Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по медицине
На правах рукописи
Белоконова Оксана Николаевна
ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОРРЕКЦИИ ФОСФОГЛИВОМ
В РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ
НАРУШЕНИЙ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ
ПРИ ОСТРОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ГЕПАТОПАТИИ
14.03.06 Ц фармакология, клиническая фармакология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Курск Ц 2012
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор,
заслуженный деятель науки РФ Конопля Александр Иванович
Официальные оппоненты:
Филиппенко Николай Григорьевич - доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, заведующий кафедрой клинической фармакологии
Филиппова Ольга Всеволодовна Ц доктор медицинских наук, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Воронежский государственный университет, профессор кафедры фармации последипломного образования Учебного центра Фармация
Ведущая организация:
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Защита диссертации состоится л_29_ ___июня___ 2012 г. в л14:30 часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (305041, г. Курск,
ул. К.аМаркса, 3).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России.
Автореферат разослан л_28_ __мая__ 2012 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета Пашин Евгений Николаевич
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. В настоящее время имеет место существенное учащение токсических, в том числе и лекарственных, поражений различных органов и тканей. Значение этих поражений возросло в связи с либерализацией доступа населения к медикаментам, появлением в свободной продаже большого количества безрецептурных лекарственных средств, широким распространением агрессивной рекламы при отсутствии объективной информации о возможном побочном действии (Конопля Н.А., 2001; Топорков А.С. , 2004; КолпаковаМ.А. и др., 2006).
Известно, что поражения печени, как инфекционной, так и токсической этиологии, характеризуются нарушением иммунной реактивности организма в отношении Т-зависимых антигенов (Конопля А.И., 2008; Долгарева С.А., 2011). Важное значение имеет нестабильность течения патологического процесса как при повышении иммунной реактивности организма на эндо- и экзогенные антигены (активация функции клеток-киллеров, усиление аутоиммунных компонентов заболевания), так и при снижении иммунного ответа (повышение чувствительности к возбудителям инфекционных заболеваний, нарушение иммунологической регуляции процессов физиологической и репаративной регенерации) (Курилович С.А., 2010).
Сегодня можно говорить о том, что эритроциты вовлекаются в пато-логический процесс не только при гематологических заболеваниях, но и претерпевают серьезные изменения структуры и функции при болезнях разного генеза: злокачественных новообразованиях, воспалении, нарушениях обмена веществ, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, психических расстройствах, инфекционной патологии и др. (Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., 2002; Рязанцева Н.В. с соавт., 2002, 2003; Терещенко С.Ю., 2002; Долгарева С.А. и др., 2011).
В настоящее время остается малоизученной роль изменений физико-химических параметров эритроцитов в условиях острой токсической гепатопатии, отсутствуют данные об эффективных способах их фармакологической и нефармакологической коррекции.
Большой интерес авторов привлекают лекарственные препараты на основе глицирризиновой кислоты, поскольку это соединение с выраженной иммуномодулирующей, противовирусной активностью. При этом отсутствуют экспериментальные, а тем более и клинические исследования, посвященные изучению влияния данной группы препаратов на структурно-функциональные свойства эритроцитов (Коротаева Т.В., 2004).
Цель работы: разработка способов фармакологической коррекции с использованием Фосфоглива в различных лекарственных формах нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при экспериментальной острой токсической гепатопатии
Задачи исследования.
1. Оценить изменения белкового и липидного спектра мембран эритроцитов в условиях острого токсического поражения печени, вызванного индометацином и четыреххлористым углеродом.
2. Определить сорбционную способность эритроцитов на различных моделях острого токсического поражения печени.
3. Сопоставить влияние Фосфоглива, Фосфоглива Форте и Фосфоглива для инъекций на содержание белков и липидов в мембране эритроцитов, сорбционную способность эритроцитов при остром индометациновом поражении печени.
4. Определить эффективность Фосфоглива в различных лекарственных формах в коррекции нарушений белкового и липидного спектра мембран эритроцитов, их сорбционных свойств в условиях гепатопатии, вызванной четыреххлористым углеродом.
5. Провести сравнительную оценку фармакологической коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов с использованием Фосфоглива в различных лекарственных формах при токсическом поражении печени, вызванном введением индометацина и четыреххлористого углерода.
Научная новизна. Впервые установлены выраженные нарушения белкового и липидного спектра мембран эритроцитов и их сорбционных свойств в условиях острого индометацинового и тетрахлорметанового поражения печени.
