываемой шестичасовой экспозицией подопытных животных в барокамере с остаточным давлением соответствующим подъему на высоту 8000 м. Он характеризуется большим диапазоном изменений количественных значений биохимических показателей крови и параметров ПОЛ тканей (Макарова В.Г. и др., 1996; Takahashi H., 1991; Lyapkov B.G., 1994).
Сравнительной оценке подлежали четыре группы маркеров: показатели газового состава и кислотно-щелочного равновесия крови; сывороточные биохимические параметры; показатели функционально-метаболического статуса эритроцитов и активности перекисного окисления липидов в некоторых кислородоемких биосубстратах, таких как печень, мозг, миокард.
Препараты из биомассы из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП, назначаемые семидневным курсом, вызывали повышение устойчивости организма подопытных животных к воздействию гипоксических факторов. Антигипоксический эффект проявился в минимальных изменениях по сравнению с контролем параметров газового состава и кислотно-щелочного равновесия крови. Это могло быть связано как с общеадаптационным действием, усиливающим активность основных функциональных систем животных в период шестичасового пребывания в барокамере, так и более быстрым восстановлением фиксируемых характеристик после спуска крыс препаратных групп по сравнению с серией гипоксия. Дополнительным подтверждением проявлений возросшей переносимости гипоксического воздействия явились результаты изменений комплекса биохимических показателей сыворотки крови, изменения которых характерны при развитии острой гипоксической гипоксии: активности аминотрансфераз, гамма-глутамилтранспептидазы, щелочной фосфатазы, амилазы; концентраций общего белка, общего холестерина, глюкозы, мочевины, калия, натрия (Лукьянчук В.Д., Савченкова Л.В., 1993; Макарова В.Г. и др., 1996). Судя по ним, степень анализируемого действия оказалась неодинаковой: более значимой в серии, где применяли препарат из б.к.т. ПП.
По данным динамики ферментных и метаболических показателей эритроцитов сравниваемые препараты в условиях воздействия гипоксических факторов способствовали интенсификации гликолиза, как ранних, так и завершающих его стадий. Причем, это действие (судя по абсолютным значениям и активности пируваткиназы, и содержания 2,3-дифосфоглицерата) также оказалось более выраженным у препарата из б.к.т. ПП. Вполне вероятно, что выявленный метаболический сдвиг является одним из решающих в механизме антигипоксического действия вводимых препаратов на эритроцитарном уровне. Кроме того, значительное возрастание содержания 2,3-дифосфоглицерата предопределяет снижение сродства гемоглобина к кислороду, что, в свою очередь, способствует сохранению необходимого уровня оксигенации тканей. Косвенным подтверждением данных предположений может рассматриваться и тот факт, что у животных, получавших препарат из б.к.т. ЖШ, активность АТФ-азы оказалась гораздо более низкой, чем у крыс серии гипоксия, хотя осталась достоверно превышающей контрольный параметр. А после введения препарата из б.к.т. ПП активность данного фермента практически не отличалась от показателя у интактных животных. Это свидетельствует о функциональной стабильности клеточных мембран эритроцитов крыс данной серии даже в условиях воздействия гипоксических факторов.
Необходимость обязательного включения сравнительного анализа динамики уровня липопероксидации в биосубстратах при данной модели обоснована тем, что гипоксия является одним из индукторов ПОЛ биологических мембран с последующим повреждением тканей (Медведев Ю.В., Толстой А.Д., 2000; Yasaka T., Ocudaira K., Fulito H., 1986; Meerson F.Z., 1993). Препараты из биомассы фитоадаптогенов в условиях воздействия гипоксических факторов оказали четкое антиоксидантное действие, проявившееся меньшей степенью активации ПОЛ в ткани печени, миокарде и его отсутствием - в мозговой ткани. Статистический анализ итоговых результатов свидетельствует о большей выраженности данного эффекта в серии, где животным перед помещением в гипобарическую камеру вводили препарат из б.к.т. ПП.
Таким образом, установленные проявления и возможные механизмы антигипоксического действия препарата из б.к.т. ПП характеризуются достаточной выраженностью, обеспечивающей высокую устойчивость организма в условиях остро развившейся кислородной недостаточности. Данная характеристика безусловно важна и может способствовать расширению диапазона практического использования оцениваемого препарата.
Оценка сравнительной выраженности радиопротекторных свойств у исследуемых фитоадаптогенов проведена на взрослых нелинейных крысах-самцах, подвергаемых однократному общему воздействию гамма-облучением в дозе 7,5 Гр. Данная модель, характеризующаяся приблизительно 50%-й летальностью облученных животных в течение первого месяца, достаточно широко используется в экспериментальных исследованиях при исследованиях влияния фитопрепаратов на показатели течения радиационного поражения (Бураева Л.Б. и др., 1998; Вымятина З.К. и др., 2000).
Динамика проявлений радиационной патологии и ее модификация препаратами из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП изучалась путем регистрации гематологических и биохимических параметров в опытных сериях на 1, 3, 5, 10 и 30-й дни после облучения. Сравниваемые препараты способствовали сохранению практически на всех этапах регистрации более высокого уровня, чем в серии радиация, числа лейкоцитов, тромбоцитов, эритроцитов и концентрации гемоглобина. Детальный анализ полученных результатов свидетельствует о достаточно близкой в целом выраженности этого проявления радиопротекторного действия в обеих группах.
У животных, подвергнутых облучению на фоне введения препаратов из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП, выявлена достоверно меньшая степень изменений показателей, отражающих функционально-метаболическое состояние эритроцитов (содержания 2,3-дифосфоглицерата, активности АТФ-азы, пируваткиназы,) на каждом этапе эксперимента по сравнению с серией радиация. Вполне вероятно, что эти данные являются одним из проявлений влияния оцениваемых препаратов, обеспечивающего повышенную устойчивость организма подопытных лабораторных животных, в частности их эритроцитов, к радиационному воздействию.
В обеих препаратных группах было установлено достаточно отчетливое и близкое по выраженности антиоксидантное действие в условиях использованной экспериментальной модели лучевой патологии, которое оценивалось по динамики некоторых параметров свободно-радикального процесса в гомогенатах селезенки и тонкой кишки.
