Geum.ru
   Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии  

На правах рукописи

Корнилова Алена Владимировна

Физиологическое состояние желудка собак при

толстокишечной непроходимости и ее устранении

03.03.01 Ц физиология

06.02.01 Ц диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Благовещенск - 2012

Работа выполнена ФГБОУ ВПО Дальневосточный государственный аграрный университет

Научные руководители: кандидат ветеринарных наук, доцент

  Набока Людмила Анатольевна

  доктор ветеринарных наук, доцент

  Чубин Алексей Николаевич

Официальные оппоненты:

Вертипрахов Владимир Георгиевич

доктор биологических наук, профессор кафедры физиологии, анатомии и валеологии Забайкальского государственного гуманитарно-педагогического университета им. Чернышевского

Труш Наталья Вдадимировна

доктор биологических наук, профессор, зав. кафедрой морфологии и патологии животных Дальневосточного государственного аграрного университета

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится л 23 мая 2012 г. в 900 часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.027.04 при ФГБОУ ВПО Дальневосточном государственном университете в институте ветеринарной медицины и зоотехнии в аудитории 14 по адресу: 675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86, телефон (факс): (416-2) 52-62-80.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО Дальневосточный государственный аграрный университет.

Автореферат разослан л ___________2012г.

Ученый секретарь

диссертационного совета                                                Землянская Н.И.

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. На современном этапе развития ветеринарной медицины кишечная непроходимость (КН) остается одной из трудноразрешимых проблем (Лукьяновский В.А., 1991; Гринев Г.И., 1997; Гурьянов А.М., 1997; Стекольников А.А., 2005).

Большое количество научных работ посвящено изучению патогенеза кишечной непроходимости. Основные его моменты связаны с застоем кишечного содержимого, скоплением газов и жидкого содержимого кишечника выше места обтурации, перерастяжением вышележащих отделов кишечной трубки. Одновременно с указанными местными изменениями низкообтурационная толстокишечная непроходимость сопровождается гемодинамическими нарушениями, обезвоживанием, расстройством деятельности нервной и сердечно-сосудистой систем, а также выраженной интоксикацией (Норберг-Чарквиани А.Е., 1969; Белобородова Н.В., 1992; Шульпекова Ю.О., 2008). Выраженность этих процессов изучена в зависимости от вида и уровня кишечной непроходимости. Однако при всем многообразии исследований, практически нет работ о влиянии низкой обтурационной непроходимости на секреторную функцию желудка.

В настоящее время актуальным вопросом остается поиск не дорогих лекарственных веществ, обладающих широким спектром действия. В связи с этим большое внимание уделяют применению электроактивированных растворов, в частности раствору активного гипохлорита натрия (РАГН). Данный раствор является сильным окислителем за счет содержания в молекуле легко отщепляемого атомного кислорода, что обеспечивает его бактерицидные, противовирусные, противогрибковые, иммуномоделирующие свойства (Бердников П.П., Михеева С.Н., Набока Л.А., Диких И.П., 1999-2004).

На основе соединения гетероаромотических фенолов разработан и внедрен в клиническую практику лекарственный препарат мексидол. Механизм действия мексидола связан с его специфическим влиянием на энергетический обмен (Лукьянова Л.Д., 2000; Новиков В.Е., Катунина Н.П., 2002). Ингибируя свободнорадикальное окисление липидов биомембран, мексидол сохраняет их упорядоченность (Воронина Т.А., 2001; Гусев В.А., 2000; Девяткина Т.А., Луценко Р.В., Важничая Е.М., 1999).

Цель исследования. Изучить морфофункциональную реакцию желудка собак на раздельное и сочетанное воздействие раствора гипохлорита натрия и мексидола при экспериментально созданной низкой обтурационной толстокишечной непроходимости (НОТН).

Задачи исследования:

  1. Исследовать секреторную функцию желудка собак в норме на раздельное и сочетанное применение РАГН и мексидола.
  2. Изучить морфологию и функцию желудка собак с различной длительностью НОТН.
  3. Изучить раздельное и сочетанное воздействие испытуемых факторов на морфологию и функцию желудка после устранения НОТН.

Научная новизна исследования.

  1. Разработана модель экспериментальной низкой обтурационной толстокишечной непроходимости у собак (разрешение о выдаче патента на изобретение №2011108826/14(012740).
  2. Впервые изучена морфофункциональная характеристика желудка собак с низкой обтурационной толстокишечной непроходимостью.
  3. Впервые на экспериментальном материале разработан и оценен терапевтический эффект сочетанного воздействия раствора гипохлорита натрия и мексидола.

Теоретическая значимость и практическая ценность работы. Полученные экспериментальные материалы расширяют представление об изменениях в слизистой оболочке желудка при НОТН. Положительные экспериментальные результаты применения РАГН и мексидола расширяют и углубляют наши представления о механизме каждого из исследованных факторов на норму и патологию, что позволяет разработать комплекс лечебных мероприятий с их применением.

Основные положения, выносимые на защиту

  1. Сравнительная оценка воздействия РАГН и мексидола отдельно и в сочетании на секреторную функцию желудка собак в норме.
  2. Сравнительная оценка морфофункциональных показателей желудка при НОТН.
  3. Сравнительная оценка воздействия РАГН и мексидола на морфологию и функцию желудка собак после устранения НОТН.

Внедрение результатов исследования. Полученные материалы используются в научной работе кафедр: физиологии и незаразных болезней ФГБОУ ВПО Дальневосточный государственный аграрный университет; морфологии и патологии животных ФГБОУ ВПО Дальневосточный государственный аграрный университет.

Апробация работы. Основные положения и материалы исследования доложены и обсуждены на научных конференциях Института ветеринарной медицины и зоотехнии ДальГАУ (Благовещенск, 2011 г.), на XII региональной научно-практической конференции с межрегиональным и международным участием Молодежь XXI века: шаг в будущее (Благовещенск, 2011 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 5 в рецензируемых научных журналах рекомендуемых ВАК Минобрнауки России.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах (без приложений). Содержит введение, обзор литературы, материалы, методы и результаты исследований, обсуждение результатов, выводы и рекомендации для практического применения. Список используемой литературы включает 205 источников, в том числе 29 источников иностранных авторов. Работа иллюстрирована 28 таблицами и 48 рисунками.