Впервые выявлено корригирующее влияние Фосфоглива, Фосфоглива Форте и Фосфоглива для инъекций нарушений содержания белков и липидов в мембране эритроцитов, сорбционные свойства красных клеток крови при остром токсическом поражении печени, вызванном индометацином и четыреххлористым углеродом.
Впервые установлено, что в условиях острой индометациновой токсической гепатопатии более эффективна в коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов инъекционная форма Фосфоглива, а при поражении печени тетрахлорметаном - Фосфоглив для инъекций и Фосфоглив Форте.
Определено, что критериями прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами являются: сорбционная способность эритроцитов, содержание в мембране -спектрина и триглицеридов.
Практическая значимость. Установлена зависимость выраженности нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропных токсикантов.
Экспериментально доказана эффективность Фосфоглива в различных лекарственных формах в коррекции нарушений белкового и липидного спектра мембраны красных клеток крови, их сорбционных свойств на различных моделях острой токсической гепатопатии.
Применение Фосфоглива, в отличие от Фосфоглива Форте и инъекционной формы препарата, в условиях экспериментального острого токсического поражения печени оказалось менее эффективным вне зависимости от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропного токсиканта.
Расширены рекомендации назначения в клинической практике Фосфоглива для инъекций с целью коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при остром токсическом поражении печени.
Показана перспектива дальнейшего совершенствования способов фармакологической коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при заболеваниях печени.
Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского государственных медицинских университетов и академий и медицинского факультета Белгородского государственного университета.
Положения, выносимые на защиту.
1. Структурно-функциональные свойства эритроцитов при остром токсическом поражении печени изменяются дифференцированно в зависимости от химической природы и механизма повреждающего действия гепатотропного токсиканта.
2. При острой токсической индометациновой гепатопатии наибольшей эффективностью в коррекции нарушений белкового и липидного спектров мембраны и сорбционных свойств эритроцитов обладает Фосфоглив для инъекций.
3. У животных с тетрахлорметановым острым токсическим поражением печени эффективными в коррекции структурно-функциональных свойств красных клеток крови являются инъекционная форма Фосфоглива и Фосфоглив Форте.
4. Для прогнозирования и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами, наиболее диагностически ценными являются определение сорбционной способности эритроцитов и содержание в мембране -спектрина и триглицеридов.
Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на XVI Российском национальном конгрессе Человек и лекарство (Москва, 2009), IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2010), Межрегиональном форуме Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии - междисциплинарные проблемы (Санкт-Петербург, 2010), совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, хирургических болезней № 2, акушерства и гинекологии Курского государственного медицинского университета (2012).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, 6 из которых в рекомендуемых изданиях ВАК РФ; в работах содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.
ичный вклад автора. Автором составлены план и дизайн исследования, проведен анализ отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертации, лично проводились экспериментальные исследования, анализировались показатели структурно-функциональных свойств эритроцитов. Диссертантом самостоятельно выполнялся анализ и обобщение результатов, составление таблиц и графиков, написание диссертации, сопоставление с литературными данными. Доля автора в совместных публикациях составила 75-95%.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, иллюстрирована 9 таблицами и 9 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 106 отечественных и 97 иностранных источников.
Собственные исследования
Материалы и методы исследования
Экспериментальные исследования. Эксперименты проводили на 296 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 10-12 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника РАМН Столбовая одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.). Животных умерщвляли передозировкой средств для наркоза через 24 часа после последнего введения препарата и/или токсиканта.
Дизайн исследования. Способы введения и дозировки фармакологических препаратов. Расчет дозировок препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м2) для крысы и человека в зависимости от массы тела (FreIreichаE.J., 1966) (табл. 1).
Токсическое поражение печени моделировали внутрижелудочным введением индометацина в дозе 5 мг/кг, внутрижелудочно, трехкратно, через 24 часа (Саратиков А.С., 1995) или внутримышечным введением 3 мл/кг четыреххлористого углерода в виде 50% раствора в оливковом масле, трехкратно, через 24 часа (Алексеева Н.Н., 1991). Токсикант вводили в последние 3 дня получения препаратов Фосфоглива.