Данные проведенного исследования позволяют констатировать наличие у препаратов из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП равновыраженного защитного эффекта к радиационному воздействию. Он проявился практически на всех этапах 30-дневного контролируемого пострадиационного периода достоверно меньшими изменениями регистрируемых показателей по сравнению с серией, в которой животные не получали препараты из биомассы фитоадаптогенов. При этом протекторное действие, отмеченное через сутки после облучения, можно, вероятнее всего, расценить как проявление повышенной устойчивости к радиации, вызванной 10-дневным превентивным курсовым назначением оцениваемых препаратов, а меньшую степень изменений регистрируемых параметров по сравнению с чисто облученными животными, на последующих этапах - как реализацию их терапевтического эффекта в условиях лучевой патологии. На 30-й день практически все определяемые гематологические и биохимические показатели в препаратных группах, в отличие от серии радиация, полностью соответствовали значениям контрольной группы животных. При анализе поэтапной выраженности оцениваемого действия следует отметить достаточно жесткое соотношение между характером изменений показателей интенсивности ПОЛ, с одной стороны, и динамикой гематологических и эритроцитарных параметров, с другой. Это, по-видимому, отражает значимость антиоксиданой активности препаратов из биомассы фитоадаптогенов в реализации других проявлений их радиопротекторного эффекта.
С учетом данных, свидетельствующих о важной роли в этиологии и патогенезе атеросклероза интенсификации свободно-радикального окисления (Ланкин В.З., Вихерт А.М., 1989; Артемьева Г.Б., 1990; Tsai A.C., Thie G.M., Law C.R., 1977; Goto J., 1982), с одной стороны, и достаточно выраженной антиоксидантной активностив фитоадаптогенов семейства аралиевых (Давыдов В.В. и др., 1990; Трилис Я.Г., 1996), с другой, в настоящей работе для проведения сравнительного изучения антиатеросклеротических свойств препаратов из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП была использована перекисная модель атеросклероза (Воскресенский О.Н., Бобырев В.И., 1971). Она воспроизводилась у подопытных кроликов путем их тридцатидневного содержания на безантиоксидантном рационе, включающим жир с низким уровнем токоферола. Индивидуальные пищевые брикеты готовились по стандартной рецептуре. Дополнительным фактором, усиливающим и ускоряющим развитие атеросклероза, была иммобилизационная гиподинамия: животные весь опытный период находились в состоянии практически полной обездвиженности, так как размеры индивидуальных вольеров были подобраны в максимальном соответствии с длинной туловища кролика. В таких условиях, как подтверждено экспериментальными исследованиями (Артемьева Г.Б., 1990), у подопытных животных ускоренно развивается гиперлипидемия, синдром липопероксидации в различных тканях, включая сосудистую стенку, и специфические изменения в артериях: липидная инфильтрация, деструкция эластики, фиброз, кальциноз.
Настоящие эксперименты выполнены в вариантах профилактического и лечебного применения сравниваемых препаратов. В первом случае они назначались в течение всего срока воздействия атерогенных факторов, во втором - две недели сразу же после перевода кроликов на обычную диету и в просторные вольеры. В качестве биохимических критериев оценки моделируемой патологии и ее модификации при применении препаратов из биомассы фитоадаптогенов использовали показатели липидного спектра сыворотки крови (концентрация общих липидов, триглицеридов, общего холестерина, β-липопротеидов, α-липопротеидов и значения индекса атерогенности), а также параметры, характеризующие активность липопероксидации в гомогенате ткани аорты (концентрация МДА, активность НАДФ-Н-зависимого и аскорбат-зависимого ПОЛ).
Сравнительный анализ полученных данных свидетельствует о том что препараты из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП вызывают достаточно выраженный профилактический эффект при воздействии факторов, индуцирующих атерогенез. Причем, по значениям всех определяемых параметров это действие оказалось достаточно близким по выраженности в обеих препаратных сериях. Через две недели после прекращения воздействия атерогенных факторов, в течение которых препараты из биомассы сравниваемых фитоадаптогенов назначались как лечебные средства, терапевтическая эффективность препарата из б.к.т. ПП, оцениваемая как по значениям динамики показателей липидного спектра сыворотки крови, так и параметров интенсивности перекисного окисления липидов в гомогенате стенки аорты оказалась более выраженной.
Изученное свойство препарата из б.к.т. ПП, учитывая чрезвычайно широкую распространенность атеросклероза и отсутствие радикальных средств для его лечения, должно рассматриваться как достаточно важная характеристика, расширяющая перспективы его клинического применения. При этом следует дополнительно отметить, что исследуемый препарат соответствует большинству принципиальных требований, предъявляемых к ангиопротекторам: способен влиять на ряд патогенетических факторов атеросклероза (уменьшает гиперлипидемию, увеличивает уровень антиатерогенных липопротеидов, тормозит активность перекисного окисления липидов); обладает высокой степенью безопасности, не кумулирует, что позволяет использовать его продолжительными курсами.
Для реализации гонадотропного действия женьшеня и его аналогов необходимо, чтобы половая функция была не только измененной, т.е. сниженной, но и способной к восстановлению (Гинзбург Я.З., 1959; Брехман И.И., Дардымов И.В., Добряков Ю.И., 1966; Дардымов И.В., 1976). Данные условиях проявления стимулирующего эффекта фитоадаптогенов на функцию половых желез предопределили выбор в настоящем исследовании для сравнительного анализа гонадотропной активности препаратов из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП экспериментальной модели односторонней кастрации половозрелых крыс.
Учитывая особенности динамики течения посткастрационного периода у крыс при использовании этой модели (Чугунова Л.Г. и др., 1997; Бурмистрова Л.А., 1999), сравнительную оценку гонадотропных свойств осуществляли в течение двух недель после тестэктомии: на 3, 6, 9 и 14-й дни. По завершении каждого этапа в биосубстратах крыс сравниваемых серий проводили три вида сравнительного анализа - биохимический, массаметрический и гистологический.
Из биохимических показателей регистрировали концентрации тестостерона в крови и фруктозы в семенной жидкости. В рамках массаметрического исследования определяли комплекс показателей прямого взвешивания (массу тела, семенников, семенных пузырьков, предстательной железы) и рассчитывали значения весовых коэффициентов для половых органов. Гистологическое исследование проводилось в вариантах цитологического (семенники) и морфометрического (семенные пузырьки) анализов. Параметрами первого были количества пахитенных сперматоцитов, ранних и поздних сперматид, второго - высота этителия и высота складок.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что препарат из б.к.т. ПП обладает достаточно выраженным гонадотропным эффектом. Это проявляется тем, что он уступает лэталонному препарату из б.к.т. ЖШ только более медленным, отсроченным развитием анализируемого действия, а на заключительном этапе контролируемого двухнедельного периода практически по всем параметрам оцениваемого комплекса эффекты в препаратных сериях оказались полностью сопоставимыми.