2 МАТЕРИАЛ, УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Условия выполнения исследований. Исследования выпоняли в лабораториях кафедр - физиологии и незаразных болезней, морфологии и патологии животных института ветеринарной медицины и зоотехнии Дальневосточного государственного аграрного университета.

Объектами исследования были беспородные собаки массой 12-15 кг. Животных содержали в благоустроенном виварии института, оборудованном специальными секциями для каждого вида животных.

У двенадцати собак хирургически создавали изолированный желудочек по методу Павлова И.П., с сохраненной нервной связью с пищевым центром. Это позволяло во время экспериментов получать чистый, не контактировавший с кормом желудочный сок.

Первым этапом эксперимента явилось исследование раздельного и сочетанного применения испытуемых факторов на секреторную функцию желудка у животных без патологии. Терапевтический эффект гипохлорита натрия и мексидола при их раздельном и сочетанном применении изучали на собаках у которых хирургически создавали низкую обтурационную толстокишечную непроходимость [1].

По истечении 7 суток кишечную непроходимость устраняли не хирургическим методом, животных разделили на четыре группы по три собаки в каждой. Первая группа, где животных не подвергали лечению, служила контролем. Остальным группам в течение 6 дней выполняли следующую терапию: опыт-1 - ректально вводили РАГН; опыт-2 - внутримышечно инъецировали мексидол; опыт-3 - ректально вводили гипохлорит натрия и внутримышечно инъецировали мексидол.

Для патоморфологических исследований на 2, 4, 6 сутки от начала лечения у эвтаназированых животных брали фундальный отдел желудка.

Физиологические методы. Для изучения влияния испытуемых факторов на секреторную функцию желудочных желез, были выполнены 3 серии опытов на здоровых фистулированных собаках. Схема исследования во всех сериях опытов была идентична. После 18 часов голодания на животных воздействовали тем или иным испытуемым фактором, затем фиксировали в станках и в течение четырех часов: первого часа до (фон) и трех часов после кормления собирали желудочный сок. В нем определяли: объем, концентрацию свободной соляной кислоты, общего количества кислот и пепсина. Суммарную секрецию этих компонентов определяли умножением их концентрации на объем собранного сока за каждый час опыта.

В контрольной серии опытов собакам ректально вводили теплую (38С) дистиллированную воду (10 мл/кг) и внутримышечно инъецировали воду для инъекций. Собакам первой опытной группы ректально вводили раствор гипохлорита натрия (38С) в дозе 10мл/кг, концентрацией 500мг/л. Во второй опытной группе собакам, внутримышечно инъецировали мексидол в дозе 20мг/кг. В третьей серии опытов животным одновременно вводили ректально РАГН и внутримышечно инъецировали мексидол в той же дозе и концентрации, что и в предыдущих сериях.

Биохимические методы исследования. Свободную соляную кислоту и общую кислотность желудочного сока определяли титрометрически (мэкв/л), пептическую активность - по методу Пятницкого (1965), выражали в ед.П..

Гистологические методы. Гистологическое исследование экспериментального материала заключалось в изучении слизистой фундального отдела желудка собак: при воздействии испытуемыми факторами производили с помощью окуляр-микрометра МОВ-1-15 измерение толщины слизистой оболочки, определяли степень десквамации эпителия, объемную долю желез, относительное количество лимфоцитов, плазматических и тучных клеток, нейтрофилов, главных и обкладочных клеток желез.

Для выявления степени кровенаполнения сосудов мышечного слоя желудка и фрагментации клеточных структур использовали окулярную измерительную сетку для стереоскопических измерений со 100 и 25 равноудаленными точками нулевой толщины (Автандилов Г.Г., 1984)

Математические методы исследования. Статистическую обработку экспериментального материала осуществляли методом Ойвина И.А.

Обработку цифрового материала морфологических исследований осуществляли методом вариационной статистики, с использованием стандартной компьютерной программы Microsoft Excel.

Схема исследований представлена в таблице 1 и на рисунке 1

Таблица 1 - Распределение животных (собак) в эксперименте

Испытуемые факторы

Физиологические исследования

Количество животных

Интактный контроль

3

Опыт 1 (ректальное введение раствора гипохлорита натрия)

3

Опыт 2 (в/м инъекции мексидола)

3

Опыт 3(сочетанное воздействие испытуемых факторов)

3

С моделью кишечной непроходимости

3

Воздействие РАГН после устранения НОТН

3

Воздействие мексидолом после устранения НОТН

3

Сочетанное воздействие факторов после устранения НОТН

3

Морфологические исследования

Животные с моделью НОТН, не получавшие лечения

9

Опыт 1(ректальное введение РАГН после устранения НОТН)

9

Опыт 2 (в/м инъекции мексидола, после устранения НОТН)

9

Опыт 3 (сочетанное воздействие факторов, после устранения НОТН)

9

Итого

48

Рисунок 2 - Схема опыта

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

    1. Влияние внутримышечного введения мексидола на функцию желудочных желез

Перед фиксацией в станке голодным фистулированным собакам, один раз в сутки, инъецировали внутримышечно мексидол в дозе 20 мг/кг. Затем, собирали часовые порции желудочного сока, в течение одного часа до кормления (фон) и трех часов после него. О секреторной активности судили по количеству собранного сока и по секреции его основных компонентов.

Анализ результатов показал (табл.2), что после введения мексидола объем выделяемого сока за четыре часа наблюдения у животных уменьшался в 2 раза.

Концентрация соляной кислоты превышала показатели контрольной группы в 1,6 раза. После кормления, данный показатель уменьшался, и к концу наблюдения разница составила 2%.

Концентрация общего количества кислот после введения мексидола, в первой часовой порции (фон) была на 11% выше контрольной. После кормления, данный показатель в опытной группе был меньше контрольного в первый час на 10%, во второй на 17% и в третий час на 12% соответственно.