Таблица 1
Использованные препараты, дозировки, способы и кратность введения интактным крысам и животным с острым токсическим
поражением печени
Препарат | Доза, мг/кг, в пересчете на: | Введение | |||
ецитин | ГК | Способ | Количество | Кратность | |
Фосфо-глив | 1500 | 800 | внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии | 14 | Через 24 часа |
Фосфоглив Форте | 1500 | 240 | внутрижелудочно в 1% крахмальной суспензии | 14 | Через 24 часа |
Фосфо-глив для инъекций | 1500 | 600 | внутрибрюшинно | 14 | Через 24 часа |
Информация о лекарственных формах Фосфоглива, изученных в работе. лФосфоглив - препарат, состоящий из липоида С80 (0,065 г), глицирата (0,035 г), микрокристаллической целлюлозы HP 101 (0,08 г), кальция карбоната (0,2636 г), аэросила А300 (0,0032), кальция стеарата (0,0032 г), талька (0,01).
Фосфоглив Форте - состоит из липоида PPL-400 (0,300 г), глицирата (0,065 г), бутилгидрокситолуола (0,0001 г), масла подсолнечного (0,0229 г), спирта этилового ректификата (0,012 г).
Фосфоглив для инъекций - лиофилизированный порошок, состоящий из лецитина (0,5 г) и глицирризиновой кислоты (0,2 г).
Исследование структурно-функциональных свойств эритроцитов. Эритроциты получали из 5 мл гепаринизированной крови по методу E.аBeutler (1985) с незначительной модификацией. Цельную кровь отстаивали дважды в 10 мМ Na-фосфатном буфере (рН=7,4), содержащем 0,9% хлорида натрия и 3% декстрана Т-500, в течение 30 минут при температуре 37С. После этого кровь центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость аспирацией. Эритроцитарную массу подвергали дополнительной очистке на хроматографической колонке через НВS-целлюлозу.
Определялась общая сорбционная способность эритроцитов, обусловленная наружной архитектоникой клеточной мембраны (Тогайбаев А.А. и др., 1988), сорбционная емкость гликокаликса эритроцитов для альцианового синего (Семко Г.А., 1998) и уровень малонового диальдегида в эритроцитах (Банкова В.В. и др., 1987).
Мембраны эритроцитов получали методом G.T. Dodge (1963), разрушая эритроциты осмотическим и механическим гемолизом в 10 мМ Na-фосфатном буфере, после чего проводили отмывку теней от гемоглобина в 10 мМ и 5 мМ Na-фосфатном буфере. Электрофорез проводили в присутствии додецилсульфата натрия в вертикальных пластинах полиакриламидного геля по методу U.K.аLaemmli (1970). Белки окрашивали кумаси голубым R-250 по модифицированной методике G.аFairbanks (1971). Количественное содержание белковых фракций рассчитывали через площадь и известную концентрацию яичного альбумина, выступающего в качестве маркерного белка. Полученные значения пересчитывали на 1 мг общего белка в исследуемом образце сухих мембран эритроцитов. Липиды выделяли методом тонкослойной хроматографии (Крылов В.И. и др., 1984).
Статистическая обработка полученных результатов. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрические и непараметрические методы, факторный анализ, кластерный анализ, критерий 2, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена (Гублер Е.Г., ГенкинаА.Р., 1973; Лакин Г.Ф., 1980). Статистически значимыми считали различия с p<0,05.
___________________________
Примечание. Определение белкового и липидного спектра мембран эритроцитов проведено в лаборатории иммуноферментного анализа НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета, за что выражаем сотрудникам соответствующего подразделения глубокую признательность.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при четыреххлористом токсическом поражении печени и использовании Фосфоглива. При ОТПП у экспериментальных животных снижается представительность в мембране эритроцитов обеих подфракций спектрина, анкирина, анионтранспортного белка (АТБ), белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (Г-3-ФД), тропомиозина, глутатион-S-трансферазы и повышается уровень белка полосы 4.1 и паллидина (табл. 2). Кроме этого, в данной группе животных снижена ССЭ, СЕГ и повышена концентрация внутри красных клеток крови малонового диальдегида (МДА) (табл. 2).
В группе животных, получавших Фосфоглив внутрь, отмечалась частичная коррекция представительности -спектрина, анкирина, АТБ, белка полосы 4.5, Г-3-ФД. Изменения белкового спектра на фоне применения Фосфоглива приводят к повышению СЕГ до уровня нормы (табл. 2).
При использовании Фосфоглива Форте у животных в условиях ОТПП выявлена нормализация уровня -спектрина, белка полосы 4.1, СЕГ, коррекция не до уровня нормы -спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, Г-S-Т, ССЭ и концентрация внутри клеток МДА (табл. 2).