Эксперименты по оценке антидиабетического эффекта препарата из б.к.т. ПП проведены на нелинейных крысах-самцах, инсулинозависимый диабет у которых вызвали однократной внутрибрюшиной иньекцикй аллоксана. Использованы две модификации, соответствующие лечебному и профилактическому вариантам применения сравниваемых препаратов, что обусловлено учетом патогенетических особенностей аллоксанового диабета и предположительным механизмом терапевтического действия фитоадаптогенов при данной экспериментальной патологии (Дардымов И.В., 1976; Давыдов В.В., Молоковский Д.С., Лимаренко А.Ю., 1990; Молоковский Д.С., Давыдов В.В., Хегай М.Д., 2002).
При оценке лечебного варианта, когда сравниваемые препараты назначались подопытным животным в течение 10 дней после регистрации признаков диабета, установлено достоверное снижение гипергликемии, гипоинсулинемии и гипогликогенгистии. При этом более рельефным нормализующее действие оказалось в случае применения препарата из б.к.т. ПП, что дополнительно подтвердилось результатами глюкозо-толерантного теста, т.е. через 45 минут (на пике сахарной кривой) после внутрижелудочного введения животным концентрированной глюкозы.
Учитывая важность свободно-радикального механизма в реализации избирательного и специфического панкреотоксического действия аллоксана (Блох К.О., 1987; Asayama K. et al., 1984), с одной стороны, данные о предотвращении аллоксанового диабета классическими антиоксидантами (Cowden W., Lewis-Hughes Р., Clark I., 1985; Fujii S. et al., 1985), с другой, сравнительную выраженность протективного эффекта препаратов из биомассы фитоадаптогенов, назначаемых 14-дневным курсом, оценивали по изменениям в гомогенате ткани поджелудочной железы параметров активности ПОЛ. Они регистрировались через сутки после иньекции панкреотоксина. Установленный антиоксидантный эффект при моделируемой эндокринной патологии также оказался более выраженным в случае применения препарата из б.к.т. ПП. С данной особенностью, вероятно, отчасти можно связать и другие отмеченные выше гормонально-метаболические различия в препаратных сериях, так как антигипергликемические свойства сравниваемых препаратов во многом предопределены их протективной активностью в отношении цитотоксического действия аллоксана.
Как следует из полученных данных, антидиабетическое действие препарата из б.к.т. ПП как при лечебном, так и профилактическом вариантах применения, оказалось более выраженным. Это различие, по всей вероятности, предопределено характером его стимулирующего воздействия на функцию поджелудочной железы и антиоксидантными свойствами, предотвращающими ее поражение аллоксаном.
Одним из перспективных способов совершенствования терапии основных заболеваний щитовидной железы - гипер- и гипотиреоза - является применение препаратов растительного происхождения, фармакодинамические свойства которых способствуют усилению эффекта базисных лекарственных средств, направленных на устранение ведущих проявлений этих патологий и повышению степени безопасности их применения длительными курсами. При этом многие фитопрепараты сами активно способствуют положительной динамике данных эндокринопатий (Соколов С.Я., 2000; Макарова В.Г. и др., 2001). В последние годы появились сообщения о возможности влияния препаратов из группы фитоадаптогенов семейства аралиевых на функциональную активность щитовидной железы (Трилис Я.Г., 1996).
Изучение эффективности препаратов из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП при экспериментальных патологиях щитовидной железы, подтверждаемых формируемым избытком или дефицитом тиреоидных гормонов в крови подопытных крыс, в рамках самостоятельного раздела проведено и в настоящем исследовании.
Оценка влияния сравниваемых препаратов на течение моделируемого гипертиреоза осуществлена по широкому комплексу параметров: массаметрических (значения массы тела, масса и весовые коэффициенты внутренних органов), электрокардиографических, биохимических (показатели белкового, электролитного, углеводного обмена сыворотки крови, печени, скелетной мышцы, маркеры интенсивности ПОЛ в миокарде и скелетной мышце, показатели кислотно-щелочного баланса и газового состава крови). Результаты выполненного исследования убедительно свидетельствуют о том, что препараты из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП повышают устойчивость организма лабораторных животных при экспериментальном гипертиреозе к тироксиновой интоксикации. При этом степень протекторного эффекта оказалась неодинаковой: по большинству регистрируемых показателей действие препарата из б.к.т. ПП оказалось более надежным.
Назначение препаратов из биомассы культуры ткани фитоадаптогенов лабораторным животным с экспериментальным мерказолиловым гипотиреозом также сопровождается их четким положительным влиянием на течение данной патологии. Это проявляется как меньшей степенью изменений основных биохимических маркеров гипотиреоза, так и сохранением в условиях гипотрийодтиронинемии ряда функционально-метаболических характеристик, в частности, андрогенного статуса и физической работоспособности. Последняя оценивалась по расширенному комплексу, включающему временные характеристики двойного плавательного теста до предела, данные газового состава, кислотно-щелочного равновесия крови и некоторые биохимические параметры энергетического обмена в различных биосубстратах (печеночная ткань, миокард, эритроциты, сыворотка крови) после его выполнения. Детальный сравнительный анализ свидетельствует о практически равновыраженном эффекте препаратов из б.к.т. ЖШ и б.к.т. ПП при моделируемой эндокринопатии, что подтверждено близкими количественными значениями большинства регистрируемых показателей, отражающих их протективные свойства к мерказолиловому дефициту тиреоидных гормонов.
Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о достаточно высокой безопасности препарата из б.к.т. ПП и его выраженной фармакологической активности, проявившейся рядом профилактических и терапевтических свойств при различных экспериментальных патологиях и состояниях. Системный сравнительный анализ с соответствующими параметрами препарата из б.к.т. ЖШ свидетельствует о том, что по многим фармакодинамическим характеристикам он не уступает лэталонному средству, а по некоторым из них даже превосходит его. Полученные данные подтверждают значение биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного как ценного лекарственного сырья, препараты из которого могут найти широкое практическое применение.
выводы
1. Значения базисного параметра острой токсичности - LD50, установленные для препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного, а также отсутствие функционально-метаболических и гистологических изменений у крыс, постоянно получавших исследуемый препарат в течение 2, 4 и 6 месяцев в различных дозах, т.е. при оценке возможных проявлений хронической токсичности, служит подтверждением высокой степени его безопасности даже при режиме относительно интенсивного и длительного назначения. Практически не выявлено у данного препарата проявлений специфических видов токсичности - аллергенного, мутагенного, эмбриотоксичного эффектов.
2. Назначение препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного подопытным животным, подвергающимся однократным и многократным плавательным нагрузкам, сопровождается увеличением как абсолютных, так и относительных показателей физической работоспособности. При этом их количественные значения в полисциасовой серии на всех этапах проводимого анализа статистически не отличались от таковых у животных, получавших препарат из биомассы женьшеня.