Таблица 2 - Динамика секреторной функции желудочных желез у собак при введении мексидола, (Mm)

Часы после кормления

фон

1

2

3

Объем сока,мл

Контроль

1,12,21

7,81,54

5,02,37

3,81,42

мексидол

2,123,15

2,63,34

2,01,35

1,83,12

Опыт к контролю в %

192***

33***

40***

47***

Концентрация свободной соляной кислоты, мэкв/л

Контроль

16,83,50

82,82,61

86,53,32

72,23,10

мексидол

26,80,14

78,40,69

86,60,41

71,22,11

Опыт к контролю в %

159***

95**

100

98

Общая кислотность, мэкв/л

Контроль

78,92,51

148,36,50

132,58,31

112,66,42

мексидол

88,03,29

134,84,15

110,45,05

99,23,98

Опыт к контролю в %

111*

90**

83***

88***

Пептическая активность, ед.П.

Контроль

67,44,70

58,36,71

66,95,13

69,45,91

мексидол

69,23,64

62,42,49

60,13,54

58,32,60

Опыт к контролю в %

102

107

89***

84***

Примечание *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001

Активность пепсина в соке голодных собак и после их кормления возрастала незначительно на 2 и 7 процентов соответственно. В последующие часы наблюдений после кормления, в опытной группе отмечалось снижение активности пепсина на 11% и на 16% соответственно.

Из приведенного анализа следует, что мексидол угнетает секрецию желудочного сока, а также снижает секреторную активность главных и париетальных клеток.

3.2 Влияние ректального введения раствора гипохлорита натрия на функцию желудочных желез

В данной серии опытов животным ректально вводили теплый (38С) раствор активного гипохлорита натрия в дозе 10 мл/кг, концентрацией 500 мг/л. Также как и в предыдущей серии опытов, в часовых порциях сока определяли объем и секрецию его основных компонентов.

В среднем количество секретируемого сока за четыре часа наблюдений превышал контрольные показатели на 18% (табл.3).

Таблица 3 - Динамика секреторной функции желудочных желез у собак при ректальном введении раствора гипохлорита натрия, (Mm)

Часы после кормления

фон

1

2

3

Объем сока,мл

Контроль

1,20,21

7,81,54

5,00,37

3,90,42

РАГН

1,10,45

9,62,43

5,91,67

4,21,15

Опыт к контролю в %

92

123**

118**

107

Концентрация свободной соляной кислоты, мэкв/л

Контроль

16,83,50

82,82,61

86,53,32

72,23,10

РАГН

17,02,61

96,41,32

95,92,11

74,22,12

Опыт к контролю в %

101

116***

111

102

Общая кислотность, мэкв/л

Контроль

78,92,51

148,36,50

132,58,31

112,66,42

РАГН

79,81,23

165,82,34

137,53,12

114,32,50

Опыт к контролю в %

102

111**

103

101

Пептическая активность, ед.П.

Контроль

67,44,70

58,36,71

66,95,13

69,45,91

РАГН

71,51,77

64,82,11

72,91,53

70,91,24

Опыт к контролю в %

106

111**

109*

102

Примечание *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001

Максимальная интенсивность секреции свободной HCL наблюдалась в фоновой порции и в первые два часа пищевого возбуждения, разница с контролем в первый и второй час после кормления составляла 16% и 11% соответственно.

Концентрация общего количества кислот в первой часовой порции была

близка к контрольному показателю и незначительно увеличивалась в первый час после кормления на 11%.

Исследование секреторной реакции главных клеток показало, что активность пепсина была выше контрольных показателей во всех часовых порциях сока. У голодных собак разница с контролем составляла 6%, в первый час после кормления - 11%, во второй и третий 9 и 2 процента соответственно.

Таким образом, ректальное введение гипохлорита натрия вызывает незначительное возбуждение желудочных желез, секреция возрастает не только за счет увеличения объема сока, но и за счет повышения концентрации в нем основных компонентов.

3.3 Секреторная функция желез при сочетанном воздействии РАГН и мексидола

Следующим этапом эксперимента было испытание одновременного воздействия раствора гипохлорита натрия и мексидола секреторную функцию желудка.

Перед фиксацией в станке собакам ректально вводили РАГН и внутримышечно инъецировали мексидол в той же дозе и концентрации, что и в предыдущих сериях. Аналогично предыдущим сериям опытов, в каждой часовой порции сока измеряли его объем и концентрацию в нем основных компонентов. Результаты исследований представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Динамика секреторной функции желудочных желез у собак при сочетанном воздействии РАГН и мексидола, (Мm)

Часы после кормления

фон

1

2

3

Объем сока,мл

Контроль

1,20,21

7,81,30

5,00,41

3,90,21

РАГН+мексидол

1,90,32

3,60,22

3,710,11

2,90,04

Опыт к контролю в %

158***

28***

74***

74***

Концентрация свободной соляной кислоты, мэкв/л

Контроль

16,83,50

82,82,61

86,53,32

72,23,10

РАГН+мексидол

24,31,32

80,82,12

84,83,51

72,41,72

Опыт к контролю в %

144***

97

98

99

Общая кислотность, мэкв/л

Контроль

78,92,51

148,36,50

132,58,31

112,66,42

РАГН+мексидол

86,04,25

144,65,66

136.74,44

112,82.46

Опыт к контролю в %

108*

97

103

100

Пептическая активность, ед.П.

Контроль

67,44,70

58,36,71

66,95,13

69,45,91

РАГН+мексидол

69,22,72

53,81,94

62,21,56

64,42,76

Опыт к контролю в %

102

92*

92*

92*

Примечание *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001

Объем выделяемого сока у голодных собак после введения испытуемых препаратов на 58% превышал показатели контроля (табл.4). В часы после кормления количество сока выделялось в 2,8 раза меньше.

У голодных собак после введения РАГН и мексидола концентрация свободной соляной кислоты была выше контрольной на 44%. В часы после кормления разница между группами не превышала 3%.

Общая кислотность, после введения РАГН и мексидола, в первой часовой порции была на 8% выше контрольной. После кормления данный показатель в опытной группе стал меньше контрольного в первый час на 3%, на второй час на 3% больше, а в третий час не имел отличия.

Концентрация пепсина в соке голодных собак опытной группы незначительно возрастала, а в последующие часы после кормления снижалась на 8% по сравнению с контрольными показателями.