Инъекции препарата Фосфоглив нормализовали у животных, получавших четыреххлористый углерод, представительность -спектрина, белка полос 4.1 и 4.5, паллидина, Г-3-ФД, Г-S-Т, СЕГ и корригировали другие измененные показатели структурно-функциональных свойств эритроцитов (табл. 2).
Таким образом, в условиях ОТПП четыреххлористым углеродом выявлены изменения целого ряда белковых фракций в мембране эритроцитов и ее сорбционных свойств, а использование Фосфоглива позволяет корригировать и нормализовать выявленные изменения, при этом максимальной эффективность обладает форма Фосфоглива для инъекций.
После отравления четыреххлористым углеродом у животных в эритроцитарной мембране повышен уровень холестерина, свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и снижена концентрация эфиров жирных кислот, триглицеридов, фосфатидилхолина и сфингомиелина (табл. 3).
Таблица 2
Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при ОТПП ЧХУ(Mm)
Показатели | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Острое токсическое поражение печени (ОТПП) ЧХУ | |||||
Контроль | ОТПП ЧХУ | ОТПП ЧХУ + Фосфоглив | ОТПП ЧХУ + Фосфоглив форте | ОТПП ЧХУ + Фосфоглив для инъекций | |
-Спектрин, мг% | 110,35,21 | 74,33,8*1 | 81,53,22*1,2 | 85,64,2*1,2 | 90,33,71*1,2 |
-Спектрин, мг% | 93,14,31 | 79,54,3*1 | 82,34,7*1 | 88,14,05*2 | 90,25,0*2 |
Анкирин, мг% | 71,02,04 | 52,62,74*1 | 62,14,21*1,2 | 59,43,05*1,2 | 64,13,08*1,2 |
Анионтранспортный белок, мг% | 169,66,22 | 142,75,47*1 | 156,34,8*1,2 | 150,65,91*1 | 158,24,97*1,2 |
4.1, мг% | 81,44,1 | 96,15,3*1 | 85,74,9 | 83,13,14*2 | 84,24,81*2 |
Паллидин, мг% | 62,134,09 | 74,74,8*1 | 67,85,1 | 69,34,92 | 60,313,9*2 |
4.5, мг% | 69,793,13 | 52,63,82*1 | 60,13,72*1,2 | 61,12,93*1,2 | 64,55,17*2 |
Дематин, мг% | 41,22,05 | 45,63,33 | 40,42,7 | 46,94,71 | 39,53,75 |
Актин, мг% | 101,14,15 | 117,75,64 | 108,74,3 | 99,68,21 | 112,66,41 |
Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, мг% | 54,32,0 | 40,73,14*1 | 46,42,07*1,2 | 45,93,12*1 | 50,13,84*2 |
Тропомиозин, мг% | 65,33,09 | 56,23,81*1 | 60,73,15 | 62,74,1 | 63,23,7 |
Глутатион-S-трансфераза, мг% | 59,22,45 | 44,32,91*1 | 46,43,31*1 | 51,73,0*1,2 | 55,64,71*2,3 |
СЕГ, 10-12 г/эр. | 2,40,12 | 1,80,09*1 | 2,10,19*2 | 2,40,20*2 | 2,20,10*2 |
ССЭ, % | 46,23,0 | 12,24,84*1 | 19,61,21*1 | 21,52,37*1,2 | 28,62,89*1-4 |
МДА, нмоль * 106 эр. | 3,210,09 | 7,270,39*1 | 6,060,25*1,2 | 5,910,29*1,2 | 4,10,17*1-4 |
Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ - традиционное лечение.
Таблица 3
ипидный спектр мембраны эритроцитов при ОТПП ЧХУ (мг%, Mm)
Показатели | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Острое токсическое поражение печени (ОТПП) ЧХУ | |||||
Контроль | ОТПП ЧХУ | ОТПП ЧХУ + Фосфоглив | ОТПП ЧХУ + Фосфоглив форте | ОТПП ЧХУ + Фосфоглив для инъекций | |
Холестерин | 43,02,14 | 54,42,39*1 | 48,42,41*1,2 | 47,32,08*1,2 | 45,61,97*2 |
Эфиры холестерина | 38,032,21 | 32,61,74*1 | 34,61,92*1 | 33,72,03*1 | 35,62,52 |
Свободные жирные кислоты | 4,30,17 | 5,090,12*1 | 4,810,15*1,2 | 4,520,18*2 | 4,420,16*2 |
Моно- и диглицериды | 10,430,42 | 11,310,38*1 | 10,30,24*2 | 9,450,41*2 | 10,210,27*2 |
Триглицериды | 15,631,17 | 11,211,31*1 | 16,21,12*2 | 17,42,31*2 | 16,311,38*2 |
Фосфатидилхолин | 24,01,87 | 17,12,01*1 | 17,311,24*1 | 18,321,12*1 | 20,411,29*1-4 |
Фосфатидилэтаноламин | 24,632,12 | 22,32,07 | 23,21,38 | 25,62,33 | 24,82,51 |
изофосфатидилхолин | 22,30,13 | 24,7 0,23*1 | 21,90,31*2 | 22,80,18*2 | 22,710,35*2 |
Фосфатидилинозитол | 5,10,06 | 4,940,12 | 5,20,14 | 5,070,17 | 4,880,22 |
Сфингомиелин | 11,80,49 | 9,310,33*1 | 9,070,19*1 | 10,520,25*1-3 | 12,040,51*2-4 |
Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ - традиционное лечение.