3. Препарат из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного способствует снижению выраженности токсического тетрахлорметанового гепатита у крыс, что проявляется меньшей степенью изменений биохимических показателей сыворотки крови, параметров интенсивности перекисного окисления липидов в ткани печени, характерных для использованной экспериментальной патологии, и подтверждается данными ее гистологического анализа. При этом гепатопротекторный эффект в целом превосходит соответствующее действие препарата из биомассы женьшеня.
4. Антигипоксический эффект оцениваемого препарата проявился в стабильности параметров газового состава и кислотно-щелочного равновесия крови и результатами изменений комплекса биохимических показателей сыворотки крови, динамики ферментных и метаболических показателей эритроцитов, а также параметров интенсивности перекисного окисления липидов в периферических тканях лабораторных животных, подвергнутых воздействию гипоксических факторов. Судя по полученным результатам, степень выраженности данного действия также более значима, чем у животных, получавших препарат из биомассы женьшеня.
5. Препарат из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного обладает близким по выраженности к препарату женьшеня радиопротекторным действием, проявившимся на всех этапах тридцатидневного контролируемого пострадиационного периода достоверно меньшими изменениями значений гематологических параметров, биохимических показателей функционально-метаболического состояния эритроцитов и активности перекисного окисления липидов в тканях селезенки и тонкой кишки облученных животных.
6. Профилактическое применение препаратов из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного и женьшеня на фоне воздействия факторов, способствующих развитию атеросклероза у кроликов, сопровождается умеренным и количественно близким снижением, по сравнению с серией латеросклероз, значений показателей интенсивности свободно-радикального процесса в стенке аорты и достаточно выраженным защитным эффектом в отношении показателей липидного спектра сыворотки крови. При их назначении в лечебном варианте антиатеросклеротическая эффективность препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного оказалась более выраженной.
7. Детальный сравнительный анализ полученных данных свидетельствует о равновыраженной эффективности применения препаратов из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного и женьшеня при экспериментальном посткастрационном гипогонадизме и мерказолиловом гипотиреозе. Степень протективного действия препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного при аллоксановом диабете и тироксиновом гипертиреозе по большинству регистрируемых показателей оказалась превосходящей соответствующие эффекты препарата из биомассы женьшеня.
список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Изучение антитоксического действия препаратов из биомассы женьшеня, полисциаса папоротниколистного и эссенциале в условиях затравки экспериментальных животных гербицидом утнур. - Рязань, 1994. - 10 с.Ц Деп. в ВИНИТИ 2.02.1994, №300-В94. - (Соавт.: А.А. Никифоров, О.А. Семенова).
2. Применение препарата из биомассы женьшеня в условиях интоксикации гербицидом утнур // Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты: тез. 1-го Междунар. конгр. - М., 1994. - С. 201-202 (№ 358). - (Соавт.: А.А. Никифоров).
3. Фармакологическая коррекция метаболической адаптации к гипоксии // Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И.П. Павлова. - 1994. - №1-2. - С. 13-16. - (Совм. с: В.Г. Макарова, Б.К. Романов, К.В. Савилов).
4. Изучение гепатопротекторного эффекта препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. - 1995. - Т. V, №3. - С. 207. - (Прил. №1 к журн.: Материалы I- й Рос. гастроэнтерологической недели). - (Соавт.: Л.Г. Чугунова, Г.Б. Артемьева, А.А. Никифоров, К.В. Савилов).
5. Оценка антигипоксического действия препаратов из биомассы женьшеня и полисциаса папоротниколистного // Сб. резюме Пятого Нац. конгр. по болезням органов дыхания. - М., 1995. - № 662. - С. 122. - (Прил. к журн.: Пульмонология. - 1995). - (Соавт.: В.Г. Макарова, Г.Б. Артемьева, А.А. Никифоров).
6. Оценка токсикологических свойств препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного // Тез. 1-го съезда Рос. о-ва фармакологов. - М., 1995. - С 261. - (Совм. с: В.Г. Макарова, А.А. Никифоров).
7. Апи- и фитопрофилактика экспериментальной изадриновой миокардиодистрофии // Сб. резюме Шестого Нац. конгр. по болезням органов дыхания. - Новосибирск, 1996. - С. 446 (№1696). - (Прил. к журн.: Пульмонология. - 1996). - (Соавт.: Л.Г. Чугунова, В.А. Киселёва, К.В. Савилов).
8. Влияние препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного на показатели кариометрического анализа эпителиоцитов тонкой кишки при остром радиационным поражении // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 1996. - Т. VI, №4. - С. 122 (№345). - (Прил. №3 к журн.: Материалы Второй Рос. Гастроэнтерологической Недели). - (Совм. с: В.Г. Макарова, А.Г. Краснолобов).
9. Влияние препаратов из биомассы полисциаса папоротниколистного и женьшеня на течение экспериментального сахарного диабета // Человек и лекарство: тез. докл. III Рос. Нац. конгр. - М., 1996. - С. 196. - (Соавт.: К.В. Савилов).
10. Влияние препаратов из биомассы фитоадаптогенов на показатели липидного обмена кроликов, находящихся на безантиоксидантном рационе // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 1996. - Т. VI, №4. - С. 59 (№110). - (Прил. №2 к журн.: Материалы I-го Рос. конгр. Парентеральное питание в гастроэнтерологии). - (Соавт.: Л.Г. Чугунова, О.А. Семенова).
11. Изучение протективных свойств препаратов из биомассы фитоадаптогенов в условиях поражения поджелудочной железы аллоксаном // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 1996. - Т. VI, №4. - С. 163 - 164 (№468). - (Прил. №3 к журн.: Материалы Второй Рос. Гастроэнтерологической Недели). - (Соавт.: Л.Г. Чугунова).
12. Оценка антиоксидантного действия полисциаса папоротниколистного как возможного механизма его цитопротекции тонкой кишки в условиях острого радиационного поражения // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 1996. - Т. VI, №4. - С. 40 (№73). - (Прил. №2 к журн.: Материалы I-го Рос. конгр. Парентеральное питание в гастроэнтерологии). - (Совм. с: В.Г. Макарова, В.А. Киселева).
13. Экспериментально-фармакологическая оценка препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного // Человек и лекарство: тез. докл. III Рос. Нац. конгр. - М., 1996. - С. 34. - (Совм. с: В.Г. Макарова).
14. Protective effects of Poliscias filicifolia (araliaceae) and lactulose against hepatotoxicity induced by CCL4 in rats // Abstracts 10th Asian Pasific Congress of Gastroenterology and 7th Asian Pasific Congress of Digestive Endoscopy. - Yokogama (Japan), 1996. - P. 325. - (Co-auths.: L. Chugunova, V. Makarova, D. Uzbekova, L. Mirgorodskaya).