Из приведенного анализа следует, что сочетание раствора гипохлорита натрия и мексидола до кормления стимулирует секреторную функцию желудочных желез, а в период пищевого возбуждения снижает их выделительную активность.

3.4 Влияние низкой обтурационной толстокишечной непроходимости на секреторную функцию желудочных желез

Для изучения воздействия низкой обтурационной толстокишечной непроходимости у 12 фистулированных животных хирургически была смоделирована кишечная непроходимость. Контролем служили показатели здоровых собак. Аналогично предыдущим сериям, в каждой часовой порции сока измеряли объем и концентрацию в нем основных компонентов. Результаты исследований представлены в таблице 5.

Объем выделяемого сока за четыре часа опыта у здоровых животных в 3,8 раза больше чем в группе с НОТН.

У собак при НОТН концентрация свободной НСl выше контрольной на 11%, однако, в первый час после приема пищи она уменьшалась на 48%, во - 2-ой на 75% и в 3-ий час на 82% соответственно.

Концентрация общего количества кислот при низкой обтурационной кишечной непроходимости, в первой часовой порции (фон) была на 41% ниже контрольных данных. В течение первого и второго часа после кормления этот показатель имел тенденцию к уменьшению, а к четвертому часу достоверно (Р<0,001) снижался на 58%.

Концентрация пепсина в соке голодных собак с НОТН была ниже контрольных показателей на16%, в первый час после кормления - на 9, а во второй и третий часы - на 26 и 21% соответственно.

Наиболее полную характеристику секреторной функции желудочных желез дает показатель суммарной секреции основных компонентов в объеме сока собранного за время наблюдения.

Результаты расчета суммарной секреции компонентов желудочного сока представлены на рисунке 2.

Таблица 5 - Динамика секреторной функции желудочных желез у собак с моделью низкой обтурационной толстокишечной непроходимостью, (Мm)

Часы после кормления

фон

1

2

3

Объем сока,мл

Контроль

1,20,21

7,81,30

5,00,41

3,90,21

опыт

0,90,32

1,60.41

1,92,12

0,90,14

Опыт к контролю в %

75***

20***

38***

23***

Концентрация свободной соляной кислоты, мэкв/л

Контроль

16,83,50

82,82,61

86,53,32

72,23,10

опыт

18,80,14

43,20,69

21,80,41

12,92,11

Опыт к контролю в %

111*

52***

25***

18***

Общая кислотность, мэкв/л

Контроль

78,92,51

148,36,50

132,58,31

112,66,42

опыт

46,63,39

128,44,15

109,65,05

48,33,98

Опыт к контролю в %

59***

86***

82***

42***

Пептическая активность, ед.П.

Контроль

67,44,70

58,36,71

66,95,13

69,45,91

опыт

56,93,64

60,82,49

51,23,54

46,12,60

Опыт к контролю в %

84***

91

74***

79***

Примечание *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001

Полученные результаты показали (рис.2), что НОТН угнетает секреторную функцию желудка, концентрация свободной соляной кислоты уменьшалась на 98%, секреция пепсина на 78%, общего количества на 72 % соответственно.

Рисунок 2 - Суммарная секреция желудочного сока и его основных компонентов за четыре часа опытов при низкой обтурационной толстокишечной нерпоходимости..

Примечание: *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001

3.5 Функция желудочных желез собак после устранения низкой

обтурационной толстокишечной непроходимости при воздействии РАГН и мексидола раздельно и в сочетании в течение 2 суток

Целью данной серии опытов было изучение секреторной деятельности желудочных желез после устранения кишечной непроходимости с применением РАГН и мексидола раздельно и в сочетании.

Данную серию выполняли на фистулированных собаках, по методу

И.П. Павлова, с моделью низкой обтурационной непроходимости. НОТН устраняли на седьмые сутки и воздействовали испытуемым фактором. На фоне интактного контроля было сформировано четыре группы животных: контроль (К) - без лечения; опыт 1 (О1) - вводили РАГН (в дозе 10мг/кг, в концентрации 500мг/л); опыт 2 (О2) - инъецировали мексидол (в дозе 20 мг/кг); опыт 3 (О3) - где, животным применяли сочетанное воздействие испытуемых факторов. В каждой часовой порции сока измеряли объем и концентрацию его основных компонентов.

Изучение суммарной секреции сока (рис.3) при введении мексидола в течение двух суток показало, что его объем был меньше интактного контроля на 47%, а при отсутствии лечения эта разница составляла 60%. Концентрация HCL, общих кислот и пепсина была выше в сравнении с группой, не получавшей лечения на 11, 17 и 11 процентов соответственно.

При ректальном введении РАГН объем сока в сравнении с нелеченным контролем был больше в 1,3 раза, концентрация HCL увеличилась на 6%, секреция общих кислот на 13% и пепсина на 10%.

Рисунок 3 - Суммарная секреция желудочного сока и его основных компонентов за четыре часа опыта при применении: 1-интактные животные, 2- контроль, 3-мексидол, 4-РАГН, 5-РАГН+мексидол.

Примечание: *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001

Сочетанное применение испытуемых препаратов увеличило объем секретируемого сока в сравнении с группой, не получавшей лечения, на 12%, свободной HCL на 6%, общих кислот и пепсина на 15 и 12 процентов соответственно.

3.6 Функция желудочных желез собак после устранения низкой обтурационной толстокишечной непроходимости при воздействии РАГН и мексидола раздельно и в сочетании в течение 4 суток

После 4 дней лечения, как и в предыдущих сериях, у собак в каждой часовой порции сока измеряли его объем и концентрацию в нем основных компонентов.

Расчет суммарной секреции сока показал, что применение мексидола в течение четырех дней; увеличивало секрецию желудочного сока в сравнении с нелеченым контролем на 27%, концентрацию свободной соляной кислоты и общих кислот на 30% и пепсина на 25% (рис.4).

Ректальное введение гипохлорита натрия стимулировало секрецию желудочных желез, повышая количество секретируемого сока на 31% в сравнении с показателями животных без лечения. Концентрация свободной соляной кислоты была больше нелеченного контроля на 31%, общего количества кислот на 37% и пепсина на 29%.