Использование Фосфоглива внутрь у животных, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода, позволило снизить, но не до уровня нормы, концентрацию в эритроцитарной мембране холестерина и свободных жирных кислот, нормализовать уровень моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и триглицеридов (табл. 3).
Применение у животных в условиях ОТПП Фосфоглива Форте нормализует уровень в мембране красных клеток крови свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина и триглицеридов, возрастает, но не до уровня нормы содержание холестерина и сфингомиелина, (табл. 3).
Максимальной эффективностью у данной группы животных обладает Фосфоглив для инъекций - его использование нормализует липидный спектр в мембране эритроцитов, за исключением концентрации фосфатидилхолина, уровень которого возрастает, но не до уровня нормы (табл. 3).
Мембранопротективная эффективность Фосфоглива в различных лекарственных формах при индометациновом токсическом поражении печени. В условиях ОТПП, вызванного введением индометацина, у животных установлено снижение представительности -спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, Г-3-ФД, триглицеридов, сфингомиелинов и повышение количества белка полосы 4.1, паллидина, холестерина, свободных жирных кислот, что приводит к снижению общей сорбционной способности эритроцитов и накоплению в них МДА (рис. 1).
Введение животным Фосфоглива per os на фоне токсического воздействия индометацина позволило нормализовать в мембране красных клеток крови концентрацию триглицеридов и частично корригировать представительность -спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, свободных жирных кислот и МДА внутри клеток (табл. 4).
Применение Фосфоглива Форте у животных в условиях ОТПП дополнительно, в отличие от предыдущей группы животных, нормализует в эритроцитарной мембране уровень анкирина и корригирует представительность паллидина и повышает, но не до уровня нормы, ССЭ (табл. 4, 5).
Рис. 1. Представительность белков и липидов в мембране эритроцитов, ССЭ, СЕГ и концентрация МДА у животных в условиях ОТПП.
Примечания.
1. Радиус окружности - показатели у контрольной группы животных (1 группа).
2. - показатели у животных с ОТПП (2 группа).
3. - р < 0,05 между показателями по отношению к 1 группе.
4. АТБ - анионтранспортный белок, Г-3-ФД - глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, Г-S-Т - глутатион-S-трансфераза; ЭХ - эфиры холестерина, СЖК - свободные жирные кислоты, МДГ - моно- и диглицериды, ТГ - триглицериды, ФХ - фосфатидилхолин, ФЭ - фосфатидилэтаноламин, ЛФХ - лизофосфатидилхолин, ФИ - фосфатидилинозитол, СМ - сфингомиелин.
Инъекции Фосфоглива более эффективно корригируют и нормализуют нарушенные показатели белково-липидного спектра мембран красных клеток крови в условиях ОТПП: нормализуют количество паллидина, белка полосы 4.5, Г-3-ФД, холестерина и сфингомиелина, корригируя остальные изменённые показатели, за исключением представительности белка полосы 4.1 (табл. 4, 5).