15. Анализ параметров перекисного окисления липидов при моделировании аллоксанового диабета и на фоне превентивного назначения препаратов из биомассы фитоадаптогенов // Человек и лекарство: тез. докл. IV Рос. Нац. конгр. - М., 1997. - С. 141. - (Совм. с: Л.Г. Чугунова).
16. Влияние препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного на показатели глюкозо-толерантного теста при экспериментальном диабете // Пожилой больной. Качество жизни: тез. докл. II Междунар. науч.- практ. конф. - М., 1997. - С. 16. - (Соавт.: Л.Г. Чугунова, К.В. Савилов).
17. Влияние препаратов из клеточных культур фитоадаптогенов на гематологические показатели облученных крыс // Проблемы фармакологии и фармации на Дальнем Востоке: материалы регион. науч. конф. Часть 1. Экспериментальная фармакология. - Хабаровск, 1997. - С. 82-84. - (Соавт.: В.Г. Макарова).
18. Возможность фармакопрофилактики нарушений углеводно-азотистого обмена при экспериментальном гипертиреозе // Актуальные вопросы эндокринологии: тез. Всерос. науч.- практ. конф. - Пермь, 1997. - С. 102-103. - (Совм. с: Л.Г. Чугунова, К.В. Савилов, И.В. Хныкина).
19. Изучение антиоксидантных свойств препаратов из клеточных культур фитоадаптогенов семейства аралиевых в условиях экспериментальной гипоксии // Сб. резюме Седьмого Нац. конгр. по болезням органов дыхания. - М., 1997. - С. 345 (№1283). - (Прил. к журн.: Пульмонология.-1997). - (Соавт.: К.В. Савилов).
20. Кариометрический и гистологический анализ тонкой кишки при оценке радиопротекторных свойств препарата из биомассы женьшеня // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 1997. - Т. VI, №5. - С. 220 (№542). - (Прил. №4 к журн.: Материалы Третьей Рос. Гастроэнтерологической Недели) - (Совм. с: В.Г. Макарова, А.Г. Краснолобов).
21. Оценка эффективности апи- и фитотерапии экспериментального мерказолилового гипотиреоза // Экология и здоровье человека: тез. докл. IV Всерос. науч.- практ. конф. с Междунар. участием. - Самара, 1997. - С. 219-220. - (Совм. с: Л.Г. Чугунова, В.А. Киселева, Л.В. Никифорова).
22. Сравнительная эффективность препаратов из биомасс некоторых фитоадаптогенов в условиях аллоксанового диабета // Актуальные вопросы эндокринологии: тез. Всерос. науч.- практ. конф. - Пермь, 1997. - С. 37. - (Соавт.: Л.Г. Чугунова).
23. Цитологический анализ при оценке гонадотропного эффекта фитоадаптогенов в условиях односторонней кастрации крыс-самцов // Актуальные вопросы эндокринологии: тез. Всерос. науч.- практ. конф. - Пермь, 1997. - С. 124-125. - (Соавт.: В.И. Шутов, В.А. Кривов).
24. Влияние препарата из биомассы клеточной культуры женьшеня на течение химического ожога глаз // Актуальные вопросы клинической фармакологии: тез. V Междунар. конф. - М., 1998. - С. 80. - (Соавт.: В.А. Соколов).
25. Влияние препарата из биомассы полисцисаса папоротниколистного на кариометрические характеристики энтероцитов облученных животных // Рос. гастроэнтерол. журн. - 1998. - №4. - С. 161-162. - (Содерж. журн.: Тез. съезда науч. о-ва гастроэнтерологов России). - (Соавт.: В.Г. Макарова, А.Г. Краснолобов).
26. Влияние препаратов из биомасс клеточных культур растений семейства аралиевых на показатели восстановления физической работоспособности // Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений: тез. докл. Междунар. совещания. - Новосибирск, 1998. - С. 152. - (Соавт.: В.Г. Макарова).
27. Динамика показателей интенсивности перекисного окисления липидов при фитотерапии токсического гепатита // От materia media к современным медицинским технологиям: тез. докл. Всерос. науч.- практ. конф., посвящ. 200-летнему юбилею кафедры фармакологии и фармации ВМА. - СПб, 1998. - С. 145. - (Соавт.: В.Г. Макарова).
28. Изменения концентраций инсулина и некоторых параметров углеводного обмена при фитотерапии экспериментального сахарного диабета // Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений: тез. докл. Междунар. совещания. - Новосибирск, 1998. - С. 153. - (Соавт.: Л.Г. Чугунова).
29. Изменения показателей активности гликолиза эритроцитов при радиационном воздействии и назначении препаратов из биомасс клеточных культур женьшеня и полисциаса папоротниколистного // Паллиативная медицина и реабилитация. - 1998. - №2-3. - С. 180 (VI.16). - (Содерж. журн.: Тез. II Конгр. с Междунар. участием Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении). - (Соавт.: В.Г. Макарова).
30. Изучение антигипоксического эффекта некоторых фито- и апипрепаратов в условиях истощающих физических нагрузок у животных с экспериментальным гипотиреозом // Сб. резюме Восьмого Нац. конгр. по болезням органов дыхания. - М., 1998. - С. 264 (XXX.71). - (Прил. к журн.: Пульмонология. - 1998). - (Соавт.: Л.Г. Чугунова, Л.А. Бурмистрова).
31. Изучение регенераторных свойств препаратов из биомассы полисциаса папоротниколистного // Человек и лекарство: тез. докл. V Рос. Нац. конгр. - М., 1998. - С. 402. - (Соавт.: В.А. Соколов).
32. Особенности течения экспериментальной патологии печени при применении препаратов из биомасс женьшеня и полисциаса папоротниколистного // Современные технологии в медицине: тез. докл. межрегион. науч.- практ. конф. - Томск, 1998. - С. 163-165. - (Соавт.: В.Г. Макарова).
33. Оценка эффективности апи- и фитотерапии экспериментального гипотиреоза // International Journal on Immunorehabilitation. - 1998. - №8. - С. 152 (589). - (Содерж. журн.: Тез. IV Междунар. конгр. Реабилитация в медицине и иммунореабилитация). - (Совм. с: Л.Г. Чугунова, М.В. Семенченко, Е.Н. Якушева).
34. Hepatoprotective effects of Royal Jelly, Poliscias Filicifolia (Araliaceaе) and Lactulose in CCL4-induced liver damage in rats // Third African International Congress of The African Association of Study of Liver Diseases (AF ASLD). - Cairo (Egypt), 1998. - Abstract № 1866. - (With: D. Uzbekova, L. Chugunova, V. Makarova, L. Mirgorodskaya).