Расчет суммарной секреции сока и его основных компонентов, показал, что сочетанное воздействие РАГН и мексидола обладает наиболее стимулирующим действием на секрецию желудочных желез. Разница в объеме сока, в сравнении с интактными показателями, составляла 8%; свободной соляной кислоты 18%; общих кислот 12% и пепсина 8%.

Рисунок 4 - Суммарная секреция желудочного сока и его основных компонентов за четыре часа опыта при применении: 1-интактные животные, 2 - контроль, 3-мексидол, 4-РАГН, 5-РАГН+мексидол.

Примечание: *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001

Анализ результатов показал, что наиболее положительная динамика, наблюдалась в группе, где применяли сочетанное лечение. Увеличивается не только объем сока, но концентрация основных компонентов в нем.

3.7 Функция желудочных желез собак после устранения низкой обтурационной толстокишечной непроходимости при воздействии РАГН и мексидола раздельно и в сочетании в течение 6 суток

После 6 дней лечения, как и в предыдущих сериях у животных собирали порции сока, измеряли его объем и концентрацию основных компонентов в нем.

Расчет суммарной секреции желудочного сока и его основных компонентов показал, что ежедневное применение мексидола в течение 6 суток, по сравнению с другими опытными группами, незначительно стимулирует желудочную секрецию. Разница в объеме секретируемого сока, с группой, не получавшей лечение, составляла 9%. Концентрация основных компонентов в секретируемом соке также отличалась незначительно: свободной соляной кислоты на 13%, общего количества кислот на 8% и пепсина на 6% соответственно.

Ректальное введение раствора гипохлорита натрия в течение 6 дней, максимально стимулировало секреторную функцию желудочных желез. Объем секретируемого сока превышал показатели интактного контроля на 11%.

Суммарная секреция свободной соляной кислоты увеличивалась по отношению к интактным показателям на 9%, превышая при этом значения контроля на 69%.

Общая кислотность имела самые высокие показатели, и превышала контроль на 59%, а показатели интактной группы на 23%.

Пептическая активность, в сравнении с интактными показателями, возрастала на 11%, а разница с контролем составляла 41%.

Рисунок 5 - Суммарная секреция желудочного сока и его основных компонентов за четыре часа опыта при применении: 1-интактные животные, 2-нелеченный контроль, 3-мексидол, 4-РАГН, 5-РАГН+мексидол.

Примечание: *Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001

Сочетание испытуемых факторов увеличивало секрецию желудочного сока в сравнении с нелеченным контролем на 29%. Концентрация свободной HCL и общее количество кислот возрастало на 56 и 33 процента соответственно. Расчет суммарной секреции пепсина, показал, что данный показатель практически не отличается от интактного контроля, превышая нелеченный контроль на 29%.

3.8 Влияние экспериментально созданной низкой обтурационной толстокишечной непроходимости на морфофункциональное состояние фундального отдела стенки желудка

Для того чтобы изучить как меняется морфологическая структура стенки желудка у собак с низкообтурационной толстокишечной непроходимостью, нами были изготовлены гистологические препараты из фундальной части и выполнены морфометрические исследования. Результаты отображены в таблице 6.

Сравнение морфологических показателей интактной группы и группы с моделью кишечной непроходимости показало, что в опытной группе в течение 2 дней толщина слизистой, кровенаполнение сосудов, клеточный состав желудочных желез практически не отличались от контрольных показателей. В подслизистой оболочке желудка наблюдалась слабовыраженная инфильтрация, объемная доля нейтрофилов увеличилась на 9%.

У всех животных опытной группы с длительностью НОТН 4 суток снижалась высота слизистой на 3%, наблюдалось увеличение индекса десквамации, при этом снижалась объемная доля желудочных желез на 10%, с уменьшением количества париетальных на 6 и главных клеток на 7% соответственно.

Таблица 6 - Динамика морфофункциональных показателей фундального отдела желудка собак с различной длительностью низкообтурационной толстокишечной непроходимости, (Мm)

Показатели

Интактный

контроль

2-сутки

4-сутки

6-сутки

Толщина слизистой оболочки, мкм

736,7316,5

731,713,05

Р>0,05

715,917,08

Р<0,05

708,718,26

Р<0,05

Кровенаполнение сосудов, %

15,51,79

15,51,97

Р>0,05

16,31,95

Р<0,01

22,42,07

Р<0,01

Индекс десквамации эпителия, %

0,10,02

0,60,72

Р>0,05

1,60,65

Р>0,05

4,20,54

Р<0,05

Железы (объемная доля, %)

68,94,07

67,23,83

Р>0,05

58,52,36

Р<0,05

54,02,19

Р<0,05

Объемная доля клеток, %

- главные

47,05,85

46,13,56

Р>0,05

40,02,03

Р<0,01

31,03,24

Р<0,01

- париетальные

28,03,23

27,52,50

Р>0,01

22,22,09

Р<0,01

18,63,24

Р>0,01

- добавочные

17,02,21

18,41,20

Р>0,05

24,73,11

Р<0,05

28,02,14

Р<0,05

- лимфоциты

4,30,23

4,00,49

Р>0,05

9,30,53

Р<0,05

16,61,66

Р<0,01

плазматические

8,60,65

9,41,17

Р>0,05

18,01,26

Р<0,05

28,23,81

Р<0,05

- нейтрофилы

0,10,02

0,91,09

Р>0,05

6,91,46

Р<0,05

9,80,66

Р<0,05

- тучные

1,20,27

1,80,53

Р>0,05

3,10,92

Р<0,05

4,40,75

Р<0,01

Р - достоверность показателей к интактному контролю

Сравнивая морфологические показатели животных с НОТН длительностью 6 суток отмечено, что толщина слизистой оболочки желудка уменьшилась на 4%. Наблюдалось выраженное кровенаполнение сосудов, достоверно (Р<0,05) увеличивался индекс десквамации на 4%. Выявлено также уменьшение объемной доли желез желудка на 15%, причем количество добавочных клеток возросло на 11%. В воспалительном инфильтрате отмечено достоверное (Р<0,05) увеличение объемной доли лимфоцитов, тучных и плазматических клеток.

Таким образом, при НОТН длительностью 6-суток у животных развивается поверхностный гастрит с признаками атрофии.