Таблица 4
Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов при ОТПП ИМ (Mm)
Показатели | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Острое токсическое поражение печени (ОТПП) | |||||
Контроль | ОТПП ИМ | ОТПП ИМ + Фосфоглив | ОТПП ИМ + Фосфоглив Форте | ОТПП ИМ + Фосфоглив инъекции | |
-Спектрин, мг% | 110,35,21 | 63,83,2*1 | 81,63,11*1,2 | 85,44,1*1,2 | 87,13,2*1,2 |
-Спектрин, мг% | 93,14,31 | 89,74,5 | 92,34,7 | 92,94,05 | 91,15,0 |
Анкирин, мг% | 71,02,04 | 57,42,3*1 | 63,74,1*1,2 | 69,44,25*2 | 69,83,1*2 |
Анионтранспортный белок, мг% | 169,66,22 | 172,75,5 | 166,35,9 | 170,68,9 | 168,24,6 |
4.1, мг% | 81,44,1 | 106,58,7*1 | 103,65,9*1 | 99,74,2*1 | 81,24,25*1 |
Паллидин, мг% | 62,134,09 | 85,75,1*1 | 86,34,2*1 | 75,32,42*1,2 | 61,453,7*2 |
4.5, мг% | 69,793,13 | 50,13,8*1 | 61,43,4*1,2 | 60,52,8*1,2 | 68,54,2*2 |
Дематин, мг% | 41,22,05 | 43,13,25 | 40,42,7 | 46,93,2 | 39,53,4 |
Актин, мг% | 101,14,15 | 107,15,61 | 108,76,4 | 102,68,3 | 107,68,1 |
Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, мг% | 54,32,0 | 41,33,11*1 | 45,91,86*1,2 | 46,33,3*1,2 | 52,73,2*2 |
Тропомиозин, мг% | 65,33,09 | 66,24,6 | 62,73,15 | 62,74,1 | 63,23,4 |
Глутатион-S-трансфераза, мг% | 59,22,45 | 54,33,5 | 59,43,31 | 58,74,0 | 56,64,3 |
СЕГ, 10-12 г/эр. | 2,40,12 | 2,60,11 | 2,50,19 | 2,50,20*2 | 2,40,10 |
ССЭ, % | 46,23,0 | 22,22,1*1 | 20,91,3*1 | 29,52,11*1,2 | 28,62,89*1-4 |
МДА, нмоль * 106 эр. | 3,210,09 | 6,210,52*1 | 5,120,281,2 | 5,30,2*1,2 | 4,40,2*1-4 |
Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ - традиционное лечение.
Таблица 5
ипидный спектр мембраны эритроцитов при ОТПП ИМ (мг%, Mm)
Показатели | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Острое токсическое поражение печени (ОТПП) | |||||
Контроль | ОТПП ИМ | ОТПП ИМ + Фосфоглив | ОТПП ИМ + Фосфоглив Форте | ОТПП ИМ + Фосфоглив инъекции | |
Холестерин | 43,02,14 | 59,13,25*1 | 58,12,5*1 | 57,22,3*1 | 44,71,6*2-4 |
Эфиры холестерина | 38,032,21 | 37,81,7 | 38,11,5 | 36,72,2 | 37,12,3 |
Свободные жирные кислоты | 4,30,17 | 5,270,17*1 | 4,890,19*1,2 | 4,910,12*1,2 | 4,890,12*1,2 |
Моно- и диглицериды | 10,430,42 | 11,20,6 | 10,90,7 | 10,50,9 | 10,70,8 |
Триглицериды | 15,631,17 | 10,121,25*1 | 15,81,15*2 | 16,42,1*2 | 16,61,5*2 |
Фосфатидилхолин | 24,01,87 | 27,12,2 | 25,91,2 | 28,321,12 | 23,41,29 |
Фосфатидилэтаноламин | 24,632,12 | 22,32,3 | 23,21,3 | 25,62,33 | 24,22,51 |
изофосфатидилхолин | 22,30,13 | 21,71,2 | 21,90,3 | 22,80,18 | 22,20,35 |
Фосфатидилинозитол | 5,10,06 | 5,20,12 | 5,00,3 | 5,070,17 | 4,90,22 |
Сфингомиелин | 11,80,49 | 8,280,42*1 | 9,00,18*1 | 8,90,21*1 | 11,740,81*2-4 |
Примечание. Звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия; ТЛ - традиционное лечение.
Сравнительная эффективность Фосфоглива в различных лекарственных формах при различных моделях экспериментальной токсической гепатопатии. Сравнивая мембранопротективную эффективность различных форм Фосфоглива в условиях токсического поражения печени, выявлено, что максимальной эффективностью в отношении нарушенных показателей структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов обладает Фосфоглив для инъекций как при ИМ, так и ЧХ токсическом поражении печени, так как позволяет снизить количество измененных показателей с 80% до 24% при четыреххлористом токсическом поражении печени и с 48% до 20% при индометациновом (табл. 6).