35. Изучение актопротекторного эффекта препаратов из биомасс фитоадаптогенов в условиях дисфункции щитовидной железы // Фармация в XXI веке: инновации и традиции: тез. докл. Междунар. конф. - СПб, 1999. - С. 217. - (Совм. с: Л.Г. Чугунова, А.А. Слепнев).
36. Комплексный массаметрический анализ при исследовании радиопротекторного эффекта препаратов из биомасс женьшеня и полисциаса папоротниколистного // Достижения клинической фармакологии: тез. Междунар. науч. форума. - М., 1999. - С. 121. - (Соавт.: В.И. Шутов).
37. Массаметрический анализ влияния экстрактов из биомасс клеточных культур фитоадаптогенов и некоторых образцов маточного молочка на течение экспериментального гипотиреоза // Парентеральное и энтеральное питание: тез. III Междунар. конгр. - М., 1999. - С. 24 (№78). - (Соавт.: В.И. Шутов, О.В. Колобаева).
38. Массаметрический анализ влияния экстрактов из биомасс клеточных культур фитоадаптогенов и некоторых образцов маточного молочка на течение экспериментального гипотиреоза // Забайкальский мед. вестн. - 1999. - №1-4. - С. 55. - (Содерж. журн.: Тез. Всерос. науч.-практ. конф. Экологозависимая патология). - (Соавт.: В.И. Шутов, О.В. Колобаева).
39. Особенности изменений содержания трийодтиронина при апи- и фитотерапии мерказолилового гипотиреоза // Человек и лекарство: тез. докл. VI Рос. Нац. конгр. - М., 1999. - С. 75. - (Совм. с: Л.Г. Чугунова, В.А. Киселева).
40. Оценка антиатерогенного действия препаратов из биомассы растений семейства аралиевых // Рос. кардиол. журн. - 1999. - №4. - С.141-142. - (Прил. к журн.: Тез. докл. VI Всерос. съезда кардиологов). - (Соавт.: В.И. Шутов, О.В. Колобаева).
41. Оценка гонадотропного действия препаратов из биомассы культуры тканей некоторых растений семейства аралиевых // Фармация в XXI веке: инновации и традиции: тез. докл. Междунар. конф. - СПб., 1999. - С. 195 -196. - (Соавт.: В.И. Шутов, В.А. Кривов).
42. Оценка параметров андрогенной активности при моделировании экспериментального гипотиреоза и назначении препаратов из биомасс клеточных культур некоторых фитоадаптогенов // Забайкальский мед. вестн. - 1999. - №1-4. - С. 54-55. - (Содерж. журн.: Тез. Всерос. науч.-практ. конф. Экологозависимая патология). - (Соавт.: В.И. Шутов).
43. Оценка терапевтических свойств препаратов из биомассы растений семейства аралиевых при экспериментальном аллоксановом диабете // Человек и лекарство: тез. докл. VI Рос. Нац. конгр. - М., 1999. - С. 75. - (Совм. с: Л.Г. Чугунова).
44. Разработка модели гипотиреоза для исследования средств метаболической коррекции // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии: тез. Всерос. науч. конф. с Междунар. участием. - СПб., 1999. - С. 230. - (Совм. с: Л.Г. Чугунова, К.В. Савилов).
45. Влияние апи- и фито- препаратов на показатели физической работоспособности при экспериментальном гипотиреозе // Фитотерапия, лазеротерапия, биологически активные вещества естественного происхождения (БАВЕП) в XXI веке: материалы науч.- практ. конф. - Черноголовка, 2000. - С. 125-126. - (Соавт.: В.А. Киселева, А.А. Слепнев).
46. Влияние препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного на течение посткастрационного периода // Человек и лекарство: тез. докл. VII Рос. Нац. конгр. - М., 2000. - С. 427. - (Соавт.: В.И. Шутов).
47. Возможности применения пищевой добавки на основе биологически активных продуктов пчеловодства и препаратов из биомасс растений семейства аралиевых для коррекции физической работоспособности в условиях гипотиреоза // Парентеральное и энтеральное питание: тез. IV Междунар конгр. - М., 2000. - С. 69-70 (№128). - (Соавт.: Л.Г. Чугунова, А.А. Слепнев).
48. Динамика тестостеронемии у крыс в посткастрационном периоде и на фоне назначения препаратов из биомасс фитоадаптогенов // Актуальные вопросы эндокринологии: тез. докл. 3-й Всерос. науч.- практ. конф. - Пермь, 2000. - С. 217-218. - (Соавт.: В.И. Шутов).
49. Сравнительный биохимический анализ антигипоксического эффекта препаратов из биомасс клеточных культур растений семейства аралиевых // Сб. резюме Десятого Нац. конгр. по болезням органов дыхания. - СПб., 2000. - С. 391 (№1467). - (Прил. к журн.: Пульмонология.-2000). - (Соавт.: В.И. Шутов, В.А. Киселева).
50. Актопротекторное действие препаратов из биомасс фитоадаптогенов при экспериментальной гипотиреозе // Человек и лекарство: тез. докл. VIII Рос. Нац. Конгр. - М., 2001. - С. 641. - (Совм. с.: В.И. Шутов).
51. Влияние пищевых добавок, содержащих комбинации биологически активных продуктов пчеловодства и препаратов из биомасс некоторых фитоадаптогенов на массаметрические параметры щитовидной железы при экспериментальном гипотиреозе // Парентеральное и энтеральное питание: тез. V Междунар. конгр. - М., 2001. - С. 69-70 (№84). - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
52. Гисто-метаболическая оценка гепатопротекторного эффекта препарата из биомассы клеточной культуры полисциаса папоротниколистного // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2001. - Т. XI, №1. - С. 50 (№163). - (Прил. №12 к журн.: Материалы Шестой Рос. конф. Гепатология сегодня). - (Соавт.: В.И. Шутов).
53. Динамика параметров газового состава и кислотно-щелочного равновесия крови при экспериментальном мерказолиловом гипотиреозе и назначении биологически активных продуктов пчеловодства и фитопрепаратов семейства аралиевых // Сб. материалов 3-й Междунар., 9-й Всерос. науч.- практ. конф. по пчеловодству и апитерапии. - Саратов, 2001. - С. 133-135. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
54. Пат. 2165648 РФ, МПК 7 G 09 B, 23/28, A 61 K, 31/4164. Способ моделирования гипотиреоза / Л.Г. Чугунова, А.Н. Рябков, К.В. Савилов (РФ). - №97120428; заявл. 26.11.1997; опубл. 20.04.2001, Бюл.11.