3.9 Влияние раздельного и сочетанного воздействия РАГН и

мексидола в течение двух суток на морфофункциональное состояние фундального отдела желудка собак после устранения низкой обтурационной толстокишечной непроходимости

Наблюдая за динамикой изменения секреторной активности желез после устранения НОТН с применением различных методов лечения, нас интересовали изменения морфологических показателей стенки желудка. Для этого были выполнены морфометрические исследования с оценкой гистофункционального состояния фундального отдела желудка собак (табл.7).

Таблица 7 - Морфологические показатели фундального отдела желудка собак после устранения низкообтурационной толстокишечной непроходимости, с применением РАГН, мексидола и их сочетании в течение двух суток, (Мm)

Показатели

Интактные животные

Контроль

без лечения

РАГН

Мексидол

Мексидол+

РАГН

Толщина

слизистой оболочки, мкм

736,7316,5

690,816,78

Р1>0,05

698,914,81

Р1>0,05; Р2>0,01

701,728,65

Р1>0,05; Р2>0,01

705,825,66

Р1>0,05;

Р2>0,01

Кровенаполнение сосудов, %

15,51,79

35,53,07

Р1>0,05

34,32,95

Р1>0,05; Р2>0,01

32,44,07

Р1>0,05; Р2>0,05

34,22,08

Р1>0,05; Р2>0,01

Индекс десквамации эпителия, %

0,10,02

7,61,07

Р1>0,05

6,60,45

Р1>0,05; Р2>0,01

6,20,54

Р1>0,05; Р2>0,01

6,11,39

Р1>0,05; Р2>0,05

Железы (объемная доля, %)

68,94,07

48,41,22

Р1>0,05

48,52,34

Р1>0,05; Р2>0,05

49,02,29

Р1>0,05; Р2>0,01

51,42,20

Р1>0,01; Р2>0.01

Объемная доля клеток, %

- главные

47,05,85

30,92,26

Р1>0,05

31,02,34

Р1<0,05; Р2>0,01

31,03,44

Р1>0,01; Р2>0,01

31,92,56

Р1>0,05; Р2>0,05

париетальные

28,03,23

13,62,66

Р1>0,01

14,22,19

Р1>0,01; Р2>0,01

15,63,34

Р1>0,01; Р2>0,01

14,92,86

Р1>0,01; Р2>0,01

- добавочные

17,02,21

34,63,84

Р1>0,05

33,73,00

Р1>0,01; Р2>0,01

34,03,12

Р1<0,05; Р2>0,01

33,92,76

Р1>0,01; Р2>0,01

- лимфоциты

4,30,23

26,92,52

Р1>0,05

16,30,43

Р1>0,05; Р2>0,05

18,82,16

Р1>0,01; Р2<0,01

14,91,32

Р1<0,05; Р2>0,01

плазматические

8,60,65

28,31,70

Р1>0,05

21,02,26

Р1<0,05; Р2>0,01

22,23,01

Р1>0,01; Р>20,01

18,31,74

Р1>0,01; Р2>0,01

-нейтрофилы

0,10,02

16,10,66

Р1>0,05

15,91,42

Р1>0,01; Р2>0,01

15,81,60

Р1>0,01; Р2<0,1

14,12,62

Р1>0,05; Р2>0,05

- тучные

1,20,27

5,80,55

Р1>0,05

5,10,96

Р1>0,05; Р2>0,05

5,40,65

Р1>0,01; Р2>0,01

5,40,57

Р1>0,01; Р2>0,01

Примечание: Р1 - достоверность показателей к интактному контролю; Р2 - достоверность показателей к контролю без лечения

Степень кровенаполнения сосудов и индекс десквамации эпителия достоверно уменьшались.

В сравнении с группой, не получавшей лечение, в группе с сочетанным применением испытуемых факторов на 3% увеличилась объемная доля желез.

Объемная доля париетальных клеток фундальных желез при применении мексидола увеличивалась на 2%, в сравнении с группой, не получавшей лечение.

При лечении РАГН количество лимфоцитов в сравнении с группой без лечения, уменьшалось на 10%, в группе с применением мексидола на 8%, а при их сочетании на 12% соответственно.

Количество плазматических клеток уменьшалось во всех опытных группах, однако максимально данный показатель был меньше в группе с сочетанным лечением. Разница с нелеченным контролем составляла 10%.

Таким образом, морфометрические данные свидетельствуют о том, что после устранения НОТН на 2-е сутки в опытных группах, получавших лечение, была отмечена незначительная положительная динамика.

3.10 Влияние раздельного и сочетанного воздействия РАГН и мексидола в течение четырех суток на морфофункциональное состояние фундального отдела желудка собак после устранения низкой обтурационной толстокишечной непроходимости

При наблюдении за динамикой изменений в стенке желудка, у собак после устранения НОТН, не получавших лечение, на 4 сутки сохранялись все признаки воспалительного процесса (табл.8).

Толщина слизистой оболочки желудка при применении мексидола и РАГН уменьшалась по сравнению с группой, не получавшей лечение. Было отмечено достоверное (Р2>0,01; Р2>0,05) уменьшение кровенаполнения сосудов.

После сочетанного лечения мексидолом и РАГН в течение четырех дней объемная доля желез была больше на 10%, чем в группе, где не применяли никакого воздействия.

Объемная доля обкладочных клеток в составе желез в большей степени увеличивалась после сочетанного введения РАГН и мексидола и достоверно (Р2>0,01) была больше чем в нелеченной группе.

В группе с сочетанным лечением, объемная доля лимфоцитов воспалительном инфильтрате достоверно (Р<0,05) была меньше, чем в группе без лечения в 2 раза. Объемная доля плазматических клеток в инфильтрате собственной пластинки желудка после введения мексидола, РАГН и их сочетанного воздействия достоверно (Р2>0,01) уменьшалось в сравнении с нелеченным контролем

Объемная доля нейтрофилов и тучных клеток в воспалительном инфильтрате в большей степени уменьшалось в группе с сочетанным лечением и была достоверно (Р2>0,05) меньше, чем в группе не получавшей лечения.