Представленные выше данные позволяют сделать заключение, что в условиях острой токсической гепатопатии имеет место нарушение метаболического гомеостаза, что проявляется изменением структурно-функциональных свойств эритроцитов, в первую очередь белково-липидного спектра. При этом использование различных форм препарата Фосфоглив позволяет корригировать и нормализовать представительность белков и липидов в мембране красных клеток крови. Максимальной эффективностью в условиях ОТПП обладает Фосфоглив для инъекций, минимальной - Фосфоглив, тогда как Фосфоглив Форте занимает промежуточное положение (табл. 6).
Таблица 6
Сравнительная мембранопротективная эффективность различных форм Фосфоглива в условиях острого токсического поражения печени
Измененные показатели (%) | ЧХУ | ИМ |
Отравление гепатотоксическим ядом | 80,0 | 48,0 |
Отравление + Фосфоглив | 64,0 | 44,0 |
Отравление + Фосфоглив Форте | 52,0 | 40,0 |
Отравление + Фосфоглив инъекции | 24,0 | 20,0 |
В целом эффекты препарата обусловлены антиоксидантной активностью лецитина, который замещает и стабилизирует мембраны гепатоцитов, а глицирризиновая кислота не только дополнительно стабилизирует лецитин, но и обладает прямым иммуномодулирующим эффектом на клетки иммунной системы, что совместно ускоряет репаративные процессы в гепатоцитах.
В данном случае благодаря своей высокой биодоступности оказался более эффективным Фосфоглив для инъекций, введение которого, вероятно, позволяет стабилизировать мембранные структуры гепатоцитов, уменьшить процессы перекисного окисления липидов и снизить выход в кровеносное русло иммуностимулирующих соединений, что сопровождается нормализацией большинства исследованных показателей иммунного статуса.
Полученные результаты диктуют необходимость апробирования данных форм препарата Фосфоглив в клинических исследованиях с целью разработки эффективных способов фармакокоррекции метаболических нарушений при острой токсической гепатопатии.
Другой сферой интересов, позволяющей косвенно оценить механизм влияния тех или иных препаратов на изучаемые показатели, служит факторный анализ. С его помощью него удалось редуцировать лабораторные показатели, на которые предложенные схемы оказывают минимальное влияние, и выделить те, которые максимально чувствительны к воздействию препаратов.
Построение графиков факторной нагрузки лабораторных данных установило, что наиболее чувствительными к воздействию Фосфоглива вне зависимости от токсического агента, является содержание -спектрина, триглицеридов и сорбционная способность эритроцитов, что позволяет использовать данные показатели для прогнозирования и оценки выраженности острого токсического поражения печени различными по химической структуре и механизму повреждающего действия токсикантами.
ВЫВОДЫ
1. При экспериментальной острой токсической гепатопатии, вызванной введением четыреххлористого углерода, в эритроцитарной мембране повышен уровень холестерина, свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов, лизофосфатидилхолина, белка полосы 4.1, паллидина, внутриклеточного малонового диальдегида, снижена мембранная концентрация эфиров жирных кислот, триглицеридов, фосфатидилхолина и сфингомиелина, обеих подфракций спектрина, анкирина, анионтранспортного белка, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, тропомиозина, глутатион-S-трансферазы, общая сорбционная способность эритроцитов и их гликокаликс.
2. В условиях острого индометацинового токсического поражения печени в мембране эритроцитов снижен уровнь триглицеридов, сфингомиелинов,
-спектрина, анкирина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, повышено количество холестерина, свободных жирных кислот, белка полосы 4.1, паллидина, снижена общая сорбционная способность клеток.
3. Введение Фосфоглива при токсическом индометациновом поражении печени нормализует в мембране эритроцитов концентрацию триглицеридов, применение Фосфоглива Форте дополнительно нормализует уровень анкирина, инъекции Фосфоглива - количество паллидина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, холестерина и сфингомиелина.
4. Использование Фосфоглива в условиях тетрахлорметанового токсического поражения печени нормализует в мембране эритроцитов представительность паллидина и белка полосы 4.1, Фосфоглив Форте дополнительно нормализует уровень свободных жирных кислот, тропомиозина и сорбционную емкость гликокаликса, Фосфоглив для инъекций - содержание всех липидов, -спектрина, белка полосы 4.5, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы и глутатион-S-трансферазы.
6. В условиях острой токсической индометациновой гепатопатии наиболее эффективно нормализует нарушения структурно-функциональных свойств эритроцитов инъекционная форма Фосфоглива, а при токсическом тетрахлорметановом поражении печени - Фосфоглив для инъекций и Фосфоглив Форте.