55. Сравнительный анализ массаметрических параметров при апи- и фитотерапии мерказолилового гипотиреоза // Интермед-2001: материалы 2-й Междунар. науч.- практ. конф. - Рыбное, 2001. - С. 165-166. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
56. Анализ влияния препаратов из биомассы полисциаса папоротниколистного и женьшеня на показатели газового состава и кислотно-щелочного равновесия крови при экспериментальном гипертиреозе // Человек и лекарство: тез. докл. IХ Рос. Нац. конгр. - М., 2002. - С. 688. - (Соавт.: В.И. Шутов).
57. Антигипоксический эффект препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного в условиях экспериментальной радиационной патологии // Сб. резюме Двенадцатого Нац. конгр. по болезням органов дыхания. - М., 2002. - С. 423 (LX.34). - (Прил. к журн.: Пульмонология.-2002). - (Соавт.: В.И. Шутов).
58. Антиоксидантная характеристика гепатопротектроного эффекта апи- и фитопрепаратов // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2002. - Т. XII, №1. - С. 48 (№150). - (Прил. №16 к журн.: Материалы Седьмой Рос. конф. Гепатология сегодня). - С. 48 (№150). - (Соавт.: В.А. Киселева, В.И. Шутов).
59. Влияние препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного на показатели липопероксидации и антиоксидантной защиты печеночной ткани в условиях экспериментального тетрахлорметанового гепатита // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2002. - Т. XII, №5. - С. 127 (№474). - (Прил. №17 к журн.: Материалы Восьмой Рос. Гастроэнтерологической Недели). - (Соавт.: В.А. Киселева, В.И. Шутов).
60. Влияние препаратов из биомасс клеточных культур женьшеня и полисциаса папоротниколистного на некоторые показатели андрогенной активности при экспериментальном гипотиреозе // Актуальные вопросы эндокринологии: тез. докл. 4-й Всерос. науч.- практ. конф. - Пермь, 2002. - С. 251-252. - (Соавт.: В.И. Шутов).
61. Кардиопротективный эффект биологически активных продуктов пчеловодства и препаратов из биомасс фитоадаптогенов семейства аралиевых в условиях тироксиновой интоксикации // Апитерапия сегодня: материалы Междунар. науч.- практ. конф. по апитерапии. - Рязань, 2002. - С. 33-36. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая, В.А. Киселева).
62. Коррекция физической работоспособности апи- и фитопрепаратами при гипофункции щитовидной железы // От мёдоцелительства до научной пчёлотерапии III тысячелетия: сб. материалов 1-й Междунар. науч.- практ. конф. по пчеловодству и пчёлотерапии Белорусский мёд-2002. - Минск, 2002. - С. 107-108. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая, В.А. Киселева).
63. Оценка параметров липидного спектра крови при экспериментальном гипотиреозе и назначении пищевых добавок на основе продуктов пчеловодства и некоторых фитопрепаратов // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2002. - Т. XII, №5. - С. 132 (№488). - (Прил. №17 к журн.: Материалы Восьмой Рос. Гастроэнтерологической Недели). - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая, В.А. Киселева).
64. Показатели газового состава крови при апи- и фитотерапии экспериментального гипотиреоза // Сб. резюме Двенадцатого Нац. конгр. по болезням органов дыхания. - М., 2002. - С. 423 (LX.33). - (Прил. к журн.: Пульмонология.-2002). - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая, В.А. Киселева).
65. Сравнительная оценка влияния пищевых добавок на основе маточного молочка и препарата из биомассы полисциаса папоротниколситного на некоторые параметры экспериментальной тироксиновой миокардиопатии // Парентеральное и энтеральное питание: тез. VI Междунар. конгр. - М., 2002. - С. 83-84 (№ 86). - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая, В.А. Киселева).
66. Характеристика андрогенного статуса при экспериментальной фитотерапии мерказолилового гипотиреоза // Парентеральное и энтеральное питание: тез. VI Междунар. конгр. - М., 2002. - С. 84 (№87). - (Соавт.: В.И. Шутов).
67. Оценка антиоксидантной активности препарата из биомассы культуры ткани полисциаса папоротниколистного в условиях экспериментальной тироксиновой интоксикации // Парентеральное и энтеральное питание: тез. VII Междунар. конгр. - М., 2003. - С. 86 (№102). - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая, В.А. Киселева).
68. Оценка биохимических показателей углеводного, липидного и электролитного обменов при фитотерапии экспериментального гипертиреоза // Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И.П. Павлова. - 2003. - №1-2. - С. 42-47. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
69. Характеристика гепатопротекторного действия препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного в условиях экспериментального тетрахлорметанового гепатита // Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И.П. Павлова. - 2003. - №1-2. - С. 109-113.
70. Влияние препаратов из биомассы фитоадаптогенов на биохимические и морфологические проявления острого токсического гепатита // Актуальные вопросы гастроэнтерологии в терапии и хирургии: сб. науч. тр., посвящ. 60-летию Рязан. гос. мед. ун-та им. акад. И.П. Павлова. - Рязань; М., 2004. - С. 87-92. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
71. Метаболические изменения в печени и скелетных мышцах при фитотерапии экспериментальной тироксиновой интоксикации // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2004. - Т. XIV, №1. - С. 99 (№365). - (Прил. №22 к журн.: Материалы Девятой Рос. конф. Гепатология сегодня). - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая, В.А. Киселева).
72. Ферментативная оценка гепатопротекторного эффекта препарата из биомассы клеточной культуры полисциаса папоротниколистного // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2004. - Т. XIV, №1. - С. 99 (№364). - (Прил. №22 к журн.: Материалы Девятой Рос. конф. Гепатология сегодня). - (Соавт.: В.А. Киселева, В.И. Шутов).
73. Экспериментальная оценка стресспротективного эффекта препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного в условиях мерказолиловой интоксикации // Человек и лекарство: тез. докл. ХI Рос. Нац. конгр. - М., 2004. - С. 623-624. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
74. Анализ динамики некоторых параметров липопероксидации в ткани тонкого кишечника при экспериментальной лучевой патологии и на фоне применения фитопрепартов новых биотехнологий // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2005. - Т. XV, №5. - С. 44 (№155). - (Прил. №26 к журн.: Материалы Одиннадцатой Рос. Гастроэнтерологической Недели).
75. Влияние препарата из биомассы клеточной культуры полисциаса папоротниколистного на течение экспериментального гепатита, моделируемого токсическими дозами гербецида утнур // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2005. - Т. XV, №1. - С. 107 (№ 397). - (Прил. №24 к журн.: Материалы Десятой Рос. конф. Гепатология сегодня). - (Соавт.: А.А. Никифоров).