Таблица 8 - Морфологические показатели фундального отдела желудка собак после устранения низкообтурационной толстокишечной непроходимости, с применением РАГН, мексидола и их сочетании в течение четырех суток, (Мm)

Показатели

Интактные животные

Контроль

без лечения

РАГН

Мексидол

Мексидол+РАГН

Толщина

слизистой оболочки, мкм

736,7316,5

704,813,7

Р1>0,05

711,815,91

Р1>0,05; Р2>0,01

714,718,05

Р1>0,05; Р2>0,01

721,924,16

Р1>0,05; Р2>0,01

Кровенаполнение сосудов, %

15,51,79

28,52,57

Р1>0,05

27,42,75

Р1>0,05; Р2>0,01

21,61,12

Р1>0,05; Р2>0,05

23,21,04

Р1>0,05; Р2>0,01

Индекс десквамации эпителия, %

0,10,02

4,61,07

Р1>0,05

4,20,51

Р1>0,05; Р2>0,01

3,20,64

Р1>0,05; Р2>0,01

2,11,37

Р1>0,05; Р2>0,05

Железы (объемная доля, %)

68,94,07

49,61,02

Р1>0,05

52,52,34

Р1>0,05; Р2>0,05

51,02,90

Р1<0,05; Р2>0,01

59,42,20

Р1>0,01; Р2>0.01

Объемная доля клеток, %

- главные

47,05,85

34,72,56

Р1>0,05

38,02,34

Р1<0,05; Р2>0,01

39,03,47

Р1>0,01; Р2>0,01

42,72,16

Р1>0,05; Р2>0,05

- париетальные

28,03,23

15,62,66

Р1>0,01

17,81,29

Р1>0,01; Р2>0,01

16,62,24

Р1>0,01; Р2>0,01

19,91,61

Р1>0,01; Р2>0,01

- добавочные

17,02,21

28,62,23

Р1>0,05

23,92,24

Р1>0,01; Р2>0,01

26,03,56

Р1<0,05; Р2>0,01

22,91,62

Р1>0,01; Р2>0,01

- лимфоциты

4,30,23

16,92,12

Р1>0,05

10,30,43

Р1>0,05; Р2>0,05

11,82,10

Р1>0,01; Р2<0,01

7,91,21

Р1<0,05; Р2>0,01

плазматические

8,60,65

18,31,54

Р1>0,05

13,52,60

Р1<0,05; Р2>0,01

13,23,11

Р1>0,01; Р>20,01

11,81,75

Р1>0,01; Р2>0,01

- нейтрофилы

0,10,02

11,10,61

Р1>0,05

9,92,12

Р1>0,01; Р2>0,01

10,11,01

Р1>0,01; Р2<0,1

8,11,52

Р1>0,05; Р2>0,05

- тучные

1,20,27

4,40,51

Р1>0,05

3,10,46

Р1>0,05; Р2>0,05

2,40,45

Р1>0,01; Р2>0,01

2,40,57

Р1>0,01; Р2>0,01

Примечание: Р1 - достоверность показателей к интактному контролю; Р2 - достоверность показателей к контролю без лечения

Анализ результатов показал, что наиболее положительная динамика морфофункциональных показателей наблюдается в группе с сочетанным применением РАГН и мексидола.

3.11 Влияние раздельного и сочетанного воздействия РАГН и мексидола в течение шести суток на морфофункциональное состояние фундального отдела желудка собак после устранения низкой обтурационной толстокишечной непроходимости

При длительности лечения 6 суток, в группе, где применяли мексидол, индекс десквамации эпителия был меньше на 10% в сравнении с группой без лечения, но был выше, чем в группе интактного контроля в 2 раза. При сочетанном применении мексидола и РАГН индекс десквамации в 3 раза был меньше, чем в группе без лечения (табл.9).

Объемная доля желез после всех вариантов лечения достоверно (Р2>0,01) увеличивалась по сравнению с группой, не получавшей лечения, после применения мексидола и РАГН на 5%, а при их сочетанном введении на 12%.

В отношении объемной доли обкладочных клеток анализ результатов показал, что при сочетанном воздействии испытуемых факторов разница с интактным контролем составляла 2%.

В опытной группе с сочетанным лечением объемная доля главных клеток практически не отличалась от показателей интактной группы.

На шестые сутки в сравнении с группой, не получавшей лечения, сочетанное применение РАГН и мексидола, снизило объемную долю лимфоцитов и нейтрофилов в воспалительном инфильтрате в 2 раза.

Таблица 9 - Морфологические показатели фундального отдела желудка собак после устранения низкообтурационной толстокишечной непроходимости, с применением РАГН, мексидола и их сочетании в течение шести суток, (Мm)

Показатели

Интактные животные

Контроль

без лечения

РАГН

Мексидол

Мексидол+

РАГН

Толщина

слизистой оболочки, мкм

736,7316,5

714,813,67

Р1>0,05

711,815,91

Р1>0,05; Р2>0,01

714,718,05

Р1>0,05; Р2>0,01

721,924,16

Р1>0,05; Р2>0,01

Кровенаполнение сосудов, %

15,51,79

18,82,47

Р1>0,05

17,41,74

Р1>0,05; Р2>0,01

17,61,21

Р1>0,05; Р2>0,05

16,21,44

Р1>0,05; Р2>0,01

Индекс десквамации эпителия, %

0,10,02

3,61,17

Р1>0,05

3,20,55

Р1>0,05; Р2>0,01

2,20,63

Р1>0,05; Р2>0,01

1,10,37

Р1>0,05; Р2>0,05

Железы (объемная доля, %)