7. Для прогнозирования развития и оценки степени выраженности острого токсического поражения печени наиболее диагностически ценным является определение сорбционной способности эритроцитов и содержания в мембране -спектрина и триглицеридов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Рекомендовать применение Фосфоглива для инъекций для коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при остром токсическом поражении печени.
2. Использовать для прогнозирования развития и оценки степени выраженности токсического поражения печени определение сорбционной способности эритроцитов и содержание в мембране -спектрина и триглицеридов.
3. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания о нарушениях структурно-функциональных свойств эритроцитов при экспериментальной острой токсической гепатопатии и способах их фармакологической коррекции с использованием Фосфоглива в различных лекарственных формах.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Белоконова, О.Н. Применение фосфоглива для коррекции иммунных нарушений при острой экспериментальной токсической гепатопатии /
Н.А. Кедровская, О.Н. Белоконова // Тез. докл. XVI Росс. нац. конгр. Человек и лекарство. - 2009. - С. 232.
2. Белоконова, О.Н. Влияние различных лекарственных форм Фосфоглива на сорбционные показатели эритроцитов в условиях токсического поражения печени / О.Н. Белоконова, Н.А. Кедровская // Материалы IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков. 25-26 февраля 2010 года. Том I / Под ред. В.А. Лазаренко - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2010. - С. 82-85.
3. Белоконова, О.Н. Иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты различных лекарственных форм Фосфоглива в условиях индометацинового токсического поражения печени / Н.А. Кедровская,
О.Н. Белоконова // Курский науч.-практ. вестн. Человек и его здоровье. Ц 2009. Ц № 4. Ц С. 5-8.
4. Иммуномодулирующие эффекты фосфоглива при экспериментальном токсическом поражении печени / Н.А. Быстрова, О.Н. Белоконова, А.Л. Локтионов, Н.А. Кедровская // Международный журнал по иммунореабилитации. Ц 2010. Ц Т. 12, № 2. Ц С. 159.
5. Применение различных лекарственных форм фосфоглива в коррекции нарушений иммунитета при экспериментальном токсическом поражении печени / Е.В. Орлова, О.Н. Белоконова, В.А. Рагулина, Е.В. Авдеева // Российский аллергологический журнал. Ц 2010. - № 5, Вып. 1. Ц
С. 36-37.
6. Коррекция функциональной активности нейтрофилов периферической крови производными 3-гидроксипиридина при остром токсическом поражении печени / О.Н. Белоконова, В.А. Рагулина, Е.А. Орлова и др. // Российский аллергологический журнал. Ц 2010. - № 5, Вып. 1. Ц С. 236-237.
7. Эффективность различных лекарственных форм Фосфоглива в коррекции структурно-функциональных нарушений мембраны эритроцитов при остром токсическом поражении печени / В.П. Гаврилюк, О.Н. Белоконова, А.И. Конопля, Н.А. Быстрова // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. Ц 2011. Ц Т. 10, № 2. Ц С. 269-273.
8. Нарушения белково-липидного спектра мембраны эритроцитов при экспериментальной гепатопатии, коррекция различными формами препарата Фосфоглив / О.Н. Белоконова, А.И. Конопля, В.П. Гаврилюк и др. // Фундаментальные исследования. - 2011, № 11 (3). - С. 481-484.
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
1 - -спектрин, мг%
1 - -спектрин, мг%
АТБ - анионтранспортный белок или белок полосы 3
Г-3-ФД - глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа
Г-S-Т - глутатион-S-трансфераза
ИМ - индометацин
ФХ - лизофосфатидилхолин, мг%
МДА - малоновый диальдегид, нмоль * 106 эр.
МДГ - моно- и диглицериды, мг%
ОТПП - острое токсическое поражение печени
ПОЛ - перекисное окисление липидов
СЕГ - сорбционная емкость гликокаликса, 10-12 г/эр.
СЖК - свободные жирные кислоты, мг%
СМ - сфингомиелин, мг%
ССЭ - сорбционная способность эритроцитов, %
ТГ - триглицериды, мг%
ФИ - фосфатидилинозитол, мг%
ФХ - фосфатидилхолин, мг%
ФЭ - фосфатидилэтаноламин, мг%
ЭХ - эфиры холестерина, мг%
ицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г.
Сдано в набор 26.05.2012 г. Подписано в печать 26.05.2012 г.
Формат 30х421/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom.
Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0.
Тираж 100 экз. Заказ № 206"А"
Издательство Курского государственного медицинского университета
305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
Авторефераты по всем темам >>
Авторефераты по медицине