76. Влияние препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного на показатели интенсивности перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты эритроцитов при острой гипоксической гипоксии // Сб. резюме 15-го Нац. конгр. по болезням органов дыхания. - М., 2005. - С. 64 (№213). - (Прил. к журн.: Пульмонология.-2005).
77. Сравнительная оценка динамики некоторых показателей углеводного обмена как маркеров гепатопротекторного эффекта препаратов из биомассы фитоадаптогенов при экспериментальном гипертиреозе // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2005. - Т. XV, №1. - С. 106 (№ 396). - (Прил. №24 к журн.: Материалы Десятой Рос. конф. Гепатология сегодня).
78. Сравнительная эффективность препаратов из биомассы клеточных культур растений семейства аралиевых при экспериментальном атеросклерозе // Человек и лекарство: тез. докл. ХII Рос. Нац. конгр. - М., 2005. - С. 229.
79. Экспериментальная оценка влияние препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного на метаболические проявления панкреотоксического эффекта аллоксана // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2005. - Т. XV, №5. - С. 64 (№229). - (Прил. №26 к журн.: Материалы Одиннадцатой Рос. Гастроэнтерологической Недели). - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
80. Экспериментальный анализ интенсивности перекисного окисления липидов при моделировании гипертиреоза и применении препарата из биомассы полисциаса папоротниколистного // Материалы 9-й Респ. науч.- практ. конф. с Междунар. участием, посвящ. 60-летию победы в Великой Отечественной войне и Всерос. дням защиты от экологической опасности. - Рязань, 2005. - С. 332-334. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
81. Изучение антиатерогенных свойств препаратов из биомассы клеточных культур женьшеня и полисциаса папоротниколистного // Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения в современной медицине: материалы 6-й Междунар. науч. конф. - Черноголовка, 2006. - С. 213-216.
82. Оценка антиоксидантных свойств препаратов из биомассы клеточных культур женьшеня и полисциаса папоротниколистного при экспериментальном атеросклерозе // Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения: материалы 10-й Респ. конф. с Междунар. участием, посвящ. 110-летию со дня рождения акад. Ф.Г. Кроткова / под ред. засл. деят. науки РФ, проф. В.Г.Макаровой и засл. работника высш. шк. РФ, проф. В.А. Кирюшина. - Рязань, 2006. - С. 254-256.
83. Сравнительная оценка влияния препаратов из биомассы клеточных культур фитоадаптогенов семейства аралиевых на некоторые массаметрические показатели гемикастрированных крыс // Материалы ежегодной науч. конф. Рязан. гос. мед. ун-та им. акад. И.П. Павлова / под ред. засл. деят. науки РФ, проф. В.Г.Макаровой. - Рязань, 2006. - Ч. I. - С. 3-4. - (Соавт.: Д.Г. Узбекова).
84. Сравнительная оценка эффективности апи- и фитотерапии мерказолилового гипотиреоз // Парентеральное и энтеральное питание: тез. Х Междунар. конгр. - М., 2006. - С. 84 (№63). - (Соавт.: В.А. Киселева).
85. Сравнительная экспериментальная оценка актопротекторного эффекта препаратов из биомасс клеточных культур растений семейства аралиевых // Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения в современной медицине: материалы 6-й Междунар. науч. конф. - Черноголовка, 2006. - С. 217-221. - (Соавт.: Л.Г. Хвойницкая).
86. Экспериментальный анализ антиатерогенных свойств препаратов из биомассы растений семейства аралиевых // Парентеральное и энтеральное питание: тез. Х Междунар. конгр. - М., 2006. - С. 85 (№64). - (Соавт.: В.И. Шутов, О.В. Колобаева).
87. Сравнительная оценка антиоксидантного действия препаратов из биомасс растений семейства аралиевых как составляющей их гепатопротекторного эффекта // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2007. - Т. XVII, №1. - С. 92 (№338). - (Прил. №29 к журн.: Материалы Двенадцатой Рос. конф. Гепатология сегодня).
88. Сравнительный анализ актопротекторного эффекта препаратов из биомасс фитоадаптогенов в условиях плавательного теста // Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения: материалы 11-й Респ. науч.- практ. конф. с Междунар. участием, посвящ. 85-летию Роспотребнадзора и 45-летию медико-профилактического ф-та РязГМУ / под ред. засл. работника высш. шк. РФ, проф. В.А. Кирюшина. - Рязань, 2007. - С. 235-237.
89. Фитотерапевтическая коррекция метаболических нарушений печени при экспериментальной гипертироксинемии // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2007. - Т. XVII, №1. - С. 92 (№339). - (Прил. №29 к журн.: Материалы Двенадцатой Рос. конф. Гепатология сегодня).
90. Массаметрический анализ динамики половых органов у лабораторных животных в посткастрационном периоде на фоне введения препаратов из биомассы фитоадаптогенов // Парентеральное и энтеральное питание: тез. ХI Междунар. конгр. - М., 2007. - С. 67-68 (№58). - (Соавт.: В.И. Шутов).
91. Влияние препаратов из биомасс растений семейства аралиевых на парметры физической работоспособности лабораторных животных в условиях экспериментального гипотиреоза // Парентеральное и энтеральное питание: тез. ХI Междунар. конгр. - М., 2007. - С. 71-72 (№62).
92. Комплексный биохимический анализ влияния препарата из биомассы клеточной культуры полисциаса папоротниколистного на течение аллоксанового диабета. - Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И.П. Павлова. - 2008. - № 1. - С. 118-123.
93. А.Н.Рябков. Комплексный биохимический анализ сравнительной выраженности гепатопротекторного эффекта препаратов из биомасс клеточных культур фитоадаптогенов семейства аралиевых // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2008. - Т. XVIII, №1. - С. 84 (№ 307). - (Прил. №39 к журн.: Материалы Тринадцатой Рос. конф. Гепатология сегодня).
94. Фитотерапевтическая коррекция нарушений активности некоторых ферментов печени при интоксикации гербецидом утнур // Рос. журн. Гастроэнтерологии, Гепатологии и Колопроктологии. - 2008. - Т. XVIII, №1. - С. 84 (№ 308). - (Прил. №39 к журн.: Материалы Тринадцатой Рос. конф. Гепатология сегодня). - (Соавт.: А.А.Никифоров).
95. Сравнительная экспериментальная оценка актопротекторного эффекта препаратов из биомасс клеточных культур полисциаса папоротниколистного и женьшеня в условиях плавательного теста. - Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И.П. Павлова. - 2008. - №2. - С. 80-84.
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по биологии