68,94,07

53,61,02

Р1>0,05

58,52,04

Р1>0,05; Р2>0,05

59,02,03

Р1<0,05; Р2>0,01

65,42,11

Р1>0,01; Р2>0.01

Объемная доля клеток, %

- главные

47,05,85

38,72,61

Р1>0,05

40,01,33

Р1<0,05; Р2>0,01

44,02,07

Р1>0,01; Р2>0,01

45,72,16

Р1>0,05; Р2>0,05

- париетальные

28,03,23

19,92,60

Р1>0,01

21,81,20

Р1>0,01; Р2>0,01

22,62,42

Р1>0,01; Р2>0,01

25,92,61

Р1>0,01; Р2>0,01

- добавочные

17,02,21

21,61,23

Р1>0,05

19,91,24

Р1>0,01; Р2>0,01

18,82,50

Р1<0,05; Р2>0,01

17,91,02

Р1>0,01; Р2>0,01

- лимфоциты

4,30,23

11,52,10

Р1>0,05

6,30,33

Р1>0,05; Р2>0,05

7,82,07

Р1>0,01; Р2<0,01

5,91,21

Р1<0,05; Р2>0,01

плазматические

8,60,65

13,23,50

Р1>0,05

11,52,60

Р1<0,05; Р2>0,01

12,23,11

Р1>0,01; Р>20,01

11,81,75

Р1>0,01; Р2>0,01

- нейтрофилы

0,10,02

7,10,41

Р1>0,05

4,92,82

Р1>0,01; Р2>0,01

8,11,01

Р1>0,01; Р2<0,1

6,11,52

Р1>0,05; Р2>0,05

- тучные

1,20,27

3,40,41

Р1>0,05

2,10,46

Р1>0,05; Р2>0,05

1,40,46

Р1>0,01; Р2>0,01

1,40,57

Р1>0,01; Р2>0,01

Примечание: Р1 - достоверность показателей к интактному контролю; Р2 - достоверность показателей к контролю без лечения

Таким образом, достоверное снижение признаков воспаления в слизистой оболочке желудка собак после устранения низкой обтурационной толстокишечной непроходимости зависят от длительности и метода лечения. Наибольший терапевтический эффект наблюдался в группе с сочетанным применением раствора активного гипохлорита натрия и мексидола в течение 6 суток.

ВЫВОДЫ

  1. Внутримышечное введение мексидола угнетает секреторную функцию желудочных желез. Количество секретируемого сока под его воздействием уменьшается на 52%, свободной соляной кислоты на 67% и пепсина на 59%. Одновременное введение гипохлорита натрия и мексидола угнетает секреторную функцию желудка: объем выделяемого сока меньше на 32%, концентрация свободной соляной кислоты на 38%, общих кислот и пепсина на 36%.
  2. НОТН угнетает секреторную функцию желудочных желез, так как концентрация свободной соляной кислоты уменьшается на 92%, активность пепсина на 78%, общего количества кислот на 72% соответственно.
  3. У животных при НОТН в течение 4 и 6 суток развивается поверхностный гастрит с признаками атрофии. К 4 суткам увеличилась клеточная инфильтрация: объемная доля плазматических клеток на 9%, нейтрофилов на 7 и лимфоцитов на 5 процентов соответственно. Объемная доля желез к 6 суткам уменьшается на 15%; главных и париетальных клеток на 16% и 9% соответственно, добавочных клеток увеличивается на 11%.
  4. Одновременное введение мексидола и гипохлорита натрия, в течение 6 суток после устранения НОТН, в большей степени восстанавливает функциональную структуру слизистой желудка. Объемная доля желез увеличивается на12%, главных клеток на 7%, а париетальных на 6%.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ

  1. После устранения низкообтурационной толстокишечной непроходимости в период восстановительной терапии мы рекомендуем использовать сочетание ректального раствора гипохлорита натрия в дозе 10 мг/кг, в концентрации 500 мг/л и внутримышечных инъекций мексидола однократно в сутки в дозе 20 мг/кг.
  2. При гиперсекреторных гастритах мы рекомендуем ежедневно, однократно в сутки, внутримышечно, инъекции мексидола в дозе 20 мг/кг.
  3. Результаты исследования могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций на биологических и ветеринарных факультетах.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

*1. Набока, Л.А. Чубин, А.Н. Корнилова, А.В. Экспериментальная модель низкой обтурационной кишечной непроходимости у собак. / Л.А. Набока, А.Н. Чубин, А.В. Корнилова // Аграрный вестник Урала, 2011.- №3 - С. 35-36.

2. Набока, Л.А. Чубин, А.Н. Корнилова, А.В.Влияние одновременного воздействия мексидола и лазерного излучения на секреторную функцию желудочных желез собак. / Л.А. Набока, А.Н. Чубин, А.В. Корнилова // Дальневосточный аграрный вестник, 2011.- №1 - С. 33-35.

*3. Набока, Л.А. Чубин, А.Н. Корнилова, А.В. Воздействие антиоксиданта мексидол на секреторную функцию желудка собак.  / Л.А. Набока, А.Н. Чубин, А.В. Корнилова // Вестник Алтайского государственного университета, 2011. №3 - С. 84-87.

*4. Набока, Л.А. Корнилова, А.В. Секреторная функция желудка собак при экспериментальной низкой обтурационной кишечной непроходимости.  / Л.А. Набока, А.В. Корнилова // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2011. №1 - С.80-85.

*5 Набока, Л.А. Чубин, А.Н. Корнилова, А.В. Влияние одновременного воздействия активного гипохлорита натрия и мексидола на секреторную функцию желудка собак / Л.А. Набока, А.Н. Чубин, А.В. Корнилова // Вестник КрасГАУ. 2011. Вып.7 - С. 137-141.

6. Корнилова А.В. Секреторная функция желудка собак после устранения низкой обтурационной непроходимости при применении мексидола / А.В. Корнилова // Материалы XII региональной науч.-практ. конф. л Молодежь XXI века: шаг в будущее, посвященной 50-летию полета в космос Ю.А. Гагарина, 19-21 мая 2011г. - Благовещенск, МАП. - Том 6. - С.39-40.

*7. Набока, Л.А. Бердников, П.П. Корнилова, А.В. Динамика секреторной функции желудка собак при низкой обтурационной толстокишечной непроходимости. / Л.А. Набока, П.П. Бердников,  А.В. Корнилова // Вестник Алтайского государственного университета, 2012. №1 - С. 68-70.

8. Набока, Л.А. Чубин, А.Н. Корнилова, А.В. Морфофункциональное состояние фундального отдела стенки желудка собак при экспериментально созданной низкой обтурационной толстокишечной непроходимости.  / Л.А. Набока, А.Н. Чубин, А.В. Корнилова // Дальневосточный аграрный вестник, 2012.- №1 - С. 20-22

____________

Примечания: Публикации *1,*3,*4,*5*7 - в рецензируемых журналах из списка ВАК.

   Авторефераты по всем темам  >>  Авторефераты по биологии